專利名稱：器官的停止、保護(hù)和保存的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于停止(停跳)、保護(hù)和/或保存器官(尤其是心臟直視手術(shù)、心血管診斷或治療性介入時(shí)的心臟)的方法和藥物或獸用組合物。
每年在澳大利亞有20,000次以上的心臟直視手術(shù)，在美國(guó)則超過800,000次，在歐洲有1,000,000次左右。在這些需要心臟直視手術(shù)的人約1.2％是新生兒/嬰兒，主要是因?yàn)橄忍煨孕呐K病。
在心臟直視手術(shù)(open heart surgery)中可能需要停止心博長(zhǎng)達(dá)3小時(shí)。高鉀心麻痹(超過15-20mM)用作心肌停止和保護(hù)的基礎(chǔ)已有40多年。目前所使用的大部分溶液含有高鉀包括廣泛使用的St Thomas No.2 Hospital溶液，其通常含有110mM NaCl、16mM KCl、16mM MgCl2、1.2mM CaCl2和10mMNaHCO3，且pH約為7.8。高鉀溶液通常導(dǎo)致膜去極化從約-80到-50mV。盡管高鉀溶液能提供令人接受的臨床結(jié)果，但是最近有證據(jù)表明進(jìn)行性鉀引發(fā)的去極化導(dǎo)致離子和代謝失衡，這可能與再灌注過程中的心肌功能喪失、室性心律失常、缺血性損傷、內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、微脈管受損、細(xì)胞死亡和泵功能喪失有關(guān)。與成年人的心臟相比，嬰兒的心臟更易被高鉀的心麻痹停止而受到損傷。假設(shè)的主要離子失衡與鈉內(nèi)流的增加相連，繼而活化Na+/Ca2+交換從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高。然后就發(fā)生了Na+和Ca2+離子泵的代償性活化，激活厭氧代謝補(bǔ)充了ATP，并伴發(fā)組織的乳酸鹽增加和組織的pH下降。在鉀停止中還連累到自由基的產(chǎn)生和氧化性應(yīng)激反應(yīng)，通過給予抗氧化劑可部分逆轉(zhuǎn)。在一些情況中，已報(bào)道了高鉀引發(fā)的缺血將損傷平滑肌和內(nèi)皮的功能。
為了將心麻痹停止中的缺血損傷最小化，有大量實(shí)驗(yàn)研究使用鉀通道開啟劑來替代高鉀。據(jù)信使用尼可地爾、阿里卡林、或松脂的心臟保護(hù)與鉀通道的開啟有關(guān)，其導(dǎo)致超極化狀態(tài)、動(dòng)作電位的縮短和流入細(xì)胞的Ca2+流減少。但存在的一個(gè)缺點(diǎn)是與高鉀心麻痹溶液相比，在相同或更長(zhǎng)時(shí)間恢復(fù)后功能并沒有改善。另一缺陷是由于松脂在水溶液中的低溶解性所以需要載體。常規(guī)使用的載體是二甲基亞砜(DMSO)，在用于動(dòng)物或人的治療中是有爭(zhēng)議的。
大部分研究者包括那些提倡使用鉀通道開啟劑的研究者，認(rèn)為一旦將血流停止并給予停止溶液，就發(fā)生缺血且隨著時(shí)間而不斷增加。為了降低危險(xiǎn)的可能性，我們尋找到一種心臟麻痹的溶液，能將心臟置于一種可逆的代謝減退狀態(tài)(模擬于冬眠海龜、蟄伏的蜂鳥或夏眠的沙漠蛙(desert-frog)等的組織)。當(dāng)這些動(dòng)物的代謝速率降低(有些達(dá)到90％以上)，它們的組織不再變成進(jìn)行性缺血，但保持在下調(diào)的穩(wěn)定狀態(tài)，這期間供給和需求相匹配。理想的心麻痹溶液應(yīng)能產(chǎn)生易逆轉(zhuǎn)、快速的電化學(xué)停止，而組織的缺血最小。心臟應(yīng)積聚較小量的組織乳酸鹽，利用小量糖原，表現(xiàn)出高能磷酸鹽胞液氧化還原(NAD/NADH)和生物能磷酸化(ATP/ADP Pi)的比例和ATP自由能等變化最小。胞液pH和游離鎂離子可以有很小的變化或沒有變化，或在細(xì)胞內(nèi)液和細(xì)胞外液間只有最少量水的遷移，和對(duì)細(xì)胞器如線粒體沒有重要的超微結(jié)構(gòu)的損傷。理想的心麻痹溶液應(yīng)能100％功能性恢復(fù)，而無室性心律失常、胞液鈣過量或其他泵功能異常。而至今未有能滿足所有這些要求的心麻痹溶液。現(xiàn)在我們發(fā)現(xiàn)可以用鉀通道開啟劑腺苷和局部麻醉的利多卡因，在停止和恢復(fù)過程中較好地保護(hù)心臟。
人們對(duì)腺苷的作用是有爭(zhēng)議的。腺苷已表明能增加冠脈血流量、使細(xì)胞膜超級(jí)化和通過ATP-敏感的鉀通道和腺苷相關(guān)的通路(包括腺苷受體特別是A1受體)作為預(yù)處理劑。已知腺苷能改善心肌恢復(fù)，以輔助高鉀心麻痹。另外，腺苷還能用于預(yù)處理(無論其是否存在于停止溶液中)以減少致死的傷害。在一項(xiàng)研究中，腺苷表明可與鉀停止溶液相媲美，且在最近的血液心麻痹中其防止了缺血損傷心臟的缺血后功能紊亂。有時(shí)將腺苷作為輔助劑加到鉀心麻痹中。
利多卡因是一種局部麻醉劑，其封阻鈉快速通道，且通過降低內(nèi)向鈉流的量值具有抗心律失常的特性。據(jù)信伴隨動(dòng)作電位的縮短直接減少鈣通過Ca2+選擇性通道和Na+/Ca2+交換而進(jìn)入細(xì)胞。最近報(bào)道還表明在再灌注過程中利多卡因與清除心臟中的游離基如羥基或單態(tài)氧有關(guān)。與這種清除功能相聯(lián)，利多卡因還可抑制磷酸酯酶的活性和最小化缺血過程中的膜退化。利多卡因還表現(xiàn)出具有保護(hù)心肌的作用，在一項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)比高鉀溶液更出眾。但我們的實(shí)驗(yàn)顯示單用0.5、1.0和1.5mM的利多卡因得到高度易變的功能恢復(fù)(用分離的博動(dòng)的大鼠心臟)。
一方面，本發(fā)明提供了一種停止、保護(hù)和/或保存器官的方法，所述的方法包括給予需要的對(duì)象有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
另一方面，本發(fā)明提供了(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑在制備用于停止、保護(hù)和/或保存器官的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑，用于停止、保護(hù)和/或保存器官。
另一方面，本發(fā)明還提供了藥物或獸用組合物，包括有效量的(i)鉀通道開啟劑和/或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
本發(fā)明特別適用于停止、保護(hù)和/或保存對(duì)象體內(nèi)完整的器官，可以看出也可用于停止、保護(hù)和/或保存分離的器官。
所以，本發(fā)明還提供了停止、保護(hù)和/或保存器官的方法，包括給予一種組合物，該組合物含有有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)該器官的局部麻醉劑。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“加入”指其最廣泛的含義，即將本發(fā)明的組合物與器官接觸的任何方法，例如浸浴、灌注或通過各種途徑的泵送。
本文所用的所用“器官”也是取其最廣泛的含義，指具有特性功能的身體的任何部位包括組織和細(xì)胞或它們的一部分，例如細(xì)胞株或細(xì)胞器制備物。其他例子包括循環(huán)器官(如心臟)、呼吸器官(如肺)、泌尿器官(如腎和膀胱)、消化器官(如胃、肝、胰或脾)、生殖器官(如陰囊、睪丸、卵巢或子宮)、神經(jīng)器官(如腦)、生殖細(xì)胞(如精子或卵子)和體細(xì)胞(如皮膚細(xì)胞、心臟細(xì)胞)即肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、腦細(xì)胞或腎細(xì)胞。
本發(fā)明的方法特別適用于在心臟直視手術(shù)(包括心臟移植)中停止、保護(hù)和/或保存心臟。其他應(yīng)用包括在心血管介入性治療之前、期間或之后(可能包括心臟病發(fā)作、血管成形或血管造影)減少心臟的損傷。例如，可將組合物給予患或正發(fā)展心臟病的對(duì)象，且還可在使用溶血凝藥如鏈激酶的同時(shí)給藥。一旦凝塊溶解，存在的組合物就可保護(hù)心臟免受進(jìn)一步的傷害如重灌注損傷。對(duì)那些缺少正常血流、營(yíng)養(yǎng)和/或氧(不同時(shí)間段)的心臟部分而言該組合物可作為心臟保護(hù)劑特別有效。例如，可用該組合物治療在心血管介入性治療前存在的或由其引發(fā)的心臟缺血。
所以，本發(fā)明還提供了心臟麻痹性或心臟保護(hù)性組合物，它包括有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
鉀通道開啟劑或促效劑可選自尼可地爾、二氮嗪、米諾地爾、吡那地爾(pinicadil)、阿里卡林(aprikalim)、克羅卡林(cromokulim)、NS-1619(1，3-二氫-1-[2-羥基-5-(三氟甲基)苯基]-5-(三氟甲基)-2-H-苯并咪唑(benimidazol)-酮)、氨氯地平、Bay K86644(L型)(1，4-二氫-2，6-二甲基-5-硝基-4-[2(三氟甲基)苯基]-3-吡啶羧酸(甲酯)、芐普地爾HCl(L型)、鈣賽普汀(calciseptine)(L型)、ω-芋螺毒素GVIA(N型)、ω-芋螺毒素MVIIC(Q型)、HCl賽康啶、丹曲林鈉(Ca2+釋放抑制劑)、HCl地爾硫(L型)、非洛地平(filodipine)、氟桂嗪HCl(Ca2+/Na+)、弗斯匹林(L型)、HA-1077 2HCl(1-(5-異喹啉基磺?；?高哌嗪·HCl)、伊拉地平、洛哌丁胺HCl、曼諾力得(Ca2+釋放抑制劑)、HCl尼卡地平(L型)、硝苯地平(L型)、HCl尼古地平(L型)、尼莫地平(L型)、尼群地平(L型)、匹莫齊特(L-和T-型)、釕紅、斯里蘭卡肉桂堿(SR通道)、taicvatoxin、維拉帕米HCl(L型)、HCl甲氧基-維拉帕米(L型)、YS-035HCl(L型)N[2(3，4-二甲氧基苯基)乙基]-3，4-二甲氧基-N-甲基苯乙胺HCl)和AV封阻劑如維拉帕米和腺苷?？梢岳斫庖陨狭谐龅陌ㄢ}拮抗劑，因?yàn)殁浲ǖ篱_啟劑是間接鈣拮抗劑。
腺苷是特別優(yōu)選的，因?yàn)樗荛_啟鉀通道、超極化細(xì)胞、抑制代謝功能、還可能保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、提高組織的預(yù)先準(zhǔn)備和保護(hù)免受缺血或損傷。腺苷還是間接的鈣拮抗劑、血管舒張劑、抗心率失常劑、抗腎上腺素、游離基清除劑、停止劑、抗炎藥(降低中性白細(xì)胞活性)、代謝劑和可能的氧化氮供體。
在一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供了停止、保護(hù)和/或保存器官的方法，該方法包括給予有此需要的對(duì)象有效量的腺苷和局部麻醉劑。
合適的腺苷受體促效劑包括N6-環(huán)戊基腺苷(CPA)、N-乙基羧酰胺基腺苷(NEAC)、2-[p-(2-羧基乙基)苯乙基-氨基-5’-N-乙基羧酰胺基腺苷(CGS-21680)、2-氯腺苷、N6-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基腺苷、2-氯-N6-環(huán)戊基腺苷(CCPA)、N-(4-氨基芐基)-9-[5-(甲基羰基)-β-D-呋喃核糖基]-腺苷(AB-MECA)、([IS-[1a，2b，3b，4a(S*)]]-4-[7-[[2-(3-氯-2-噻吩基)-1-甲基-丙基]氨基]-3H-咪唑[4，5-b]吡啶基-3-基]環(huán)戊烷甲酰胺(AMP579)、N6-(R)-苯基異丙基腺苷(R-PLA)、氨基苯基乙基腺苷(APNEA)和環(huán)己基腺苷(CHA)。
局部麻醉劑可選自美西律、二苯海因、丙胺卡因、普魯卡因、馬比佛卡因、和1B類抗心律失常藥如利多卡因或其衍生物(如QX-314)。利多卡因是優(yōu)選的，因?yàn)樗芡ㄟ^封阻鈉快速通道、抑制代謝功能、降低游離胞液鈣、防止細(xì)胞釋放酶、可能保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞和保護(hù)肌絲損傷，而作為局部麻醉劑。利多卡因還能作為游離基清除劑和抗心律失常藥。
因?yàn)槔嗫ㄒ蚰芊庾桠c快速通道，可以理解其他鈉通道封阻劑也可替代或與局部麻醉劑聯(lián)用于本發(fā)明的方法和組合物中。合適的鈉通道封阻劑的例子包括毒物如河豚毒素。
所以，在本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例中，提供了一種停止、保護(hù)和/或保存器官的方法，所述的方法包括給予有此需要的對(duì)象有效量的腺苷和利多卡因。
在另一優(yōu)選實(shí)施例中，提供了藥物或獸用組合物，其包括有效量的腺苷和利多卡因。
為易于參考，本文以下將“鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑”和“局部麻醉劑”稱為“活性成分”。
本發(fā)明的方法包括給予有效量的活性成分，其時(shí)間和條件足以停止、保護(hù)和/或保存器官。可以分開、順序或同時(shí)給予單劑量或系列劑量的活性成分。
對(duì)象可以是人或動(dòng)物，如家畜(如綿羊、母?；蝰R)、實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)用動(dòng)物(如小鼠、兔或豚鼠)或?qū)櫸?如狗或貓)，尤其是那些有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的動(dòng)物。
可看出，按對(duì)象的特性、待停止、保護(hù)和/或保存的器官類型和提出的應(yīng)用，來確定組合物中存在的活性成分的量。對(duì)在心臟直視手術(shù)中需要停止心跳的人而言，腺苷的濃度宜為約0.001到20mM，較佳地約為0.01到10mM，更佳地約為0.05到5mM，利多卡因的濃度宜為約0.001到20mM，較佳地約為0.01到10mM，更佳地約為0.05到5mM。對(duì)在心臟病發(fā)作或心血管介入性治療之前、期間或之后需要治療的人對(duì)象而言，下表列出了腺苷和利多卡因的優(yōu)選濃度。注射利多卡因的類型/單位 腺苷位點(diǎn)靜脈內(nèi)灌輸 1. 0.001-10 1. 0.0001-20mg/分鐘/kg2. 0.01-52. 0.01-103. 0.01-13. 0.5-3靜脈內(nèi)快速注射 1. 0.0001-1001. 0.001-1000mg/kg 2. 0.001-10 2. 0.01-100冠狀動(dòng)脈內(nèi)灌注 1. 0.0001-1001. 005-50mg/分鐘 2. 0.001-1 2. 0.005-5(每個(gè)心臟)3. 0.01-0.5 3. 0.05-2.5冠狀動(dòng)脈內(nèi)快速注射 1. 0.001-10001. 0.01-10,000μg 2. 0.1-100 2. 1-1000(每個(gè)心臟)3. 1-20 3. 10-2001＝較佳地2＝更佳地3＝最佳地可以任何適當(dāng)?shù)耐緩浇o予活性成分，包括口服、植入、直腸、吸入或吹入(通過嘴或鼻)、局部(包括頰和舌下)、陰道和腸道外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、胸骨內(nèi)和皮內(nèi))。較佳地，通過將活性成分與對(duì)象或有類似血型的對(duì)象的血液混合，實(shí)現(xiàn)心臟直視手術(shù)或心血管介入性治療中的給藥。然后活性成分一般通過主動(dòng)脈進(jìn)入冠脈循環(huán)。通過連續(xù)或間歇給藥達(dá)到停止。例如，在Langendorff模式通過主動(dòng)脈逆行由連續(xù)或間歇灌注，發(fā)生心臟停止。但可以看出最佳路徑可因?qū)ο蟮牟“Y和年齡和所選用的活性成分而改變。
本發(fā)明的組合物在約15℃-37℃是高效的，較佳地為約20℃到37℃，用St Thomas No.2溶液只當(dāng)溫度較低(如降到4℃)才可完成較長(zhǎng)的停止時(shí)間。
當(dāng)可以將一種或兩種活性成分單獨(dú)給予時(shí)，較佳地是將它們中的一種或兩者與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑一起給予。各種載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑必須與組合物中的其他成分是藥學(xué)上“相容”的，且對(duì)對(duì)象無害。這些組合物可常規(guī)地以單位劑量存在，且可用制藥領(lǐng)域熟知的方法準(zhǔn)備。這些方法包括將活性成分與載體(由一種或多種副成分組成)混合。較佳地，通過均勻地、精細(xì)地將活性成分與液態(tài)載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑混合來制備這些組合物。
本發(fā)明還涉及藥物組合物或獸用組合物，包括活性成分和藥學(xué)上或獸用可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑。
本發(fā)明的適用于口服的組合物可以為離散的單位，如膠囊、囊劑或片劑(各含有預(yù)定量的活性成分)、粉末或顆粒、溶液或懸浮液(在水性或非水性液體中)、或水包油的液態(tài)乳化劑或油包水液態(tài)乳化劑?；钚猿煞忠部梢酝鑴⒏鄤┗蚝齽┑男问酱嬖凇?br>
通過壓制或壓模(任選地與一種或多種副成分)制備片劑。通過用適當(dāng)?shù)臋C(jī)器將呈自由流動(dòng)形式(如粉末或顆粒)的活性成分，且其任選地與結(jié)合劑(如預(yù)膠凝玉米粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)、填充劑(如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)、潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂、滑石粉或硅膠)、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(如硬脂酸鎂、滑石粉或硅膠)、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(如羥基乙酸淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡啶酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑混合，來制備壓制的片劑。可以用適當(dāng)?shù)臋C(jī)器將用惰性液態(tài)稀釋劑潤(rùn)濕的粉末狀化合物壓制制得模制片劑。這些片劑可任選地涂層或壓刻，且可將其制備成能提供緩慢或受控地釋放其中的活性成分，如利用不同比例的羥丙基甲基纖維素以提供理想的釋放特性。片劑還可任選地具有腸溶衣，從而在胃以外的腸道部分釋放。
在停止、保護(hù)和/或保存器官前給予的液態(tài)制備物可以是如溶液、糖漿或懸浮液的形式或它們也可以是在使用前需與水或其他適當(dāng)載體混合的干產(chǎn)品?？捎盟帉W(xué)上可接受的添加劑如懸浮劑(如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化的可食脂肪)、乳化劑(如卵磷脂或阿拉伯樹膠)、非水性載體(如扁桃油、油酯、酒精或分級(jí)的植物油)、防腐劑(如對(duì)羥基苯甲酸或山梨酸甲酯或丙酯)和能源(如碳水化合物如葡萄糖、脂肪如棕櫚酸酯或氨基酸)，通過常規(guī)的方法制備這些液態(tài)制備物。
適用于在嘴中局部給藥的組合物包括錠劑(含有可口基質(zhì)通常為蔗糖和阿拉伯樹膠或黃蓍膠的活性成分)、軟錠劑(含有在惰性基質(zhì)如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯樹膠的活性成分)和漱口水(含有在適當(dāng)液態(tài)載體中的活性成分)。
對(duì)皮膚上的局部應(yīng)用而言，活性成分可以乳膏、油膏、凝膠、溶液或懸浮液的形式。
對(duì)眼睛的局部給藥而言，活性成分可以是在適當(dāng)?shù)臒o菌水性或非水性載體中的溶液或懸浮液的形式。另外，緩沖劑包括殺菌劑和殺真菌劑的防腐劑，如乙酸苯汞或硝酸鹽、苯扎氯銨或雙氯苯雙胍己烷(chlorohexidine)和增稠劑如羥丙甲纖維素(hypromellose)也可加入。
還可將活性成分制備成儲(chǔ)備制劑。通過植入(如皮下或肌內(nèi))或肌內(nèi)注射，可給予這些持久作用的制劑。所以，可將活性成分與適當(dāng)?shù)木酆衔锘蚴杷牧弦黄鹬苽?如在可接受的油或離子交換樹脂中的乳劑，或溶解性較差的衍生物，如難溶的鹽)。
直腸給予的制劑可以是與適當(dāng)?shù)姆谴碳ば再x形劑混合的栓劑或保留灌腸劑，所述的賦形劑在常溫時(shí)是固體，在直腸溫度中則為液體，從而在直腸中融化釋放出活性成分。這些賦形劑包括可可豆油或水楊酸酯。
對(duì)鼻內(nèi)和肺部給藥而言，可將活性成分制備成通過適當(dāng)計(jì)量裝置或單位劑量裝置給予的溶液或懸浮液，或任選地與適當(dāng)?shù)慕o藥載體混合的粉末，用適當(dāng)?shù)乃瓦f裝置給藥。
對(duì)用于陰道給藥的組合物而言，可以是陰道環(huán)、填塞物、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧劑，它們除活性成分外還含有本領(lǐng)域已知的那些載體。
適用于腸道外給藥的組合物包括水性或非水性等滲無菌注射液，含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和維持組合物在接受對(duì)象的血液中等滲的溶質(zhì)；水性和非水性的無菌懸浮液，包括懸浮劑和增稠劑。這些組合物還可裝在單位劑量或多劑量的密封容器中，如安培和小瓶，且還可在冷凍干燥(凍干)條件下保存(僅需要在使用前立即添加無菌液態(tài)載體如注射用水)。還可從上述的無菌粉末、顆粒和片劑制備即用的注射溶液和懸浮液。
當(dāng)組合物是獸用時(shí)，可用該領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。這些獸用組合物的例子包括那些適用于
(a)口服、外用的，如獸用頓服藥(如水性或非水性溶液或懸浮液)；片劑或丸劑；與飼料混合用的粉末、顆?；蛩幫?；用于舌的貼片；(b)腸道外的給藥，如通過皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射，如無菌水或懸浮液；或(當(dāng)適合時(shí))通過乳房?jī)?nèi)注射，通過通過乳頭將懸浮液或溶液引入乳房；(c)局部給藥，如用于皮膚的乳膏、油膏或噴霧劑；或(d)陰道內(nèi)，如陰道環(huán)、乳膏或泡沫。
可以看出除上述提到的成分外，本發(fā)明的組合物還可含有其他本領(lǐng)域常用的試劑(取決于所述的組合物)，例如那些用于口服的組合物還可含有結(jié)合劑、甜味劑、增稠劑、香料、崩解劑、涂層、防腐劑、潤(rùn)滑劑和/或延遲劑。
合適的甜味劑包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、天冬苯丙二肽酯或糖精。合適的崩解劑包括玉米粉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、黃原膠、皂土、海藻酸或瓊脂。合適的香精包括薄荷油、鹿蹄草油、櫻桃、柑橘或樹莓香精。適當(dāng)?shù)耐繉影ū┧岷?或異丁烯酸和/或它們酯的聚合物或共聚物、石蠟、脂肪醇、玉米醇溶蛋白、紫膠或谷蛋白。適當(dāng)?shù)姆栏瘎┌ū郊姿徕c、維生素E、α-生育酚、維生素C、羥苯甲酸甲酯、羥苯甲酸丙酯或亞硫酸氫鈉。適當(dāng)?shù)臐?rùn)滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、油酸鈉、氯化鈉或滑石粉。適當(dāng)?shù)难舆t時(shí)間的試劑包括單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
一優(yōu)選的藥學(xué)上可接受的載體是pH約為6-9的緩沖液，較佳地pH約為7，更佳地pH約為7.4，和/或低濃度的鉀如至多約10mM，較佳地為約2-8mM，更佳地約為4-6mM。合適的緩沖液包括Krebs-Henseleit(其通常含有10mM葡萄糖、117mMNaCl、5.9mM KCl、25mM NaHCO3、1.2mM NaH2PO4、1.12mMCaCl2(游離Ca2+＝1.07mM)和0.512mM MgCl2+(游離Mg2+＝0.5mM))、St.Thomas No.2溶液、Tyrodes溶液(其通常含有10mM葡萄糖、126mM NaCl、5.4mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2、0.33mM NaH2PO4和10mM HEPES(N-[2-羥基乙基]哌嗪-N’-[2-乙基磺酸])、Fremes溶液、Hartmanns溶液(其通常含有129NaCl、5mM KCl、2mMCaCl2和29mM乳酸鹽)和Ringers-Lactate。用低鉀的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是使本發(fā)明的組合物對(duì)對(duì)象的傷害較少，尤其是那些兒科對(duì)象如新生兒/嬰兒。高鉀與鈣的積蓄有關(guān)，而鈣的積蓄又與心臟損傷、細(xì)胞膨脹和恢復(fù)過程中的心律失常相聯(lián)。在心臟停止中新生兒/嬰兒比成年人更易受高鉀的損傷。缺陷手術(shù)后，新生兒/嬰兒的心臟可能需要許多天才能恢復(fù)正常，有時(shí)需要加強(qiáng)治療或生命維持。所以使用低濃度鎂的載體是有利的，如低于約2.5mM，但可以看出需要時(shí)而且對(duì)組合物的活性基本沒有影響，也可使用高濃度鎂(如高達(dá)約20mM)。
在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，提供了一種藥物組合物或獸用組合物，包括腺苷、利多卡因和藥學(xué)上可接受的載體(其含有至多約10mM的鉀)。
在另一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供了藥物組合物或獸用組合物，包括腺苷、利多卡因和Krebs-Henseleit緩沖液。
組合物還可便利地以試劑盒的形式存在，將活性成分分開安置，以分開、順序或同時(shí)給予。
可以看出本發(fā)明的組合物還包括和/或與已知的藥物聯(lián)用，這取決于所需的應(yīng)用。例如，對(duì)用于基本預(yù)防血液中腺苷降解的藥物如核苷轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑如雙嘧達(dá)莫，可作為本發(fā)明組合物的添加劑。腺苷在血液中的半衰期約為10秒，所以存在防止其降解的藥物能將本發(fā)明的組合物的效果最大化。較佳地含有的雙嘧達(dá)莫的濃度范圍約為0.1nM到10mM，且對(duì)保護(hù)心臟非常有利。通過抑制腺苷轉(zhuǎn)運(yùn)(增加血管舒張)雙嘧達(dá)莫可以輔助腺苷的作用。當(dāng)組合物是間歇給予時(shí)這尤其重要。
藥物的其他例子包括凝塊破裂藥如鏈激酶。如上所述，可在給予患著或正發(fā)展成心臟病的對(duì)象鏈激酶的同時(shí)給予組合物。
本發(fā)明還參考以下實(shí)施例進(jìn)行了描述。這些實(shí)施例不構(gòu)成任何限制。
在實(shí)施例中，可以參考以下附圖
圖1是比較用Krebs-Henseleit配的100μM腺苷和0.5mM利多卡因與St.Thomas Hospital No.2溶液進(jìn)行的心臟停止的主動(dòng)脈流與時(shí)間的圖；圖2六張圖顯示30分鐘間歇缺血后心率、心收縮壓、主動(dòng)脈流、冠脈流、MV02和心率壓力乘積；圖3六張圖顯示2小時(shí)間歇缺血后心率、心收縮壓、主動(dòng)脈流、冠脈流、MV02和心率壓力乘積；圖4六張圖顯示4小時(shí)歇缺血后心率、心收縮壓、主動(dòng)脈流、冠脈流、MV02和心率壓力乘積；
圖5圖2-圖4結(jié)果總結(jié)的柱狀圖；圖6六張圖顯示用新生兒心臟進(jìn)行2小時(shí)歇缺血后心率、心收縮壓、主動(dòng)脈流、冠脈流、MV02和心率壓力乘積；圖7四張圖顯示冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后(無腺苷-利多卡因灌注)體內(nèi)大鼠心臟20分鐘缺血。
圖8四張圖顯示冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后體內(nèi)大鼠心臟20分鐘缺血，用腺苷(6.3mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時(shí)/300g大鼠的速率灌注；圖9顯示冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后體內(nèi)大鼠心臟30分鐘缺血，用腺苷(6.3mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時(shí)/300g大鼠的速率灌注；圖10四張圖顯示冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后體內(nèi)大鼠心臟20分鐘缺血，用腺苷(3.15mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時(shí)/300g大鼠的速率灌注；圖11四張圖顯示冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后體內(nèi)大鼠心臟30分鐘缺血，用腺苷(1.6mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時(shí)/300g大鼠的速率灌注；圖12顯示冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后體內(nèi)大鼠心臟30分鐘缺血，用腺苷(1.6mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時(shí)/300g大鼠的速率灌注；圖13兩張圖顯示用和不用AL在體內(nèi)心臟病的發(fā)病過程中ATp和PCr相對(duì)于缺血時(shí)間的變化；圖14兩張圖顯示用和不用AL在體內(nèi)心臟病的發(fā)病過程中乳酸鹽和心肌pH相對(duì)于缺血時(shí)間的變化；圖15兩張圖顯示用和不用AL在體內(nèi)心臟病的發(fā)病過程中糖原和心率壓力乘積相對(duì)于缺血時(shí)間的變化；在實(shí)施例中，“AL”指含有腺苷和利多卡因的組合物。
實(shí)施例1本實(shí)施例比較了腺苷(100μM)心麻痹劑與高鉀St.Thomas Hospital No.2溶液(16mM K+)對(duì)連續(xù)灌注全程缺血后的功能性恢復(fù)的影響。
37℃用Krebs-Henseleit pH7.4緩沖液以工作模式(預(yù)負(fù)荷7.5mmHg；后負(fù)荷100mmHg)灌注雄性450g Sprague-Dawley大鼠的心臟(n＝19)30分鐘。然后在70mmHg恒壓的逆行模式，用(i)含有100μM腺苷和0.5mM利多卡因的過濾的Krebs-Henseleit(10mM葡萄糖，pH7.6-7.8在37℃)(n＝11)的溶液或(ii)St.Thomas No.2溶液(0.2微米過濾)(n＝8)使心臟停止。停止30分鐘或4小時(shí)后，恢復(fù)用37℃ Krebs-Henseleit pH7.4進(jìn)行正常的順行灌注心臟。監(jiān)測(cè)心率、冠脈流、主動(dòng)脈流、主動(dòng)脈壓和耗氧。用Student t-測(cè)試測(cè)得統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)果與St.Thomas No.2溶液相比，用腺苷心麻痹進(jìn)行心臟停止30分鐘達(dá)到靜止?fàn)顟B(tài)只要一半時(shí)間(77秒與33秒，p＜0.0001)。在恒定的灌注壓下進(jìn)行停止，用腺苷心麻痹劑冠脈血流要大30％(p＜0.05)。在再灌注過程中發(fā)現(xiàn)AL心臟的主動(dòng)脈壓、主動(dòng)脈流和心排血量較快恢復(fù)。再灌注后5分鐘，AL心臟的心率、主動(dòng)脈壓、主動(dòng)脈流、冠脈流、心排血量和氧耗都較高(表1)。在100mmHg灌注壓(perfusion head)15、25和35分鐘后也發(fā)現(xiàn)較高的主動(dòng)脈流(圖1)。表130分鐘連續(xù)停止體溫正常的工作大鼠心臟后，比較腺苷和利多卡因心麻痹劑與St Thomas No.2 Hospital溶液(37℃)腺苷和利多卡因(n＝11) Thomas No.2溶液(n＝12)電動(dòng)停止(秒) 30±2秒 77±6秒?yún)?shù) 對(duì)照 5分鐘恢復(fù) ％對(duì)照 對(duì)照 5分鐘恢復(fù)％對(duì)照心臟(bpm) 292±9213±8 73％ 285±14 150±35 53％心收縮壓(mmHg) 122±3126±4 103％126±388±14 70％*舒張壓(mmHg) 76±1 74±1.397％ 78.5±1.2 59±8.5 75％主動(dòng)脈流(ml/分鐘) 35.6±3 24±4 67％ 31.5±4.1 9.96±2.832％*冠脈流(ml/分鐘)16.4±0.7 13.6±0.9 83％ 17.4±0.7410±1.9 57％心排血量(ml/分鐘) 52±3 37.2±4.7 72％ 50±4 20±4.5 40％*氧耗(μmol/分鐘/濕重) 6.97±0.285.39±0.38 77％ 7.28±0.304.14±0.557％在30分鐘停止流程前5分鐘采集取對(duì)照值。*顯著P＜0.05由功能性參數(shù)來看，與St.Thomas Hospital No.2溶液相比，100μM和0.5mM利多卡因心麻痹劑引導(dǎo)較短的停止時(shí)間和提高的恢復(fù)特性。下表2列出了4小時(shí)心臟停止的結(jié)果。表2比較S-D大鼠心臟用腺苷/利多卡因心臟麻痹劑進(jìn)行或St Thomas Hospital溶液No.2進(jìn)行連續(xù)心臟麻痹30分鐘后的功能性恢復(fù)穩(wěn)定灌注過程n 心率 心收縮壓 冠脈流主動(dòng)脈流心排血量 MV02停止(bpm) (mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7 292.18 122.38 16.44 35.66 526.97 在70mmHg穩(wěn)+利多卡因 ±8.82 ±3.58 ±1.07 ±3.33 ±2.73±0.28 定灌注壓力送心麻痹 ％100100100 100 100 100 遞進(jìn)行30分St Thomas102.85 128.08 17.431.53 48.93 7.28 鐘心臟停止Hosptial ±13.48±3.14 ±0.74 ±4.09 ±4.15±0.3No.2溶液 ％100 100 100 100 100 100表2續(xù)再灌注后5分鐘n心率 心收縮壓冠脈流 主動(dòng)脈流 心排血量 MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7212.91126.09 13.6 23.6437.24 5.39+利多卡因 ±7.62±4.15 ±0.92 ±4.09 ±4.73±0.38心麻痹劑 ％ 73103 83 66 7277St Thomas10 150.3688.08 10.099.96 20.06 4.14Hospital ±34.45 ±14.21 ±1.93 ±2.83 ±4.49±0.5No.2溶液％5370 57 32 4057再灌注后15分鐘n 心率 心收縮壓冠脈流 主動(dòng)脈流 心排血量MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7 262.18 114.9112.5525.0737.82 5.89+利多卡因 ±10.36±4.18±1.03 ±3.08 ±3.89 ±0.32心麻痹劑 ％90 9476 71 72 86St Thomas10257.09 118.8215.0516.1831.24 6.1Hospital ±14.81±3.81±1.24 ±2.95 ±3.73 ±0.45No.2溶液 ％90 9486 51 64 84表2續(xù)再灌注后25分鐘n 心率 心收縮壓冠脈流 主動(dòng)脈流心排血量MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7 253.54 118.4 14.08 30.5244.8 8.06+利多卡因 ±28.47±3.58 ±0.75±2.73 ±3 ±0.31心麻痹劑 ％ 8797 8686 8687St Thomas10 266.91 118.09 15.05 23.1138.16 6.6Hospital±15.16±3.43 ±1.04±3.94 ±4.47±0.48No.2溶液 ％ 9494 8673 7891再灌注后35分鐘n 心率 心收縮壓冠脈流 主動(dòng)脈流 心排血量MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘) (ml/分鐘)(ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷7 283.83 118.88 14.2 32.1346.33 6.54+利多卡因 ±11.74±4.62 ±0.68±2.94 ±3.43±0.09心麻痹劑％97 97 8890 8994St Thomas 10271.27 120.45 15.38 25.3540.74 6.74Hospital ±14.04±3.11 ±1.37±4.03 ±4.4 ±0.48No.2溶液％96 96 8880 8996
實(shí)施例2用實(shí)施例2所述的方法制備成年Wistar大鼠(350g)，然后進(jìn)行以下的間歇灌注。
在將心臟從工作模式回到成Lagndorff模式后，在70mmHg的恒壓下進(jìn)行間歇逆行灌注。穩(wěn)定后，用50ml腺苷加利多卡因心麻痹劑或St Thomas HospitalNo.2溶液使心臟停止。然后交叉夾住主動(dòng)脈，讓心臟停止20分鐘(除30分鐘間歇停止流程中)，然后解除夾子，自70mmHg壓頭送遞停止溶液2分鐘。再安置夾子，連續(xù)進(jìn)行此流程30分鐘、2小時(shí)和4小時(shí)(37℃)。
與實(shí)施例1的連續(xù)灌注相反，間歇心麻痹送遞是臨床上常用的方法。在間歇停止過程中，夾住對(duì)象的主動(dòng)脈，然后給予停止溶液。幾分鐘后，心臟停止，停止心麻痹送遞。心臟保持不動(dòng)可進(jìn)行手術(shù)。每30分鐘給予停止溶液幾分鐘，從而維持心臟的停止?fàn)顟B(tài)以保留和保護(hù)心肌。在這些時(shí)間過程中，由乳酸鹽的產(chǎn)生和心肌pH的下降表明心肌慢慢地變得缺血。由此，間歇灌注送遞通常被稱為間歇缺血停止。下表3-7和圖2-5顯示這些結(jié)果。
37℃缺血停止30分鐘表3和圖2顯示AL的停止時(shí)間是St Thomas溶液的一半，21s(n＝7)與53s(n＝10)。在重灌注后所有心臟的功能都恢復(fù)到相同水平(組間沒有明顯差異)。
表3用腺苷/利多卡因心麻痹劑和St Thomas Hospital溶液No.2進(jìn)行成年心臟30分鐘間歇停止*的特征*(15分鐘后的主動(dòng)脈夾制后，有節(jié)奏地重復(fù)2分鐘心麻痹)腺苷/利多卡因心 St Thomas Hospital P麻痹劑(n＝7) 溶液No.2(n＝10)停止時(shí)間(秒) 21.4352.78 p＜0.01±3.92 ±5.65首次收縮時(shí)間 147.14 133.67 ns重灌注后(秒) ±14.95 ±31.44恢復(fù)到100mmHg的時(shí)間 302.14 309.44 ns±21.87 ±30.15表4比較用腺苷/利多卡因心臟麻痹劑或St Thomas Hospital溶液No.2進(jìn)行間歇缺血*30分鐘后大鼠心臟的功能性恢復(fù)穩(wěn)定灌注過程n心率 心收縮壓 主動(dòng)脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02 停止(bpm) (mmHg)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡 7254.38128.23 34.33 21.64 58.29 31504±1651 6.31 在15分鐘因心麻痹劑±11.01 ±2.83 ±3.64 ±2.02±4.63 ±0.65 送遞心麻St Thomas10 276.74123.64 32.78 19.38 55.36 34090 5.97 痹劑進(jìn)行Hosptial ±11.87 ±1.30 ±2.09 ±1.62±2.59 ±1111 ±0.56 30分鐘缺No.2溶液 100 100 100100 100 100 100血停止表4續(xù)再灌注后5分鐘n 心率心收縮壓 主動(dòng)脈流冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(mmHg)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷7 180.48 132.79 22.06*22.15 47.5924074 6.81+利多卡因 ±26.83 ±6.65 ±4.48 ±2.20 ±2.70 ±3330 ±0.97心麻痹劑74 10464 102 82 76 108St Thomas 10 135.94 81.82 19.04*13.48 34.6123281 5.02Hospital±32.71 ±15.94±4.69 ±2.47 ±6.96 ±4069 ±0.79No.2溶液49 58 70 636884*用Students T測(cè)驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異(n＜0.05)表4續(xù)再灌注后15分鐘n心率心收縮壓 主動(dòng)脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02 停止(bpm)(mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7225.31 126.1729.21 17.14 48.9928228 5.03+利多卡因 ±19.17 ±2.88±3.20 ±1.81 ±3.76 ±2015 ±0.49心麻痹劑92 9885 79 84 90 80St Thomas 10 255.88 121.5624.84 17.00 45.0731131 5.41Hospital±9.69 ±1.32±2.36 ±1.64 ±2.47 ±1267 ±0.53No.2溶液92 9876 88 81 91 91表4續(xù)再灌注后30分鐘n 心率心收縮壓 主動(dòng)脈流冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm) (mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘)(ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7236.94124.8429.60 16.4949.09 29403 5.42+利多卡因 ±13.75 ±2.61±2.83 ±1.51 ±1.95 ±1231 ±0.70心麻痹劑979786 76 84 93 86St Thomas 10 255.17122.1622.26 17.0842.41 31154 5.26Hospital±12.29 ±1.62±3.32 ±1.20 ±3.28 ±1464 ±0.38No.2溶液929968 88 77 91 88再灌注后60分鐘n心率 心收縮壓主動(dòng)脈流 冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7244.97119.80 22.42 15.52 41.53292695.25+利多卡因 ±11.48 ±2.95 ±3.48 ±0.49±2.78 ±1240 ±0.55心麻痹劑100 93 65 7271 93 83St Thomas 10 258.16117.57 17.01 15.46 35.89303925.08Hospital±13.88 ±1.68 ±3.08 ±1.21±3.46 ±1727 ±0.33No.2溶液9395 52 8065 89 85
37℃缺血停止2小時(shí)表5和圖3顯示A-L停止的時(shí)間是St Thomas溶液的一半，33s(n＝7)與81s(n＝8)。用St Thomas停止的8只心臟中有4只不能恢復(fù)。所有A-L心臟都存活(n＝7)?；謴?fù)的St Thomas心臟的主動(dòng)脈流為50-90％，心率70-120％和心收縮壓90-100％恢復(fù)?；謴?fù)的A-L心臟的主動(dòng)脈流80％、心率95％和心收縮壓95-100％恢復(fù)。
表5用腺苷/利多卡因心麻痹劑和St Thomas Hospital溶液No.2進(jìn)行成年大鼠心臟缺血停止*2小時(shí)的特性(*20分鐘主動(dòng)脈夾制后，有節(jié)奏地重復(fù)2分鐘心麻痹)n腺苷/利多卡 n St Thomas Hospital p因心麻痹劑溶液No.2停止時(shí)間(秒)7 338 810.0003±5 ±8重灌注后的第一次收 7 360±19 4 260±95 NS縮的時(shí)間(秒)恢復(fù)到100mmHg的 7 541±46 4 2400±3261 NS時(shí)間和得到主動(dòng)脈流的時(shí)間(秒)心臟重灌注后存活的 100 50百分比
37℃缺血停止4小時(shí)表6和7及圖4顯示A-L停止的時(shí)間是St Thomas溶液的一半，26s(n＝9)與78s(n＝7)。用St Thomas停止的7只心臟中有6只不能恢復(fù)。所有A-L心臟都存活(n＝9)。唯一恢復(fù)的St Thomas心臟的主動(dòng)脈流為40％，心率80％和心收縮壓90％恢復(fù)?；謴?fù)的A-L心臟的主動(dòng)脈流70％、心率90％和心收縮壓95-100％恢復(fù)。
表6用腺苷/利多卡因心麻痹劑和St Thomas Hospital溶液No.2進(jìn)行成年大鼠心臟缺血停止*4小時(shí)的特性(*20分鐘主動(dòng)脈夾制后，有節(jié)奏地重復(fù)2分鐘心麻痹)腺苷/利多卡 St Thomas Hospital p因心麻痹劑溶液No.2停止時(shí)間(秒) 26.44 77.86 ＜0.001±2.77 ±10(n＝9) (n＝7)重灌注后的第一次收 401.67 390.00縮的時(shí)間(秒) 28.48 (n＝1)(n＝9)恢復(fù)到100mmHg的 549.22 480.00時(shí)間和得到主動(dòng)脈流 40.68 (n＝1)的時(shí)間(秒) (n＝9)心臟重灌注后存活的 100 14 ＜百分比 (n＝9) (n＝1) 0.0001表7比較用腺苷/利多卡因心臟麻痹劑或St Thomas Hospital溶液No.2進(jìn)行間歇心臟缺血性停止4小時(shí)后大鼠心臟的功能性恢復(fù)穩(wěn)定灌注過程n 心率心收縮壓 主動(dòng)脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02停止(bpm) (mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡 9275.33118.44 36.47 16.28 53.88 32338 6.71 在每20分因心麻痹劑±12.91 ±3.50 ±1.65 ±1.03 ±1.73 ±1084 ±0.45 鐘送遞心St Thomas7259.21121.57 41.23 16.03 57.26 31508 7.64 麻痹劑進(jìn)Hosptial ±12.84 ±2.42 ±4.18 ±1.26 ±5.30 ±1672 ±0.24 行4小時(shí)No.2溶液n＝1 270 117.00 51 19.8 70.8 315900 7.28 缺血停止表7續(xù)再灌注后15分鐘n 心率心收縮壓 主動(dòng)脈流冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(mmHg)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 9 229.89110.8919.81 13.92 36.4925327 5.94+利多卡因±16.10 ±1.86±3.56 ±1.53 ±4.13 ±1555 ±0.69心麻痹劑 ％83 9454 86 68 78 89St Thomas 1 220.00100 18.60 16.20 36.4022000 5.303Hospital ％81 8536 82 51 70 73No.2溶液再灌注后30分鐘n心率 心收縮壓 主動(dòng)脈流冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm) (mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 9239.444113.0024.62 11.5339.4426684 4.946+利多卡因 ±18.7165 ±3.07±2.917±1.001 ±4.259 ±1669 ±0.443心麻痹劑％87 9568 71 73 83 74St Thomas 1220105.0016.8 20.4 39.2 23100 5.303Hospital％81 9033 103 55 73 73No.2溶液表7續(xù)再灌注后60分鐘n 心率心收縮壓主動(dòng)脈流 冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘)(ml/分鐘)(mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 9 249.22 111.89 25.58 11.3940.63 275705.04+利多卡因±17.19 ±3.29 ±3.26 ±1.32 ±4.72±1577 ±0.49心麻痹劑 ％91 94 70 70 7585 75St Thomas 1 250.00 102.00 14.40 18.0034.40 255006.29Hospital ％93 87 28 91 4981 86No.2溶液圖5是圖2-4結(jié)果的總結(jié)，顯示在30分鐘缺血間歇停止(n＝7)、2小時(shí)缺血間歇停止(n＝7)和4小時(shí)缺血間歇停止(n＝9)后，用AL溶液停止的心臟全部存活。相反，用St Thomas溶液停止的心臟，30分鐘后全部(n＝10)存活，50％(8只測(cè)試的心臟中有4只)和14％(7只測(cè)試的心臟中有1只)存活。另外，成功地用AL停止兩只心臟達(dá)6小時(shí)。
圖2-4顯示0.5小時(shí)停止(圖2)、2小時(shí)停止(圖3)和4小時(shí)停止(圖4)后的60分鐘過程中的功能特性(心率、心收縮壓、主動(dòng)脈流、冠脈流、氧耗和心率-壓力乘積)。在所有實(shí)驗(yàn)中，用AL溶液進(jìn)行心臟停止的功能性恢復(fù)參數(shù)較高。0.5小時(shí)停止后，除接受AL停止溶液的心臟主動(dòng)脈流恢復(fù)外，這些差異都不明顯。30分鐘時(shí)70mmHg壓頭下的主動(dòng)脈流恢復(fù)到對(duì)照的90％，而相比之下St Thomas心臟只有65％。2小時(shí)間歇缺血停止后功能性恢復(fù)的差異就更大。AL停止的心臟心率和心收縮壓恢復(fù)到幾近對(duì)照值的100％，而St.Thomas心臟僅恢復(fù)40-50％。AL心臟中主動(dòng)脈流、冠脈流、氧耗和心率-壓力乘積恢復(fù)到對(duì)照的80％和更高，St Thomas心臟僅為20-40％。4小時(shí)停止后，差異就更大了，7只StThomas心臟只有1只恢復(fù)。而所有AL心臟在4小時(shí)停止后，都恢復(fù)到上述2小時(shí)停止的功能性參數(shù)。可以得到如下結(jié)論AL停止在2和4小時(shí)停止過程中提供對(duì)成年心臟的優(yōu)良保護(hù)和恢復(fù)。
實(shí)施例3用實(shí)施例2所述的方法，37℃用間歇灌注方法制備新生/幼大鼠(用50-70g 20天齡的大鼠)心臟2小時(shí)，但將送遞和后負(fù)荷的壓頭減至50mmHg。下表8和9及圖6列出的結(jié)果顯示顯示A-L停止的時(shí)間是St Thomas溶液的三分之一，19s(n＝7)與66s(n＝7)。用St Thomas停止的7只心臟中有3只不能恢復(fù)。所有A-L心臟都存活(n＝7)，恢復(fù)80％主動(dòng)脈流。恢復(fù)的St Thomas心臟恢復(fù)到平均80％主動(dòng)脈流速，但變異非常大。
所有用AL溶液停止的新生/幼大鼠心臟都在2小時(shí)間歇缺血停止后恢復(fù)。而用St Thomas溶液停止的7只心臟在2小時(shí)間歇缺血停止后只有4只恢復(fù)。在AL停止心臟中，心率和心收縮壓恢復(fù)到對(duì)照值的90-100％，而St Thomas心臟僅恢復(fù)50-60％。AL心臟的主動(dòng)脈流、冠脈流和心率-壓力乘積恢復(fù)到對(duì)照的80％及更高，而St Thomas心臟僅約50％。AL心臟的氧耗為對(duì)照的70-85％，而St Thomas溶液進(jìn)行的心臟停止僅為約60％?？梢缘贸鋈缦陆Y(jié)論在新生/幼大鼠心臟的2小時(shí)停止和恢復(fù)過程中AL能提供優(yōu)良的保護(hù)。
表8用腺苷/利多卡因心麻痹劑和St Thomas Hospital溶液No.2進(jìn)行新生未成熟大鼠心臟的停止*的特性(*20分鐘主動(dòng)脈夾制后，有節(jié)奏地重復(fù)2分鐘心麻痹)重灌注后負(fù)荷50mmHg腺苷/利多卡 St Thomas Hospital p因心麻痹劑 溶液No.2停止時(shí)間(秒) 18.57 65.71*＜0.05±3.27(7) ±12.71(7)重灌注后的第一次收 23.83 55.75*＜0.05縮的時(shí)間(秒) ±3.03(7) ±12.97(4)恢復(fù)到100mmHg的165 270 ns時(shí)間和得到主動(dòng)脈流 ±29.48(7) ±83.5(4)的時(shí)間(秒)心臟重灌注后存活的 100(7) 57*(4) ＜0.05百分比心律失常發(fā)生率(％) 14(7) 25(4)ns*用Student t測(cè)驗(yàn)顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異p＜0.05表9比較用腺苷/利多卡因心臟麻痹劑或St Thomas Hospital溶液No.2進(jìn)行缺血*停止2小時(shí)后未成熟大鼠心臟的功能性恢復(fù)*(20分鐘主動(dòng)脈夾制后，有節(jié)奏地重復(fù)2分鐘心麻痹)穩(wěn)定灌注過程n心率 主動(dòng)脈流 冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02 停止(bpm) (ml/分鐘)(ml/分鐘) (ml/分鐘)(mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡 7261.98 6.99 4.8013.45*16579 4.60每20分鐘送遞心因心麻痹劑±12.81 ±1.30 ±0.56 ±1.16±853 ±0.52 麻痹劑2分鐘進(jìn)行St Thomas7239.96 4.43 4.299.95*15515 5.392小時(shí)缺血停止Hosptial ±19.52 ±1.05 ±0.76 ±1.01±1149±0.61No.2溶液表9續(xù)再灌注后15分鐘n 心率 主動(dòng)脈流 冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡因心麻痹劑 7 230.94 5.37 4.0311.77 14046 4.71±12.33±1.63 ±0.61 ±1.84±1297±0.33St Thomas Hospital 4 233.45 3.78 4.58 10.87 13818 4.36No.2溶液 ±36.2 ±1.51 ±1.2 ±1.99±3103±0.67再灌注后30分鐘n心率 主動(dòng)脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡因心麻痹劑 7235.39 6.67 4.09 12.45 14994 4.43±8.99 ±1.58±0.68 ±1.71 ±709 ±0.24St Thomas Hospital 4228.55 4.38 4.00 10.63 13522 4.14No.2溶液±32.67±1.68±1.14 ±1.97 ±2912 ±0.69再灌注后60分鐘n心率 主動(dòng)脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡因心麻痹劑 7242.78 6 3.75 13.05 13272 4.13±30.35±1.66±0.57 ±1.55 ±2643 ±0.62St Thomas Hospital 4234.48 3.88 3.58 9.6813910 4.02No.2溶液±40.16±1.41±0.92 ±1.50 ±3262 ±0.75
實(shí)施例4下表10顯示腺苷和利多卡因?qū)?-2天齡的新生豬心臟的心麻痹有效。(每20分鐘主動(dòng)脈夾制間給予2分鐘心麻痹劑脈沖共2小時(shí))。
表10
實(shí)施例5將雄性Wistar大鼠(250g)關(guān)養(yǎng)在控溫和控光的房間。提供充足的食物和水，直至實(shí)驗(yàn)前1天，停止供食，讓大鼠饑餓過夜。腹腔內(nèi)注射戊巴比妥(60mg/kg)麻醉大鼠。麻醉下，分別將導(dǎo)管植入大鼠的股靜脈和動(dòng)脈，用于腺苷和利多卡因(AL)給藥，并分別測(cè)定血壓。將大鼠氣管切開，讓大鼠人工呼吸每分鐘60-70次室內(nèi)空氣。將大鼠的胸部切開，固定左前降(LAD)冠狀動(dòng)脈。將縫線置于LAD的下側(cè)。基線20分鐘后，捆扎實(shí)驗(yàn)大鼠組的LAD 30分鐘，監(jiān)測(cè)血壓和心率。缺血30分鐘后，松開夾子再灌輸心臟20分鐘。在對(duì)照大鼠，圖7顯示了沒有給予AL。對(duì)灌注AL的3只大鼠，分別給予三種不同劑量的腺苷(1)如圖8和9所示，6.3mg/ml腺苷+12.6mg/ml利多卡因，以1ml/小時(shí)/300g大鼠速率灌注；(2)如圖10所示，3.15mg/ml腺苷+12.6mg/ml利多卡因，以1ml/小時(shí)/300g大鼠速率灌注；(3)如圖11和12所示，1.6mg/ml腺苷+12.6mg/ml利多卡因，以1ml/小時(shí)/300g大鼠灌注。
與30分鐘缺血(無AL灌注)的大鼠相比，發(fā)現(xiàn)AL以劑量依賴性形式保護(hù)心臟，在較高的劑量達(dá)到最大保護(hù)。如果腺苷的劑量減半則保護(hù)將逐漸失去。但即使在最差的狀況，心臟的功能也比無AL的要好。所有接受AL大鼠的心臟心率和壓力都恢復(fù)。
體內(nèi)心臟病過程中腺苷和利多卡因的綜述在心臟病發(fā)作或心肌梗塞(MI)30分鐘的大鼠模型中，圖7顯示10分鐘血壓達(dá)到0，可將動(dòng)物視為接近死亡。10分鐘，心臟恢復(fù)而且血壓上升，高度漂移由于缺血損傷。這種恢復(fù)可能是由于側(cè)支循環(huán)的補(bǔ)充。相反，在夾制冠狀動(dòng)脈前5分鐘，將腺苷和利多卡因溶液灌注入大鼠，則10分鐘中沒有觀察到血壓的這種下跌(圖8)。而沒有接受AL溶液的大鼠都接近死亡，存在AL溶液時(shí)心臟降低了其收縮的速率且僅錯(cuò)過少許心跳。值得注意的是，缺血20分鐘時(shí)心跳沒有紊亂。AL灌注停止后所有心臟都恢復(fù)其全部功能(圖9)?？梢缘贸鋈缦陆Y(jié)論在AL溶液中的心臟明顯受到保護(hù)而對(duì)抗深度缺血發(fā)作(由關(guān)閉冠狀動(dòng)脈引發(fā))。AL溶液對(duì)心臟的保護(hù)作用與腺苷的劑量相關(guān)。如果將腺苷的劑量減半而利多卡因的劑量不變，在10分鐘和20分鐘可以發(fā)現(xiàn)較大的變化(圖10)。如果再將腺苷的劑量減半，保護(hù)進(jìn)一步減少。但在所有實(shí)驗(yàn)中AL灌注的大鼠都完全恢復(fù)血液動(dòng)力學(xué)功能(基于血壓和心率)(圖12)。
將兩組有或無AL的經(jīng)歷心臟病發(fā)作的大鼠置于核磁共振(NMR)波譜儀中，圖13-15記錄了代謝數(shù)據(jù)。NMR非侵害性地測(cè)定了閉合冠狀動(dòng)脈的30分鐘過程中三磷酸腺苷(ATP)、磷酸肌酸(PCr)和pH的變化。在工作臺(tái)上進(jìn)行的分開實(shí)驗(yàn)中，在液氮溫度將心臟冷凍夾制，對(duì)中性化合的組織酸提取液以酶學(xué)方法(測(cè)定通過)用分光光度計(jì)測(cè)定糖原和乳酸鹽。從閉合冠狀動(dòng)脈灌注中接受AL溶液的心臟觀察到主要的明顯差異(P＜0.05)。AL心臟中ATP保持在90-100％對(duì)照值，而未接受AL的心臟為60％(圖13)。這同樣也在高能磷酸儲(chǔ)備的PCr中可以看出，雖然未接受AL的心臟表現(xiàn)出更大的百分比下跌(減至20％閉合前的值)(圖14)。在接受AL的心臟中，在缺血過程中乳酸鹽(厭氧代謝的終產(chǎn)物)增加5倍，而未接受AL的心臟中乳酸鹽增加20倍以上(圖15)。這由心肌細(xì)胞pH的測(cè)定可以支持，在未接受AL溶液的心臟發(fā)現(xiàn)更大的pH下降(更多酸)。需要指出的是，在AL心臟的最初10分鐘pH的下跌很少，表明存在AL時(shí)心肌細(xì)胞根據(jù)組織乳酸鹽水平較低得到更好氧的支持。在前10分鐘有和無AL的心臟所消耗的燃料糖原量類似，但AL心臟保持約60-70％閉合前的值(單獨(dú)與缺血心臟相比)。由代謝數(shù)據(jù)可以看出接受AL的冠脈閉合的心臟比那些沒有接受AL的心臟更需氧。糖原是各心臟的主要能量來源，但AL心臟優(yōu)先地從線粒體氧化磷酸化(而不是產(chǎn)生乳酸)再生它們的ATP。這與上述血壓和心率變化的功能性數(shù)據(jù)完全一致。
實(shí)施例6用Krebs-Henseleit(含有10mM葡萄糖，pH7.4)配制200μM和50μM局部麻醉劑丙胺卡因、普魯卡因和甲哌卡因配制停止溶液。下表11列出的結(jié)果是在70mmHg用心麻痹劑持續(xù)灌注30分鐘得到的。
表11腺苷+丙胺卡因腺苷+普魯卡因腺苷+馬比佛卡因停止時(shí)間 13秒21秒 10.5秒第一次心跳113 145036主動(dòng)脈流恢復(fù) 312 3353405分鐘AF％ 67％58％ 39％實(shí)施例7將松脂溶解于0.05％二甲基亞砜(DMSO)(200μM)、局部麻醉劑丙胺卡因、普魯卡因、馬比佛卡因和利多卡因(在Krebs-Henseleit溶液中)來制備停止溶液。如下表12所示，發(fā)現(xiàn)松脂不如腺苷有效。
表12松脂 松脂 松脂松脂+丙胺卡因+普魯卡因+馬比佛卡因 +利多卡因停止時(shí)間128 422041 149第一次心跳 215 120056 230主動(dòng)脈流恢復(fù)810 450655 4455分鐘AF％ 0％ 25％ 0％70％15分鐘AF％ 38％ 57％ 36％71％實(shí)施例8添加ATP-鉀通道封阻劑、格列苯脲(20μM)和腺苷及利多卡因，延遲的停止時(shí)間增加三倍，從26秒(AL)增至76-120秒(ALG)(n＝2)。存在格列苯脲時(shí)更慢的恢復(fù)時(shí)間和更低的主動(dòng)脈流(42-53％)顯示開啟KATP通道作為AL所提供的停止和保護(hù)模式的重要性。從這些結(jié)果可以得出如下結(jié)論ATP-鉀通道是腺苷和利多卡因引發(fā)停止應(yīng)答的重要靶。
表13A/L+20μM格列苯脲(n＝2) 僅A/L(n＝5)停止時(shí)間 76-120秒 26秒第一次心跳 245-255(分鐘秒)1分鐘37秒主動(dòng)脈流恢復(fù)時(shí)間500-730(分鐘秒)3分鐘51秒5分鐘AF％ 42-53％ 84％
權(quán)利要求
1.一種停止、保護(hù)和/或保存器官的方法，其特征在于，所述的方法包括給予有此需要的對(duì)象有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的器官可以是對(duì)象體內(nèi)完整的器官，也可以是分離的完整器官。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的器官是循環(huán)器官、呼吸器官、泌尿器官、消化器官、生殖器官、神經(jīng)器官或體細(xì)胞。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的循環(huán)器官是心臟。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的方法是用于在心臟直視手術(shù)過程中停止、保護(hù)和/或保存心臟；在心血管介入性治療之前、期間或之后減少心臟的受損；或保護(hù)那些已經(jīng)歷缺少正常血流、營(yíng)養(yǎng)和/或氧氣的心臟部分。
6.如權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述的鉀通道開啟劑或促效劑選自尼可地爾、二氮嗪、米諾地爾、吡那地爾、阿里卡林、克羅卡林、NS-1619(1，3-二氫-1-[2-羥基-5-(三氟甲基)苯基]-5-(三氟甲基)-2-H-苯并咪唑-酮)、氨氯地平、Bay K86644(L型)(1，4-二氫-2，6-二甲基-5-硝基-4-[2(三氟甲基)苯基]-3-吡啶羧酸(甲酯)、芐普地爾HCl(L型)、鈣賽普汀(L型)、ω-芋螺毒素GVIA(N型)、ω-芋螺毒素MVIIC(Q型)、HCl賽康啶、丹曲林鈉(Ca2+釋放抑制劑)、HCl地爾硫(L型)、非洛地平、氟桂嗪HCl(Ca2+/Na+)、弗斯匹林(L型)、HA-10772HCl(1-(5-異喹啉基磺?；?高哌嗪·HCl)、伊拉地平、洛哌丁胺HCl、曼諾力得(Ca2+釋放抑制劑)、HCl尼卡地平(L型)、硝苯地平(L型)、HCl尼古地平(L型)、尼莫地平(L型)、尼群地平(L型)、匹莫齊特(L-和T-型)、釕紅、斯里蘭卡肉桂堿(SR通道)、taicatoxin、維拉帕米HCl(L型)、HCl甲氧基-維拉帕米(L型)、YS-035HCl(L型)N[2(3，4-二甲氧基苯基)乙基]-3，4-二甲氧基-N-甲基苯乙胺HCl)和AV封阻劑。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的AV封阻劑是腺苷。
8.如權(quán)利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述的腺苷受體促效劑選自N6-環(huán)戊基腺苷(CPA)、N-乙基羧酰胺基腺苷(NEAC)、2-[p-(2-羧基乙基)苯乙基-氨基-5’-N-乙基羧酰胺基腺苷(CGS-21680)、2-氯腺苷、N6-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基腺苷、2-氯-N6-環(huán)戊基腺苷(CCPA)、N-(4-氨基芐基)-9-[5-(甲基羰基)-β-D-呋喃核糖基]-腺苷(AB-MECA)、([IS-[1a，2b，3b，4a(S*)]]-4-[7-[[2-(3-氯-2-噻吩基)-1-甲基-丙基]氨基]-3H-咪唑[4，5-b]吡啶基-3-基]環(huán)戊烷甲酰胺(AMP579)、N6-(R)-苯基異丙基腺苷(R-PLA)、氨基苯基乙基腺苷(APNEA)和環(huán)己基腺苷(CHA)。
9.如權(quán)利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述的局部麻醉劑選自美西律、二苯海因丙胺卡因、丙胺卡因、普魯卡因、馬比佛卡因、和1B類抗心律失常藥。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述的1B類抗心律失常藥是利多卡因。
11.如權(quán)利要求1-10任一所述的方法，其特征在于，所述的活性成分(i)和(ii)與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑一起給予。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑是pH約為6-9的緩沖液。
13.如權(quán)利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑含有低濃度的鉀。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述的鉀的濃度至多約為10mM。
15.如權(quán)利要求12-14任一所述的方法，其特征在于，所述的緩沖液是Krebs-Henseleit、St.Thomas No.2溶液、Tyrodes溶液、Fremes溶液、Hartmanns溶液或Ringers-Lactate。
16.如權(quán)利要求11-15任一所述的方法，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑含有低濃度的鎂。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述的鎂的濃度至多約為2.5mM。
18.如權(quán)利要求1-17任一所述的方法，其特征在于，所述的活性成分(i)和(ii)與其他藥物一起給予。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述的藥物是雙嘧達(dá)莫或凝塊破裂藥。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述的凝塊破裂藥是鏈激酶。
21.如權(quán)利要求1-20任一所述的方法，其特征在于，所述的對(duì)象是新生兒/嬰兒。
22.如權(quán)利要求4-21任一所述的方法，其特征在于，所述的在心血管應(yīng)用中的給藥是通過將活性成分與對(duì)象和/或有類似血型的對(duì)象的血液混合完成。
23.如權(quán)利要求1-22任一所述的方法，其特征在于，所述的停止是通過連續(xù)或間歇送遞實(shí)現(xiàn)的。
24.如權(quán)利要求1-23任一所述的方法，其特征在于，所述的停止是在約15℃-37℃進(jìn)行的。
25.(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑在制備用于停止、保護(hù)和/或保存器官的藥物中的用途。
26.(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑在停止、保護(hù)和/或保存器官中的用途。
27.一種停止、保護(hù)和/或保存器官的方法，其特征在于，所述的方法包括給予器官有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或器官受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
28.一種藥物組合物或獸用組合物，其特征在于，所述的組合物含有有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
29.如權(quán)利要求28所述的組合物，其特征在于，所述的鉀通道開啟劑或促效劑選自尼可地爾、二氮嗪、米諾地爾、吡那地爾、阿里卡林、克羅卡林、NS-1619(1，3-二氫-1-[2-羥基-5-(三氟甲基)苯基]-5-(三氟甲基)-2-H-苯并咪唑-酮)、氨氯地平、Bay K86644(L型)(1，4-二氫-2，6-二甲基-5-硝基-4-[2(三氟甲基)苯基]-3-吡啶羧酸(甲酯)、芐普地爾HCl(L型)、鈣賽普汀(L型)、ω-芋螺毒素GVIA(N型)、ω-芋螺毒素MVIIC(Q型)、HCl賽康啶、丹曲林鈉(Ca2+釋放抑制劑)、HCl地爾硫(L型)、非洛地平、氟桂嗪HCl(Ca2+/Na+)、弗斯匹林(L型)、HA-1077 2HCl(1-(5-異喹啉基磺?；?高哌嗪·HCl)、伊拉地平、洛哌丁胺HCl、曼諾力得(Ca2+釋放抑制劑)、HCl尼卡地平(L型)、硝苯地平(L型)、HCl尼古地平(L型)、尼莫地平(L型)、尼群地平(L型)、匹莫齊特(L-和T-型)、釕紅、斯里蘭卡肉桂堿(SR通道)、taicatoxin、維拉帕米HCl(L型)、HCl甲氧基-維拉帕米(L型)、YS-035HCl(L型)N[2(3，4-二甲氧基苯基)乙基]-3，4-二甲氧基-N-甲基苯乙胺HCl)和AV封阻劑。
30.如權(quán)利要求29所述的組合物，其特征在于，所述的AV封阻劑是腺苷。
31.如權(quán)利要求28-30任-所述的組合物，其特征在于，所述的腺苷受體促效劑選自N6-環(huán)戊基腺苷(CPA)、N-乙基羧酰胺基腺苷(NEAC)、2-[p-(2-羧基乙基)苯乙基-氨基-5’-N-乙基羧酰胺基腺苷(CGS-21680)、2-氯腺苷、N6-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基腺苷、2-氯-N6-環(huán)戊基腺苷(CCPA)、N-(4-氨基芐基)-9-[5-(甲基羰基)-β-D-呋喃核糖基]-腺苷(AB-MECA)、([IS-[1a，2b，3b，4a(S*)]]-4-[7-[[2-(3-氯-2-噻吩基)-1-甲基-丙基]氨基]-3H-咪唑[4，5-b]吡啶基-3-基]環(huán)戊烷甲酰胺(AMP579)、N6-(R)-苯基異丙基腺苷(R-PLA)、氨基苯基乙基腺苷(APNEA)和環(huán)己基腺苷(CHA)。
32.如權(quán)利要求28-31任一所述的組合物，其特征在于，所述的局部麻醉劑選自美西律、二苯海因丙胺卡因、丙胺卡因、普魯卡因、馬比佛卡因、和1B類抗心律失常藥。
33.如權(quán)利要求28-32任一所述的組合物，其特征在于，所述的組合物是心麻痹或心保護(hù)組合物。
34.如權(quán)利要求28-33任一所述的組合物，其特征在于，所述的活性成分(i)和(ii)是與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑一起給予的。
35.如權(quán)利要求34所述的組合物，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑是pH約為6-9的緩沖液。
36.如權(quán)利要求34或35所述的組合物，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑含有低濃度的鉀。
37.如權(quán)利要求36所述的組合物，其特征在于，所述的鉀的濃度至多約為10mM。
38.如權(quán)利要求35-37任一所述的組合物，其特征在于，所述的緩沖液是Krebs-Henseleit、St.Thomas No.2溶液、Tyrodes溶液、Fremes溶液、Hartmanns溶液或Ringers-Lactate。
39.如權(quán)利要求34-38任一所述的組合物，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑含有低濃度的鎂。
40.如權(quán)利要求39所述的組合物，其特征在于，所述的鎂的濃度至多約為2.5mM。
41.如權(quán)利要求29-40任一所述的組合物，其特征在于，所述的活性成分(i)和(ii)與其他藥物一起給予。
42.如權(quán)利要求41所述的組合物，其特征在于，所述的藥物是雙嘧達(dá)莫或凝塊破裂藥。
43.如權(quán)利要求42所述的組合物，其特征在于，所述的凝塊破裂藥是鏈激酶。
全文摘要
本發(fā)明涉及停止、保護(hù)和/或保存器官的方法,該方法包括給予有此需要的對(duì)象有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。本發(fā)明還涉及停止、保護(hù)和/或保存器官的方法,該方法包括給予器官組合物,該組合物含有有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)器官的局部麻醉劑。本發(fā)明還提供了藥物組合物或獸用組合物,其包括有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
文檔編號(hào)A61K31/4409GK1344135SQ00805408
公開日2002年4月10日 申請(qǐng)日期2000年3月22日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月23日
發(fā)明者G·P·多布森 申請(qǐng)人:詹姆斯庫(kù)克大學(xué)