專利名稱：一種治療艾滋病的藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種治療艾滋病的藥物組合物及其在制備逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑藥物和在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用。
艾滋病(Acquired Immuno-deficiency Syndrome,AIDS,獲得性免疫缺損綜合癥，簡(jiǎn)稱艾滋病)是當(dāng)今世界主要威脅人類健康的不可根治的致死疾病之一。導(dǎo)致艾滋病的病原體即人類免疫缺損病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)，1983年獲得分離確證，有兩種亞型HIV-1和HIV-2，若干變異株。HIV繁殖過(guò)程大致可分九個(gè)步驟吸附、穿入、脫殼、早期蛋白合成、病毒基因組核酸的復(fù)制、晚期蛋白合成、核殼體裝配、病毒體成熟、釋放等。從理論上說(shuō)，上述過(guò)程中的每一個(gè)步驟都能作為篩選抗HIV藥物的靶點(diǎn)。并且每一步驟都發(fā)現(xiàn)了許多相應(yīng)的抑制劑，不同類型的化合物被相繼研究和用于抗艾滋病病毒。然而其中病毒基因組核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)的合成是HIV繁殖最關(guān)鍵的步驟，且需要有某些特異性酶的參與，故抗HIV藥物的研制的熱點(diǎn)主要集中于尋找這些特異性酶的抑制劑方面，包括逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)抑制劑(它抑制HIV從mRNA轉(zhuǎn)錄DNA)，蛋白質(zhì)合成酶抑制劑，逆轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)因子(TAT)抑制劑等。全世界已對(duì)約20000個(gè)化合物進(jìn)行了抗HIV的研究，目前已成功地研制出了逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑14個(gè)抗HIV藥物。如逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(AZT,DDC,DDI,D4T,3TC,Nevirapine,Delavirdine,Efavinavir)和蛋白酶抑制劑藥物(Sequanavir,Ritonavir,Indinavir,Nelfinavir,Amprenavir)雖然被批準(zhǔn)用于臨床，客觀上延長(zhǎng)了艾滋病患者的生命，但同時(shí)又帶了嚴(yán)重的毒副作用如骨髓抑制和健忘等以及導(dǎo)致抗病毒株的出現(xiàn)。因而臨床上急需研制出具有不同化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)理的新類型抗HIV病毒的新藥物。從中草藥中發(fā)現(xiàn)天然抗HIV活性化合物或先導(dǎo)物——是目前國(guó)內(nèi)外研究的重要方面和非?；钴S的領(lǐng)域。至今發(fā)現(xiàn)100多種天然化合物具有HIV活性，分屬于倍半萜、二萜、三萜、甾體、黃酮、香豆素、肽類、生物堿，多糖，天花粉蛋白等，其中活性較強(qiáng)的如甘草甜素，金絲桃素，姜黃素，大豆皂甙，喜樹堿，栗精胺，香菇多糖，天花粉蛋白等。
迄今，現(xiàn)有技術(shù)中沒(méi)有含有式(Ⅰ)化合物消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯作為有效成分在治療艾滋病方面的報(bào)道，也沒(méi)有該化合物在制備逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑藥物中的應(yīng)用和在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用的報(bào)道。
本發(fā)明的目的在于提供用于治療艾滋病的藥物組合物，其中含有治療艾滋病有效量的式(Ⅰ)化合物消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯及藥用載體和/或賦形劑，提供該藥物組合物在制備逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑藥物和在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案用于治療艾滋病的藥物組合物，其中含有治療艾滋病有效量的式(Ⅰ)化合物消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯及可藥用載體和/或賦形劑。 本發(fā)明同時(shí)還提供了上述藥物組合物在制備逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑藥物中的應(yīng)用以及上述藥物組合物在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物含有0.1-99％，優(yōu)選為0.5-90％的本發(fā)明化合物，其余為藥物學(xué)上可接受的，對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種選固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)口服和注射(靜注、肌注)兩種形式給藥。
為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用本發(fā)明的式(Ⅰ)化合物消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯(以下簡(jiǎn)稱KIBL-45)及其與藥用載體或賦形劑組成的藥物組合物的藥理作用結(jié)果來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
1、消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯對(duì)HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制作用(1)實(shí)驗(yàn)方法逆轉(zhuǎn)錄酶(Reverse Transcriptase,RT)測(cè)定，非放射性(non-radioactive)試劑盒購(gòu)自Roche公司。將化合物溶解于DMSO中。取出試劑盒中反應(yīng)條，每孔滴加20μl HIV-1RT溶液，13μl裂解緩沖液，7μl溶于DMSO的化合物，20μl含模板和核苷酸的反應(yīng)緩沖液?；衔锏慕K噥度為210μg/ml。設(shè)置Foscarnet陽(yáng)性對(duì)照孔和不含化合物的陰性對(duì)照孔。置37℃1小時(shí)。洗滌5次后，每孔加入200μl抗DIG-POD抗體工作液。37℃溫育1小時(shí)，洗滌5次。每孔滴加200μl ABTS底物反應(yīng)液。室溫反應(yīng)15-30分鐘。Bio-Tek Elx800酶標(biāo)儀測(cè)定OD值(405/490nm)。以抑制RT活性＞50％的化合物判定為初篩陽(yáng)性。將初篩陽(yáng)性化合物用裂解緩沖液進(jìn)行倍比稀釋，每個(gè)濃度設(shè)二個(gè)復(fù)孔。按上述方法測(cè)定其對(duì)RT活性的抑制。計(jì)算出抑制HIV-1RT活性50％的化合物濃度(EC50,50％effective concentration)。
(2)結(jié)果(見(jiàn)說(shuō)明書附
圖1)消旋-2-甲基-1-四氫萘酮--2-硝基乙烯對(duì)HIV-1RT的抑制活性數(shù)據(jù)μg/ml0.2881.44 7.2 36180IC50抑制率％ -6.3 -3.4 58.9 99.0 103.3 6.3μg/ml2、消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯對(duì)C8166細(xì)胞的毒性測(cè)定(1)測(cè)定方法采用MTT法對(duì)樣品CC50的測(cè)定(2)樣品的制備消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯樣品用RPMI-1640稀釋為1000μg/mL的濃度，用0.22μM膜過(guò)濾。
(3)實(shí)驗(yàn)操作取板每孔+100μL培養(yǎng)基進(jìn)行2倍梯度稀釋+100μL C8166細(xì)胞(3×105/mL)，培養(yǎng)72小時(shí)(37℃ CO25％)，吸出上清100μL+20μL MTT，繼續(xù)溫育4小時(shí)(37℃ CO25％)+100μL,10％SDS放培養(yǎng)箱中過(guò)夜(18小時(shí))。
(4)OD值測(cè)定用Elx-800酶標(biāo)儀測(cè)定OD值波長(zhǎng)490nM。
(5)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算不同濃度的抑制％率、再算出抑制50％C8166細(xì)胞的毒性值(CC50,50％cytoxic concentration)(見(jiàn)說(shuō)明書附圖2)。
消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯對(duì)C8166細(xì)胞的毒性測(cè)定μ-g/ml15.631.3 62.5 125 250 500 CC50抑制率％ -4.115.5 38.9 55.4 71.3 90.0 101μg/ml
3、消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯對(duì)HIV的治療指數(shù)(Selective Index,SI)SI=CC50÷EC50=101μg/ml÷6.3μg/ml=16從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以證實(shí)本發(fā)明的消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯對(duì)HIV逆轉(zhuǎn)錄酶具有抑制作用，它對(duì)C8166細(xì)胞的毒性低，選擇指數(shù)高，它用于與逆轉(zhuǎn)錄酶有關(guān)的疾病如艾滋病等。
圖1是反-1硝基2-苯硫基-乙烯對(duì)HIV-1RT的抑制活性數(shù)據(jù)圖；圖2是反-1硝基2-苯硫基-乙烯對(duì)C8166細(xì)胞的毒性測(cè)定圖。
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明實(shí)質(zhì)內(nèi)容進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實(shí)施例1按照文獻(xiàn)Node M.et al,Synthesis,1987,8:729進(jìn)行合成消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯將2-甲基-1-四氫萘酮32mg(0.2mmoL)溶于10mL四氫呋喃中，于氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在0℃加入二異丙基胺34.46μL(0.2mmoL)，滴加正丁基鋰185μL(1.62mmoL/mL)。于0℃攪拌30mm，加入硝基烯胺47.4mg(溶于5mL四氫呋喃中)，在1.5小時(shí)內(nèi)逐漸從0℃升至室溫，溶液傾入NH4Cl飽和水溶液中，以乙酸乙酯基萃取后，該反應(yīng)物經(jīng)制備薄層分離得消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯43mg(得率93％)。IR:1685,1505,1530,1460,1350.UV:207(24000),250(16000).1H-NMR(CDCl3):1.44(s,3H)；2.23(m,2H)；3.04(t,2H,J=6.9)；6.94,7.53(Abq,2H,J=14.0)；7.08-7.60(m,3H)；8.04(d,1H,J=7.0)Node M.et al.,Synthesis,1987,8:729消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)如右圖所示 分子式C13H13NO3將所合成的消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯與賦形劑重量比為9∶1的比例加入賦形劑，制成粉劑。
實(shí)施例2按實(shí)施例1的方法先制得消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯，按其與賦形劑重量比為5∶1的比例加入賦形劑，制成粉劑。
實(shí)施例3按實(shí)施例1的方法先制得消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯，按其與賦形劑重量比為5∶1的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實(shí)施例4按實(shí)施例1的方法先制得消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯，將其溶于無(wú)菌注射用水中，攪拌使溶，用無(wú)菌抽濾漏斗過(guò)濾，再無(wú)菌精濾，分裝于2安瓿中，低溫冷凍干燥后無(wú)菌熔封得粉針劑。
實(shí)施例5按實(shí)施例1的方法先制得消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯，按常規(guī)口服液制法制成口服液。
實(shí)施例6按實(shí)施例1的方法先制得消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯，按常規(guī)加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
實(shí)施例7按實(shí)施例1的方法先制得消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯，按其與賦形劑重量比為5∶1的比例加入賦形劑，制成膠囊。
實(shí)施例8按實(shí)施例1的方法先制得消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯，按其與賦形劑重量比為3∶1的比例加入賦形劑，制成膠囊。
權(quán)利要求
1.用于治療艾滋病的藥物組合物，其中含有治療艾滋病有效量的式(Ⅰ)化合物消旋-2-甲基-1-四氫萘酮-2-硝基乙烯及可藥用載體和/或賦形劑。
2.權(quán)利要求1所述藥物組合物在制備逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑藥物中的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1所述藥物組合物在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
用于治療艾滋病的藥物組合物,其中含有治療艾滋病有效量的式(Ⅰ)化合物消旋－2－甲基1－四氫萘酮－2－硝基乙烯及可藥用載體和/或賦形劑。上述藥物組合物在制備逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑藥物中的應(yīng)用;上述藥物組合物在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P31/18GK1304722SQ00132010
公開日2001年7月25日 申請(qǐng)日期2000年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月22日
發(fā)明者陳紀(jì)軍, 王易芬, 鄭永唐, 羅士德, 曹建新, 唐紹宗, 王惠英, 劉廣杰, 來(lái)國(guó)防 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所, 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所