一種用酶法使大豆油中生成維生素a的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用酶法使大豆油中生成維生素A的方法。以植物油為載體，強化VA，可避免因食入過量引起中毒，也可達到降低維生素A缺乏癥的發(fā)病率。由于人體不能直接合成va，e-胡蘿卜素-15，15'-加氧酶可以將P-胡蘿卜素裂解生成va，大豆三級油中含有一定量的e-胡蘿卜素，即可利用此部分e-胡蘿卜素在酶的催化下生成VA。所采用的酶是P-胡蘿卜素-15，15'-加氧酶，該酶可以從動物體內(nèi)提取，是生物酶因此對人體無危害。用e-胡蘿卜素-15，15'-加氧酶催化大豆油中的e-胡蘿卜裂解生成VA，為生產(chǎn)VA強化大豆油開辟了新的途徑。
【專利說明】-種用酶法使大豆油中生成維生素 A的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用酶法使大豆油中生成維生素 A的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 維生素 A缺乏（vitamin A deficient, VAD)是世界范圍內(nèi)，尤其是發(fā)展中國家最常 見的微量營養(yǎng)素缺乏癥之一，婦女和兒童是最容易受VAD影響的人群。VAD除導(dǎo)致干眼病 之外，還與機體免疫功能、兒童生長發(fā)育、缺鐵性貧血以及孕婦和胎兒健康有關(guān)。人體不能 自身合成維生素 A(VA),植物來源的β -胡蘿卜素及其他胡蘿卜素可在人體內(nèi)合成維生素 Α。食品強化是提高人體維生素 A營養(yǎng)水平的理想方法之一。我國人民食用植物油主要用 于烹飪各種菜肴。以植物油為載體，強化VA，可避免因食入過量引起中毒，也不會因攝取不 足而達不到強化的目的。
[0003] 目前生產(chǎn)VA強化油的方法為在一級大豆油中，人工添加視黃醇乙酸酯和抗氧化 齊U。該發(fā)明是采用酶法作用于三級大豆油，將三級大豆油中的β_胡蘿卜素轉(zhuǎn)化成VA。所 采用的酶是β -胡蘿卜素_15，15< -加氧酶，該酶可以從動物體內(nèi)提取，是生物酶對人體 無危害。該發(fā)明運用了大豆油的自身成分轉(zhuǎn)化VA，為生產(chǎn)VA強化油提供了新的途徑。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明利用大豆三級油中自有成分β-胡蘿卜素通過β -胡蘿卜素-15， 15'-加氧酶催化斷裂生成VA，使其反應(yīng)直接在油相中進行。用酶法使大豆油中生成維生 素 A的方法通過以下步驟實現(xiàn)：一、β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶的提??；二、β -胡蘿 卜素-15,15'-加氧酶催化大豆三級油生成VA。
[0005] 利用酶法轉(zhuǎn)化油中的β -胡蘿卜素為VA與現(xiàn)有的VA強化油生產(chǎn)方法相比減少 了視黃醇乙酸酯和抗氧化劑添加量。而且β -胡蘿卜素_15，15'-加氧酶是從動物體內(nèi) 提取的生物酶，對人體沒有危害。
【具體實施方式】
【具體實施方式】 [0006] 一：一種用酶法使大豆油中生成維生素 A的方法通過以下步驟實 現(xiàn)。一、β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶的提取：首先選用60日齡三黃雞，屠宰前一天，禁 食12h，自由飲水。取空腸，用冰冷的生理鹽水沖洗干凈，用剪刀剖開腸道，取蓋玻片輕輕掛 下腸粘膜，將腸粘膜按1:5(W/V)的比例如加入pH7. 4的PBS緩沖液，于(TC勻漿，lOOOr/min 低溫離心30min，取上清。將酶液保存在-70°C下備用；二、β -胡蘿卜素-15，15'-加氧 酶催化大豆三級油生成VA:取大豆三級油100g，加入一定量的β -胡蘿卜素-15,15'-加 氧酶，60 r/min機械攪拌，在溫度40°C下加入脫氧膽酸鈉 ，Tween 40,水浴反應(yīng)一段時間， 3500r/min離心20min，取上清樣測定油中VA含量。
[0007]
【具體實施方式】二：本實施方式與【具體實施方式】一的不同點在于步驟二中將油相中 β -胡蘿卜素_15，15'-加氧酶添加量為0.59Γ3%，在此條件下進行大豆油生成VA其它步 驟與【具體實施方式】一相同。
【具體實施方式】 [0008] 三：本實施方式與一的不同點在于步驟二中將油相中 β -胡蘿卜素_15，15'-加氧酶添加量為0.59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C，在此條件下進 行大豆油生成VA其它步驟與一相同。
【具體實施方式】 [0009] 四：本實施方式與一的不同點在于步驟二中將油相中 β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C，反應(yīng)時間為 4h~7h，在此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與一相同。
[0010]
【具體實施方式】五：本實施方式與【具體實施方式】一的不同點在于步驟二中將油相中 β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C，反應(yīng)時間為 4h~7h，脫氧膽酸鈉添加量為0. 019Γ0. 05%，在此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與具體 實施方式一相同。
[0011]
【具體實施方式】六：本實施方式與【具體實施方式】一的不同點在于步驟二中將油相中 β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C，反應(yīng)時間為 4h?7h，脫氧膽酸鈉添加量為0. 019Γ0. 05%，Tween 40添加量為0. 019Γ0. 05%，在此條件下進 行大豆油生成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
[0012] 【具體實施方式】七：本實施方式與【具體實施方式】一的不同點在于步驟二中將由單因 素確定的結(jié)果再進一步優(yōu)化得到固定化條件，優(yōu)化的條件為β -胡蘿卜素 -15，15'-加 氧酶添加量為〇. 59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C，反應(yīng)時間為4h?7h，脫氧膽酸鈉添加量為 0. 019Γ0. 05%，Tween 40添加量為0. 019Γ0. 05%，用優(yōu)化結(jié)果進行大豆三級油中VA生成。在 最優(yōu)狀態(tài)下VA最低含量為2mg/kg。其它步驟與【具體實施方式】一相同。
【權(quán)利要求】
1. 一種用酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特征在于用大豆油中生成維生素 A 的方法步驟如下： 步驟一 ：β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶的提取，首先選用60日齡三黃雞，屠宰前一 天，禁食12h，自由飲水，取空腸，用冰冷的生理鹽水沖洗干凈，用剪刀剖開腸道，取蓋玻片 輕輕掛下腸粘膜，將腸粘膜按1:5 (W/V)的比例如加入pH7. 4的PBS緩沖液，于0°C勻漿， lOOOr/min低溫離心30min，取上清，將酶液保存在-70°C下備用； 步驟二：β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶催化大豆三級油生成VA:取大豆三級油 IOOg,加入一定量的β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶，60r/min機械攪拌，在溫度40°C下 加入脫氧膽酸鈉 ，Tween 40,水浴反應(yīng)一段時間，3500r/min離心20min，取上清樣測定油中 VA含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特征在于步驟 二中油相中β -胡蘿卜素_15，15'-加氧酶添加量為0.59Γ3%，在此條件下進行大豆油生 成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特征在于步驟 二中油相中β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C， 在此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特征在于步驟 二中油相中β -胡蘿卜素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C， 反應(yīng)時間為4h~7h，在此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特征在于步驟 二中油相中β -胡蘿卜素_15，15'-加氧酶添加量為0.59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C， 反應(yīng)時間為4h~7h，脫氧膽酸鈉添加量為0. 019Γ0. 05%，在此條件下進行大豆油生成VA其它 步驟與【具體實施方式】一相同。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特征在于步驟 二中油相中β -胡蘿卜素_15，15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C， 反應(yīng)時間為4h?7h，脫氧膽酸鈉添加量為0. ΟΡ/ΓΟ. 05%，Tween 40添加量為0. ΟΡ/ΓΟ. 05%，在 此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特征在于步驟 二中將由單因素確定的結(jié)果再進一步優(yōu)化得到條件，結(jié)果為β -胡蘿卜素_15，15'-加 氧酶添加量為〇. 59Γ3%，反應(yīng)溫度為30°C?50°C，反應(yīng)時間為4h?7h，脫氧膽酸鈉添加量為 0. 019Γ0. 05%，Tween 40添加量為0. 019Γ0. 05%，用優(yōu)化結(jié)果進行大豆三級油中VA生成。
【文檔編號】C12P23/00GK104212866SQ201410498788
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月26日
【發(fā)明者】于殿宇, 劉天一, 孫賀, 江連洲 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)