一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種微生物的培養(yǎng)技術(shù)，尤其是涉及一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基。一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，基本培養(yǎng)基組分和含量：葡萄糖25g／L，大豆蛋白胨10g／L，酵母粉8g／L，K2HPO42g／L，CH3COONa7g／L，檸檬酸鈉3g／L，MgSO40.2g／L，F(xiàn)eCl20.1g／L，MnSO40.05g／L；基本培養(yǎng)基添加物及其添加量：無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液25mL／L。本發(fā)明首先制備無菌的釀酒酵母發(fā)酵上清液，然后將其加入到已滅菌冷卻的發(fā)酵基本培養(yǎng)基中，操作簡單，成本低廉；更重要的是使乳酸菌活菌菌體密度達(dá)到1012CFU／g，是普通發(fā)酵菌體密度(1010CFU／g)的100倍左右。
【專利說明】一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種微生物的培養(yǎng)技術(shù)，尤其是涉及一種乳酸菌的高密度發(fā)酵培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]乳酸菌作為一類被公認(rèn)的安全的微生物，長期用于多種發(fā)酵制品的加工，已被人類食用了上千年。乳酸菌對人體健康的調(diào)節(jié)作用，如調(diào)節(jié)胃腸道菌群組成、預(yù)防和治療各種腹瀉、免疫調(diào)節(jié)、抗高血壓、抗氧化性、降低血清膽固醇等已得到廣泛研究和論述。
[0003]我國《益生菌類保健食品申報(bào)與審評規(guī)定》規(guī)定:活菌類益生菌保健食品在其保質(zhì)期內(nèi)活菌數(shù)目不得少于/ ?？梢钥闯?，乳酸菌菌劑的活性與其數(shù)量密切相關(guān)，因此，乳酸菌的高密度培養(yǎng)技術(shù)就成為了乳酸菌推廣應(yīng)用的關(guān)鍵。傳統(tǒng)的靜置發(fā)酵法得到的發(fā)酵液中菌體的發(fā)酵密度較低，為了得到更多的活菌數(shù)，就需要增加反應(yīng)器的體積或者增加發(fā)酵次數(shù)等，從而增加生物量的分離費(fèi)用，延長生產(chǎn)周期，從而提高生產(chǎn)成本、降低生產(chǎn)效率。
[0004]目前，國內(nèi)外都在探討對乳酸菌的高密度培養(yǎng)技術(shù)，所采用的方法有進(jìn)行氣調(diào)培養(yǎng)的，有添加氨基酸等生長因子的，也有采用添加多肽類、低聚糖類或茶多酚類的物質(zhì)進(jìn)行培養(yǎng)的。利用上述技術(shù)進(jìn)行培養(yǎng)，具有操作復(fù)雜、成本大、產(chǎn)物成分復(fù)雜和分離難等問題，不易推廣應(yīng)用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)`有技術(shù)的不足，提供一種成本低廉，操作簡單，且獲得的乳酸菌菌體成分單一、活性高、濃度高的乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案如下:
[0007]一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，基本培養(yǎng)基組分和含量:葡萄糖258 /匕大豆蛋白胨108 / [，酵母粉/匕(?⑶0版178凡，檸檬酸鈉如/匕％3040丨/ 1,^60120.18丨1,1118040.058丨I ；基本培養(yǎng)基添加物及其添加量:無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液251111,丨匕
[0008]一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于配置培養(yǎng)基時(shí)待基本培養(yǎng)基1211高壓滅菌15-=且冷卻后，通過無菌操作將無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液加入，并攪拌均勻。
[0009]一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于基本培養(yǎng)基添加物無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液的制備方法如下:
[0010](1)釀酒酵母種子液的制備:將保存在冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的釀酒酵母接種入試管斜面活化后，再經(jīng)過搖瓶培養(yǎng)，301，200??！11條件下培養(yǎng)2處，即得種子液，通過560^波長下測定00值，以確保每一批種子液中釀酒酵母菌體數(shù)一致；
[0011](2)配置釀酒酵母發(fā)酵培養(yǎng)基:蛋白胨208/1，酵母抽提物108 /匕葡萄糖28凡，適量雙蒸水溶解，再加15此/ 10.2%腺嘌呤溶液，1201高壓滅菌150111，冷卻備用；[0012](3)接種發(fā)酵:以5%的接種量將(1)中制備的釀酒酵母種子液接種到(2)所述培養(yǎng)基中，在301,20011)111條件下培養(yǎng)36匕；
[0013](4)無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液制備:提前滅過菌的離心管收集(3)中制備的釀酒酵母發(fā)酵液，3000?。?1離心得上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮100倍，再經(jīng)0.45 微孔濾膜抽濾(抽濾瓶等提前滅菌備用)，最后得到無菌上清液。
[0014]本發(fā)明首先制備無菌的釀酒酵母發(fā)酵上清液，然后將其加入到發(fā)酵基本培養(yǎng)基中，操作簡單，成本低廉；更重要的是使乳酸菌活菌菌體密度達(dá)到101?^? / 8，是普通發(fā)酵菌體密度的100倍左右。
【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)施例1
[0016]1.按照基本培養(yǎng)基中無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液的加入量分為實(shí)驗(yàn)組八、實(shí)驗(yàn)組8、實(shí)驗(yàn)組匕實(shí)驗(yàn)組0、對照組五組，如下:
[0017]
【權(quán)利要求】
1.一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，基本培養(yǎng)基組分和含量:葡萄糖258/1，大豆蛋白胨108凡，酵母粉徹/!，(?⑶0恥78凡，檸檬酸鈉38凡，啦切辦2^/1, [6(^0.18 /1,1118040.058/1 ；基本培養(yǎng)基添加物及其添加量:無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液25h/ l.
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于配置培養(yǎng)基時(shí)待基本培養(yǎng)基1211高壓滅菌1501=且冷卻后，通過無菌操作將無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液加入，并攪拌均勻。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳酸菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于基本培養(yǎng)基添加物無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液的制備方法如下: (1)釀酒酵母種子液的制備:將保存在冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的釀酒酵母接種入試管斜面活化后，再經(jīng)過搖瓶培養(yǎng)，3000，200^條件下培養(yǎng)2處，即得種子液，通過560=0波長下測定00值，以確保每一批種子液中釀酒酵母菌體數(shù)一致； (2)配置釀酒酵母發(fā)酵培養(yǎng)基:蛋白胨208/1，酵母抽提物108/匕葡萄糖況/匕適量雙蒸水溶解，再加15h/ [0.2%腺嘌呤溶液，1201高壓滅菌15-11,冷卻備用； (3)接種發(fā)酵:以5%的接種量將(1)制備的釀酒酵母種子液接種到(2)所述培養(yǎng)基中，在30，200^111條件下培養(yǎng)36h； (4)無菌釀酒酵母發(fā)酵上清液制備:提前滅過菌的離心管收集(3)中制備的釀酒酵母發(fā)酵液，30001-1)111離心10111111得上清液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮100倍，再經(jīng)0.45 111微孔濾膜抽濾(抽濾瓶等提前滅菌備用)，最后得到無菌上清液。
【文檔編號(hào)】C12R1/46GK103834602SQ201410106008
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月21日
【發(fā)明者】馬明, 劉付燕 申請人:南京千人慧生物科技有限公司