一種穩(wěn)定性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，包括試劑1和試劑2，本發(fā)明通過(guò)對(duì)試劑1和試劑2的進(jìn)一步的改進(jìn)，使其能夠有效的提高同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒的穩(wěn)定性，而對(duì)試劑的準(zhǔn)確度和分析靈敏度沒(méi)有影響。因此，本發(fā)明提供的穩(wěn)定性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒有利于在市場(chǎng)中進(jìn)一步的推廣使用。
【專利說(shuō)明】-種穩(wěn)定性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及臨床體外檢測(cè)試劑【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種同型半胱氨酸檢測(cè)試劑 盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 同型半胱氨酸（又稱高半胱氨酸，homocysteine, Hey)是蛋氨酸代謝過(guò)程中的中 間產(chǎn)物。同型半胱氨酸在體內(nèi)的分解代謝，受兩方面因素影響最大。一是與先天遺傳有關(guān) 的某些生物酶的缺乏，另一個(gè)就是體內(nèi)葉酸、維生素 B6、維生素 B12等營(yíng)養(yǎng)元素的缺乏。這 兩種缺乏都會(huì)影響同型半胱氨酸轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥。Hey的測(cè)定， 對(duì)心血管疾病、尿毒癥、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、老年癡呆癥等疾病的判定中，有重要的臨床 意義。
[0003] 血漿中的同型半胱氨酸約70%與白蛋白結(jié)合，為結(jié)合型。其余的游離型則主要以 二硫同型半胱氨酸和以二硫鍵結(jié)合的同型半胱氨酸-半胱氨酸化合物形式存在，只有少量 以還原型同型半胱氨酸存在于血漿中。我們通常所指的是總的同型半胱氨酸濃度。
[0004] 影響同型半胱氨酸水平最主要的因素莫過(guò)于遺傳于食物營(yíng)養(yǎng)缺乏。遺傳因素主要 包括N5甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)甲基酶及胱硫醚-β-合成酶的基因發(fā)生突變，引起酶的活性降低， 從而導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥。現(xiàn)在已經(jīng)證明Ν5甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)甲基酶的缺陷，在體內(nèi)葉 酸缺乏的情況下，可以引起同型半胱氨酸濃度的明顯升高。而根據(jù)Mudd等的研究，由遺傳 缺陷引起的胱硫醚-β-合成酶的活性降低，可導(dǎo)致血漿中同型半胱氨酸的濃度超過(guò)正常 值的十倍左右。
[0005] 對(duì)近1200名老人的研究表明，體內(nèi)同型半胱氨酸的水平與飲食有著密切的關(guān)系， 血漿中維生素 Β6、Β12和葉酸的濃度越低，其同型半胱氨酸的濃度越高。由于動(dòng)物蛋白中蛋 氨酸的含量比植物蛋白約高三倍左右，可以產(chǎn)生較多的同型半胱氨酸，因此可對(duì)人體的動(dòng) 脈組織造成損傷。
[0006] 其它因素包括性別、年齡、腎功能的損害、以及服用影響葉酸和Β族維生素的藥 物，都可影響同型半胱氨酸的水平。尤其是腎功的損害，會(huì)嚴(yán)重影響那些含硫氨基酸的排 出，因?yàn)槟I小管內(nèi)皮細(xì)胞的胱硫醚-β -合成酶對(duì)同型半胱氨酸的轉(zhuǎn)化作用，被認(rèn)為血液中 的非蛋白結(jié)合型同型半胱氨酸很重要的代謝途徑。
[0007] 通常認(rèn)為成人空腹血漿總Hey水平正常值為Γ12 μ mol/L，理想值為〈10 μ mol/ L，高于15 μ mol/L則被認(rèn)為是高同型半胱氨酸敗血癥；老年人（彡60歲）空腹血漿總Hey 水平正常值為15~20 μπιοΙ/L，高于20 μπιοΙ/L被認(rèn)為是高同型半胱氨酸敗血癥。
[0008] 目前,實(shí)驗(yàn)室常用的Hey測(cè)定方法有色譜法、酶聯(lián)免疫法及熒光偏振免疫法。色 譜法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)在公認(rèn)其為測(cè)定血漿Hey濃度的首選方 法，但因色譜法（HPLC及GC-MS)需要的設(shè)備復(fù)雜且昂貴，難以適應(yīng)常規(guī)臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng) 用，而酶聯(lián)免疫測(cè)定法可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，且可測(cè)定大量標(biāo)本，因此受到臨床廣泛歡迎。
[0009] 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)同型半胱氨酸的原理是基于小分子捕獲技術(shù)（SMT)的S-腺苷同 型半胱氨酸水解酶。Hey被轉(zhuǎn)化為游離型后，通過(guò)與共價(jià)底物反應(yīng)，循環(huán)放大，同時(shí)產(chǎn)生腺 苷。腺苷立即水解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使NADH轉(zhuǎn)化為NAD，樣本 中的Hey濃度與NADH轉(zhuǎn)化速率成正比。 如所示：
【權(quán)利要求】
1. 一種穩(wěn)定性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括組分1和組分2,體積 比為 R1 :R2=240:65， 各組分原料含量如下： 組分1 : S-腺苷甲硫氨酸 0. 1-lmM NADH 0.3-3mM 三（2羧乙基）膦氯化氫 0. 5-5 mM α -酮戊二酸 5_50mM 疊氮鈉 0. l-10g/L 抗壞血酸氧化酶 2-10 KU/L ; 組分2 : Hey甲基轉(zhuǎn)移酶 1-10KU/L 谷氨酸脫氫酶 1-10KU/L S-腺苷同型半胱氨酸（SAH)水解酶 2. 5-25KU/L 腺苷脫氨酶 5-50KU/L 牛血清白蛋白 20-40g/L 椰油酰胺丙基甜菜堿 2-5g/L 。
【文檔編號(hào)】C12Q1/32GK104120165SQ201410202785
【公開(kāi)日】2014年10月29日 申請(qǐng)日期:2014年5月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月14日
【發(fā)明者】譚柏清, 董雯, 甘宜梧, 王綺 申請(qǐng)人:山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司