一種復(fù)合根瘤菌劑及其制備和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種復(fù)合根瘤菌劑及其制備和應(yīng)用。本發(fā)明以草炭土為載體，鉬酸銨、花生秧粉、γ-聚谷氨酸、蔗糖、碳酸鈣、有機硅為增效助劑，將花生慢生根瘤菌BASWS和蘇云金芽孢桿菌BtR05發(fā)酵液制成粉劑，有效菌數(shù)為花生慢生根瘤菌BASWS1～4億/g，蘇云金芽孢桿菌BtR056億/g，本制劑既能高效防治蠐螬，又能顯著提高花生產(chǎn)量。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物菌劑制備【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種復(fù)合根瘤菌劑及其制備和應(yīng) 用。 一種復(fù)合根瘤菌劑及其制備和應(yīng)用
【背景技術(shù)】
[0002] 花生在全國各地均有種植，主要分布于遼寧、山東、河北、河南、江蘇、福建、廣東、 廣西、四川等?。▍^(qū))。其中以山東省種植面積最大，產(chǎn)量最多。
[0003] 近年來，隨著花生播種面積的不斷擴大，地下害蟲的危害也越來越重。其中，蠐螬 是目前危害花生最大的害蟲。據(jù)調(diào)查，蠐螬每年給花生帶來的產(chǎn)量損失在20%以上，嚴重的 甚至絕產(chǎn)(周帥，蘇瑞峰，等.花生地下害蟲一路螬的綜合防治技術(shù)[J].種業(yè)導(dǎo)刊，2009.)。 蘇云金芽抱桿菌(菌種保藏號CGMCCN0. 2823)，是山東省 科學(xué)院中日友好生物技術(shù)研究中心實驗室保藏菌株，該菌對蠐螬具有良好的防治效果。根 瘤菌（5ra辦rAizoAia? aracAi^OBASWS (菌種保藏號CGMCCN0. 9351)分離于花生根瘤，該 菌對花生具有很好的增產(chǎn)效果。
[0004] 眾所周知，根瘤菌雖有固氮促生作用，卻無防治作物蟲害的能力，制約了根瘤菌 的推廣應(yīng)用。隨著劑型技術(shù)研究的不斷成熟，復(fù)合根瘤菌劑已成為研究熱點，如澳大利亞 Becker Underwood公司將根瘤菌菌劑中加入枯草芽孢桿菌制成的生 物殺菌劑，對豆科作物增產(chǎn)5?15%，同時還能顯著防治部分土傳病害。Alosca公司在根瘤 菌劑中添加了固氮細菌，也取得明顯的效果。本發(fā)明將花生慢生根瘤菌BASWS和防治蠐螬 的蘇云金芽孢桿菌BtR05進行配比研究，確定其在肥效與防治蠐螬的最佳混合比例，并將 其制成便于使用的混合粉劑，達到既能有效促進花生的生長，又能高效防治蠐螬，提高花生 產(chǎn)量的效果。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明的目的就是針對上述存在的缺陷而提供一種復(fù)合根瘤菌劑及其制備和應(yīng) 用。
[0006] 本發(fā)明的一種復(fù)合根瘤菌劑及其制備和應(yīng)用技術(shù)方案為，該復(fù)合根瘤菌劑，包括 花生慢生根瘤菌腫aracAis) BASWS，其在中國微生物菌種保藏管理委員會 普通微生物中心保藏，其保藏編號是：CGMCCN0. 9351，保藏日期是2014年6月16日和蘇云 金芽孢桿菌(ifeciBiAs BtR05,其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通 微生物中心保藏，其保藏編號是CGMCCN0. 2823,保藏日期是2008年12月23日。
[0007] 目前該花生慢生根瘤菌在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏， 地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編：100101，其保藏編號是：CGMCCN0. 9351，菌 種的拉丁文名稱是aracAis，參據(jù)的微生物(株）：BASWS，保藏日期是2014 年6月16日。
[0008] 本發(fā)明所述的花生慢生根瘤菌菌株特征：花生慢生根瘤菌，菌落圓形不透明，前期 為乳白色，后期為弱粉色。
[0009] 花生慢生根瘤菌BASWS和蘇云金芽孢桿菌BtR05在該復(fù)合根瘤菌劑中的有效成分 含量的比例為1:6?2:3。
[0010] 優(yōu)選的，花生慢生根瘤菌BASWS和蘇云金芽孢桿菌BtR05在該復(fù)合根瘤菌劑中的 有效成分含量的比例為2:3。
[0011] 花生慢生根瘤菌BASWS在該復(fù)合根瘤菌劑中的有效菌數(shù)為1?4億/g。
[0012] 蘇云金芽孢桿菌BtR05在該復(fù)合根瘤菌劑中的有效菌數(shù)為6億/g。
[0013] 所述的一種復(fù)合根瘤菌劑，包括按重量比的以下成分： 草炭土 75. 7 ?87. 62% 鑰酸銨0. 5?1. 0% 花生秧粉0. 5?2. 0% Y -聚谷氨酸〇· 05?0· 5% 蔗糖0· 2?1. 0% 碳酸鈣〇. 1?〇. 5% 有機硅0. 03?0. 3% 花生慢生根瘤菌BASWS 1. 0?4. 0% 蘇云金芽孢桿菌BtR05 10. 0?15. 0%。
[0014] 所述的一種復(fù)合根瘤菌劑的制備方法，花生慢生根瘤菌BASWS培養(yǎng)基為YMA培養(yǎng) 基，包括以下成分：蔗糖 10 g，酵母粉 1 g，MgS04 · 7H20 0· 2 g，Κ2ΗΡ04 0· 5 g，NaCl 0· 1 g， 〇&(：120.05 8,0.5%鑰酸鈉溶液4.01111，0.5%硼酸溶液4.01111，!120 1 000 11^，口!16.8?7.0。
[0015] BtR05斜面及搖瓶培養(yǎng)基為LB ;BtR05發(fā)酵培養(yǎng)基包括按重量比的以下成分：2% 玉米粉,6% 豆粉，1% 蔗糖，0· 5%(NH4)2S04,0· 2% Κ2ΗΡ04、0· 2% ΚΗ2Ρ04,0· 03% MgS04--7H20， pH7. 0-7. 5。
[0016] 將發(fā)酵好的菌液用無菌注射器注入裝有草炭土的塑料袋中，按比例注入花生慢生 根瘤菌BASWS和蘇云金芽孢桿菌BtR05,添加鑰酸銨，花生秧粉，聚谷氨酸，蔗糖，碳酸 鈣，有機硅。
[0017] 所述的一種復(fù)合根瘤菌劑在防治花生地下害蟲蠐螬和花生增產(chǎn)上的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明以草炭土為載體，鑰酸銨、花生秧粉、聚谷氨酸、 蔗糖、碳酸鈣、有機硅為增效助劑，將花生慢生根瘤菌BASWS和蘇云金芽孢桿菌BtR05發(fā)酵 液制成粉劑，有效菌數(shù)為花生慢生根瘤菌BASWS1?4億/g，蘇云金芽孢桿菌BtR05 6億/ g，本發(fā)明的花生慢生根瘤菌BASWS和蘇云金芽孢桿菌BtR05兩種菌種按比例混合后有協(xié)同 作用，制備成的本發(fā)明制劑既能高效防治蠐螬，又能顯著提高花生產(chǎn)量。
[0019]
【具體實施方式】： 為了更好地理解本發(fā)明，下面用具體實例來詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但是本發(fā)明 并不局限于此。
[0020] 本發(fā)明的復(fù)合根瘤菌劑，包括花生慢生根瘤菌腫aracAis) BASWS， 其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏編號是：CGMCCN0. 9351， 保藏日期是2014年6月16日和蘇云金芽孢桿菌BtR05,其在 中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏編號是CGMCCNO. 2823,保藏 日期是2008年12月23日。
[0021] 目前該花生慢生根瘤菌在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏， 地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編：100101，其保藏編號是：CGMCCN0. 9351，菌 種的拉丁文名稱是aracAis，參據(jù)的微生物(株）：BASWS，保藏日期是2014 年6月16日。
[0022] 本發(fā)明所述的花生慢生根瘤菌菌株特征：花生慢生根瘤菌，菌落圓形不透明，前期 為乳白色，后期為弱粉色。
[0023] 實施例1 花生慢生根瘤菌BASWS和蘇云金芽孢桿菌BtR05共存共生配比的研究 (1)花生慢生根瘤菌BASWS和蘇云金芽孢桿菌BtR05的培養(yǎng) 花生慢生根瘤菌BASWS培養(yǎng)基為YMA培養(yǎng)基，配方為蔗糖10 g，酵母粉1 g，MgS04*7H20 0.28，1(2冊04 0.5 8，恥(：10.18,03(：120.05 8，鑰酸鈉（0.5%溶液）4.01111硼酸（0.5%溶 液）4. 0ml，H20 1 000 mL，pH 6. 8 ?7. 0。
[0024] BtR05斜面及搖瓶培養(yǎng)基為LB。發(fā)酵培養(yǎng)基為：2%玉米粉，6%豆粉，1%蔗糖， 0· 5%(NH4)2S04,0. 2% Κ2ΗΡ04,0· 2% ΚΗ2Ρ04,0· 03% MgS04--7H20, ρΗ7· 0-7. 5。
[0025] (2)花生慢生根瘤菌BASWS和蘇云金芽孢桿菌BtR05對蠐螬的毒力測定 采用噴霧法處理蠐螬3齡幼蟲。
[0026] 噴霧法：用手持噴霧器分別將不同濃度的蘇云金芽孢桿菌BtR05和花生慢生根瘤 菌BASWS噴遍蠐螬蟲體，讓其自由爬行片刻后，移入罐頭瓶中裝土飼養(yǎng)，以清水為對照。每 瓶飼養(yǎng)一頭蠐螬，置于養(yǎng)蟲室內(nèi)，室溫28°C，適當保濕。每處理30頭蠐螬，3次重復(fù)。處理 后每天觀測一次，記錄死亡蟲數(shù)，計算死亡率和校正死亡率。蘇云金芽孢桿菌BtR05和花生 慢生根瘤菌BASWS對蠐螬的毒力測定結(jié)果見表1，2。
[0027] 表1 BtR05發(fā)酵液對蠐螬3齡幼蟲的室內(nèi)毒力測定
【權(quán)利要求】
1. 一種復(fù)合根瘤菌劑，其特征在于，包括花生慢生根瘤菌(份'<3辦?ζοΜ-- aracAis) BASWS，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏 編號是CGMCCN0. 9351，保藏日期是2014年6月16日；和蘇云金芽孢桿菌 BtR05,其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏 編號是CGMCCN0. 2823,保藏日期是2008年12月23日。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合根瘤菌劑，其特征在于，花生慢生根瘤菌BASWS和蘇 云金芽孢桿菌BtR05在該復(fù)合根瘤菌劑中的有效成分含量的比例為1:6?2:3。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合根瘤菌劑，其特征在于，花生慢生根瘤菌BASWS和蘇 云金芽孢桿菌BtR05在該復(fù)合根瘤菌劑中的有效成分含量的比例為2:3。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合根瘤菌劑，其特征在于，花生慢生根瘤菌BASWS在該 復(fù)合根瘤菌劑中的有效菌數(shù)為1?4億/g。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合根瘤菌劑，其特征在于，蘇云金芽孢桿菌BtR05在該 復(fù)合根瘤菌劑中的有效菌數(shù)為6億/g。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合根瘤菌劑，其特征在于，包括按重量比的以下成分： 草炭土 75. 7 ?87. 62% 鑰酸銨0. 5?1. 0% 花生秧粉0. 5?2. 0% Y -聚谷氨酸〇· 05?0· 5% 蔗糖0· 2?1. 0% 碳酸鈣〇. 1?〇. 5% 有機硅0. 03?0. 3% 花生慢生根瘤菌BASWS 1. 0?4. 0% 蘇云金芽孢桿菌BtR05 10. 0?15. 0%。
7. 如權(quán)利要求6所述的一種復(fù)合根瘤菌劑的制備方法，其特征在于， 花生慢生根瘤菌BASWS培養(yǎng)基為YMA培養(yǎng)基，包括以下成分：蔗糖10 g，酵母粉1 g， MgS04.7H20 0.2 g，K2HP04 0.5 g，NaCl 0.1 g，CaCl20.05 g，0.5% 鑰酸鈉溶液 4.0ml，0.5% 硼酸溶液 4. 0ml，H20 1 000 mL，pH 6. 8 ?7. 0 ; BtR05斜面及搖瓶培養(yǎng)基為LB ;BtR05發(fā)酵培養(yǎng)基包括按重量比的以下成分：2%玉 米粉,6%豆粉，1%蔗糖，0.5%(順4)2504,0.2%1( 2冊04,0.2%腿2?04,0 . 03%]\%504--7!120， pH7. 0-7. 5。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種復(fù)合根瘤菌劑的制備方法，其特征在于，將發(fā)酵好的菌 液用無菌注射器注入裝有草炭土的塑料袋中，按比例注入花生慢生根瘤菌BASWS和蘇云金 芽孢桿菌BtR05,添加鑰酸銨，花生秧粉，γ -聚谷氨酸，蔗糖，碳酸鈣，有機硅。
9. 如權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合根瘤菌劑在防治花生地下害蟲蠐螬和花生增產(chǎn)上的 應(yīng)用。
【文檔編號】C12R1/01GK104109647SQ201410322688
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月8日
【發(fā)明者】李紀順, 王貽蓮, 魏艷麗, 劉偉, 陳凱, 楊合同 申請人:山東省科學(xué)院中日友好生物技術(shù)研究中心, 濟南澳利新型肥料有限公司