一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置及方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)學細胞治療領域，具體涉及一種快速、即時分離人皮膚中表皮細胞、黑色素細胞及成纖維細胞的裝置，以及分離方法；本發(fā)明的分離裝置由微型磁力加熱攪拌器、操作面板、消化酶及等滲電解質溶液組成。本發(fā)明的分離方法不但明顯減少了分離人體皮膚細胞所需儀器、簡化了操作步驟，明顯縮短了分離細胞所需時間，而且避免了血清的應用，顯著減少過敏、病原微生物傳播等嚴重并發(fā)癥的發(fā)生，有利于人體皮膚細胞移植應用的廣泛推廣。本發(fā)明分離的細胞可用于瘢痕整形、各種原因所致色素異常改變(如白癜風、瘢痕性色素減退)的治療及急慢性創(chuàng)面修復。
【專利說明】一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置及方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)學細胞治療領域，具體涉及一種快速、即時分離人皮膚中表皮細胞、黑色素細胞及成纖維細胞的裝置，以及分離方法；本發(fā)明分離的細胞可用于瘢痕整形、各種原因所致色素異常改變(如白癜風、瘢痕性色素減退)的治療及急慢性創(chuàng)面修復。
【背景技術】
[0002]隨著醫(yī)學技術的發(fā)展，細胞治療已成為多種疾病的重要治療手段之一，受到研究者和臨床醫(yī)師的廣泛關注。人皮膚中主要的細胞成份為表皮細胞、成纖維細胞及黑色素細胞，分離上述細胞后即時應用(即未經體外培養(yǎng)擴增)、或延時應用(即經體外培養(yǎng)擴增)，結合其它治療手段已成功應用于瘢痕、瘢痕性色素減退或沉著、白癜風、燒傷深度創(chuàng)面、供皮區(qū)及各種慢性創(chuàng)面(如糖尿病足、靜脈曲張性皮膚潰瘍)等的治療，并取得了良好的效果。例如:分離小塊人皮膚中表皮細胞、黑色素細胞移植于經磨削的白癜風創(chuàng)面或其它原因所致的色素異常改變創(chuàng)面，可恢復治療區(qū)正常顏色；分離皮膚中表皮細胞、成纖維細胞，經體外培養(yǎng)擴增后種植于真皮替代物表面，形成復層組織工程皮膚，可修復深度燒傷創(chuàng)面。
[0003]盡管人皮膚細胞治療已取得一定效果，然而，存在的最大問題是目前尚無理想的表皮細胞、黑色素細胞及成纖維細胞分離設備和技術，常用的方法是切取患者斷層皮片后采用中性蛋白酶或胰蛋白酶進行消化，第一步是分離斷層皮片的表皮層，可采用熱消化或冷消化。熱消化是將斷層皮片置于由中性蛋白酶或胰蛋白酶組成的消化液中，在實驗室培養(yǎng)箱等清潔環(huán)境下于37攝氏度消化0.5-2小時，冷消化是指在4攝氏度下將斷層皮片消化8-12小時，然后以攝子揭起表皮層。第二步是分離表皮層中的細胞成份，將分離的表皮層剪切成碎片，加入一定濃度的胰蛋白酶溶液，在37攝氏度下消化10-30分鐘不等，適當吹打，然后以200目濾網過濾去除表皮碎片，加入l-5ml異體或異種血清中和胰酶，臺式離心機上以800 - 1200rpm離心5_10分鐘，吸除溶液，在沉淀物中加入培養(yǎng)基或其它類似溶液，適當吹打，獲得含表皮細胞及部分黑色素細胞或成纖維細胞的細胞懸液(參見文獻:陳俊穎，魏泓，周建華。人表皮細胞分離培養(yǎng)的研究。中國實驗動物學報，2006，14 (2):114-117。)。上述方法操作步驟多、耗時長，且需專用儀器設備，難以在手術室內與手術同步進行，成為人體皮膚細胞治療推廣應用的主要障礙，具體表現如下:1.消化分離時間長:無論是熱消化或冷消化，整個細胞分離過程需耗時2-16小時，分離的細胞難以在短時間內在手術室得到應用；2.分離細胞步驟多:需首次消化以分離表皮層、再次消化以分離表皮層中的細胞成份、然后過濾、離心、重懸細胞等，操作相對復雜、需一定的儀器設備及相關技術，只能在具備一定實驗條件及技術人員的實驗室內進行，難以在臨床上推廣應用；3.存在過敏及病毒、支原體、衣原體等病原微生物傳播的嚴重并發(fā)癥危險:細胞懸液中殘余胰蛋白酶，需添加胰蛋白酶抑制劑或血清，中止胰蛋白酶活性以免加重細胞損傷，異體或異種血清成份復雜，可導致過敏甚至過敏性休克等嚴重并發(fā)癥，且存在難以檢測的病原微生物傳播的風險；
4.所采用的分離方法據各實驗室的條件及經驗均有所不同，缺乏統(tǒng)一的流程和質控標準，臨床應用效果不穩(wěn)定。
[0004]目前急需一種快速、即時、無傳染風險的人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的專用分離設備及其分離方法。
【發(fā)明內容】
[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種快速、即時、無傳染風險的人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的專用分離設備及其分離方法。
[0006]本發(fā)明擬對目前實驗室及臨床上所使用的人皮膚細胞分離設備及技術進行改進，不僅要減少細胞分離的步驟和所需儀器，而且要縮短細胞分離時間，最重要的是要避免血清的應用，提高細胞治療的安全性。
[0007]本發(fā)明的第一方面，提供了一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置，該裝置包括:
[0008]磁力加熱攪拌器和操作面板，所述的操作面板鑲嵌于磁力加熱攪拌器上，二者形成一個整體；
[0009]所述的操作面板上設有3個以上孔，其中一個孔為磁力攪拌及過濾孔，其內放置一個磁力攪拌子，所述的磁力攪拌子的直徑為0.1-1cm,長度為0.4-2cm。
[0010]所述的磁力加熱攪拌器，也稱加熱磁力攪拌器，可控制溫度在25-40攝氏度之間，攪拌速度為100-1200rpm。
[0011]磁力加熱攪拌器驅動力為一次性電池或反復充電式電池或常用的220伏交流電。
[0012]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述的磁力加熱攪拌器，可選用市售的微型磁力加熱攪拌器加以組裝或改造，例如但不限于上海歐河機械設備有限公司的0MS-5A多聯(lián)動磁力攪拌機、常州普天儀器制造有限公司的六聯(lián)磁力加熱攪拌器等。
[0013]所述的操作面板上設有3個以上孔，各孔分別為:至少一個消化孔；至少一個漂洗孔；至少一個磁力攪拌及過濾孔，所述的磁力攪拌及過濾孔內裝有可抽取式80目一 200目的過濾網。
[0014]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述的操作面板上設有5個孔，分別為A、B、C、D、E孔，其中A孔為皮片消化孔，呈圓形、正方形或其它任意形狀，直徑為l-5cm，深度為l-5cm，溫度由加熱磁力攪拌器精確控制在25-40攝氏度；B孔、C孔、D孔為皮片漂洗孔，為圓形、正方形或其它任意形狀，直徑為l_5cm，深度為l-5cm ；E孔為磁力攪拌及過濾孔，直徑為
0.5-5cm，深度為0.5-5cm，孔內裝有可抽取式80目一 200目的過濾網。
[0015]所述的操作面板，為高強度塑料或鋁質、鋼質、木質材料構成。
[0016]優(yōu)選的，操作面板為長方體，長度為1cm?30cm,寬度為1cm?30cm,高度為5cm ?40cmo
[0017]本發(fā)明的裝置還包括:
[0018]消化酶，為由膠原酶、中性蛋白酶及胰蛋白酶組成的固態(tài)消化酶，優(yōu)選的所述的膠原酶、中性蛋白酶及胰蛋白酶的重量比為1:1:1;
[0019]等滲電解質溶液，為Ph值7.4的電解質溶液生理鹽水、PBS液、D-hank’ s液，或Hank，S 液；
[0020]一次性手術刀，優(yōu)選的為常規(guī)23號刀片；
[0021]一次性手術用鑷子，優(yōu)選的為無齒鑷子。
[0022]優(yōu)選的，本發(fā)明的裝置還包括:注射器，為lml、2.5ml或5ml常規(guī)注射器。
[0023]本發(fā)明的第二方面，提供了一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的方法，該方法包括以下步驟:
[0024]A、將消化酶溶解于等滲電解質溶液中，配制成質量濃度為0.1% -1%的消化液，加入消化孔中，啟動微型磁力加熱攪拌器，預熱5-10分鐘，使溶液溫度為25-40攝氏度；
[0025]B、將需要分離的斷層皮片，處理成厚度為0.15-0.6mm,大小為0.5cm2_16cm2 ；
[0026]C、將切取步驟B的斷層皮片置于消化孔中孵育5-45分鐘；
[0027]D、漂洗孔中加入等滲電解質溶液，將孵育后的斷層皮片進行漂洗；
[0028]E、將漂洗后的斷層皮片平放于操作面板上，表皮面朝上，用手術用鑷子揭起、分離表皮層，用一次性手術刀刮除表皮層的真皮面數次，并刮除真皮層的表皮面數次，得到少量的含細胞及部分雜質的溶液；
[0029]F、在磁力攪拌及過濾孔中加入等滲電解質溶液，將所獲得的含細胞及部分雜質的溶液置于磁力攪拌及過濾孔中過濾，然后取出可抽取式80目一 200目的過濾網，即可獲得含分離細胞的溶液；
[0030]G、進一步優(yōu)選的方案為，將漂洗后的斷層皮片平放于操作面板上，表皮面朝上，用手術用鑷子揭起、分離表皮層，用一次性手術刀刮除表皮層的真皮面數次，并刮除真皮層的表皮面數次，得到少量的含細胞及部分雜質的溶液。然后用手術刀將表皮層適當切割成碎片，將所獲得的含細胞及部分雜質的溶液和表皮碎片置于預先加入等滲電解質溶液的磁力攪拌及過濾孔中，常溫下以100 - 1200rpm攪拌5-10分鐘，然后取出可抽取式80目一 200目的過濾網，在磁力攪拌及過濾孔中即可獲得含分離細胞的溶液。
[0031 ] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，上述方法中，
[0032]優(yōu)選的，步驟Ajf0.001-0.02克消化酶(膠原酶、中性蛋白酶及胰蛋白酶為1:1:I比例)溶解于2-10ml等滲電解質溶液D-hank’ s液中，配制成質量濃度為0.1% -1%的消化液，加入A孔中，啟動微型磁力加熱攪拌器，預熱5-10分鐘，使溶液溫度為25-40攝氏度；
[0033]優(yōu)選的，步驟D、三個漂洗孔(B、C、D孔)中分別加入等滲電解質溶液如Hank’ S液，取出孵育后的斷層皮，分別于B、C、D孔中漂洗1-3次(可為I次，也可為3次不等)；
[0034]優(yōu)選的，步驟E、將漂洗后的斷層皮片平放于操作面板上，以鑷子等固定皮片，以另一鑷子揭起分離的表皮層，然后以安裝23號刀片的手術刀刮除表皮層的真皮面，刮除真皮層的表皮面，并適當將表皮層切割成碎片，即可獲得一定量的分離的細胞；
[0035]優(yōu)選的，步驟F、為進一步提高細胞分離量并去除表皮碎片，在E孔中加入0.5-5ml等滲電解質溶液如Hank’ S液，置入磁力攪拌子，將刮除后所得到的細胞溶液及表皮碎片置于E孔中，常溫下以100 — 1200rpm攪拌5-10分鐘，然后取出可抽取式80目一 200目的過濾網，在E孔中即可獲得約0.5-5ml含分離細胞的溶液，以注射器抽吸細胞溶液，待用。
[0036]經多次實驗表明，分離人皮膚細胞所需時間為15 - 60分鐘。
[0037]分離細胞的組成，是由表皮細胞、成纖維細胞及黑色素細胞組成，其中表皮細胞占50-93 %、成纖維細胞占10-25 %，黑色素細胞占2-5 %。每平方厘米人斷層皮片分離的細胞總數為1.0X 16 — 3.5 X 16個，細胞活性為80-95%。
[0038]分離的細胞，采用注射器均勻滴注或噴灑于經磨削等處理的瘢痕、白癜風或其它色素異常改變創(chuàng)面，包扎固定1-2周，可顯著減輕瘢痕增生、恢復正常皮膚色澤。分離的細胞應用于供皮區(qū)、燒傷創(chuàng)面及各種慢性創(chuàng)面(如糖尿病足、靜脈曲張性皮膚潰瘍)等，移植后細胞存活并分泌生長因子，明顯促進創(chuàng)面愈合。此外，分離的細胞也可用作實驗室培養(yǎng)擴增表皮細胞、成纖維細胞或黑色素細胞，以供研究應用。
[0039]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明的一種快速、即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞及成纖維細胞的裝置及方法，與目前常規(guī)的細胞分離技術相比，具有以下顯著優(yōu)點:
[0040]1.常規(guī)細胞分離方法需要培養(yǎng)箱或水浴箱及離心機等，不但體積大，而且操作復雜，需在實驗室內進行操作。本發(fā)明的細胞分離裝置由微型磁力加熱攪拌器及操作面板形成一體化構件，體積小、攜帶簡便，可一次性使用，或經薰蒸消毒后反復使用，尤其適合于在手術室使用，便于臨床相關細胞治療的開展；
[0041]2.常規(guī)細胞分離方法耗時2-16小時，分離的細胞難以在短時間內在手術室得到應用。本發(fā)明分離人皮膚細胞所需時間為15 - 60分鐘，可與手術同時進行，分離細胞后即時應用，便于臨床推廣；
[0042]3.應用本發(fā)明提供的細胞分離裝置分離細胞時，操作流程簡便、標準化，具備一般醫(yī)學知識的醫(yī)護人員即可進行操作，不需在具備一定實驗條件及技術人員的實驗室內進行，且分離細胞數量及活性穩(wěn)定、移植應用時存活率高；
[0043]4.本發(fā)明分離細胞時不需添加胰蛋白酶抑制劑或血清等中止殘余胰蛋白酶活性，避免了因異體或異種血清導致過敏、過敏性休克及病毒、支原體、衣原體病原微生物傳播等嚴重并發(fā)癥的發(fā)生。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0044]圖1為本發(fā)明裝置的結構示意圖；
[0045]其中:
[0046]磁力加熱攪拌器1、
[0047]操作面板2、
[0048]孔3，消化孔3A ;漂洗孔3B、3C、3D ;磁力攪拌及過濾孔3E ；
[0049]過濾網4、
[0050]溫度指示5、
[0051]轉速指示6。
【具體實施方式】
[0052]以下結合附圖和具體實施例，對本發(fā)明做進一步說明。但本發(fā)明的實施并不僅限于此。
[0053]實施例1:
[0054]如圖1所示，一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置，該裝置包括:磁力加熱攪拌器I和操作面板2，所述的操作面板2鑲嵌于磁力加熱攪拌器I上，二者形成一個整體；
[0055]所述的操作面板上設有5個孔，一個消化孔3A ;三個漂洗孔3B、3C、3D 個磁力攪拌及過濾孔3E，所述的磁力攪拌及過濾孔內裝有可抽取式80目一 200目的過濾網4。所述的磁力攪拌及過濾孔，其內放置一個磁力攪拌子。
[0056]所述的磁力加熱攪拌器，還包括溫度指示5、轉速指示6，可控制溫度在25-40攝氏度之間，攪拌速度為100-1200rpm。
[0057]3A孔為呈圓形,直徑為3cm,深度為3cm,溫度由加熱磁力攪拌器精確控制在25-40攝氏度；
[0058]3B孔、3C孔、3D孔為圓形,直徑為3cm,深度為3cm ；
[0059]3E孔為磁力攪拌及過濾孔，直徑為0.5cm，深度為1cm，孔內裝有可抽取式100目的過濾網。
[0060]本發(fā)明的裝置還包括:
[0061 ] 消化酶，為由膠原酶、中性蛋白酶及胰蛋白酶組成的固態(tài)消化酶，優(yōu)選的所述的膠原酶(購自Life Technologies公司，型號17100-017-lg)、中性蛋白酶(購自LifeTechnologies公司，型號17105-041_5g)及膜蛋白酶(購自Life Technologies公司，型號27250-018-100g)的重量比為 1:1:1;
[0062]等滲電解質溶液，為Ph值7.4的電解質溶液生理鹽水、PBS液、D-hank’ s液，或Hank，S 液；
[0063]一次性手術刀，為常規(guī)23號刀片；
[0064]一次性手術用鑷子，為常規(guī)無齒鑷。
[0065]實施例2:
[0066]利用實施例1的裝置，分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的方法包括以下步驟:
[0067]1.將0.001-0.02克消化酶(膠原酶、中性蛋白酶及胰蛋白酶為1:1:1比例)溶解于2-10ml等滲電解質溶液D-hank’s液中，配制成質量濃度為0.1% _1%的消化液，加入A孔中，啟動微型磁力加熱攪拌器，預熱5-10分鐘，使溶液溫度為25-40攝氏度；
[0068]2.切取人體任意部位斷層皮片，厚度約0.15-0.6mm,大小為0.5cm2-16cm2等；
[0069]3.將切取的斷層皮片置于3A孔中孵育5-45分鐘；
[0070]4.3B、3C、3D孔中加入電解質溶液如Hank’ S液，取出孵育后的斷層皮，分別于3B、3C、3D孔中漂洗1-3次；
[0071]5.將漂洗后的斷層皮平放于操作面板上，以鑷子等固定皮片，以另一鑷子揭起分離的表皮層，然后以安裝23號刀片的手術刀刮除表皮層的真皮面，刮除真皮層的表皮面，并適當將表皮層切割成碎片，即可獲得一定量的分離的細胞；
[0072]6.為進一步提高細胞分離量并去除表皮碎片，在3E孔中加入0.5_5ml電解質溶液如Hank’S液，置入磁力攪拌子，將刮除后所得到的細胞溶液及表皮碎片置于E孔中，常溫下以200 — 1200rpm攪拌5-10分鐘，然后取出可抽取式80目一 200目的過濾網，在3E孔中即可獲得約0.5-5ml含分離細胞的溶液，以注射器抽吸細胞溶液，待用。
[0073]所述的分離細胞主要由表皮細胞、成纖維細胞及黑色素細胞組成，其中表皮細胞占85%、成纖維細胞占11%，黑色素細胞占4%，細胞活性為90%。
[0074]以上已對本發(fā)明創(chuàng)造的較佳實施例進行了具體說明，但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所述的實施例，熟悉本領域的技術人員在不違背本發(fā)明創(chuàng)造精神的前提下還可以作出種種的等同的變型或替換，這些等同變型或替換均包含在本申請權利要求所限定的范圍內。
【權利要求】
1.一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置，其特征在于，該裝置包括: 磁力加熱攪拌器和操作面板，所述的操作面板鑲嵌于磁力加熱攪拌器上，二者形成一個整體； 所述的操作面板上設有3個以上孔，其中一個孔為磁力攪拌及過濾孔，其內放置一個磁力攪拌子，所述的磁力攪拌子的直徑為0.1?Icm,長度為0.4?2cm。
2.根據權利要求1所述的一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置，其特征在于，所述的磁力加熱攪拌器，控制溫度為25?40攝氏度，攪拌速度為100 ?1200rpmo
3.根據權利要求1所述的一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置，其特征在于，所述的操作面板上設有3?5個孔，各孔分別為:一個消化孔；一到三個漂洗孔；一個磁力攪拌及過濾孔，所述的磁力攪拌及過濾孔內裝有可抽取式80目?200目的過濾網。
4.根據權利要求3所述的一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置，其特征在于，所述的消化孔，呈圓形、正方形或其它任意形狀，直徑為I?5cm，深度為I?5cm ； 所述的漂洗孔，為圓形、正方形或其它任意形狀，直徑為I?5cm,深度為I?5cm ; 所述的磁力攪拌及過濾孔，直徑為0.5?5cm,深度為0.5?5cm,孔內裝有可抽取式80目?200目的過濾網。
5.根據權利要求1所述的一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置，其特征在于，操作面板為長方體，長度為1cm?30cm,寬度為1cm?30cm,高度為 5cm ?40cm。
6.根據權利要求1一5任一所述的一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置，其特征在于，該裝置還包括: 消化酶，為由膠原酶、中性蛋白酶及胰蛋白酶組成的固態(tài)消化酶，優(yōu)選的所述的膠原酶、中性蛋白酶及胰蛋白酶的重量比為1:1:1; 等滲電解質溶液，為Ph值7.4的電解質溶液生理鹽水、PBS液、D-hank’s液，或Hank’S液； 一次性手術刀； 一次性手術用鑷子。
7.根據權利要求6所述的一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的裝置，其特征在于，該裝置還包括:注射器，為lml、2.5ml或5ml常規(guī)注射器。
8.一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: A、將消化酶溶解于等滲電解質溶液中，配制成質量濃度為0.1%?1%的消化液，加入消化孔中，啟動微型磁力加熱攪拌器，預熱5?10分鐘，使溶液溫度為25?40攝氏度； B、將需要分離的斷層皮片，處理成厚度為0.15?0.6mm,大小為0.5cm2?16cm2 ； C、將切取步驟B的斷層皮片置于消化孔中孵育5?45分鐘； D、漂洗孔中加入等滲電解質溶液，將孵育后的斷層皮片進行漂洗； E、將漂洗后的斷層皮片平放于操作面板上，表皮面朝上，用手術用鑷子揭起、分離表皮層，用一次性手術刀刮除表皮層的真皮面數次，并刮除真皮層的表皮面數次，得到少量的含細胞及部分雜質的溶液； F、在磁力攪拌及過濾孔中加入等滲電解質溶液，將所獲得的含細胞及部分雜質的溶液置于磁力攪拌及過濾孔中過濾，然后取出可抽取式80目?200目的過濾網，即可獲得含分離細胞的溶液； G、進一步優(yōu)選的方案為，將漂洗后的斷層皮片平放于操作面板上，表皮面朝上，用手術用鑷子揭起、分離表皮層，用一次性手術刀刮除表皮層的真皮面數次，并刮除真皮層的表皮面數次，得到少量的含細胞及部分雜質的溶液。然后用手術刀將表皮層適當切割成碎片，將所獲得的含細胞及部分雜質的溶液及表皮碎片置于預先加入等滲電解質溶液的磁力攪拌及過濾孔中，常溫下以100?1200rpm攪拌5?10分鐘，然后取出可抽取式80目?200目的過濾網，在磁力攪拌及過濾孔中即可獲得含分離細胞的溶液。
9.根據權利要求8所述的一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的方法，其特征在于，步驟Ajf0.001?0.02克消化酶溶解于2?1ml等滲電解質溶液D-hank’ s液中，配制成質量濃度為0.1%?I %的消化液，加入消化孔中，啟動微型磁力加熱攪拌器，預熱5-10分鐘，使溶液溫度為25?40攝氏度。
10.根據權利要求8所述的一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的方法，其特征在于，步驟D、一到三個漂洗孔中分別加入等滲電解質溶液Hank’ S液，取出孵育后的斷層皮，分別于一到三個漂洗孔中漂洗I?3次。
11.根據權利要求8所述的一種快速即時分離人皮膚表皮細胞、黑色素細胞和成纖維細胞的方法，其特征在于，步驟G、在磁力攪拌及過濾孔中加入0.2?5ml等滲電解質溶液Hank’ S液，置入磁力攪拌子，將刮除后所得到的含細胞及部分雜質的溶液及表皮碎片置于E孔中，常溫下以100?1200rpm攪拌5-10分鐘，然后取出可抽取式80目?200目的過濾網，在E孔中即可獲得含分離細胞的溶液。
【文檔編號】C12M1/00GK104232475SQ201410475101
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月17日 優(yōu)先權日:2014年9月17日
【發(fā)明者】肖仕初, 田松, 夏照帆, 吳海斌, 鄭勇軍, 王志紅, 紀世召 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學