一種液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括30.1g/L皰肉培養(yǎng)基、2.4g/L乳糖、0.88g/L硫乙醇酸鈉、0.68g/LL-胱氨酸、0.05g/L磷酸二氫鉀、3.5g/L氯化鈉、0.001g/L刃天青、0.76g/L瓊脂，pH值為6.9-7.3。所述皰肉培養(yǎng)基為每升皰肉培養(yǎng)基中含有酪胨20.0g、酵母浸粉5.0g、可溶性淀粉1.5g、葡萄糖3g、枸櫞酸鈉5.8g、去氧膽酸鈉0.33g、磷酸二氫鈉2.0g。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；菌生長迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【專利說明】一種液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 產(chǎn)氣莢膜梭菌（C.perfringens)是臨床上氣性壞疽病原菌中最多見的一種梭菌， 因能分解肌肉和結(jié)締組織中的糖，產(chǎn)生大量氣體，導(dǎo)致組織嚴(yán)重氣腫，繼而影響血液供應(yīng)， 造成組織大面積壞死，加之本菌在體內(nèi)能形成莢膜，故名產(chǎn)氣夾膜梭菌。
[0003] 肉毒桿菌是一種生長在缺氧環(huán)境下的細菌，在罐頭食品及密封腌漬食物中具有極 強的生存能力，是毒性最強的毒素之一。肉毒桿菌是一種致命病菌，在繁殖過程中分泌毒 素，是毒性最強的蛋白質(zhì)之一。軍隊常常將這種毒素用于生化武器。人們食入和吸收這種 毒素后，神經(jīng)系統(tǒng)將遭到破壞，出現(xiàn)頭暈、呼吸困難和肌肉乏力等癥狀。
[0004] 培養(yǎng)基（Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料， 一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng) 基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要 求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變 質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培 養(yǎng)基），較長時間的貯存，必須放在3?6°C的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管，現(xiàn)在 均改制成粉末。
[0005] 培養(yǎng)基根據(jù)化學(xué)分類為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基；根據(jù)物理分類 為液體培養(yǎng)基、固定培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基；根據(jù)微生物分類為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明運用生物化學(xué)，微生物學(xué)及無機、有機、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理，對不 同的碳源、氮源、無機鹽類、維生素、生長促進劑等諸類營養(yǎng)組分的組合進行篩選，對培養(yǎng)基 的PH值、離子強度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進行了比較，研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0008] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：
[0009] -種液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括30. lg/L皰肉培養(yǎng)基、2. 4g/ L乳糖、0. 88g/L硫乙醇酸鈉、0. 68g/L L-胱氨酸、0. 05g/L磷酸二氫鉀、3. 5g/L氯化鈉、 0· 001g/L 刃天青、0· 76g/L 瓊脂，pH 值為 6. 9-7. 3。
[0010] 在以上方案的基礎(chǔ)上，所述皰肉培養(yǎng)基為每升皰肉培養(yǎng)基中含有酪胨20. 0g、酵 母浸粉5. 0g、可溶性淀粉I. 5g、葡萄糖3g、枸櫞酸鈉5. 8g、去氧膽酸鈉0. 33g、磷酸二氫鈉 2. Og0
[0011] 本發(fā)明還公開了所述的液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基的應(yīng)用，用于產(chǎn)氣莢膜梭菌確證試 驗的細菌培養(yǎng)。
[0012] 酪胨和酵母出粉提供碳氮源、維生素和生長因子；葡萄糖提供可發(fā)酵有糖類更利 于生長；氯化鈉維持均衡的滲透壓；硫乙醇酸鈉和L一胱氨酸能有效降低氧化還原電位，防 止過氧化物的積累對某些菌產(chǎn)生毒性，同時其硫氫基團有鈍化含砷、汞及其它重金屬防腐 劑的抑菌作用；少量瓊脂的凝固作用可防止二氧化碳、氧氣和還原產(chǎn)物的擴散；刃天青是 氧化還原指示劑，氧化狀態(tài)呈粉紅色，還原狀態(tài)無色。
[0013] 稱取本品29. 25g，加熱攪拌溶解于IOOOml蒸餾水中，分裝適宜容器，其裝量與容 器高度的比例應(yīng)符合，培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的1/2。121°C 高壓滅菌15分鐘迅速冷卻。
[0014] 在接種前，培養(yǎng)基氧化層高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5。否則，須經(jīng)KKTC水浴 加熱至粉紅色消失（不得超過20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并應(yīng)防止被污染。
[0015] 本發(fā)明的有益效果：
[0016] 1、培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；
[0017] 2、菌生長迅速，變異率低；
[0018] 3、便于觀察，分析。
【具體實施方式】
[0019] 實施例1 :
[0020] 一種液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括30. lg/L皰肉培養(yǎng)基、2. 4g/ L乳糖、0. 88g/L硫乙醇酸鈉、0. 68g/L L-胱氨酸、0. 05g/L磷酸二氫鉀、3. 5g/L氯化鈉、 0· 001g/L 刃天青、0· 76g/L 瓊脂，pH 值為 6. 9-7. 3。
[0021] 所述皰肉培養(yǎng)基為每升皰肉培養(yǎng)基中含有酪胨20. 0g、酵母浸粉5. 0g、可溶性淀 粉I. 5g、葡萄糖3g、枸櫞酸鈉5. 8g、去氧膽酸鈉0. 33g、磷酸二氫鈉2. 0g。
[0022] 酪胨和酵母出粉提供碳氮源、維生素和生長因子；葡萄糖提供可發(fā)酵有糖類更利 于生長；氯化鈉維持均衡的滲透壓；硫乙醇酸鈉和L一胱氨酸能有效降低氧化還原電位，防 止過氧化物的積累對某些菌產(chǎn)生毒性，同時其硫氫基團有鈍化含砷、汞及其它重金屬防腐 劑的抑菌作用；少量瓊脂的凝固作用可防止二氧化碳、氧氣和還原產(chǎn)物的擴散；刃天青是 氧化還原指示劑，氧化狀態(tài)呈粉紅色，還原狀態(tài)無色。
[0023] 稱取本品29. 25g，加熱攪拌溶解于1000ml蒸餾水中，分裝適宜容器，其裝量與容 器高度的比例應(yīng)符合，培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的1/2。121°C 高壓滅菌15分鐘迅速冷卻。
[0024] 在接種前，培養(yǎng)基氧化層高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5。否則，須經(jīng)KKTC水浴 加熱至粉紅色消失（不得超過20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并應(yīng)防止被污染。
[0025] 在 36±1°C培養(yǎng) 24-120 小時
[0026]
【權(quán)利要求】
1. 一種液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括30. lg/L皰肉培養(yǎng) 基、2. 4g/L乳糖、0. 88g/L硫乙醇酸鈉、0. 68g/LL-胱氨酸、0. 05g/L磷酸二氫鉀、3. 5g/L氯化 鈉、0? 001g/L 刃天青、0? 76g/L 瓊脂，pH 值為 6. 9-7. 3。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，其特征在于所述皰肉培養(yǎng)基為每升 皰肉培養(yǎng)基中含有酪胨20. 0g、酵母浸粉5. 0g、可溶性淀粉I. 5g、葡萄糖3g、枸櫞酸鈉5. 8g、 去氧膽酸鈉〇. 33g、磷酸二氫鈉2. 0g。
3. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于用于產(chǎn)氣莢 膜梭菌確證試驗的細菌培養(yǎng)。
【文檔編號】C12R1/01GK104313110SQ201410521625
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月30日
【發(fā)明者】王玉芝 申請人:青島康合偉業(yè)商貿(mào)有限公司