生物強化細胞營養(yǎng)素在制備抗胃癌細胞功能食品中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種生物強化細胞營養(yǎng)素在制備抗胃癌細胞功能食品中的應(yīng)用。實驗證明生物強化細胞營養(yǎng)素能使胃癌細胞存活率下降，促進胃癌細胞的凋亡。生物強化細胞營養(yǎng)素對人胃癌細胞有一定的抑制作用。并且隨著濃度的增大，抑制作用增強。
【專利說明】生物強化細胞營養(yǎng)素在制備抗胃癌細胞功能食品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物強化細胞營養(yǎng)素的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]我們?nèi)祟惖纳眢w由上萬億個細胞組成，這些細胞是人體結(jié)構(gòu)的基本功能單位，細胞的健康是在核酸的調(diào)控下，依靠蛋白質(zhì)、多種氨基酸、多肽、多糖、多種微量元素、礦物質(zhì)等帶有生物活性的物質(zhì)以維持細胞的正常代謝。細胞有特定的職責，協(xié)同工作，保持著我們的身體健康。身體內(nèi)的每個組織由細胞構(gòu)成，而相關(guān)細胞組織集群便構(gòu)成了人體的器官。雖然這些器官由功能不同的細胞構(gòu)成，但是，它們需要同樣的基本營養(yǎng)成分，這便是支撐細胞代謝的基礎(chǔ)物質(zhì)。細胞是有壽命的，理論上說，如果為細胞提供合適的、足夠的基本營養(yǎng)成分，淘汰凋亡的細胞，精確復制已經(jīng)存在的健康的細胞，提高人體對于疾病的自愈能力，我們?nèi)祟惪裳泳徦ダ?，保持健康?br>
[0003]人體對于疾病的自愈能力，即是人類依靠自身的內(nèi)在生命力，依靠免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)為主的修復機制，修復受損的細胞、擺脫疾病與亞健康狀態(tài)的一種保持身體健康的能力。當人體的自愈力下降時，是因為某些人體器官組織系統(tǒng)缺少足夠的營養(yǎng)因子，細胞不能正常地代謝，不能完全正確地復制健康細胞和液化凋亡的細胞。由于細胞的不正確的復制，使得細胞的正常功能打了折扣，身體的自我修復能力減低，這直接影響了人體對于疾病的抵抗能力，一旦遭遇外界不良因素，人體就會生病。
[0004]癌癥現(xiàn)在已經(jīng)是人類的第一大頑疾，癌細胞的特點是無限制、無止境地增生，使患者體內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗；癌細胞釋放出多種毒素，使人體產(chǎn)生一系列癥狀；癌細胞還可轉(zhuǎn)移到全身各處生長繁殖，導致人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發(fā)熱以及嚴重的臟器功能受損等等。找到能治療或輔助治療的藥物已是科學家的當務(wù)之急。目前使用的抗癌藥多是化學合成藥物，在治療腫瘤的過程中，往往會出現(xiàn)患者難以忍受的不良反應(yīng)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生物強化細胞營養(yǎng)素在制備抗胃癌細胞功能食品中的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下:
[0007]生物強化細胞營養(yǎng)素在制備抗胃癌細胞功能食品中的應(yīng)用。
[0008]生物強化細胞營養(yǎng)素是用下述方法制成:
[0009](一 )母液的制備:
[0010](I)選取谷類為原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機中加入原料總重量30%?50%的水，啟動紙漿蒸煮機，旋轉(zhuǎn)浸泡30?60分鐘；
[0011](2)停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開冷氣機，通入冷氣，旋轉(zhuǎn)保持-4°C以下60?90分鐘，停止旋轉(zhuǎn)；
[0012](3)關(guān)閉冷氣機，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫；
[0013](4)關(guān)閉空壓機，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持100°C，30?60分鐘，關(guān)閉蒸汽；
[0014](5)停止旋轉(zhuǎn)，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至30°C?50°C ；
[0015](6)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量I %?3%的營養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)30?60分鐘；所述營養(yǎng)配料為重量比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍莓果和肉桂；
[0016](7)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量0.2 0Z0?0.4%的復合酶，旋轉(zhuǎn)I?2小時；
[0017](8)加入原料總重量0.2%?1%食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵桶，在28?35°C發(fā)酵8?15天，即得母液備用；
[0018](二)膠料的制備:
[0019](I)另取谷類為第二原料，用18?30°C水浸泡8?16小時；浙水，置于容器內(nèi)；
[0020](2)向容器內(nèi)加入第二原料重量I?2倍的水，煮I?3小時；
[0021](3)過濾，去除水，獲得膠料備用；
[0022](三)成品的制備:
[0023](I)將母液與膠料按重量比為1:1?2的比例，混合，分離除渣，得混合液；
[0024](2)加入混合液重量I %?2%的低聚異麥芽糖，混合液重量0.2%?0.7%的黃原膠，混合液重量O?I %的阿膠，均質(zhì)；灌裝滅菌，得生物強化細胞營養(yǎng)素。
[0025]原料優(yōu)選為黑糯米、黃糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五種。
[0026]述第二原料優(yōu)選為黑糯米、黃糯米和白糯米至少一種。
[0027]復合酶優(yōu)選為質(zhì)量比為3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶。
[0028]食用菌種優(yōu)選為面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和保加利亞乳桿菌至少兩種。
[0029]本發(fā)明的優(yōu)點:
[0030]實驗證明，生物強化細胞營養(yǎng)素使胃癌細胞存活率下降，促進胃癌細胞的凋亡。證明生物強化細胞營養(yǎng)素對人胃癌細胞有一定的抑制作用。并且隨著濃度的增大，抑制作用增強。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0031]圖1為生物強化細胞營養(yǎng)素對人胃癌細胞系(BGC-823)存活率的影響。
[0032]圖2為生物強化細胞營養(yǎng)素對人胃癌細胞系(SGC-7901)存活率的影響。
[0033]圖3為生物強化細胞營養(yǎng)素誘導人胃癌細胞系(BGC-823)細胞凋亡。
[0034]圖4為生物強化細胞營養(yǎng)素誘導人胃癌細胞系(SGC-7901)細胞凋亡。
【具體實施方式】
[0035]本發(fā)明的實施例是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好的理解本發(fā)明，但并不對本發(fā)明作任何限制。
[0036]本發(fā)明所采用的各個食用酵母菌均購自安琪酵母股份有限公司(但并不對本發(fā)明作任何限制，其它公司生產(chǎn)的功能相同的食用酵母菌也可以用于本發(fā)明)；各個乳桿菌購自丹麥漢森公司(但并不對本發(fā)明作任何限制，其它公司生產(chǎn)的功能相同的乳桿菌也可以用于本發(fā)明)。
[0037]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0038]實施例1
[0039]生物強化細胞營養(yǎng)素用下述方法制成:
[0040](一 )母液的制備:
[0041](I)選取重量比例為1:1:1:2:2的黑糯米、黃糯米、紫米、黍米和大米五種谷物為原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機中加入原料總重量30%的水，啟動紙漿蒸煮機，旋轉(zhuǎn)浸泡30分鐘；浸泡的目的是使原料充分吸收水份；
[0042](2)停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開冷氣機，通入冷氣，旋轉(zhuǎn)保持_4°C以下60分鐘，停止旋轉(zhuǎn)；放冷的目的是使吸水后的原料膨脹；
[0043](3)關(guān)閉冷氣機，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫；提前預熱的目的是為了下一步通蒸汽之前的溫度升高而節(jié)省能源；
[0044](4)關(guān)閉空壓機，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持100°C，60分鐘，關(guān)閉蒸汽；其目的是熟化并消毒；
[0045](5)停止旋轉(zhuǎn)，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至30°C ;其目的為后續(xù)加入營養(yǎng)配料、復合酶及菌種提供合適的溫度；
[0046](6)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量2%的營養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)30分鐘；所述營養(yǎng)配料為重量比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍莓果和肉桂；
[0047](7)停止旋轉(zhuǎn),加入原料總重量0.2%的復合酶,旋轉(zhuǎn)I小時；復合酶是質(zhì)量比為3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶；
[0048](8)加入原料總重量0.2%食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵桶，在28°C發(fā)酵15天，即得母液備用；食用菌種為重量比為3:1的面包酵母菌和保加利亞乳桿菌；
[0049]( 二)膠料的制備:
[0050](I)另取重量比為1:1的黃糯米和白糯米為第二原料，用18°C水浸泡16小時；浙水，將浙水后的米置于容器內(nèi)；
[0051](2)向容器內(nèi)加入第二原料重量I倍的水，煮I小時；
[0052](3)過濾，去除水，獲得膠料備用；
[0053](三)成品的制備:
[0054](I)將母液與膠料按重量比為1:1的比例，混合，分離除渣，得混合液；
[0055](2)加入混合液重量I %的低聚異麥芽糖，混合液重量0.2%的黃原膠,均質(zhì)；灌裝滅菌，得生物強化細胞營養(yǎng)素。
[0056]本實施例中的旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速均為15轉(zhuǎn)/分鐘。
[0057]實施例2
[0058]生物強化細胞營養(yǎng)素用下述方法制成:
[0059](一 )母液的制備:
[0060](I)選取重量比為1:1:2:1:1:2:1的黑糯米、紫米、黍米、白糯米、粟米、高粱米和大米七種谷物為原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機中加入原料總重量40%的水，啟動紙漿蒸煮機，旋轉(zhuǎn)浸泡40分鐘；
[0061](2)停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開冷氣機，通入冷氣，旋轉(zhuǎn)保持_4°C以下80分鐘，停止旋轉(zhuǎn)；
[0062](3)關(guān)閉冷氣機，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫；
[0063](4)關(guān)閉空壓機，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持100°C，50分鐘，關(guān)閉蒸汽；
[0064](5)停止旋轉(zhuǎn)，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至40°C ；
[0065](6)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量I %的營養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)60分鐘；所述營養(yǎng)配料為重量比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍莓果和肉桂；
[0066](7)停止旋轉(zhuǎn),加入原料總重量0.3%的復合酶,旋轉(zhuǎn)1.5小時,復合酶是質(zhì)量比為3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶；
[0067](8)加入原料總重量0.5%食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵桶，在32°C發(fā)酵12天，即得母液備用；食用菌種為重量比為2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和植物乳桿菌；
[0068]( 二 )膠料的制備:
[0069](I)另取重量比為1:1的黃糯米和白糯米為第二原料，用30°C水浸泡8小時；浙水，置于容器內(nèi)；
[0070](2)向容器內(nèi)加入第二原料重量1.5倍的水，煮2小時；
[0071](3)過濾，去除水，獲得膠料備用；
[0072](三)成品的制備:
[0073](I)將母液與膠料按重量比為1:1.5的比例，混合，分離除渣，得混合液；
[0074](2)加入混合液重量2%的低聚異麥芽糖,混合液重量0.4%的黃原膠,混合液重量0.1 %的阿膠，均質(zhì)；灌裝滅菌，得生物強化細胞營養(yǎng)素。
[0075]本實施例中的旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速均為20轉(zhuǎn)/分鐘。
[0076]實施例3
[0077]生物強化細胞營養(yǎng)素用下述方法制成:
[0078](一 )母液的制備:
[0079](I)選取重量比為1:1:1:2:1:0.5:1:1:0.5的黑糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、
香米、高粱米、大米和薏米九種谷物為原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機中加入原料總重量50%的水,啟動紙楽:蒸煮機,旋轉(zhuǎn)浸泡60分鐘；
[0080](2)停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開冷氣機，通入冷氣，旋轉(zhuǎn)保持_4°C以下90分鐘，停止旋轉(zhuǎn)；
[0081](3)關(guān)閉冷氣機，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫；
[0082](4)關(guān)閉空壓機，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持100°C，30分鐘，關(guān)閉蒸汽；
[0083](5)停止旋轉(zhuǎn)，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至50°C ；
[0084](6)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量3%的營養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)30分鐘；營養(yǎng)配料為重量比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍莓果和肉桂；
[0085](7)停止旋轉(zhuǎn),加入原料總重量0.4%的復合酶,旋轉(zhuǎn)2小時，復合酶是質(zhì)量比為3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶；
[0086](8)加入原料總重量I %食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵桶，在35°C發(fā)酵8天，即得母液備用；食用菌種為重量比為2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和嗜酸乳桿囷；
[0087]( 二)膠料的制備:
[0088](I)另取黑糯米為第二原料，用25°C水浸泡10小時；浙水，置于容器內(nèi)；
[0089](2)向容器內(nèi)加入第二原料重量2倍的水，煮3小時；
[0090](3)過濾，去除水，獲得膠料備用；
[0091](三)成品的制備:
[0092](I)將母液與膠料按重量比為1:2的比例，混合，分離除渣，得混合液；
[0093](2)加入混合液重量2%的低聚異麥芽糖,混合液重量0.7%的黃原膠,混合液重量I %的阿膠，均質(zhì)；灌裝滅菌，得生物強化細胞營養(yǎng)素。
[0094]各實施例中的轉(zhuǎn)速為15-20轉(zhuǎn)/分鐘，其目的是例物料混勻，但對轉(zhuǎn)速并不限制，達到混勻目的的其它轉(zhuǎn)速也可以使用。
[0095]在實施例1 一 3的基礎(chǔ)上再加以微波、氣流干燥、噴霧等烘干技術(shù)，可將本發(fā)明制成粉體狀食品，減輕了液體灌裝的重量，方便外出攜帶，食用時即沖即食；
[0096]在實施例1 一 3的基礎(chǔ)上再在上述成品工序中將黃原膠的加入比例提高，加入天然果膠，也可制成類似果凍狀食品，或添加到巧克力、麥乳精、餅干、面包等食品中食用；也可精制成口服液服用。又可制成固體羹狀食品，此外，本發(fā)明還可制成餅干、糖果、點心等食品，方便各類群體食用。
[0097]實施例4
[0098]用MTT實驗檢測實施例3制備的生物強化細胞營養(yǎng)素對人胃癌細胞系(BGC-823/SGC-7901)的存活率的影響(細胞毒性實驗):
[0099](I)用含有10%的胰蛋白酶消化單層細胞，將細胞收集到含10%血清的DMEM培養(yǎng)液中。
[0100](2)離心(1500RPM，10分鐘)，用培養(yǎng)液重懸細胞，計數(shù)。將細胞均勻鋪至96孔板，每孔加入200 μ I (7000細胞)細胞懸液。
[0101](3)將培養(yǎng)板放至37°C二氧化碳培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24小時，分別加入用DMEM培養(yǎng)液配制的不同濃度的生物強化細胞營養(yǎng)素，孵育不同時間后檢測細胞存活數(shù)。結(jié)果見圖1和圖2。
[0102]圖1中，30%的生物強化細胞營養(yǎng)素作用人胃癌細胞系(BGC_823) 12和24小時后，細胞的存活率為72.33±4.04%和58.36±0.85%。
[0103]圖2中，30%的生物強化細胞營養(yǎng)素作用人胃癌細胞系(SGC_7901) 12和24小時后，細胞的存活率為60.49±0.32和57.44±0.29%.
[0104]實施例5
[0105]用流式細胞術(shù)檢測實施例3制備的生物強化細胞營養(yǎng)素對人胃癌細胞系(BGC-823/SGC-7901)凋亡情況的影響。
[0106](I)將細胞以2 X 14分別加入到六孔板中，放于二氧化碳培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)24小時，然后分別加入用DMEM培養(yǎng)液配制的不同濃度的生物強化細胞營養(yǎng)素，孵育12、24和36小時；
[0107](2)取出六孔板，用含有10%的胰蛋白酶消化單層細胞，離心得到細胞沉淀，每管分別用50ul緩沖液(含0.5ul的FITC-ant1-AnnexinV抗體和0.5ul的PI)樣品處理，并避光4°C放置30分鐘后，用PBS洗滌，加0.5mlPBS懸浮細胞。
[0108](3)準備好樣品后，進行流式細胞檢測。結(jié)果見圖3和圖4。
[0109]圖3中，在30%生物強化細胞營養(yǎng)素作用24h和36h后，人胃癌細胞(BGC-823)的早期凋亡和晚期凋亡的百分比別為11.27%和24.05%。
[0110]圖4中，在30%生物強化細胞營養(yǎng)素作用24h和36h后，人胃癌細胞(SGC-7901)的早期凋亡和晚期凋亡的百分比分別為17.33%和27.96%。
[0111]實驗證明，本發(fā)明的生物強化細胞營養(yǎng)素使胃癌細胞存活率下降，促進胃癌細胞的凋亡。證明生物強化細胞營養(yǎng)素對人胃癌細胞有一定的抑制作用。并且隨作用時間的增強、濃度的增大，抑制作用增強。
[0112]實驗證明，實施例1、實施例2制備的生物強化細胞營養(yǎng)素對使胃癌細胞存活率下降，促進胃癌細胞的凋亡的作用與實施例3的作用相似。
[0113]BGC-823和SGC-7901細胞系為人胃癌細胞系，來源為ATCC細胞庫，為現(xiàn)在實驗室常用的胃癌實驗細胞，本細胞經(jīng)過檢測，不含有細菌、真菌、病毒(HIV、HBV, HCV)、支原體。
【權(quán)利要求】
1.生物強化細胞營養(yǎng)素在制備抗胃癌細胞功能食品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所述生物強化細胞營養(yǎng)素是用下述方法制成: (一)母液的制備: (1)選取谷類為原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機中加入原料總重量30%?50%的水，啟動紙漿蒸煮機，旋轉(zhuǎn)浸泡30?60分鐘； (2)停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開冷氣機，通入冷氣，旋轉(zhuǎn)保持-4°C以下60?90分鐘，停止旋轉(zhuǎn)； (3)關(guān)閉冷氣機，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫； (4)關(guān)閉空壓機，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持100°C，30?60分鐘，關(guān)閉蒸汽； (5)停止旋轉(zhuǎn)，打開空壓機，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至30°C?50°C； (6)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量1%?3%的營養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)30?60分鐘；所述營養(yǎng)配料為重量比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍莓果和肉桂； (7)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量0.2%?0.4%的復合酶，旋轉(zhuǎn)I?2小時； (8)加入原料總重量0.2%?1%食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵桶，在28?35°C發(fā)酵8?15天，即得母液備用； (二)膠料的制備: (1)另取谷類為第二原料，用18?30°C水浸泡8?16小時；浙水，置于容器內(nèi)； (2)向容器內(nèi)加入第二原料重量I?2倍的水，煮I?3小時； (3)過濾，去除水，獲得膠料備用； (三)成品的制備: (1)將母液與膠料按重量比為1:1?2的比例，混合，分離除渣，得混合液； (2)加入混合液重量1%?2%的低聚異麥芽糖，混合液重量0.2%?0.7%的黃原膠，混合液重量O?I %的阿膠，均質(zhì)；灌裝滅菌，得生物強化細胞營養(yǎng)素。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述原料為黑糯米、黃糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五種。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述第二原料為黑糯米、黃糯米和白糯米至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述復合酶是質(zhì)量比為3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述食用菌種為面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和保加利亞乳桿菌至少兩種。
【文檔編號】A23L1/30GK104172185SQ201410409456
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年8月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月19日
【發(fā)明者】董福生, 施維, 李全順, 譚盈盈, 蔣夢影 申請人:天津市泉又今生物科技有限公司