湖北麥冬pcr鑒定試劑盒及鑒定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種湖北麥冬PCR鑒定試劑盒及鑒定方法，所述試劑盒中的特異性引物為HM1和HM2：HM1：5'-GCAGGAGGATAGCAGTGTTG-3'，HM2：5'-CCTGTAGTGGAAGAGGTGCC-3'；本發(fā)明提供了一種快速、準(zhǔn)確鑒定湖北麥冬的方法，可以廣泛應(yīng)用于湖北麥冬中藥選種育種、種植、采收儲(chǔ)存、銷售、臨床應(yīng)用各環(huán)節(jié)的品種鑒定，在鑒別中藥真?zhèn)?，打擊偽品，加?qiáng)中藥質(zhì)量監(jiān)管，促進(jìn)中藥現(xiàn)代化發(fā)展方面具有重大意義。
【專利說明】湖北麥冬PCR鑒定試劑盒及鑒定方法
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【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種DNA分子鑒定方法，特別涉及中藥湖北麥冬PCR鑒定試劑盒、特異性引物、模板及鑒定方法。
(二)
【背景技術(shù)】
[0002]湖北麥冬(Lir1pe spicata var.prolifera)主產(chǎn)于湖北襄樊市,是湖北道地藥材以及國(guó)家地理標(biāo)志性產(chǎn)品，具有養(yǎng)津生陰、清心潤(rùn)肺的功效，在臨床上應(yīng)用廣泛。湖北麥冬由于生長(zhǎng)周期短，年產(chǎn)量高，其銷量已經(jīng)占到麥冬總銷量的六成以上，成為當(dāng)前麥冬類藥材的主流品種。除了湖北麥冬外，藥典記載的麥冬主要品種包括浙麥冬和川麥冬，藥典記載外的麥冬品種包括以麥冬或野麥冬為名的沿階草屬18種和山麥冬屬8種。我國(guó)麥冬類植物資源豐富，麥冬品種繁多，產(chǎn)地不一，各品種間的藥效和價(jià)格差別較大，對(duì)麥冬主流產(chǎn)品湖北麥冬進(jìn)行鑒定具有重要意義。湖北麥冬與其他品種的外觀和性狀相似，利用常規(guī)的中藥鑒定方法較難進(jìn)行鑒別。利用DNA分子鑒定方法能夠解決湖北麥冬鑒別困難的問題，這種基于DNA序列的鑒定方法能夠從基因水平上進(jìn)行品種的甄別，具有準(zhǔn)確、高效、重復(fù)性好的諸多優(yōu)點(diǎn)，鑒定的結(jié)果不受樣品產(chǎn)地、生長(zhǎng)環(huán)境和來源的影響。
[0003]本發(fā)明提供的PCR檢測(cè)法就是一種湖北麥冬的DNA分子鑒定方法，能夠準(zhǔn)確鑒定湖北麥冬。目前已有的對(duì)湖北麥冬做出準(zhǔn)確鑒定的方法均為采用傳統(tǒng)的中藥鑒定手段，利用PCR檢測(cè)法對(duì)湖北麥冬進(jìn)行鑒定尚未見報(bào)道。
(三)
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明目的是提供一種能夠準(zhǔn)確鑒定中藥湖北麥冬的PCR鑒定試劑盒和檢測(cè)方法，包括PCR檢測(cè)法關(guān)鍵試劑PCR引物、模板和PCR檢測(cè)法的檢測(cè)步驟。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0006]本發(fā)明提供一種湖北麥冬PCR鑒定試劑盒，所述試劑盒中的特異性引物為HMl和HM2:
[0007]HMl:5’-GCAGGAGGATAGCAGTGTTG-3'，
[0008]HM2:5’-CCTGTAGTGGAAGAGGTGCC-3’ 。
[0009]進(jìn)一步，所述的湖北麥冬PCR鑒定試劑盒的組成為:
[0010]
【權(quán)利要求】
1.一種湖北麥冬PCR鑒定試劑盒，其特征在于所述試劑盒中的特異性引物為HMl和HM2:
HMl:5’-GCAGGAGGATAGCAGTGTTG-3'，
HM2:5’-CCTGTAGTGGAAGAGGTGCC-3’ 。
2.如權(quán)利要求1所述湖北麥冬PCR鑒定試劑盒，其特征在于所述的湖北麥冬PCR鑒定試劑盒的組成為:
3.一種利用權(quán)利要求1所述湖北麥冬PCR鑒定試劑盒對(duì)湖北麥冬進(jìn)行鑒定的方法，其特征在于所述方法為: (1)模板DNA的提取和質(zhì)量鑒定:提取供試品DNA作為PCR的模板；以電泳法檢測(cè)模板DNA的質(zhì)量，條帶清晰無彌散的，即為符合PCR反應(yīng)的模板DNA ； (2)PCR鑒定:利用湖北麥冬PCR鑒定試劑盒中的特異性引物HMl和HM2，進(jìn)行PCR擴(kuò)增:
將PCR反應(yīng)溶液放入PCR自動(dòng)擴(kuò)增儀器中進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)程序設(shè)置為:94°C預(yù)變性3min，94°C變性15s,60~65°C復(fù)性30s，72°C延伸Imin,45個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min ； (3)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè):取出PCR擴(kuò)增產(chǎn)物5μ L與加樣緩沖液I μ L混合，用1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果，在620bp處出現(xiàn)擴(kuò)增條帶的為湖北麥冬。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104073553SQ201410159443
【公開日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2014年4月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月18日
【發(fā)明者】李敏, 黃龍妹, 陳強(qiáng) 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)