一種禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種禽腦脊髓炎病毒YBF02株（禽腦脊髓炎病毒Avian?Encephalomyelitis?virus），該病毒株于2013年11月08日保藏在北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCC?No.8505。本發(fā)明篩選的禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株通過水平傳播感染在雞體連續(xù)傳代，均未見毒力返強(qiáng)現(xiàn)象，遺傳性穩(wěn)定，符合禽腦脊髓炎弱毒疫苗株無(wú)毒力返強(qiáng)的標(biāo)準(zhǔn)，制成的疫苗能夠提供有效的免疫保護(hù)，具有很好的商品化開發(fā)前景。
【專利說明】一種禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于疫苗抗原選育【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]禽腦脊髓炎(AE)是由禽腦脊髓炎病毒(AEV)引起的一種主要危害4周齡以下雛雞，以侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起非化膿性腦炎為主要病理特征的病毒性傳染病，表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)失調(diào)、頭頸震顫和后趾麻痹等神經(jīng)癥狀，特別是頭和頸部的震顫。因此，過去常稱為“流行性震顫”。4周齡以下雛雞感染AEV后，發(fā)病率一般為20%~60%，死亡率平均為25%，也可超過50% ;成年雞感染不表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，但可引起一過性產(chǎn)蛋下降，下降幅度為16%~43%，有的高達(dá)60%以上，但不出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，約兩周后產(chǎn)蛋可恢復(fù)正常。但此時(shí)期所產(chǎn)的種蛋高度帶毒，在孵化時(shí)呈現(xiàn)兩種趨勢(shì):一部分雞胚在孵化后期死亡；另一部分雖可孵化出殼，但在出殼時(shí)或出殼后數(shù)天內(nèi)即能表現(xiàn)癥狀，這些雛雞的糞便中帶有大量病毒，能造成其他雛雞的感染。禽腦脊髓炎在全世界均有發(fā)生，易感雞群在一年四季均可發(fā)病，冬春發(fā)生較多。幾乎所有雞群最終都會(huì)被病毒感染，但臨床發(fā)病率較低。
[0003]1930年，Jones首先在2周齡商品代洛島紅雞發(fā)現(xiàn)AE，表現(xiàn)為震顫。1931年觀察到兩次暴發(fā)，發(fā)生在不同雞場(chǎng)的I周齡和4周齡雞群，這兩個(gè)群源于同一種雞群。在以后的兩年間，在新英格蘭地區(qū)多 個(gè)州均發(fā)現(xiàn)了 AE的暴發(fā)，因此又稱為“新英格蘭病”。1934年，Jones取自然發(fā)病雞的腦組織濾液經(jīng)腦內(nèi)接種易感雞復(fù)制出了本病。1938年，Van Roekel等指出:并不是總能觀察到震顫，當(dāng)出現(xiàn)震顫時(shí)隨后會(huì)出現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)，因?yàn)榇瞬∮袀魅拘院椭饕趾χ袠猩窠?jīng)系統(tǒng)，所以提出稱為“傳染性禽腦脊髓炎”，后來(lái)縮為“禽腦脊髓炎”并于1939年被美國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)委員會(huì)采用。1958年，Schaaf第一次報(bào)道通過免疫成功控制了本病。1960年Calnek等闡明了 AE的流行病學(xué)，隨后開發(fā)出了口服疫苗，成為當(dāng)今世界商品雞群控制AE的基礎(chǔ)。該病現(xiàn)已遍布世界各地，很多國(guó)家和地區(qū)都有該病發(fā)生的報(bào)道。
[0004]我國(guó)許多省市，均有發(fā)生本病的報(bào)道，已給養(yǎng)禽業(yè)造成多方面的損失。1980年張澤紀(jì)首先在廣東的雛雞群中發(fā)現(xiàn)疑似AE。1982年李心平通過病理組織學(xué)確診該病。1983年畢英佐通過流行病學(xué)、病理組織學(xué)確診此病。姚大明、秦愛建、趙振華、姚永秀等相繼進(jìn)行了AEV的分離和鑒定工作及疫苗的研制與應(yīng)用試驗(yàn)。近年來(lái)遼寧、江蘇、黑龍江、河北、山東、內(nèi)蒙古、福建、上海、河南、江西、陜西等地陸續(xù)出現(xiàn)AE的報(bào)道。黃駿明等用雞腦敏感試驗(yàn)檢測(cè)了哈爾濱市17個(gè)蛋雞群，發(fā)現(xiàn)這些蛋雞群對(duì)AE的污染率為95.1%。由此可見，該病在我國(guó)是廣泛存在的。
[0005]對(duì)急性暴發(fā)AE的雛雞沒有有效的治療方法，在育成期接種疫苗，能控制種雞群在性成熟后不再發(fā)生感染，同時(shí)也能防止病毒經(jīng)蛋途徑擴(kuò)散。此外，母源抗體能保護(hù)雛雞在最易感的頭2~3周抵抗AEV感染。商品產(chǎn)蛋雞群也可以進(jìn)行免疫接種，以防止由AE引起的一過性產(chǎn)蛋下降。但活疫苗制備中最關(guān)鍵的是獲得低毒且具有免疫原性的疫苗株。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明的目的是提供一種禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株，用該弱毒疫苗株所制備的疫苗對(duì)AEV的攻擊能提供良好的免疫保護(hù)效力。
[0007]本發(fā)明的禽腦脊髓炎病毒YBF02株(禽腦脊髓炎病毒Avian Encephalomyelitisvirus),該病毒株于2013年11月08日保藏在北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為=CGMCC N0.8505。
[0008]本發(fā)明篩選的弱毒疫苗株用來(lái)制備用于預(yù)防禽腦脊髓炎的疫苗。
[0009]本發(fā)明篩選的禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株通過水平傳播感染在雞體連續(xù)傳代，均未見毒力返強(qiáng)現(xiàn)象，遺傳性穩(wěn)定，符合禽腦脊髓炎弱毒疫苗株無(wú)毒力返強(qiáng)的標(biāo)準(zhǔn)，制成的疫苗能提供有效的免疫保護(hù)，具有很好的商品化開發(fā)前景。
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明。
[0011]—、禽腦脊髓炎病毒株的選育
[0012]取患有禽腦脊髓炎雛雞的腦、胰腺和十二指腸，在無(wú)菌條件下研磨，用滅菌生理鹽水作1:5稀釋、反復(fù)凍融3次、4000rpm離心30分鐘，取上清液濾器過濾后，腦內(nèi)接種I日齡SPF雛雞10只，0.1ml/只，待出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)失調(diào)、頭頸震顫等癥狀后采血致死，無(wú)菌取病雛雞的腦、胰腺和十二指腸，在無(wú)菌條件下研磨，用滅菌生理鹽水作1:5稀釋，反復(fù)凍融3次、4000rpm離心30分鐘,取上清液作為第I代分離毒(Fl)保存?zhèn)溆?。取Fl代同上方法腦內(nèi)接種I日齡SPF雛雞傳代，制備第2代分離毒(F2)。如此連傳4代。雞胚致病性試驗(yàn)表明分離毒為一株非雞胚適應(yīng)性的禽腦脊髓炎病毒弱毒。取I日齡SPF雛雞傳代的F4代種毒，10倍稀釋后，卵黃囊接種6日齡SPF雞胚，繼續(xù)在37~38°C孵育至16日齡收毒:吸取胚液，觀察胚體活動(dòng)和發(fā)育情況，稱胚體重和腦重，檢查胚體，胚腦病變(出血，積水，萎縮等)；并取胚腦，胃，腸，胰腺，用胚`液作1:5稀釋,加雙抗,研磨，反復(fù)凍融3次，4000rpm離心30分鐘，制成懸液備用。這樣連續(xù)傳至第18代。選取作為疫苗研制的候選毒株，命名為AEVYBF02株，并于2013年11月08日保藏在北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為=CGMCC N0.8505。
[0013]二、AEV YBF02株的安全性檢測(cè)
[0014]AEV YBF02株毒種安全性試驗(yàn):分別將基礎(chǔ)種子的第5、7、10代毒種稀釋，取I~10周齡SPF雞各10只，每只刺種或口服IO4EID5tl的YBF02株病毒，觀察28日，并記錄結(jié)果。結(jié)果表明:AEV YBF02株基礎(chǔ)種子第5、7、10代毒種對(duì)I~10周齡SPF雞是安全的，無(wú)任何禽腦脊髓炎特異性癥狀，不影響生長(zhǎng)發(fā)育。
[0015]表1:毒種安全性試驗(yàn)
[0016]
【權(quán)利要求】
1.一種禽腦脊髓炎病毒，所述的禽腦脊髓炎病毒的保藏編號(hào)為:CGMCC N0.8505。
2.權(quán)利要求1所述的病毒在制備用于預(yù)防禽腦脊髓炎的疫苗中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求1所述的禽腦脊髓炎病毒，為YBF02株。
4.如權(quán)利要求1所述 的禽腦脊髓炎病毒的應(yīng)用，其特征在于，是對(duì)雛雞進(jìn)行免疫。
【文檔編號(hào)】C12N7/00GK103710314SQ201410001306
【公開日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2014年1月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月2日
【發(fā)明者】王紅, 范根成, 杜元釗 申請(qǐng)人:青島易邦生物工程有限公司