一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌gy-49及其篩選方法和應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49，其分類(lèi)命名為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49（ Bacillusfirmus GY-49），保藏編號(hào)為CCTCCNO：M2014347，該菌株已于2014年7月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。本發(fā)明還公開(kāi)一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49的篩選方法。本發(fā)明還公開(kāi)堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49在缺氧條件下廢水處理中的應(yīng)用。本發(fā)明還公開(kāi)了堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49在厭氧處理高濃度氮、COD廢水方面的應(yīng)用。本發(fā)明還公開(kāi)一種應(yīng)用菌劑。本發(fā)明的菌株能耐受較高硝酸鹽和COD，且在完全缺氧條件下具有高效的反硝化能力及CODCr脫除能力，能有效的去除廢水中的硝酸鹽氮并降低COD含量。CCTCC NO：M 201434720140721
【專(zhuān)利說(shuō)明】-種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49及其篩選方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于環(huán)境應(yīng)用微生物領(lǐng)域，具體涉及了一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49及其篩 選方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水中的高濃度氮素、COD的去除已成為當(dāng)今養(yǎng) 殖業(yè)污染防治的重要內(nèi)容。生物脫氮、除COD工藝因具有處理效果好、處理成本低、操作管 理方便等有點(diǎn)而得到廣泛的應(yīng)用。
[0003] 然而，大多數(shù)生物脫氮與除COD不能同時(shí)進(jìn)行。主要由于生物脫氮過(guò)程大多在無(wú) 氧的條件下進(jìn)行反硝化作用將含氮物質(zhì)轉(zhuǎn)化為N 2排放，而COD的脫除一般依賴(lài)與微生物的 有氧呼吸作用將有機(jī)質(zhì)轉(zhuǎn)化為CO2。當(dāng)前在養(yǎng)殖廢水的處理過(guò)程中要用厭氧菌劑脫氮和好 氧菌劑除C0D，在無(wú)氧的條件下微生物生長(zhǎng)及代謝緩慢，且好氧菌劑不能發(fā)揮應(yīng)有的作用甚 至導(dǎo)致好氧菌劑的死亡，在有氧的條件下厭氧菌劑不能進(jìn)行反硝化作用有效的脫除氮素且 增氧成本高，由于生長(zhǎng)及代謝環(huán)境的不同造成兩種菌劑不能同時(shí)使用。由此，導(dǎo)致水產(chǎn)養(yǎng)殖 廢水處理過(guò)程中的資源浪費(fèi)、成本增大，處理效率低等缺點(diǎn)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 發(fā)明目的：本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49。本發(fā)明的第二 個(gè)目的是提供了上述堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49的篩選方法，本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供了堅(jiān)強(qiáng) 芽孢桿菌GY-49在缺氧條件下廢水處理中的應(yīng)用。本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供了上述堅(jiān)強(qiáng) 芽孢桿菌在高氮、高COD廢水處理中的應(yīng)用。本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供了一種應(yīng)用菌劑。
[0005] 技術(shù)方案：為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢 桿菌GY-49,其分類(lèi)命名為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49 UaciBm Zfemz1S GY-49)，保藏編號(hào)為 CCTCC NO :M 2014347,該菌株已于2014年7月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心 (CCTCC)，保藏地址：湖北省武漢市武昌區(qū)武漢大學(xué)保藏中心（武漢大學(xué)第一附屬小學(xué)對(duì) 面），郵編：430072。
[0006] 本發(fā)明堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌) GY-49的分離過(guò)程為：取自江蘇省南京 市的棲霞區(qū)萬(wàn)壽村菜地地表下深度為ΚΓ15 cm的土壤；先用80°C水浴樣品30分鐘牛肉膏 蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)分離純化篩選出芽孢；再用反硝化培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選出的反硝化菌株，分 離純化最終篩選出一株具有厭氧反硝化脫除COD的菌株。
[0007] -種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49的篩選方法，包括以下步驟： 1) 芽孢桿菌的篩選：采集的土壤樣品稀釋得到菌懸液，將菌懸液涂布于制備好的牛肉 膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，然后倒置于30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，挑取不同形態(tài)的、生長(zhǎng)良好的 單菌落反復(fù)劃線(xiàn)，純化分離菌株，并將所獲得的單菌落轉(zhuǎn)接至的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面 上，30°C恒溫培養(yǎng)48 h，置于4°C冰箱保存?zhèn)溆茫礊檠挎邨U菌； 2) 反硝化及脫COD細(xì)菌的篩選：將篩選出來(lái)的芽孢桿菌在反硝化培養(yǎng)基平板上劃線(xiàn)培 養(yǎng)48h，觀(guān)察菌株是否在反硝化培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，檢測(cè)培養(yǎng)前后培養(yǎng)基總氮與COD&的變化，最 終篩選出堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49。
[0008] 上述反硝化培養(yǎng)基由以下成分組成=NaNO3 0. 6 g，檸檬酸三鈉4. I g，MgS04*7H20 0. I g，KH2PO4 I. 5 g，微量元素溶液I mL，水定容至I L，調(diào)pH到7. 0-7. 5。
[0009] 上述微量元素溶液由以下成分組成=Na2EDTA 63. 7 g，ZnSO4 2. 2 g，CaCl2 5. 5 g， MnCl2 ·4Η20 5.1 g,FeSO4 ·7Η20 5.0 g, Na2MoO4 ·4Η20 LI g,CuSO4 ·5Η20 1.6 g,CoCl2 ·6Η20 1. 6 g，水定容至I L，調(diào)pH 7. 0。
[0010] 上述牛肉膏培養(yǎng)基由以下成分組成：牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，KNO3 30g， NaCl 10. 0 g，KCl 5· 0 g，MgSO4 · 7H20 2· 5 g，蒸餾水 I L，ρΗ7· 0-7. 5,定容至 I L，pH 7· 0?7· 5。
[0011] 上述的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49在缺氧條件下廢水處理中的應(yīng)用。
[0012] 上述的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49在厭氧處理高濃度氮、COD廢水方面的應(yīng)用。
[0013] 一種應(yīng)用菌劑，將上述的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49接種于牛肉膏培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)得 到的菌體即為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49的應(yīng)用菌劑。
[0014] 上述的牛肉膏培養(yǎng)基由以下成分組成：牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，KNO3 30g， NaCl 10. 0 g，KCl 5· 0 g，MgSO4 · 7H20 2· 5 g，蒸餾水 I L，ρΗ7· 0-7. 5,定容至 I L，pH 7· 0?7· 5 有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是： 1、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌) GY-49且在無(wú)氧條件下可以快速生長(zhǎng)，且對(duì)高氮、 高COD含量的廢水具有高效的脫氮，降低COD的能力。
[0015] 2、使用該菌株對(duì)廢水脫氮，降低COD工藝簡(jiǎn)單、脫氮效果穩(wěn)定，處理效率高，且最 終產(chǎn)物為N 2和CO2，對(duì)環(huán)境沒(méi)有二次污染。
【專(zhuān)利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1為堅(jiān)強(qiáng)芽抱桿菌（ifeciBiAs ) GY-49菌落形態(tài)。
[0017] 圖2為菌株在實(shí)驗(yàn)室模擬高氮、高COD廢水中的0D600、總氮、CODtt的含量變化。
[0018] 圖3為菌種在養(yǎng)殖廢水中0D600、總氮、CODtt的含量變化。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù) 人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干變型和改進(jìn)，這些也應(yīng)視為屬于 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0020] 實(shí)施例1 : 1.材料準(zhǔn)備 (1).菌源 菌源：江蘇省南京市的棲霞區(qū)萬(wàn)壽村菜地地表下深度為1(T15 cm的土壤。
[0021] (2).培養(yǎng)基 (1)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，KCl 5.0 g，MgS04*7H20 2.5 g，水定容至I L，調(diào)節(jié)pH 7·(Γ7·2。
[0022] (2)LB培養(yǎng)基：蛋白胨10.0 g，酵母粉5.0 g，NaCl 10.0 g，水定容至I L，調(diào)節(jié) pH 7. 0?7· 2。
[0023] (3)反硝化培養(yǎng)基=NaNO3 0· 6 g，檸檬酸三鈉 4. I g，MgSO4 · 7H20 0· I g，KH2PO4 1.5 g，微量元素溶液I mL，水定容至I L，調(diào)pH到7. 0-7. 5。
[0024] 微量元素溶液：Na2EDTA 63. 7 g，ZnSO4 2. 2 g，CaCl2 5. 5 g，MnCl2 · 4H20 5. I g， FeSO4 · 7H20 5. 0 g，Na2MoO4 · 4H20 I. I g，CuSO4 · 5H20 I. 6 g，CoCl2 · 6H20 I. 6 g，水定容 至 I L，調(diào) pH 7. 0。
[0025] 各培養(yǎng)基均在121°C條件下滅菌20 min ;以上培養(yǎng)基制備固體平板時(shí)添加2%的瓊 脂。
[0026] (3) ·實(shí)驗(yàn)儀器
【權(quán)利要求】
1. 一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49,其特征在于，其分類(lèi)命名為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49 GY-49)，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M 2014347,該菌株已于 2014年 7 月 21 日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。
2. 權(quán)利要求1所述的一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49的篩選方法，其特征在于，包括以下步 驟： 1) 芽孢桿菌的篩選：采集的土壤樣品稀釋得到菌懸液，將菌懸液涂布于制備好的牛肉 膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，然后倒置于30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，挑取不同形態(tài)的、生長(zhǎng)良好的 單菌落反復(fù)劃線(xiàn)，純化分離菌株，并將所獲得的單菌落轉(zhuǎn)接至的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面 上，30°C恒溫培養(yǎng)48 h，置于4°C冰箱保存?zhèn)溆?，即為芽孢桿菌； 2) 反硝化及脫COD細(xì)菌的篩選：將篩選出來(lái)的芽孢桿菌在反硝化培養(yǎng)基平板上劃線(xiàn)培 養(yǎng)48h，觀(guān)察菌株是否在反硝化培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，檢測(cè)培養(yǎng)前后培養(yǎng)基總氮與C0D&的變化，最 終篩選出堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49的篩選方法，其特征在于，所述反 硝化培養(yǎng)基由以下成分組成：NaN03 0. 6 g，檸檬酸三鈉4. 1 g，MgS04 ? 7H20 0. 1 g，KH2P041.5 g，微量元素溶液1 mL，水定容至1 L，調(diào)pH到7. 0-7. 5。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49的篩選方法，其特征在于，所述微 量元素溶液由以下成分組成：Na2EDTA 63. 7 g，ZnS04 2. 2 g，CaCl2 5. 5 g，MnCl2 ? 4H20 5. 1 g，F(xiàn)eS04 ? 7H20 5. 0 g，Na2Mo04 ? 4H20 1. 1 g，CuS04 ? 5H20 1. 6 g，CoCl2 ? 6H20 1. 6 g，水定 容至1 L，調(diào)pH 7. 0。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49的篩選方法，其特征在于，所述牛肉 膏培養(yǎng)基由以下成分組成：牛肉膏5. 0 g，蛋白胨10. 0 g，KN03 30g，NaCl 10. 0 g，KCl 5. 0 g，MgS04 ? 7H20 2. 5 g，蒸餾水 1 L，pH7. 0-7. 5,定容至 1 L，pH 7. 0?7. 5。
6. 權(quán)利要求1所述的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49在缺氧條件下廢水處理中的應(yīng)用。
7. 權(quán)利要求1所述的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49在厭氧處理高濃度氮、COD廢水方面的應(yīng)用。
8. -種應(yīng)用菌劑，其特征在于，將權(quán)利要求1所述的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49接種于牛肉膏 培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)得到的菌體即為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌GY-49的應(yīng)用菌劑。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種應(yīng)用菌劑，其特征在于，所述牛肉膏培養(yǎng)基由以下成分 組成：牛肉膏 5.0 g，蛋白胨 10.0 g，KN03 30g，NaCl 10.0 g，KCl 5.0 g，MgS04.7H20 2.5 g，蒸餾水 1 L，pH7. 0-7. 5,定容至 1 L，pH 7. 0?7. 5。
【文檔編號(hào)】C12Q1/04GK104403968SQ201410633066
【公開(kāi)日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】胡南, 高遠(yuǎn), 高浩峰, 王鵬胤, 楊立志 申請(qǐng)人:南京工業(yè)大學(xué)