Stc2基因在作為結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移分子標(biāo)記中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了STC2基因在作為結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移分子標(biāo)記中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種鑒定或輔助鑒定待測(cè)結(jié)腸癌患者是否發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的試劑盒，包括用于檢測(cè)STC2基因表達(dá)量的試劑和記載如下判斷標(biāo)準(zhǔn)的載體：若所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量，且二者存在顯著差異，則待測(cè)結(jié)腸癌患者發(fā)生或候選發(fā)生肝轉(zhuǎn)移；本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明STC2在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移組病人原發(fā)灶中的表達(dá)明顯高于非肝轉(zhuǎn)移組，后期的體外功能學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示STC2可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤遷移侵襲能力進(jìn)而參與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的過(guò)程，這一發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步尋找結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移分子標(biāo)志物提供了線索。
【專利說(shuō)明】STC2基因在作為結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移分子標(biāo)記中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種STC2基因在作為結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移分子 標(biāo)記中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 結(jié)直腸癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，其發(fā)生率僅次于胃癌和食道癌。影響結(jié)直腸 癌患者預(yù)后的最重要因素就是癌轉(zhuǎn)移，其中又以肝臟轉(zhuǎn)移最為多見(jiàn)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，結(jié)直腸癌患者 在確診時(shí)有20 % - 40 %的病人已發(fā)生肝轉(zhuǎn)移，異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生率更高達(dá)50 %。不經(jīng)治 療的肝轉(zhuǎn)移癌患者平均生存期為16-18月，而廣泛轉(zhuǎn)移者生存期僅為3-5個(gè)月。絕大多數(shù) 伴肝轉(zhuǎn)移的患者往往因?yàn)楹笃诔霈F(xiàn)肝外轉(zhuǎn)移病灶、肝臟腫塊累及多支大血管或預(yù)留功能肝 不足等因素而無(wú)法獲得根治性切除。因此，若能早期發(fā)現(xiàn)肝臟轉(zhuǎn)移，早診斷，早治療，將會(huì)大 大提高結(jié)直腸癌患者的生存率。在結(jié)直腸癌腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的標(biāo)志物研究方面，雖然人們已 經(jīng)進(jìn)行了大量的研究，但至今仍未找到一種敏感度、特異度均足夠高的，適合于早期診斷的 標(biāo)志物。
[0003] 因此，從分子水平探索結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的機(jī)制，尋找新的、理想的結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移 相關(guān)的分子標(biāo)志，早期發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移，制定個(gè)體化的治療方案，是進(jìn)一步提高結(jié)直腸 癌患者生存率的有效途徑。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種鑒定或輔助鑒定待測(cè)結(jié)腸癌患者是否發(fā)生肝轉(zhuǎn)移 的試劑盒。
[0005] 本發(fā)明提供的試劑盒，包括用于檢測(cè)STC2基因表達(dá)量的試劑和記載如下判斷標(biāo) 準(zhǔn)的載體：
[0006] 若所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患 者癌組織中STC2基因表達(dá)量，且二者存在顯著差異，則待測(cè)結(jié)腸癌患者發(fā)生或候選發(fā)生肝 轉(zhuǎn)移；
[0007] 若所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患 者癌組織中STC2基因表達(dá)量且二者無(wú)顯著差異或者所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基 因表達(dá)量不高于于確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量，則待測(cè)結(jié)腸癌 患者未發(fā)生或候選未發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。
[0008] 上述試劑盒中，所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于確診為非肝 轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量，且二者存在顯著差異體現(xiàn)在待測(cè)結(jié)腸癌患者 癌組織中STC2基因表達(dá)量/確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量得到 的差異倍數(shù)大于2 ;
[0009] 所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者 癌組織中STC2基因表達(dá)量且二者無(wú)顯著差異或者所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因 表達(dá)量不高于于確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量體現(xiàn)在待測(cè)結(jié)腸癌 患者癌組織中STC2基因表達(dá)量/確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量得 到的差異倍數(shù)小于等于2。
[0010] 所述顯著差異為Ρ〈〇· 05
[0011] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種鑒定或輔助鑒定待測(cè)結(jié)腸癌患者是否發(fā)生肝轉(zhuǎn) 移的試劑盒。
[0012] 本發(fā)明提供的試劑盒，包括用于檢測(cè)STC2基因表達(dá)量的試劑和記載如下判斷標(biāo) 準(zhǔn)的載體：
[0013] 若在某檢測(cè)時(shí)刻所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于該結(jié)腸癌患 者確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝臟中STC2基因表達(dá)量，且二者存在顯著差異，則待測(cè)結(jié)腸癌患者 發(fā)生或候選發(fā)生肝轉(zhuǎn)移；
[0014] 若在某檢測(cè)時(shí)刻所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于該結(jié)腸癌患 者確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝臟中STC2基因表達(dá)量，且二者無(wú)顯著差異，或在某檢測(cè)時(shí)刻所述 待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量不高于該結(jié)腸癌患者確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝臟 中STC2基因表達(dá)量，則待測(cè)結(jié)腸癌患者未發(fā)生或候選未發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。
[0015] 上述試劑盒中，
[0016] 所述在某檢測(cè)時(shí)刻所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于該結(jié)腸癌 患者確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝臟中STC2基因表達(dá)量，且二者存在顯著差異體現(xiàn)在某檢測(cè)時(shí) 刻所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量/該結(jié)腸癌患者確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝 臟中STC2基因表達(dá)量得到的差異倍數(shù)大于2 ;
[0017] 所述在某檢測(cè)時(shí)刻所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于該結(jié)腸癌 患者確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝臟中STC2基因表達(dá)量，且二者無(wú)顯著差異，或在某檢測(cè)時(shí)刻所 述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量不高于該結(jié)腸癌患者確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝 臟中STC2基因表達(dá)量體現(xiàn)在某檢測(cè)時(shí)刻所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量/ 該結(jié)腸癌患者確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝臟中STC2基因表達(dá)量得到的差異倍數(shù)小于等于2。
[0018] 上述的試劑盒中，所述用于檢測(cè)STC2基因表達(dá)量的試劑包括用于擴(kuò)增STC2基因 的引物對(duì)；所述STC2基因表達(dá)量為STC2相對(duì)表達(dá)量，為STC2基因表達(dá)量/ β-actin表達(dá) 量；
[0019] 所述用于擴(kuò)增STC2基因的引物對(duì)由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列 表中序列2所示的單鏈DNA分子組成。
[0020] 上述的試劑盒中，所述用于檢測(cè)STC2基因表達(dá)量的試劑還包括用于擴(kuò)增內(nèi)參基 因的引物對(duì)，所述內(nèi)參基因?yàn)棣?actin，所述用于擴(kuò)增β-actin基因的引物對(duì)由序列表中 序列3所不的單鏈DNA分子和序列表中序列4所不的單鏈DNA分子組成。
[0021] 上述的試劑盒中，所述用于檢測(cè)STC2基因表達(dá)量的試劑也可以為表達(dá)譜芯片；具 體為 Affymetrix GeneChip Human Genome U133Plus2. OArray。
[0022] 本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，STC2在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移組病人原發(fā)灶中的表達(dá)明顯高于非肝 轉(zhuǎn)移組，后期的體外功能學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示STC2可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤遷移侵襲能力進(jìn)而參與 結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的過(guò)程，這一發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步尋找結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移分子標(biāo)志物提供了線索。
【專利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1為變性瓊脂糖凝膠電泳顯示18S和28S電泳條帶
[0024] 圖2為差異基因火山圖
[0025] 圖3為差異基因聚類分析熱圖
[0026] 圖4為Microarray與qRT-PCR差異基因結(jié)果對(duì)比圖
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0028] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0029] 標(biāo)本收集獲得武漢大學(xué)中南醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。
[0030] 組織標(biāo)本來(lái)源：標(biāo)本來(lái)自2012年06月一2012年11月期間就診于武漢大學(xué)中南 醫(yī)院腹部腫瘤科的結(jié)直腸癌患者6例，其中伴肝轉(zhuǎn)移者3例，不伴肝轉(zhuǎn)移者3例，納入本研 究的所有病例均有明確的術(shù)后病理診斷。其中結(jié)直腸癌伴肝轉(zhuǎn)移的診斷遵循中華醫(yī)學(xué)會(huì) 外科學(xué)分會(huì)胃腸外科學(xué)組和結(jié)直腸肛門外科學(xué)組、中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)大腸癌專業(yè)委員會(huì)于2010 年發(fā)布的結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移診斷和綜合治療指南（V2010)中的標(biāo)準(zhǔn)。收集的信息包括患者住 院號(hào)、姓名、性別、年齡、出生地、聯(lián)系地址、聯(lián)系電話、腫瘤家族史、腸鏡結(jié)果、重要的影像學(xué) 檢查資料、手術(shù)記錄、術(shù)后病理診斷結(jié)果。初次記錄資料不完整者，后期借助醫(yī)院電子病歷 系統(tǒng)和病案室存檔資料補(bǔ)充完善。
[0031] 術(shù)中標(biāo)本離體后，迅速留取結(jié)直腸癌癌組織。放入事先準(zhǔn)備好的冷凍保存管中，做 好標(biāo)記，并于5min內(nèi)置入液氮罐中，以避免RNA降解。病例選取條件為：（1)術(shù)后均經(jīng)病檢 確診；（2)術(shù)前未進(jìn)行過(guò)放療、化療或其他抗腫瘤治療。
[0032] 實(shí)施例1、分子標(biāo)記基因 STC2的發(fā)現(xiàn)
[0033] 一、表達(dá)譜芯片篩選結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移差異表達(dá)基因
[0034] 1、提取 RNA
[0035] 結(jié)直腸癌病例6例，其中結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移組男性2例，女性1例，中位年齡54. 67 歲；結(jié)直腸癌非肝轉(zhuǎn)移組男性2例，女性1例，中位年齡68. 67歲。如下表1，樣本名稱由患 者住院號(hào)表示，中間隱去兩位數(shù)字。
[0036] 表1為結(jié)直腸癌病例
[0037]
【權(quán)利要求】
1. 一種鑒定或輔助鑒定待測(cè)結(jié)腸癌患者是否發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的試劑盒，包括用于檢測(cè) STC2基因表達(dá)量的試劑和記載如下判斷標(biāo)準(zhǔn)的載體： 若所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者 癌組織中STC2基因表達(dá)量，且二者存在顯著差異，則待測(cè)結(jié)腸癌患者發(fā)生或候選發(fā)生肝轉(zhuǎn) 移； 若所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者癌 組織中STC2基因表達(dá)量且二者無(wú)顯著差異或者所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表 達(dá)量不高于確診為非肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量，則待測(cè)結(jié)腸癌患者未 發(fā)生或候選未發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。
2. -種鑒定或輔助鑒定待測(cè)結(jié)腸癌患者是否發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的試劑盒，包括用于檢測(cè) STC2基因表達(dá)量的試劑和記載如下判斷標(biāo)準(zhǔn)的載體： 若在某檢測(cè)時(shí)刻所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于該結(jié)腸癌患者確 診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝臟中STC2基因表達(dá)量，且二者存在顯著差異，則待測(cè)結(jié)腸癌患者發(fā)生 或候選發(fā)生肝轉(zhuǎn)移； 若在某檢測(cè)時(shí)刻所述待測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量高于該結(jié)腸癌患者 確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝臟中STC2基因表達(dá)量，且二者無(wú)顯著差異，或在某檢測(cè)時(shí)刻所述待 測(cè)結(jié)腸癌患者癌組織中STC2基因表達(dá)量不高于該結(jié)腸癌患者確診為非肝轉(zhuǎn)移時(shí)期肝臟中 STC2基因表達(dá)量，則待測(cè)結(jié)腸癌患者未發(fā)生或候選未發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于： 所述用于檢測(cè)STC2基因表達(dá)量的試劑包括用于擴(kuò)增STC2基因的引物對(duì)； 所述用于擴(kuò)增STC2基因的引物對(duì)由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列2所示的單鏈DNA分子組成。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于： 所述用于檢測(cè)STC2基因表達(dá)量的試劑還包括用于擴(kuò)增內(nèi)參基因的引物對(duì)，所述內(nèi)參 基因?yàn)棣?actin，所述用于擴(kuò)增β-actin基因的引物對(duì)由序列表中序列3所示的單鏈DNA 分子和序列表中序列4所示的單鏈DNA分子組成。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述用于檢測(cè)STC2基因表達(dá)量的 試劑為表達(dá)譜芯片。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104087670SQ201410329446
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月10日
【發(fā)明者】謝偉, 楊倩, 馮茂輝, 馬翔, 陳雙倩, 王國(guó)洲, 李華馳 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)