一種抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種發(fā)酵羊乳的制備方法，特別涉及一種抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]自由基是機(jī)體一種正常代謝產(chǎn)物，具有很強(qiáng)的氧化能力。但由于疾病衰老等因素會(huì)使自由基水平升高，從而導(dǎo)致一系列疾病。因此對(duì)于抗氧化劑的研究成為熱點(diǎn)。其中天然的抗氧化肽由于毒副作用小已成為研究熱點(diǎn)，例如抗壞血酸、α_生育酚、一些抗氧化性多糖及乳源的抗氧化物質(zhì)。
[0003]目前抗氧化肽的制備方法主要包括酸堿水解法、酶解法及發(fā)酵法，酸堿水解法污染較大已逐漸被淘汰，酶解法由于高效且溫和，因此是最常用的方法。但發(fā)酵法相較于酶解法，最大的優(yōu)點(diǎn)在于可以將微生物產(chǎn)酶及酶解過(guò)程兩步合一，因此節(jié)約了成本，并且通過(guò)發(fā)酵法制得的肽沒(méi)有苦味，口感較好，更適用于食品中的應(yīng)用。
[0004]羊乳中脂肪顆粒約為牛乳的三分之一，更利于人體消化吸收，并且其中維生素及微量元素的含量明顯高于牛乳，且成分組成更接近與人乳，更適宜易過(guò)敏、腸胃功能較弱及身體虛弱的人群飲用，被國(guó)際上譽(yù)為“奶中之王”。植物乳桿菌屬于革蘭氏陽(yáng)性菌，兼性厭氧，是同型發(fā)酵乳酸菌的一種，相較于其他乳酸菌來(lái)說(shuō)具有較大的活菌數(shù)，并且在發(fā)酵過(guò)程中能夠高產(chǎn)抗氧化物質(zhì)，并且本身亦具有一系列的一系列保健作用，例如調(diào)節(jié)免疫、維持腸道菌群平衡、降低膽固醇形成、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收等益生作用。利用植物乳桿菌發(fā)酵羊乳，可在獲取羊乳本身的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的同時(shí)，保證較高的益生菌活菌數(shù)及較好的抗氧化性，以及益生菌本身的保健作用。
[0005]目前針對(duì)采用益生菌發(fā)酵法制備抗氧化性乳制品的較少，其中專(zhuān)利CN104186655A提供了利用降血壓及抗氧化性酸乳制品的制備工藝，以添加果膠、變性淀粉等增稠物質(zhì)的奶液混合物為原料，植物乳桿菌和雙歧桿菌菌株為發(fā)酵菌株，先后接種進(jìn)行發(fā)酵制得酸乳，但并未涉及以羊乳作為乳源，以白扁豆多糖這一藥食同源且本身具有抗氧化性的物質(zhì)作為增稠劑添加。專(zhuān)利CN101575383A提供了利用水提醇沉法制備白扁豆多糖的工藝，未提及采用酶法輔助法這一更溫和高效安全的方法制備白扁豆多糖；專(zhuān)利CN103923835提供利用纖維素酶和果膠酶復(fù)合提取白扁豆多糖，未涉及木聚糖酶和纖維素酶復(fù)合使用的提取方法。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，從而制得既具有傳統(tǒng)酸羊乳的風(fēng)味及營(yíng)養(yǎng)，又具有較強(qiáng)抗氧化性的功能性酸羊乳。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù):
[0008]I)將植物乳桿菌菌株的菌懸液以3 %-9%的體積比接種至質(zhì)量濃度為10 %-20%的復(fù)原羊乳中，再向其中加入白扁豆多糖使白扁豆多糖的濃度為4-10mg/mL，然后進(jìn)行厭氧培養(yǎng)得到發(fā)酵羊乳；
[0009]2)向發(fā)酵羊乳中加入其質(zhì)量5%-10%的蔗糖后，在2°C_5°C下對(duì)混合發(fā)酵乳進(jìn)行密封并后熟，得到抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳。
[0010]所述的厭氧培養(yǎng)是在35°C -45 °C恒溫箱中厭氧培養(yǎng)6-15小時(shí)。
[0011]所述的后熟時(shí)間為8h-l2h。
[0012]所述的白扁豆多糖制備工藝如下:
[0013]I)首先，按質(zhì)量份數(shù)取5份白扁豆經(jīng)粉碎過(guò)60目篩得白扁豆粉末，并溶于100-150份蒸餾水中得到白扁豆溶液；
[0014]2)其次，向白扁豆溶液中加入其質(zhì)量0.5 % -1.5 %的纖維素酶、0.5%_1.5%的木聚糖酶，調(diào)節(jié)液固比為40-60: I，pH為4-9進(jìn)行酶解，之后將溶液加熱至沸騰進(jìn)行滅酶，隨后將酶解液進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液為白扁豆多糖提取液；
[0015]3)將白扁豆多糖提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至白扁豆粉末相同質(zhì)量的濃縮液，然后加入到無(wú)水乙醇中進(jìn)行靜置醇沉；
[0016]4)將靜置的沉淀物進(jìn)行抽濾，并用無(wú)水乙醇進(jìn)行洗滌后將沉淀于45_60°C下烘干至恒重并粉碎，即制得白扁豆多糖。
[0017]所述的纖維素酶的活性為8000U/g。
[0018]所述的木聚糖酶的活性為50000U/g。
[0019]所述的酶解條件為:40 0C -70 0C進(jìn)行2h_4h。
[0020]所述的滅酶為加熱至沸騰并保持10-20min。
[0021 ]所述濃縮液與無(wú)水乙醇的體積比為1:3-4，靜置醇沉?xí)r間為10_20h。
[0022]本發(fā)明制備得到的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳中植物乳桿菌的活菌數(shù)達(dá)到18CfuAnL以上。添加的白扁豆多糖不僅本身具有抗氧化性，并且可促進(jìn)益生菌的生長(zhǎng)，增強(qiáng)羊乳的粘度，還具有可調(diào)節(jié)腸道菌群平衡及機(jī)體免疫力的功能?？寡趸参锶闂U菌發(fā)酵羊乳的DPPH自由基清除率為50%-80%。按照上述方法制得的發(fā)酵酸羊乳，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期飲用可一定程度上預(yù)防由于機(jī)體氧化作用導(dǎo)致的如老年癡呆等一系列疾病。
【具體實(shí)施方式】
[0023]本發(fā)明的植物乳桿菌菌株采用以下方法進(jìn)行活化處理:取0.4g凍干植物乳桿菌菌粉接種于1mL MRS培養(yǎng)基中于37°C恒溫培養(yǎng)24h，再以5%接種量活化兩代，得到植物乳桿菌的三代菌懸液。
[0024]實(shí)施例1:
[0025]白扁豆多糖制備:
[0026]I)首先，按質(zhì)量份數(shù)取5份白扁豆經(jīng)粉碎過(guò)60目篩得白扁豆粉末，并溶于100份蒸餾水中得到白扁豆溶液；
[0027]2)其次，向白扁豆溶液中加入其質(zhì)量I %的活性為8000U/g的纖維素酶、1.5%的50000U/g的木聚糖酶，調(diào)節(jié)液固比為55: I，pH為6后在50°C酶解3h，之后將溶液加熱至沸騰并保持1min進(jìn)行滅酶，隨后將酶解液進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液為白扁豆多糖提取液；
[0028]3)將白扁豆多糖提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至白扁豆粉末相同質(zhì)量的濃縮液，然后加入到3倍體積的無(wú)水乙醇中靜置I Oh醇沉；
[0029]4)將靜置的沉淀物進(jìn)行抽濾，并用無(wú)水乙醇進(jìn)行洗滌后將沉淀于50°C下烘干至恒重并粉碎，即制得白扁豆多糖。
[0030]抗氧化嗜酸乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備:
[0031 ] I)將植物乳桿菌菌株的菌懸液以5%的體積比接種至質(zhì)量濃度為14%的復(fù)原羊乳中，再向其中加入白扁豆多糖使白扁豆多糖的濃度為6mg/mL，然后在41°C恒溫箱中厭氧培養(yǎng)10小時(shí)得到發(fā)酵羊乳；
[0032]2)向發(fā)酵羊乳中加入其質(zhì)量5%的蔗糖后將發(fā)酵羊乳置于4°C下密封并后熟10h，得到抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳。
[0033]所得產(chǎn)品中植物乳桿菌活菌數(shù)為2.19 X 18Cf u/mL，DPPH自由基清除率為68.32%。
[0034]實(shí)施例2:
[0035]白扁豆多糖制備:
[0036]I)首先，按質(zhì)量份數(shù)取5份白扁豆經(jīng)粉碎過(guò)60目篩得白扁豆粉末，并溶于120份蒸餾水中得到白扁豆溶液；
[0037]2)其次，向白扁豆溶液中加入其質(zhì)量0.5%的活性為8000U/g的纖維素酶、I %的50000U/g的木聚糖酶，調(diào)節(jié)液固比為45:1，pH為5后在60°C酶解2.5h，之后將溶液加熱至沸騰并保持15min進(jìn)行滅酶，隨后將酶解液進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液為白扁豆多糖提取液；
[0038]3)將白扁豆多糖提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至白扁豆粉末相同質(zhì)量的濃縮液，然后加入到3倍體積的無(wú)水乙醇中靜置20h醇沉；
[0039]4)將靜置的沉淀物進(jìn)行抽濾，并用無(wú)水乙醇進(jìn)行洗滌后將沉淀于60°C下烘干至恒重并粉碎，即制得白扁豆多糖。
[0040]抗氧化嗜酸乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備:
[0041 ] I)將植物乳桿菌菌株的菌懸液以4%的體積比接種至質(zhì)量濃度為16%的復(fù)原羊乳中，再向其中加入白扁豆多糖使白扁豆多糖的濃度為4mg/mL，然后在35°C恒溫箱中厭氧培養(yǎng)15小時(shí)得到發(fā)酵羊乳；
[0042]2)向發(fā)酵羊乳中加入其質(zhì)量8%的蔗糖后將發(fā)酵羊乳置于3°C下密封并后熟8h，得到抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳。
[0043]所得產(chǎn)品中植物乳桿菌活菌數(shù)為4.06 X 1 8C fu/mL，DPPH自由基清除率為71.40%。
[0044]實(shí)施例3:
[0045]白扁豆多糖制備:
[0046]I)首先，按質(zhì)量份數(shù)取5份白扁豆經(jīng)粉碎過(guò)60目篩得白扁豆粉末，并溶于150份蒸餾水中得到白扁豆溶液；
[0047]2)其次，向白扁豆溶液中加入其質(zhì)量1.5%的活性為8000U/g的纖維素酶、0.5%的50000U/g的木聚糖酶，調(diào)節(jié)液固比為60: I，pH為7后在70°C酶解2h，之后將溶液加熱至沸騰并保持20min進(jìn)行滅酶，隨后將酶解液進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液為白扁豆多糖提取液；
[0048]3)將白扁豆多糖提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至白扁豆粉末相同質(zhì)量的濃縮液，然后加入到4倍體積的無(wú)水乙醇中靜置15h醇沉；
[0049]4)將靜置的沉淀物進(jìn)行抽濾，并用無(wú)水乙醇進(jìn)行洗滌后將沉淀于45°C下烘干至恒重并粉碎，即制得白扁豆多糖。
[0050]抗氧化嗜酸乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備:
[0051]I)將植物乳桿菌菌株的菌懸液以3%的體積比接種至質(zhì)量濃度為12%的復(fù)原羊乳中，再向其中加入白扁豆多糖使白扁豆多糖的濃度為8mg/mL，然后在38°C恒溫箱中厭氧培養(yǎng)12小時(shí)得到發(fā)酵羊乳；
[0052]2)向發(fā)酵羊乳中加入其質(zhì)量6%的蔗糖后將發(fā)酵羊乳置于5°C下密封并后熟llh，得到抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳。
[0053]所得產(chǎn)品中植物乳桿菌活菌數(shù)為3.12X 108cfu/mL，DPPH自由基清除率為61.23%。
[0054]實(shí)施例4:
[0055]白扁豆多糖制備:
[0056]I)首先，按質(zhì)量份數(shù)取5份白扁豆經(jīng)粉碎過(guò)60目篩得白扁豆粉末，并溶于130份蒸餾水中得到白扁豆溶液；
[0057]2)其次，向白扁豆溶液中加入其質(zhì)量0.8%的活性為8000U/g的纖維素酶、1.2%的50000U/g的木聚糖酶，調(diào)節(jié)液固比為50: I，pH為4后在40°C酶解4h，之后將溶液加熱至沸騰并保持13min進(jìn)行滅酶，隨后將酶解液進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液為白扁豆多糖提取液；
[0058]3)將白扁豆多糖提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至白扁豆粉末相同質(zhì)量的濃縮液，然后加入到3.5倍體積的無(wú)水乙醇中靜置13h醇沉；
[0059]4)將靜置的沉淀物進(jìn)行抽濾，并用無(wú)水乙醇進(jìn)行洗滌后將沉淀于55°C下烘干至恒重并粉碎，即制得白扁豆多糖。
[0060]抗氧化嗜酸乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備:
[0061]I)將植物乳桿菌菌株的菌懸液以7%的體積比接種至質(zhì)量濃度為10%的復(fù)原羊乳中，再向其中加入白扁豆多糖使白扁豆多糖的濃度為5mg/mL，然后在43°C恒溫箱中厭氧培養(yǎng)6小時(shí)得到發(fā)酵羊乳；
[0062]2)向發(fā)酵羊乳中加入其質(zhì)量7%的蔗糖后將發(fā)酵羊乳置于2°C下密封并后熟9h，得到抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳。
[0063]所得產(chǎn)品中植物乳桿菌活菌數(shù)為4.15X 108cfu/mL，DPPH自由基清除率為67.04%。
[0064]實(shí)施例5:
[0065]白扁豆多糖制備:
[0066]I)首先，按質(zhì)量份數(shù)取5份白扁豆經(jīng)粉碎過(guò)60目篩得白扁豆粉末，并溶于110份蒸餾水中得到白扁豆溶液；
[0067]2)其次，向白扁豆溶液中加入其質(zhì)量1.2%的活性為8000U/g的纖維素酶、0.8%的50000U/g的木聚糖酶，調(diào)節(jié)液固比為40:1，pH為9后在50°C酶解2.5h，之后將溶液加熱至沸騰并保持ISmin進(jìn)行滅酶，隨后將酶解液進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液為白扁豆多糖提取液；
[0068]3)將白扁豆多糖提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至白扁豆粉末相同質(zhì)量的濃縮液，然后加入到3倍體積的無(wú)水乙醇中靜置18h醇沉；
[0069]4)將靜置的沉淀物進(jìn)行抽濾，并用無(wú)水乙醇進(jìn)行洗滌后將沉淀于50°C下烘干至恒重并粉碎，即制得白扁豆多糖。
[0070]抗氧化嗜酸乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備:[0071 ] I)將植物乳桿菌菌株的菌懸液以9%的體積比接種至質(zhì)量濃度為20%的復(fù)原羊乳中，再向其中加入白扁豆多糖使白扁豆多糖的濃度為10mg/mL，然后在45°C恒溫箱中厭氧培養(yǎng)12小時(shí)得到發(fā)酵羊乳；
[0072]2)向發(fā)酵羊乳中加入其質(zhì)量10%的蔗糖后將發(fā)酵羊乳置于4°C下密封并后熟12h，得到抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳。
[0073]所得產(chǎn)品中植物乳桿菌活菌數(shù)為2.5 5 X 1 8C fu/mL，DPPH自由基清除率為59.47%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，其特征在于: 1)將植物乳桿菌菌株的菌懸液以3%-9%的體積比接種至質(zhì)量濃度為10%-20 %的復(fù)原羊乳中，再向其中加入白扁豆多糖使白扁豆多糖的濃度為4-10mg/mL，然后進(jìn)行厭氧培養(yǎng)得到發(fā)酵羊乳； 2)向發(fā)酵羊乳中加入其質(zhì)量5%-10%的蔗糖后，在2°C_5°C下對(duì)混合發(fā)酵乳進(jìn)行密封并后熟，得到抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，其特征在于:所述的厭氧培養(yǎng)是在35 °C -45 °C恒溫箱中厭氧培養(yǎng)6-15小時(shí)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，其特征在于:所述的后熟時(shí)間為8h-12h。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，其特征在于:所述的白扁豆多糖制備工藝如下: 1)首先，按質(zhì)量份數(shù)取5份白扁豆經(jīng)粉碎過(guò)60目篩得白扁豆粉末，并溶于100-150份蒸餾水中得到白扁豆溶液； 2)其次，向白扁豆溶液中加入其質(zhì)量0.5%-1.5%的纖維素酶、0.5%-1.5%的木聚糖酶，調(diào)節(jié)液固比為40-60: I，pH為4-9進(jìn)行酶解，之后將溶液加熱至沸騰進(jìn)行滅酶，隨后將酶解液進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液為白扁豆多糖提取液； 3)將白扁豆多糖提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至白扁豆粉末相同質(zhì)量的濃縮液，然后加入到無(wú)水乙醇中進(jìn)行靜置醇沉； 4)將靜置的沉淀物進(jìn)行抽濾，并用無(wú)水乙醇進(jìn)行洗滌后將沉淀于45-60°C下烘干至恒重并粉碎，即制得白扁豆多糖。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，其特征在于:所述的纖維素酶的活性為8000U/g。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，其特征在于:所述的木聚糖酶的活性為50000U/g。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，其特征在于:所述的酶解條件為:40 0C -70 0C進(jìn)行2h-4h。8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，其特征在于:所述的滅酶為加熱至沸騰并保持10_20min。9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，其特征在于:所述濃縮液與無(wú)水乙醇的體積比為1:3-4，靜置醇沉?xí)r間為10-20h。
【專(zhuān)利摘要】一種抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的制備方法，將植物乳桿菌菌株的菌懸液接種至復(fù)原羊乳中，再向其中加入白扁豆多糖，然后進(jìn)行厭氧培養(yǎng)得到發(fā)酵羊乳；向發(fā)酵羊乳中加入蔗糖后，在2℃?5℃下對(duì)混合發(fā)酵乳進(jìn)行密封并后熟，得到抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳；本發(fā)明制備得到的抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳中植物乳桿菌的活菌數(shù)達(dá)到108cfu/mL以上；添加的白扁豆多糖不僅本身具有抗氧化性，并且可促進(jìn)益生菌的生長(zhǎng)，增強(qiáng)羊乳的粘度，還具有可調(diào)節(jié)腸道菌群平衡及機(jī)體免疫力的功能，抗氧化植物乳桿菌發(fā)酵羊乳的DPPH自由基清除率為50％?80％；按照上述方法制得的發(fā)酵酸羊乳，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期飲用可一定程度上預(yù)防由于機(jī)體氧化作用導(dǎo)致的如老年癡呆等一系列疾病。
【IPC分類(lèi)】A23C9/13, A23C9/123
【公開(kāi)號(hào)】CN105707233
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610067228
【發(fā)明人】陳合, 惠翌昕, 舒國(guó)偉, 陳立
【申請(qǐng)人】陜西科技大學(xué)