專利名稱：制備含dna物品的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備含DNA物品的方法。
背景技術(shù)：
DNA是存在于細胞器的染色體中的基本遺傳物質(zhì)。因為DNA中存儲有遺傳信息，所以它己成為生物和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中廣泛研究的對象。然而，因從活體組織中僅能獲取少量的DNA，則在研究該DNA之前，必須將DNA的目標序列擴增。現(xiàn)已知有許多擴增DNA目標序列的方法和儀器[Mullis,K.等，體外DNA特定的酶擴增聚合酶鏈反應(yīng)(Specific enzymaticamplification of DNA in vitro:the polymerase chain reaction.),Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.51,263-273,1986；美國專利4,683,195、4,683,202和4,889,818,韓國專利126,231]。
本發(fā)明人觀察到DNA能代表供體的獨有特征。利用該觀察結(jié)果，發(fā)明人制備了含DNA的物品，特別是其能長時間保存并具有吸引人的外觀。若該物品為固體，可將擴增的DNA植入其中；若該物品為無定形，可將擴增的DNA與其混合。這樣就制備了所述物品，其通過包含供體獨有特征來代表DNA的供體。
附圖簡要說明
圖1所示為一個鑰匙鏈，其含有根據(jù)本發(fā)明一個實施例制備的一個DNA混合物、以及HLA DNA帶；圖2所示為一個項鏈，其是根據(jù)本發(fā)明另一實施例制備的；圖3所示為一個項鏈，其是根據(jù)本發(fā)明再一實施例制備的。
在圖中每個數(shù)字標號具有下列含義1．鑰匙鏈2．HLA DNA帶3．DNA供體的照片4．絲印簽名5．含有DNA的溶液6．水10、20.項鏈實施本發(fā)明的最件方式本發(fā)明的目的是提供一種制備固體物品的方法，如裝飾品、唱片和文具等，通過將供體的DNA注入物品而使其含有DNA，本發(fā)明還提供了一種制備無定形物品的方法，如香水和墨水，通過將供體的DNA與物品混合而使其含有DNA。這兩種方法采用了DNA提取和擴增技術(shù)。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，其提出了一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲取含有DNA的樣品；從樣品中提取出DNA；擴增提取出的DNA；將擴增的DNA的溶液通過空腔的開口注入物品內(nèi)的空腔；最后封好空腔的開口。
另一種辦法是，將擴增的DNA的溶液干燥成膠態(tài)或固態(tài)并且將干燥的DNA放入所述固體物品的空腔內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，其提出了一種制備含DNA的無定形物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲取含有DNA的樣品；從樣品中提取出DNA；擴增提取出的DNA；將擴增的DNA的溶液與物品混合。
另一種辦法是，將擴增的DNA的溶液干燥成膠態(tài)或固態(tài)并且將干燥的DNA與無定形物品混合。
根據(jù)本發(fā)明的再一個實施例，其提出了一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲取含有DNA的樣品；從樣品中提取出DNA；擴增提取出的DNA；將擴增的DNA置于聚丙烯酰胺膠體中形成電泳；將形成電泳的DNA染色；將含有染色了的DNA的膠體干燥以得到膠體膜；并將膠體膜應(yīng)用于物品表面。
根據(jù)本發(fā)明的還一個實施例，其提出了一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲取含有DNA的樣品；從樣品中提取出DNA；擴增提取出的DNA；用擴增的DNA制取HLA DNA帶；并且將該HLA DNA帶應(yīng)用于物品表面。
本發(fā)明也提供了采用上述任何一種方法制備的、含有DNA的物品。
DNA供體可以是任何具有DNA的有機活體，包括人類在內(nèi)。由于對該物品的需求，與名人有關(guān)的被紀念的人物，如政治領(lǐng)袖、宗教領(lǐng)袖、作家、電影明星、體育明星和歌手，是優(yōu)選的DNA供體。然而，家庭成員、團體成員或?qū)櫸镆部墒枪w，因為與這些供體相關(guān)的物品分別地對于其他家庭成員、團體成員或?qū)櫸镏魅耸怯幸饬x的。
所述DNA樣品可以是能從供體獲取并包含供體的DNA的任何部分或樣品。對于人DNA供體來說，血液、毛發(fā)、皮膚組織、指甲、趾甲等等可方便地用做DNA樣品。
DNA可用各種已知方法提取和復(fù)原，但這些方法可根據(jù)被使用的DNA樣品調(diào)整[Buffone等，不用苯酚提取而從生物學(xué)樣品中分離DNA(Isolation of DNA from biological specimens without extractionwith phenol.)Clin.Chem.31:164-165,1985]。如果，例如，樣品是血液，將EDTA血液和紅細胞(RBC)溶胞緩沖液與該樣品混合并且將該混合液離心分離。由此獲得的分離物與Chelex樹脂混合并煮沸以提取DNA。
根據(jù)本發(fā)明，天然基因組的DNA可被用來制備含DNA的物品。然而，因僅有少量天然DNA可被從樣品中提取出來，所以優(yōu)選將提取出的天然DNA擴增。
DNA擴增可通過聚合酶鏈反應(yīng)，或通過兩步擴增來實現(xiàn)，其中兩步擴增即第一步擴增包括一個聚合酶鏈反應(yīng)，第二步擴增包括將在第一步中擴增了的DNA插入載體以獲得重組質(zhì)粒，將該重組質(zhì)粒植入宿主細胞，培養(yǎng)被重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)換的宿主細胞，并分離如此大量產(chǎn)生的重組質(zhì)粒。
所述聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)可根據(jù)Mullis等人的方法，利用傳統(tǒng)聚合酶鏈反應(yīng)工具來實現(xiàn)。基因試劑盒(HLA基因型試劑盒，Inno-lipa有限公司)可方便地用于擴增過程。
在采用質(zhì)粒的第二步擴增過程中，通過聚合酶鏈反應(yīng)擴增的DNA可被克隆，例如，通過利用TA克隆試劑盒(Invitrogen)。另外，擴增的DNA可無需dNTP而在含有T4 DNA聚合酶的媒介物中反應(yīng)15分鐘，然后再與dNTP反應(yīng)15分鐘以獲得鈍端DNA，其中從該DNA每端突出的T和A堿基已被移除。另外，用于克隆過程的適當(dāng)?shù)妮d體被諸如SmaⅠ的鈍端限制酶分裂。對于如此獲得的載體，鈍端DNA被T4 DNA連接酶連接。
如此構(gòu)造的質(zhì)?？杀灰脒m當(dāng)?shù)乃拗骷毎靡源罅糠蛛x重組質(zhì)粒。該宿主細胞可以是E.coli HB101、E.coli CSH 41，等等。根據(jù)本發(fā)明被所述質(zhì)粒轉(zhuǎn)換的宿主細胞采用Luria Broth(LB)媒介物培養(yǎng)，然后，可用Birnboin & Doly的方法(1979)來提取和分離該大量產(chǎn)生的質(zhì)粒。
得到的DNA溶液可通過空腔的開口注入固體物品內(nèi)的空腔，然后封住空腔的開口以得到含有DNA的物品。另外可行的是，該DNA溶液可干燥成膠態(tài)或固態(tài)，并且將該干燥的DNA注入固體物品的空腔中。在注入物品前，該DNA溶液或干燥的DNA可被染色以使其看起來更清晰。在注入物品前，該DNA溶液可用染色試劑染色，如溴酚藍或苯酚紅以及可選擇地與甘油混合。
在說明書和權(quán)利要求書中，“固體”物品是指任何具有一定形狀的物體，其可非限制性包括首飾如戒指、項鏈、耳環(huán)，書寫用具如筆、鋼筆、鉛筆、鉛筆盒，以及鑰匙鏈，洋娃娃，玩具，鞋，書包，手包，錢包，唱片，CD片。
所述物品的空腔，即DNA注入處，可由傳統(tǒng)加工方法制成。為了增強由染色DNA帶來的裝飾效果，該固體物品的空腔優(yōu)選為一異形。透明部分可以是各種形狀。根據(jù)本發(fā)明的含有DNA的物品可進一步被下列的方法修飾，如雙鏈DNA螺旋線圖、簽字和/或DNA供體的照片以表明該物品含有供體的DNA。
所述擴增的DNA的溶液在與無定形物品混合前可選擇地被干燥?！盁o定形”物品是指任何不具有一定形狀的物品，其可非限制性包括如下物品，如香水、墨水、墨汁和染料等。
根據(jù)本發(fā)明實施例，所述擴增的DNA可在聚丙烯酰胺膠體中形成電泳，染色并干燥以獲得含有DNA的膠體膜。得到的膠體膜可用于固體物品表面。
當(dāng)從血液樣品中提取DNA時，HLA DNA帶可用于物品表面以起到裝飾效果。所述DNA供體的特殊特性可由此通過該HLA DNA帶展示出來。
所述HLA DNA帶可按如下方法制備。從血液樣品中提取DNA并將其擴增。擴增的DNA可與諸如從Inno-lipa有限公司獲得的試劑盒帶反應(yīng)。因用來識別白細胞的各種DNA序列的探針存在于該帶上，所以這些探針通過形成堿基對而與DNA結(jié)合。若將可與DNA反應(yīng)的染色試劑加到該帶上，則染色試劑將和與所述探針結(jié)合的DNA反應(yīng)以成色。所述帶根據(jù)DNA的供體的不同而變化，因為每個供體都有他或她自己特殊的DNA堿基序列。
因根據(jù)本發(fā)明的方法制備的物品含有DNA，其代表了該DNA供體的特殊特性，人們通過佩帶這些物品而紀念該供體，如名人、家庭成員、愛人、寵物等等。
而且，根據(jù)本發(fā)明的方法制備的物品與不含有DNA的物品相比截然不同。本發(fā)明的方法可用于鑒別某物品的真?zhèn)巍?br>
存在于根據(jù)本發(fā)明方法制備的物品中的DNA可長期保存而不變質(zhì)。因此，該DNA可用來鑒別一個人的身份也就是，存在于根據(jù)本發(fā)明方法制備的物品中的DNA可與從一個人身上獲得的用來鑒別身份的DNA相比較，由此可確定(若需要的話)其是不是該供體，或者是否與該供體有遺傳關(guān)系。
下述實施例用以說明根據(jù)本發(fā)明制備含有DNA物品的方法。
實施例1DNA的提取將從供體采集來的全血3ml置于EDTA涂覆的試管中并放置在2-8℃的冰箱里。
將50μl的EDTA血液和RBC溶胞緩沖溶液置于已消毒的1.5ml的微型離心試管中，在13000rpm轉(zhuǎn)速下離心旋轉(zhuǎn)一分鐘以獲得沉淀物。所得沉淀物用500μl消毒水洗滌。重復(fù)離心和洗滌步驟直到除去所有殘留的RBC。然后在洗滌過的沉淀物中加入200μl的Chelex樹脂，煮沸10分鐘后進行離心分離。將如此所獲得的10μl上清液用于進一步的擴增過程?？芍貜?fù)10分鐘的煮沸和隨后的冷藏步驟。
DNA的擴增將在下表1中所示的材料混合，用一種聚合酶鏈式反應(yīng)工具(Inno-lipa有限公司的HLA基因型試劑盒)將該混合物在下表2中所述的條件下進行DNA擴增。
表1 擴增混合物(總量50μl)
表2 聚合酶鏈式反應(yīng)條件
預(yù)處理1、HLA DNA帶的制備HLA DNA帶可采用HLA試劑盒(Inno-lipa有限公司)由擴增的DNA制備。
2、用于注入的DNA溶液的制備由擴增過程獲得的DNA通過TA克隆試劑盒(Invitrogen有限公司)克隆入載體中?？寺〉馁|(zhì)粒被大量分離。使用E.coli HB101，并且將該轉(zhuǎn)換的E.coli HB101置于37℃條件下?lián)u動溫育18小時。起初的HB101在傳統(tǒng)的LB(Luria Broth)媒介物中培育過夜。經(jīng)培育的細菌用500ml的LB稀釋至1/100，然后在該媒介物中接種并培養(yǎng)。采用Birnboin &Doly(1979)的方法分離質(zhì)粒。將含有目標質(zhì)粒DNA的E.coli HB101在37℃條件下培養(yǎng)18小時。將用于分離該質(zhì)粒的試劑SolⅠ[50mM葡萄糖，25mM Tris·Cl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8)]、SolⅡ(0.2N NaOH,1％ SDS)和SolⅢ(5M醋酸鉀60ml，冰醋酸11.5ml，水28.5ml)按順序加入，溫和攪拌由此獲得的混合物，然后在14000rpm的轉(zhuǎn)速下離心分離10分鐘。將由此獲得的上清液加入等量的苯酚∶氯仿(1∶1)中，劇烈混合然后離心分離。將該步驟重復(fù)2次或3次。在獲得的清亮的上清液中加入100％乙醇(2倍)，將該混合物冷藏10分鐘然后離心分離。棄置上清液并干燥剩余物，用1ml 70％的乙醇洗滌1次，干燥，與TE緩沖液混合以溶解DNA，然后冷藏。
將甘油和溴酚藍加入由此獲得的DNA溶液中。
后處理將2個圓形丙烯酸板(每個直徑為5cm，厚0.5cm)疊放在一起以便在板的相鄰表面間形成空腔。其中一個板上有一個與空腔相連的孔并且由此將DNA溶液注入空腔。板上還有一構(gòu)件以使一環(huán)狀物可與其相連。如圖1所示，HLA帶附著在板的側(cè)邊，并且將該DNA供體的照片和絲印簽名印制在板的外表面。丙烯酸板在其側(cè)邊處相互接觸連接。在預(yù)處理過程中制備的DNA溶液通過位于一個板上的孔注入空腔，然后將孔封住。如此生產(chǎn)的丙烯酸物品(厚1cm)是平面對稱的。通過在丙烯酸物品的環(huán)連接構(gòu)件上插入一個環(huán)來制成一個鑰匙鏈。
實施例2DNA的提取將由供體獲得的毛發(fā)從根部剪斷成5cm以內(nèi)的小段。在5ml的試管中將毛發(fā)與200μl的Chelex樹脂混合，將混合物煮沸10分鐘以除去DNA以外的細胞碎片。然后在12000rpm的轉(zhuǎn)速下將混合物離心分離。將由此獲得的上清液用于進一步的擴增過程。
DNA的擴增按下表3所示制備所述擴增混合物，然后按下表4所示聚合酶鏈反應(yīng)條件實施DNA擴增過程。
表3 擴增混合物(總量50μl)
表4 聚合酶鏈反應(yīng)條件
預(yù)處理1、含有DNA的聚丙烯酰胺膠體膜的制備制備10％聚丙烯酰胺膠體并加入擴增了的DNA。通過對電泳柱施以200V的電壓以使DNA形成電泳。電泳完成后，將膠體在0.4％的硝酸銀溶液中沉淀30分鐘以使膠體中的DNA染色。將膠體放置在兩層玻璃紙間并干燥以得到含DNA的堅硬的膠體膜(1mm長，3cm厚)。
2、被注入的DNA溶液的制備向通過擴增過程獲取的DNA中加入苯酚紅和甘油，以獲取被注入的DNA溶液。
后處理根據(jù)實施例1的方法制備鑰匙鏈，只是用含有DNA的聚丙烯酰胺膠體代替HLA DNA帶。
根據(jù)本發(fā)明，可制備各種含有DNA的物品。這些物品可代表該DNA供體的獨特特性并且可長久保持。
權(quán)利要求
1.一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲得包含DNA的一個樣品；從該樣品中提取出DNA；擴增提取出的DNA；通過空腔的開口向物品中的空腔注入該擴增的DNA的溶液；并且封住空腔的開口。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制備含有DNA物品的方法，其中所述DNA擴增步驟是通過聚合酶鏈反應(yīng)來實現(xiàn)的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的制備含有DNA物品的方法，其中所述DNA擴增步驟是通過兩步擴增來實現(xiàn)的，第一步擴增包括一個聚合酶鏈反應(yīng)，并且接下來的第二步擴增包括以下步驟將在第一步擴增過程中擴增了的DNA插入載體以得到重組質(zhì)粒，將該重組質(zhì)粒引入宿主細胞，培養(yǎng)通過重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)換的宿主細胞，并且分離由此大量產(chǎn)生的質(zhì)粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任何一項的制備含有DNA物品的方法，其中所述擴增的DNA的溶液在注入物品中的空腔之前被干燥成膠體態(tài)或固態(tài)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任何一項的制備含有DNA物品的方法，其中所述擴增的DNA的溶液在注入物品中的空腔之前被染色。
6.一種制備含有DNA的無定形物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲得包含DNA的一個樣品；從該樣品中提取出DNA；擴增提取出的DNA；并且將該擴增的DNA的溶液與物品混合。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的制備含有DNA物品的方法，其中所述無定形物品選自香水、墨水、墨汁和染料。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7的制備含有DNA物品的方法，其中所述擴增了的DNA的溶液在與物品混合之前被干燥成膠體態(tài)或固態(tài)。
9.一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲得包含DNA的一個樣品；從該樣品中提取出DNA；擴增提取出的DNA；將該擴增的DNA置于聚丙烯酰胺膠體中形成電泳；將該形成電泳的DNA染色；干燥含有染色DNA的膠體以獲得膠體膜；并且將該膠體膜應(yīng)用于物品的表面。
10.一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲得包含DNA的一個樣品；從該樣品中提取出DNA；擴增提取出的DNA；用該擴增的DNA制備HLA DNA帶；并且將該HLA DNA帶應(yīng)用于物品的表面。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10任何一項的方法制備的含有DNA的物品。
全文摘要
一種制備含DNA物品的方法,該方法包括以下步驟:從供體獲取含DNA的樣品;從該樣品中提取出DNA;擴增提取出的DNA;通過空腔的開口向物品里的空腔中注入該擴增的DNA的溶液;并且封住該空腔的開口,其中所述物品具有一定的形狀,或若物品為無定形時,將擴增的DNA的溶液與該物品混合。
文檔編號A44C3/00GK1306402SQ99807627
公開日2001年8月1日 申請日期1999年6月24日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月24日
發(fā)明者任勇彬 申請人:恒星基因有限公司