一株解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）的菌株，其中，該菌株的保藏號(hào)為CGMCC NO.8040。另一方面，本發(fā)明還提供了一種菌劑，其中，所述菌劑含有如上所述的菌株的活菌體和培養(yǎng)基。另一方面，本發(fā)明還提供了如上所述的菌株和/或菌劑在防治果實(shí)真菌病害中的用途。再一方面，本發(fā)明還提供了一種防治果實(shí)真菌病害的方法，其中，該方法包括：將含有如上所述的菌株的活菌體的菌劑與果實(shí)接觸。通過(guò)上述技術(shù)方案，本發(fā)明能夠有效地實(shí)現(xiàn)對(duì)果實(shí)真菌病害的防治，并且不會(huì)有有害化學(xué)物質(zhì)的殘留。
CGMCC NO8040
20130816
【專(zhuān)利說(shuō)明】一株解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地，涉及一種解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的菌株、含有該菌株的菌劑、該菌株和菌劑的用途以及一種防治果實(shí) 真菌病害的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 果品貯藏保鮮是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的延續(xù)。隨著生活水平的提高，大眾對(duì)健康和環(huán)境問(wèn)題 日益重視，對(duì)果實(shí)品質(zhì)的要求也越來(lái)越高，綠色食品迅速普及。因此，尋找安全有效的技術(shù) 對(duì)果實(shí)進(jìn)行采后防腐、殺菌，對(duì)果實(shí)保鮮十分重要。
[0003] 真菌病害是誘發(fā)果實(shí)腐敗的主要因素，因此防治果實(shí)真菌病害對(duì)果實(shí)的貯藏至為 關(guān)鍵。目前用于防治果實(shí)真菌病害的方法大多通過(guò)化學(xué)藥品浸泡法來(lái)實(shí)現(xiàn)，但是化學(xué)藥品 浸泡容易殘留對(duì)人體有害的物質(zhì)，因此存在不夠安全有效的缺陷。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的是克服化學(xué)藥品浸泡法來(lái)防治果實(shí)真菌病害時(shí)存在的不夠安全有 效的缺陷，提供一種更加安全有效的微生物生物防治果實(shí)真菌病害的方法。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，一方面，本發(fā)明提供一種解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的菌株，其中，該菌株的保藏號(hào)為CGMCC NO. 8040。
[0006] 另一方面，本發(fā)明還提供了一種菌劑，其中，所述菌劑含有如上所述的菌株的活菌 體和培養(yǎng)基。
[0007] 另一方面，本發(fā)明還提供了如上所述的菌株和/或菌劑在防治果實(shí)真菌病害中的 用途。
[0008] 再一方面，本發(fā)明還提供了一種防治果實(shí)真菌病害的方法，其中，該方法包括：將 含有如上所述的菌株的活菌體的菌劑與果實(shí)接觸。
[0009] 通過(guò)上述技術(shù)方案，本發(fā)明能夠有效地實(shí)現(xiàn)對(duì)果實(shí)真菌病害的防治，并且不會(huì)有 有害化學(xué)物質(zhì)的殘留。
[0010] 本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】部分予以詳細(xì)說(shuō)明。
[0011] 生物保藏
[0012] 本發(fā)明的菌株，分類(lèi)命名為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens),是 本發(fā)明的發(fā)明人從新疆葡萄園區(qū)果實(shí)上分離的，于2013年08月16日保藏于中國(guó)微生物菌 種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址位于北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為 CGMCC NO. 8040。該菌株的生物學(xué)性狀包括：菌落白色，半透明，光滑濕潤(rùn)菌落，稍隆起，圓形 齊整菌落；革蘭氏染色菌體紫色，為革蘭氏陽(yáng)性菌，桿狀。
【專(zhuān)利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0013] 附圖是用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說(shuō)明書(shū)的一部分，與下面的具 體實(shí)施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中：
[0014] 圖1是本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌的典型的光學(xué)顯微鏡照片。
[0015] 圖2是本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌對(duì)葡萄灰霉病菌的典型的抑制效果圖。
[0016] 圖3是本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌對(duì)桃褐腐病病斑大小的抑制效果圖。其中，左側(cè) 的桃為施用了本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌的處理，右側(cè)的桃為沒(méi)有施用本發(fā)明的解淀粉芽孢 桿菌的對(duì)照。
[0017] 圖4是本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病病斑大小的抑制效果。左側(cè)的番茄 桃為沒(méi)有施用本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌的對(duì)照，右側(cè)的番茄為施用了本發(fā)明的解淀粉芽孢 桿菌的處理。
[0018] 圖5是本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌對(duì)蘋(píng)果青霉病病斑大小的抑制效果。左側(cè)的蘋(píng)果 為施用了本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌的處理，右側(cè)的蘋(píng)果為沒(méi)有施用本發(fā)明的解淀粉芽孢桿 菌的對(duì)照。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描 述的【具體實(shí)施方式】?jī)H用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0020] 在本發(fā)明中，在未作相反說(shuō)明的情況下，使用的液體的數(shù)值均為20°C下的數(shù)值。本 發(fā)明中，Yro培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基是微生物培養(yǎng)中常規(guī)使用的培養(yǎng)基，它們的組 成可以為教科書(shū)(例如焦瑞身，微生物工程，化學(xué)工業(yè)出版社，2003)中的說(shuō)明。
[0021] 本發(fā)明提供了一種解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的菌株，其 中，該菌株的保藏號(hào)為CGMCC NO. 8040。
[0022] 本發(fā)明還提供了一種菌劑，其中，所述菌劑含有如上所述的菌株的活菌體和培養(yǎng) 基。
[0023] 其中，如上所述的菌株的活菌體在所述菌劑中的含量可以為106-10nCFU/mL。
[0024] 其中，所述培養(yǎng)基可以含有5-10g/L的酵母粉、5_20g/L的蛋白胨和5-10g/L的氯 化鈉。
[0025] 本發(fā)明還提供了如上所述的菌株和/或菌劑在防治果實(shí)真菌病害中的用途。
[0026] 本發(fā)明還提供了一種防治果實(shí)真菌病害的方法，其中，該方法包括：將含有如上所 述的菌株的活菌體的菌劑與果實(shí)接觸。
[0027] 其中，如上所述的菌株的活菌體在所述菌劑中的含量可以為106_108CFU/mL。
[0028] 其中，接觸的方式可以為浸泡；浸泡的時(shí)間可以為30-60秒。
[0029] 其中，該方法還可以包括，將接觸后的果實(shí)置于貯藏條件下，所述貯藏條件可以為 常規(guī)的貯藏條件，例如貯藏條件可以包括：溫度為1_5°C，相對(duì)濕度為90-95%，光照強(qiáng)度為 0.3勒克斯以下。
[0030] 其中，所述果實(shí)可以包括蘋(píng)果、梨、草莓、桃和葡萄中的至少一種；引起果實(shí)真 菌病害的真菌可以包括葡萄灰霉病菌（Botrytis cinerea)、梨青霉病菌（PeniciIlium expansum)、蘋(píng)果灰霉病菌（Botrytis cinerea)、蘋(píng)果青霉病菌（Penicillium expansum (Link) Thom)、辣椒炭疽病菌（Gloeosporium piperatum)、桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、桃褐腐病菌（Monilinia laxa)、桃褐腐病菌（Monilinia fructigena)、搜桃 褐腐病菌（Monilinia fructicola)、柑橘綠霉病菌（Penicillium digitatum)和柑橘青霉 病菌（Penicillium italicum)中的至少一種。
[0031] 以下將結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
[0032] 實(shí)施例1
[0033] 配制培養(yǎng)基，成分為5g/L的酵母抽提物、10g/L的蛋白胨和10g/L的氯化鈉。
[0034] 將保藏號(hào)為CGMCC NO. 8040的解淀粉芽孢桿菌接種并培養(yǎng)在上述培養(yǎng)基中，直至 菌體濃度為l〇9CFU/mL，得到菌劑。顯微鏡下，該菌株的典型的光學(xué)顯微鏡照片如圖1所示。
[0035] 實(shí)施例2
[0036] 使用保藏號(hào)為CGMCC NO. 8040的解淀粉芽孢桿菌菌株，對(duì)葡萄灰霉病菌（Botrytis cinerea)、梨青霉病菌（Penicillium expansum)、蘋(píng)果灰霉病菌（Botrytis cinerea)、 蘋(píng)果青霉病菌（Penicillium expansum (Link) Thom)、辣椒炭疽病菌（Gloeosporium piperatum)、桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、桃褐腐病菌（Monilinia laxa)、桃褐 腐病菌（Monilinia fructigena)、搜桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、柑橘綠霉病菌 (Penicillium digitatum)和柑橘青霉病菌（Penicillium italicum)進(jìn)行抑菌效果的檢 測(cè)，得到如表1所示的結(jié)果。其中，對(duì)葡萄灰霉病菌的典型的抑制效果圖如圖2所示。對(duì)桃 褐腐病病斑大小的抑制效果圖如圖3所示。其中，左側(cè)的桃為施用了本發(fā)明的解淀粉芽孢 桿菌的處理，右側(cè)的桃為沒(méi)有施用本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌的對(duì)照。對(duì)番茄灰霉病病斑大 小的抑制效果如圖4所示。左側(cè)的番茄桃為沒(méi)有施用本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌的對(duì)照，右 側(cè)的番茄為施用了本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌的處理。對(duì)蘋(píng)果青霉病病斑大小的抑制效果如 圖5所示。左側(cè)的蘋(píng)果為施用了本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌的處理，右側(cè)的蘋(píng)果為沒(méi)有施用 本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌的對(duì)照。
[0037] 其中，選擇桃米后褐腐病病囷、等果米后灰霉病囷、等果米后青霉病囷為指不真 菌，采用平板對(duì)峙培養(yǎng)法和果實(shí)體內(nèi)人為打孔接種法。
[0038] 平板對(duì)峙培養(yǎng)法具體操作如下：保藏號(hào)為CGMCC NO. 8040的解淀粉芽孢桿菌菌株 在LB培養(yǎng)基上28°C恒溫培養(yǎng)48h。植物病原真菌在PDA平板上25°C恒溫培養(yǎng)3-4天，自菌 落邊緣用直徑〇. 7cm無(wú)菌不銹鋼打孔器打制帶菌瓊脂片；用無(wú)菌接種針挑取病原菌菌片， 菌絲面朝下接種于PDA平板中心處，同時(shí)在距病原真菌菌片兩側(cè)均約3. OOcm處用無(wú)菌接種 環(huán)劃線(xiàn)保藏號(hào)為CGMCC NO. 8040的解淀粉芽孢桿菌菌株，以?xún)H接病原菌的平板為對(duì)照，每個(gè) 處理三次重復(fù)，25°C恒溫培養(yǎng)5-7天，測(cè)量病原真菌邊緣與保藏號(hào)為CGMCC NO. 8040的解淀 粉芽孢桿菌菌株的菌落帶寬中心之間的抑菌帶寬度。
[0039] 果實(shí)體內(nèi)人為打孔接種法具體操作（以防治桃采后褐腐病為例進(jìn)行說(shuō)明）如下：
[0040] 保藏號(hào)為CGMCC NO. 8040的解淀粉芽孢桿菌菌株在LB液體培養(yǎng)基上28°C恒溫培 養(yǎng)48h，用蒸餾水調(diào)至菌液濃度為5X108CFU/ml，得到抗病菌液。桃褐腐病菌M. fructicola 在PDA平板上25°C恒溫培養(yǎng)5-7天，收集病孢子，用蒸餾水制成5 X IO4CFUAiI的孢子懸浮 液；成熟的桃子，先用0.5%次氯酸鈉消毒之后，用滅過(guò)菌的移液器槍頭，沿著桃的腰部插 孔，每個(gè)果子扎孔3個(gè)，每個(gè)孔為30mmX 30mm。每孔接種30 μ 1抗病菌液，室溫瞭干，然后再 接種30 μ 1的病原菌孢子懸浮液。最后，處理的果子放置于25°C下，5-7天后，測(cè)定果實(shí)腐 爛斑大小。腐爛斑小于IOmm被視為不發(fā)病。根據(jù)腐爛病斑的占總接種孔數(shù)的多少，計(jì)算發(fā) 病率，未發(fā)病的病斑數(shù)占總接種孔數(shù)的多少，計(jì)算病斑抑制率。
[0041] 表I. CGMCC NO. 8040的解淀粉芽孢桿菌對(duì)不同病原菌的抑制效果
[0042]
【權(quán)利要求】
1. 一種解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的菌株，其特征在于，該菌株 的保藏號(hào)為CGMCC NO. 8040。
2. -種菌劑，其特征在于，所述菌劑含有權(quán)利要求1所述的菌株的活菌體和培養(yǎng)基。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的菌劑，其中，權(quán)利要求1所述的菌株的活菌體在所述菌劑中的 含量為 106-10nCFU/mL。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的菌劑，其中，所述培養(yǎng)基含有5-10g/L的酵母抽提物、 5-20g/L的蛋白胨和5-10g/L的氯化鈉。
5. 權(quán)利要求1所述的菌株和/或權(quán)利要求2-4中任意一項(xiàng)所述的菌劑在防治果實(shí)真菌 病害中的用途。
6. -種防治果實(shí)真菌病害的方法，其特征在于，該方法包括：將含有權(quán)利要求1所述的 菌株的活菌體的菌劑與果實(shí)接觸。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述的菌株的活菌體在所述菌劑中的含量為 106-10nCFU/mL。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其中，接觸的方式為浸泡；浸泡的時(shí)間為30-60秒。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，該方法還包括，將接觸后的果實(shí)置于貯藏條件 下，所述貯藏條件包括：溫度為1_5°C，相對(duì)濕度為90-95%，光照強(qiáng)度為0. 3勒克斯以下。
10. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述果實(shí)包括蘋(píng)果、梨、草莓、桃和葡萄中 的至少一種；引起果實(shí)真菌病害的真菌包括葡萄灰霉病菌（Botrytis cinerea)、梨青 霉病菌（Penicillium expansum)、蘋(píng)果灰霉病菌（Botrytis cinerea)、蘋(píng)果青霉病菌 (Penicillium expansum (Link) Thom)、辣椒炭疽病菌（Gloeosporium piperatum)、桃褐腐 病菌（Monilinia fructicola)、桃褐腐病菌（Monilinia laxa)、桃褐腐病菌（Monilinia fructigena)、搜桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、柑橘綠霉病菌（Penicillium digitatum)和柑橘青霉病菌（Penicillium italicum)中的至少一種。
【文檔編號(hào)】C12R1/07GK104371944SQ201410038949
【公開(kāi)日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2014年1月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月26日
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