一種用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌的培育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌的培育方法，包括（1）菌種樣品采集，（2）擴增培養(yǎng)，（3）篩選馴化菌種和（4）純化菌種等四個步驟，本發(fā)明首先在市政污水廠的活性污泥和黑臭水體底泥里篩選出具有脫氮除磷的土著微生物，用黑臭水體的污水作為主要的碳源與能量，再加入其他菌種生長所需的營養(yǎng)元素，通過馴化得到來自本土環(huán)境中的具有脫氮除磷的復(fù)合菌。本發(fā)明培養(yǎng)出的菌種具有增殖快，對黑臭水體的脫氮除磷效果明顯等特點，使用本發(fā)明得到的復(fù)合菌處理黑臭水體既避免了使用化學(xué)凈水劑的二次污染，也不需要擔(dān)心菌種的安全性，處理效率也遠(yuǎn)高于種植水生植物。
【專利說明】一種用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌的培育方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物菌種培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌的培育方法。
【背景技術(shù)】。
[0002]在我國的城市內(nèi)河，封閉水體，小流域都存在嚴(yán)重的水體富營養(yǎng)化污染，黑臭，異味，甚至藍(lán)藻赤潮，在水體安全和人體健康方面造成了巨大的損害。氮、磷等營養(yǎng)物質(zhì)過剩是引發(fā)水體黑臭富營養(yǎng)化的根本原因，當(dāng)水體中N濃度>0.2mg/L，P濃度>0.02mg/L時就存在發(fā)生富營養(yǎng)化的可能性。由于我國城市管網(wǎng)規(guī)劃的不全面，造成許多的城市內(nèi)河都受到生活污水排放的影響變成臭水溝，失去自凈能力。而生活污水是氮、磷等營養(yǎng)物質(zhì)的最大排放源，因此如何解決黑臭水體的氮磷是生態(tài)修復(fù)城市內(nèi)河，封閉水體，小流域的核心問題。目前使用的較多的有投加化學(xué)凈水劑，外加菌種以及種植水生植物等方法。投加化學(xué)凈水劑可以快速的降低水體里的磷含量，但是產(chǎn)生無機沉淀物，導(dǎo)致底泥狀態(tài)惡化，產(chǎn)生二次污染，而且對氮沒有作用；外加菌種，可以增加水體里脫氮除磷微生物的數(shù)量，但存在外來菌種對水體的適應(yīng)和外來物種長期安全性的風(fēng)險，而且成本較高，每平米水體外加菌種的費用在1-2元；種植具有解氮聚磷的水生植物，可以吸收利用水體中的氮磷，但是生長周期較長，并且需要及時收割，人工費用較高，作用有限。
[0003]鑒于上述問題，有必要培養(yǎng)一種用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌培育方法來解決上述問題。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌培育方法，以期有效解決黑臭水體中氮磷過剩的問題。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0006]一種用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌的培育方法，包括以下步驟:
[0007](I)菌種樣品采集:分別采集市政污水處理廠的活性污泥與黑臭水體的底泥，放入恒溫箱中待用，溫度為28°C~35°C ；
[0008](2)擴增培養(yǎng):在好氧條件下，向兩種污泥樣品中分別加入液體培養(yǎng)基進行恒穩(wěn)培養(yǎng)，溫度為28°C~35°C，培養(yǎng)時間為2~3天；
[0009](3)篩選馴化菌種:將兩種污泥混合液按照I~3:1混合加入篩選馴化培養(yǎng)基中，在28°C~35°C溫度下好氧振蕩，2~3天為一個馴化周期，需要5_8個馴化周期；每個馴化周期結(jié)束后，取5-10mL培養(yǎng)液接種到新鮮的篩選馴化培養(yǎng)基中；
[0010](4)純化菌種:將篩選好的菌種接種到活化富集培養(yǎng)基中，在28°C~35°C溫度，培養(yǎng)2-3天，用高速離心機離心處理，再用磷酸鹽緩沖液清洗，再離心制成菌種懸浮液。
[0011] 步驟(2)所述的液體培養(yǎng)基的配置比例為:1000mL培養(yǎng)基中加入K2HPO40.0-1.5g、MgSO4.7H201-3g、牛肉膏 l_3g、(NH4)2S04l_2g、NaH2P04.3H201_2g、尿素 0.2-0.3g、FeSO4.7Η200.002-0.003g、MnSO4.7Η200.003-0.004g、ZnSO4.7Η200.003-0.004g、CoSO4.7Η200.001-0.002g、葡萄糖 15_16g，調(diào) PH 值為 7.0，并高壓滅菌。
[0012]步驟(3)所述的篩選馴化培養(yǎng)基的配置比例為:1000mL培養(yǎng)基中加入黑臭水體的污水 50-100g、K2HPO4L 5-2.5g、NaH2PO4.3H201_2g、MgSO4.7H203_4g、、NH4C12_3g、維生素B10.1-0.2g，調(diào)PH值為7.0，并高壓滅菌。
[0013]步驟(4)所述的活化富集培養(yǎng)基的配置比例為:1000mL培養(yǎng)基中加入NH4C12_3g，牛肉膏5-6g、葡萄糖15-16g、瓊脂15-16g，調(diào)PH值為7.0，并高壓滅菌。
[0014]經(jīng)鑒定，所得菌種包含以下四種微生物:蠟狀芽孢桿菌、脫氮副球菌、施氏假單胞菌、枯草芽孢桿菌。
[0015]本發(fā)明首先在市政污水廠的活性污泥和黑臭水體底泥里篩選出具有脫氮除磷的土著微生物，用黑臭水體的污水作為主要的碳源與能量，再加入其他菌種生長所需的營養(yǎng)元素，通過馴化得到來自本土環(huán)境中的具有脫氮除磷的復(fù)合菌。本發(fā)明培養(yǎng)出的菌種具有增殖快，對黑臭水體的脫氮除磷效果明顯等特點，使用本發(fā)明得到的復(fù)合菌處理黑臭水體既避免了使用化學(xué)凈水劑的二次污染，也不需要擔(dān)心菌種的安全性，處理效率也遠(yuǎn)高于種植水生植物?！緦＠綀D】
【附圖說明】
[0016]圖1為本發(fā)明的用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌培育方法的流程圖。
【具體實施方式】
[0017]實施例:
[0018]本發(fā)明所述的用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌培育方法的流程圖請參閱圖1，具體實施步驟如下:
[0019](I)菌種樣品采集:分別用無菌取樣瓶采集南京一市政污水處理廠的活性污泥與城市一黑臭內(nèi)河的底泥各1000mL,放入恒溫箱中待用，溫度為28°C~35°C。
[0020](2)擴增培養(yǎng):向兩種污泥樣品中分別按照10g/L的比例加入液體培養(yǎng)基，并進行曝氣恒溫培養(yǎng)，溫度為28°C~35°C，培養(yǎng)時間為2-3天。其中液體培養(yǎng)基的成分為:1000mL培養(yǎng)基中加入 K2HPO4L 5g、MgSO4.7H201g、牛肉膏 lg、(NH4)2SO4Ig' NaH2PO4.3H201g、尿素0.2g、FeSO4.7H200.002g、MnSO4.7H200.003g、ZnSO4.7H200.003g、CoSO4.7H200.0Olg、葡萄糖15g，調(diào)PH值為7.0，并高壓滅菌。
[0021](3)篩選馴化菌種:將兩種污泥混合液按照1:1比例共取5mL混合，加入1000mL篩選馴化培養(yǎng)基，在28°C~35°C溫度下好氧振蕩，2天為一個馴化周期，共進行6個馴化周期。每個馴化周期結(jié)束后，取5mL培養(yǎng)液接種到新鮮的1000mL篩選馴化培養(yǎng)基中。其中篩選馴化培養(yǎng)基成分為=1000mL培養(yǎng)基中加入黑臭水體的污水100g、K2HPO4L 5g、NaH2PO4.3Η201.0g、MgSO4.7H203.0g、、NH4C12g、維生素 B10.lg，調(diào) PH 值為 7.0，并高壓滅菌。
[0022](4)純化菌種:將篩選好的菌種5mL接種到1000mL活化富集培養(yǎng)基中，在28°C~35°C溫度,培養(yǎng)2天,用高速離心機(8000r/min)離心處理IOmin,再用磷酸鹽緩沖液清洗，再離心10min制成菌種懸浮液。其中活化富集培養(yǎng)基成分為1000mL培養(yǎng)基中加入NH4C12g，牛肉膏5g、、葡萄糖15g、瓊脂15g，調(diào)PH值為7.0,并高壓滅菌。[0023](5)菌種鑒定:用MIDI脂肪酸鑒定系統(tǒng)提供的萃取、鑒定方法鑒定純化出的菌落。鑒定出的菌種包含以下四種微生物，依次編號為:A蠟狀芽孢桿菌B脫氮副球菌C施氏假單胞菌D枯草芽孢桿菌。
[0024]A蠟狀芽孢桿菌落為乳白色，不規(guī)則形狀，革蘭氏染色為陽性；B脫氮副球菌，乳黃色，菌株個體呈橢圓形，革蘭氏染色為陰性；C施氏假單胞菌落為黃色，直或微彎的桿菌狀，革蘭氏染色為陰性；D枯草芽孢桿菌落為微黃色，橢圓到柱狀，革蘭氏染色陽性。四種菌在培養(yǎng)基中存活的比例為=A蠟狀芽孢桿菌38%，B脫氮副球菌35%，C施氏假單胞菌18%，D枯草芽孢桿菌9%。將得到的復(fù)合菌懸液，在28-35°C溫度下加入液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)2天，好氧處理取自黑臭河水里的污水，實驗發(fā)現(xiàn)，按照1%的投加量，8-16個小時的好氧處理可高效去除污水中的懸浮物(SS)，C0Dcr，氨氮和總磷(TP)。如表1，通過16個小時的處理，可以達到地表水四類標(biāo)準(zhǔn)的要求。
[0025]表1
[0026]
【權(quán)利要求】
1.一種用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌的培育方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)菌種樣品采集:分別采集市政污水處理廠的活性污泥與黑臭水體的底泥，放入恒溫箱中待用，溫度為28°c~35°C ； (2)擴增培養(yǎng):在好氧條件下，向兩種污泥樣品中分別加入液體培養(yǎng)基進行恒穩(wěn)培養(yǎng)，溫度為28°C~35°C，培養(yǎng)時間為2~3天； (3)篩選馴化菌種:將兩種污泥混合液按照I~3:1混合加入篩選馴化培養(yǎng)基中，在28°C~35°C溫度下好氧振蕩，2~3天為一個馴化周期，需要5_8個馴化周期；每個馴化周期結(jié)束后，取5-10mL培養(yǎng)液接種到新鮮的篩選馴化培養(yǎng)基中； (4)純化菌種:將篩選好的菌種接種到活化富集培養(yǎng)基中，在28°C~35°C溫度，培養(yǎng)2-3天，離心處理，再用磷酸鹽緩沖液清洗，再離心制成菌種懸浮液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌的培育方法，其特征在于，步驟(2 )所述的液體培養(yǎng)基的配置比例為:1000mL培養(yǎng)基中加入K2HPO40.0-1.5g、MgSO4.7H201-3g、牛肉膏 l_3g、(NH4)2S04l_2g、NaH2P04.3H201_2g、尿素 0.2-0.3g、FeSO4.7Η200.002-0.003g、MnSO4.7Η200.003-0.004g、ZnSO4.7Η200.003-0.004g、CoSO4.7Η200.001-0.002g、葡萄糖 15_16g，調(diào) PH 值為 7.0，并高壓滅菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌的培育方法，其特征在于，步驟(3)所述的篩選馴化培養(yǎng)基的配置比例為:1000mL培養(yǎng)基中加入黑臭水體的污水 50-100g、K2HPO4L 5-2.5g、NaH2PO4.3H201_2g、MgSO4.7H203_4g、、NH4C12_3g、維生素B10.1-0.2g，調(diào)PH值為7.0，并高壓滅菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于黑臭水體脫氮除磷復(fù)合菌的培育方法，其特征在于，步驟(4)所述的活化富集培養(yǎng)基的配置比例為:1000mL培養(yǎng)基中加入NH4C12-3g，牛肉膏5_6g、、葡萄糖15-16g、瓊脂15-16g,調(diào)PH值為7.0,并高壓滅菌。
【文檔編號】C12R1/125GK103911332SQ201410136717
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2014年4月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月4日
【發(fā)明者】范敏, 王勤 申請人:范敏