表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，屬于生物細(xì)胞【技術(shù)領(lǐng)域】。包括預(yù)處理、消化和配液，取表皮，制成若干塊表皮片，將表皮片置于消化容器中，加入消化酶，進(jìn)行動(dòng)態(tài)消化，得細(xì)胞懸液；將消化所得細(xì)胞懸液與蛋白凝膠混合，混合均勻完成配液即可噴涂在創(chuàng)面上。將本發(fā)明動(dòng)態(tài)富集方法應(yīng)用于創(chuàng)面修復(fù)，具有培養(yǎng)效率高、操作便捷、皮源利用率高等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，屬于生物細(xì)胞【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]我國燒傷的發(fā)病率為總?cè)丝诘?~10%。，每年發(fā)生燒傷者近千萬人，需住院治療的達(dá)數(shù)十萬之多，而且，嚴(yán)重?zé)齻咚劳雎屎芨?。燒傷治愈后常遺留大量疤痕，對(duì)患者的外貌、體形以及功能、心理方面都會(huì)造成負(fù)面影響。其中，大面積燒傷造成嚴(yán)重的皮膚缺失，是導(dǎo)致患者死亡的一個(gè)重要因素，皮源的解決問題的關(guān)鍵。 [0003]為了克服皮源的問題，通常是采用盡早關(guān)閉燒傷創(chuàng)面的方法，燒傷創(chuàng)面的早期關(guān)閉不僅可以挽救患者生命，也是減輕疤痕的重要手段，現(xiàn)有的技術(shù)中主要是通過微粒皮技術(shù)、培養(yǎng)表皮細(xì)胞以及Recell技術(shù)來實(shí)現(xiàn)的。
[0004](I)微粒皮技術(shù)需先從患者身下未燒傷部位取下健康的皮源，再將這有限的自體皮源使用物理方法進(jìn)行分散成盡量小的微粒，然后回植到病人的創(chuàng)面上，這種技術(shù)可將皮片擴(kuò)大10~20倍，但該方法采用物理方法將皮片粉碎，然后回植到創(chuàng)面上，移植的皮粒貼附率不高，因此，效果難以保證；
[0005](2)培養(yǎng)表皮細(xì)胞的方法需等待的時(shí)間較長，且遠(yuǎn)期療效不佳；
[0006](3) Recell技術(shù)是在靜態(tài)下通過胰酶將基底層表皮細(xì)胞進(jìn)行消化，然后利用噴霧法將混懸在林格氏液中的液態(tài)表皮細(xì)胞噴灑在創(chuàng)面，使用該技術(shù)可將皮片擴(kuò)大40~60倍，但缺陷在于，該方法需要消耗大量的高濃度消化酶，處理過程中會(huì)采用刮擦等物理方式取樣，而刮擦等物理方法會(huì)因操作者的技術(shù)熟練程度有所不同，細(xì)胞會(huì)有一定的損害，通過Recell獲取的細(xì)胞活力僅在70%左右，因此，表皮干細(xì)胞的實(shí)際獲取量難以確認(rèn)，同時(shí)，由于細(xì)胞是呈液態(tài)噴霧在受損皮膚表面，細(xì)胞發(fā)生流動(dòng)，很難保證細(xì)胞在創(chuàng)傷面的均勻分布，由此燒傷創(chuàng)面的愈合也無法保證，需要多次噴霧才能最終實(shí)現(xiàn)燒傷創(chuàng)面的恢復(fù)，延長了治療流程，且所用的整個(gè)噴霧套件目前仍以進(jìn)口設(shè)備為主，單臺(tái)的價(jià)格在1-2萬之間，治療成本相應(yīng)的也大大提聞。
[0007]有鑒于此，本發(fā)明人對(duì)怎么樣充分利用有限皮源的問題進(jìn)行深入研究，開發(fā)出一種表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，本案由此產(chǎn)生。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0008]為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明提供一種培養(yǎng)效率高、操作便捷、皮源利用率高的表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法。
[0009]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下:
[0010]表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，包括預(yù)處理、消化和配液，具體步驟為，
[0011](I)預(yù)處理:取表皮，制成若干塊表皮片；
[0012](2)消化:取步驟(1)所得表皮片置于消化容器中，加入消化酶，進(jìn)行動(dòng)態(tài)消化，得細(xì)胞懸液；[0013](3)配液:將消化所得細(xì)胞懸液與蛋白凝膠混合，混合均勻完成配液。
[0014]為實(shí)現(xiàn)更好的使用效果，上述技術(shù)方案的進(jìn)一步設(shè)置如下:
[0015]步驟(1)中，所取的表皮為斷層皮片，制得的每塊表皮片的粒徑在l_5mm。
[0016]步驟(2)中，每l-2cm2斷層皮片添加4_6ml的消化酶，所述的消化酶中主要作用成分為胰酶和EDTA，其中，胰酶在消化酶中的質(zhì)量濃度為0.25-0.5%，EDTA在消化酶中的質(zhì)量濃度為0.01-0.05% ;動(dòng)態(tài)消化是在恒溫條件下進(jìn)行的，由交替進(jìn)行的靜置和動(dòng)態(tài)兩種狀態(tài)組成，即先靜置5-7分鐘(也可稱為靜態(tài)消化)，然后進(jìn)入動(dòng)態(tài)，動(dòng)態(tài)保持3-7分鐘后，再靜置5-7分鐘后，進(jìn)入動(dòng)態(tài)，溫度控制在35-380C，優(yōu)選為36.8-37.5°C，靜置-動(dòng)態(tài)-靜置-動(dòng)態(tài)構(gòu)成一個(gè)循環(huán)，每個(gè)動(dòng)態(tài)消化過程包含2-5次該循環(huán)，動(dòng)態(tài)消化完成后進(jìn)行細(xì)胞沖刷。較優(yōu)的，斷層皮片的厚度為0.3-0.6mm的中厚皮片；動(dòng)態(tài)時(shí)確保消化容器內(nèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)速為60-300rpm，優(yōu)選轉(zhuǎn)速為180-300rpm，細(xì)胞沖刷采用的試劑為PBS、標(biāo)準(zhǔn)生理鹽水或格林氏液中的任一種，以細(xì)胞完全沖出消化容器為止。
[0017]在步驟(3)與步驟(2)之間，至少進(jìn)行一次過濾，采用目數(shù)為20-60條件下進(jìn)行過濾，去除表皮殘?jiān)?，而下層的?xì)胞液用于配液。較優(yōu)的，下層細(xì)胞液中添加抑制劑形成細(xì)胞懸液，抑制劑優(yōu)選為自體血清或大豆胰蛋白酶，每5-15ml下層細(xì)胞液中自體血清的添加1-3滴(每15滴為1ml)，大豆胰蛋白酶添加量為下層細(xì)胞液量的0.8-3倍。
[0018]步驟(3)中，蛋白凝膠優(yōu)選為纖維蛋白膠，混合過程為:分別將細(xì)胞懸液與促凝劑、纖維蛋白膠混合。較優(yōu)的，促凝劑和纖維蛋白膠先進(jìn)行預(yù)混合，再將細(xì)胞懸液和促凝劑/纖維蛋白膠灌入雙筒注射器的不同筒中，在同樣壓力作用下，細(xì)胞懸液和促凝劑/纖維蛋白膠同時(shí)擠出，混合均勻完成配液，每5-10ml纖維蛋白膠中加入1-3滴(每15滴為Iml)促凝劑，纖維蛋白膠與促凝劑的總量和細(xì)胞懸液等量。
[0019]上述技術(shù)方案中，所述的預(yù)處理、消化和配液等步驟是在表皮動(dòng)態(tài)消化儀或生物培養(yǎng)用搖床上進(jìn)行的，表皮細(xì)胞動(dòng)態(tài)消化儀包括底座，以及設(shè)置在底座上的控制面板、消化容器、過濾容器、混合容器、控制單元、加熱器、振動(dòng)器、傳感器和電源，其中，控制面板包括顯示屏和按鍵，振動(dòng)器安裝在消化容器的底部，使消化容器產(chǎn)生一定頻率的振動(dòng)；加熱器安裝在消化容器的外表面上，用于加熱消化容器內(nèi)的液體，溫度傳感器安裝在消化容器上，用于監(jiān)測(cè)消化容器的加熱溫度，上述加熱器、振動(dòng)器分別與控制單元的輸出端相連，控制面板和傳感器器分別與控制單元的輸入端相連，電源分別為控制面板、控制單元、加熱器和振動(dòng)器供電。
[0020]由于表皮細(xì)胞中除表皮干細(xì)胞外，其他細(xì)胞同樣具有增殖的功能，有助于創(chuàng)面愈合，因此，本發(fā)明的上述方案中，將全部的斷層皮片作為表皮細(xì)胞來源；整個(gè)動(dòng)態(tài)消化過程是在35-38°C恒溫條件下，采用生物搖床(實(shí)驗(yàn)過程中可選用常規(guī)的生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)用搖床，如型號(hào)為HS-100C的)、振動(dòng)器(振動(dòng)器作用與生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)用藥創(chuàng)相同，結(jié)構(gòu)不同，因而轉(zhuǎn)速也存在差異，通常需要轉(zhuǎn)換)等方式提供動(dòng)態(tài)條件，一方面可獲得更大、更多的細(xì)胞量，同時(shí)，消化酶的使用濃度和使用量也可以大大降低，消化過程在十幾分鐘內(nèi)即可完成，與常規(guī)的過夜消化方式相比，縮短了消化時(shí)間，更有利于細(xì)胞活性的保持，減少細(xì)胞損耗，采用本發(fā)明中的動(dòng)態(tài)消化技術(shù)獲得表皮細(xì)胞是一種可靠的方法，配液所得的已經(jīng)分化的表皮細(xì)胞噴涂在創(chuàng)面上，表皮細(xì)胞在創(chuàng)面通過逆分化形成表皮干細(xì)胞，促進(jìn)傷口愈合，皮源得到充分合理的利用，擴(kuò)增倍數(shù)達(dá)到100-120倍。[0021]其中，斷層皮片的定義是指皮膚的皮下組織以上的皮膚部分，包括刃厚皮片(厚度在0.3mm左右)和中厚皮片(厚度在0.3-0.6mm左右)。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0022]圖1為本發(fā)明實(shí)施例2中所用表皮細(xì)胞富集儀的俯視結(jié)構(gòu)示意圖；
[0023]圖2為本發(fā)明實(shí)施例2中所用表皮細(xì)胞富集儀的立體結(jié)構(gòu)示意圖；
[0024]圖3為采用本發(fā)明所得細(xì)胞應(yīng)用于裸鼠背部創(chuàng)面后第2周的染色結(jié)果對(duì)照(100倍顯微鏡下);
[0025]圖4為采用本發(fā)明所得細(xì)胞應(yīng)用于裸鼠背部創(chuàng)面后第3周的染色結(jié)果對(duì)照(100倍顯微鏡下);
[0026]圖5為采用本發(fā)明所得細(xì)胞應(yīng)用于裸鼠背部創(chuàng)面后第4周的染色結(jié)果對(duì)照(100倍顯微鏡下);
[0027]圖6為顯微鏡下靜態(tài)消化獲得的活的表皮細(xì)胞得到富集(100倍相差顯微鏡下)；
[0028]圖7為顯微 鏡下動(dòng)態(tài)消化獲得的成纖維細(xì)胞得到富集(100倍相差顯微鏡下)。
[0029]圖中標(biāo)號(hào):底座I ;底座上表面11 ;底座下表面12 ;操作臺(tái)13 ;控制面板2 ;顯不屏21 ;按鍵22 ;消化容器3 ;過濾容器4 ;導(dǎo)流管41 ;混合容器5 ;控制單元6 ;加熱器7 ;振動(dòng)器8 ;傳感器9 ;電源10。
【具體實(shí)施方式】
[0030]實(shí)施例1
[0031 ] 本實(shí)施例中，表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，包括預(yù)處理、消化和配液，具體步驟為，
[0032](I)預(yù)處理:取2cm2的斷層皮片，其中，斷層皮層為斷層厚度為0.3mm的中厚表皮，將斷層皮片制成直徑為2-3mm大小的表皮片；
[0033](2)消化:預(yù)處理斷層皮片的同時(shí)，通過控制面板啟動(dòng)表皮細(xì)胞富集儀，將表皮細(xì)胞富集儀預(yù)熱5-10分鐘，維持溫度在36.8-37.5°C，將步驟(1)所得表皮片置于消化容器中，加入5ml的消化酶，其中，消化酶中起催化作用的主要成分為胰酶和EDTA，消化酶中胰酶的含量為0.25% (質(zhì)量百分?jǐn)?shù))，EDTA的含量為0.01% (質(zhì)量百分?jǐn)?shù))，靜置7分鐘后，通過控制面板調(diào)整消化容器內(nèi)的表皮片的轉(zhuǎn)速(其轉(zhuǎn)速的實(shí)現(xiàn)可通過生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)用搖床實(shí)現(xiàn)，也可米用圖6_),動(dòng)態(tài)開始,動(dòng)態(tài)處理3分鐘后再靜置7分鐘，靜置-動(dòng)態(tài)_靜置_動(dòng)態(tài)形成一個(gè)循環(huán)，恒溫下循環(huán)3次后，采用PBS沖刷細(xì)胞，沖刷時(shí)長為10-30S，將細(xì)胞完全沖刷出消化容器后，終止沖刷，將得到的溶液轉(zhuǎn)移到目數(shù)為40目的過濾容器中(本實(shí)施例中過濾容器的過濾部件選用尼龍篩網(wǎng)，也可選擇同等目數(shù)的濾網(wǎng)或起到同樣作用的過濾裝置)進(jìn)行過濾，去除表皮殘?jiān)?，在過濾所得下層細(xì)胞液內(nèi)添加1-2滴自體血清或15ml大豆蛋白酶抑制劑，得細(xì)胞懸液；
[0034](3)配液:將消化所得細(xì)胞懸液與纖維蛋白膠混合，即:先將促凝劑和纖維蛋白膠進(jìn)行預(yù)混合，促凝劑的添加量為3-4滴，再將細(xì)胞懸液和促凝劑/纖維蛋白膠灌入雙筒注射器的不同筒中，在同樣壓力作用下，細(xì)胞懸液和促凝劑/纖維蛋白膠同時(shí)擠出，混合均勻完成配液，將配液所得分化表皮細(xì)胞涂覆在燒傷創(chuàng)面上，并在創(chuàng)面表面形成0.5-lmm厚的膜狀薄層即可。[0035]實(shí)施例2
[0036]本實(shí)施例與實(shí)施例1的設(shè)置和工作原理相同，區(qū)別在于:本實(shí)施例的預(yù)處理和消化等步驟是在專用設(shè)備表皮細(xì)胞動(dòng)態(tài)消化儀上進(jìn)行的，結(jié)合圖6和圖7，包括底座1，以及設(shè)置在底座I上的控制面板2、消化容器3、過濾容器4、混合容器5、控制單元6、加熱器7、振動(dòng)器8、傳感器9和電源10等，其中，控制面板2包括顯示屏21和按鍵22，在本實(shí)施例中，上述顯示屏21采用數(shù)碼管顯示，主要用于顯示溫度、振動(dòng)頻率、循環(huán)時(shí)間等參數(shù)，按鍵22包括電源啟動(dòng)按鍵和振動(dòng)開啟按鍵；振動(dòng)器8安裝在消化容器3的底部，使消化容器3產(chǎn)生一定頻率的振動(dòng)，在本實(shí)施例中，所述振動(dòng)器8采用振動(dòng)電機(jī),振動(dòng)電機(jī)的轉(zhuǎn)速范圍為1100-2500rpm，與實(shí)施例1中生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)用搖床的功能相同，均為使消化容器3內(nèi)的溶液產(chǎn)生一定頻率的震動(dòng)或晃動(dòng)；加熱器7安裝在消化容器3的外表面上，用于加熱消化容器3，使消化容器3內(nèi)的溶液保持在36.8-37.5°C之間；傳感器9安裝在消化容器3側(cè)壁的通孔上，溫度傳感器的探頭伸入溶液內(nèi)，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)消化容器3的加熱溫度，溫度傳感器9可以采用多種型號(hào)的溫度傳感器 ，目的在于能精確感應(yīng)到消化容器3內(nèi)溶液的溫度；加熱器7、振動(dòng)器8分別與控制單元6的輸出端相連，控制面板2和傳感器器9分別與控制單元6的輸入端相連，電源10分別為控制面板2、控制單元6、加熱器7和振動(dòng)器8供電，在本實(shí)施例中，上述控制單元6采用微處理器，可以選擇多個(gè)型號(hào)的微處理器，只要能實(shí)現(xiàn)上述控制功能就行；過濾容器4的上端設(shè)有過濾網(wǎng)；消化容器3、過濾容器5和混合容器6的入口部以及控制面板2分別安裝在底座I的上表面11上，底座I上表面11上進(jìn)一步設(shè)有一操作臺(tái)13，用于表皮消化前，剪切等預(yù)處理；控制單元6、電源10和振動(dòng)器8分別安裝在底座I的下表面12上，振動(dòng)器8的頂部與消化容器3的底部相接觸。
[0037]采用本實(shí)施例上述裝置進(jìn)行表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集，操作步驟如下:
[0038](I)預(yù)處理:取表皮，在表皮細(xì)胞富集儀的操作臺(tái)13上制成若干塊粒徑在l_5mm表皮片；
[0039](2)消化:啟動(dòng)表皮細(xì)胞富集儀電源10，取步驟(1)所得表皮片置于消化容器3中，加入消化酶，通過控制單元6控制振動(dòng)器8和加熱器7，進(jìn)行動(dòng)態(tài)消化，動(dòng)態(tài)消化結(jié)束后，將細(xì)胞沖出消化容器，得細(xì)胞溶液；
[0040](3)過濾:將步驟(2)所得細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)入過濾容器4進(jìn)行過濾，去除表皮殘?jiān)?，下層?xì)胞液用于配液；
[0041](4)配液:將過濾所得下層細(xì)胞液轉(zhuǎn)入混合容器，與蛋白凝膠混合，混合均勻完成配液，在本實(shí)施例中，下層細(xì)胞液中添加抑制劑形成細(xì)胞懸液，抑制劑為自體血清，蛋白凝膠為纖維蛋白膠，具體的混合過程為:促凝劑和纖維蛋白膠先進(jìn)行預(yù)混合，再將細(xì)胞懸液和促凝劑/纖維蛋白膠灌入雙筒注射器的不同筒中，在同樣壓力作用下，細(xì)胞懸液和促凝劑/纖維蛋白膠同時(shí)擠出，混合均勻完成配液。
[0042]其中涉及到的消化酶以及消化酶添加量、促凝劑、抑制劑、蛋白凝膠等參數(shù)的設(shè)置可參考實(shí)施例1中對(duì)應(yīng)的參數(shù)，本實(shí)施例振動(dòng)器的作用與實(shí)施例1中生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)用搖床作用相同，都是使消化容器3內(nèi)的溶液產(chǎn)生一定頻率的震動(dòng)或晃動(dòng)，但裝置結(jié)構(gòu)和原理與實(shí)施例1中生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)用搖床不同，故本實(shí)施例中振動(dòng)電機(jī)的轉(zhuǎn)速范圍為1100-2500rpm，具體操作中，根據(jù)表皮所選種類不同，以及處理量的差別，振動(dòng)電機(jī)的轉(zhuǎn)速可選擇為1100、1500、1800、2300和2500等不同檔位，過濾容器可選用目數(shù)為30、40、50或60，以適應(yīng)處理效果和處理目的的需求。
[0043]對(duì)上述實(shí)施例的實(shí)施效果進(jìn)行整體分析。
[0044]其中，表1為實(shí)施例1中不同消化方式時(shí)的總表皮細(xì)胞獲取量，表2為上述實(shí)施例所得不同表皮細(xì)胞遞呈組間創(chuàng)面愈合時(shí)間的比較。
[0045]表1不同消化方式的總表皮細(xì)胞獲取量(P〈0.01)
【權(quán)利要求】
1.表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，其特征在于，包括預(yù)處理、消化和配液，具體步驟為， (1)預(yù)處理:取表皮，制成若干塊表皮片； (2)消化:取步驟(1)所得表皮片置于消化容器中，加入消化酶，進(jìn)行動(dòng)態(tài)消化，得細(xì)胞懸液； (3)配液:將消化所得細(xì)胞懸液與蛋白凝膠混合，混合均勻。
2.如權(quán)利要求1所述的表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，其特征在于:步驟(1)中，所取的表皮為斷層皮片，每塊表皮片的粒徑在l_5mm。
3.如權(quán)利要求2所述的表皮細(xì)胞的富集及應(yīng)用，其特征在于:所述的斷層皮片的厚度為0.3-0.6mm的中厚皮片。
4.如權(quán)利要求1所述的表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，其特征在于:步驟(2)中，每1-2cm2斷層皮片添加4-6ml的消化酶，所述的消化酶中包括胰酶和EDTA，其中，胰酶在消化酶中的質(zhì)量濃度為0.25-0.5%，EDTA在消化酶中的質(zhì)量濃度為0.01-0.05% ;動(dòng)態(tài)消化在恒溫條件下進(jìn)行，由交替進(jìn)行的靜置和動(dòng)態(tài)兩種狀態(tài)組成，動(dòng)態(tài)消化完成后進(jìn)行細(xì)胞沖刷，獲得細(xì)胞懸液。
5.如權(quán)利要求4所述的表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，其特征在于:交替進(jìn)行的每對(duì)靜置、動(dòng)態(tài)構(gòu)成一個(gè)循環(huán)，動(dòng)態(tài)消化時(shí)，先靜置5-7分鐘，再進(jìn)入動(dòng)態(tài)，動(dòng)態(tài)保持3-7分鐘后，每個(gè)動(dòng)態(tài)消化包括2-5個(gè)循環(huán)，溫度恒定控制在35-38°C。
6.如權(quán)利要求4或5所述的表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，其特征在于:所述的動(dòng)態(tài)時(shí)確保消化容器內(nèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)速為60 -300rpm ;細(xì)胞沖刷采用的試劑為PBS、標(biāo)準(zhǔn)生理鹽水或格林氏液中的任一種，以細(xì)胞完全沖出消化容器為止。
7.如權(quán)利要求6所述的表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，其特征在于:所述的動(dòng)態(tài)時(shí)確保消化容器內(nèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)速180-300rpm。
8.如權(quán)利要求1所述的表皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)富集方法，其特征在于:步驟(3)與步驟(2)之間，至少還需進(jìn)行一次過濾，過濾的目數(shù)為20-60，去除表皮殘?jiān)?，而下層?xì)胞液中添加抑制劑，形成細(xì)胞懸液，其中，抑制劑為自體血清或大豆胰蛋白酶，每5-15ml下層細(xì)胞液中自體血清的添加1-3滴，大豆胰蛋白酶的添加量為下層細(xì)胞液的0.8-3倍。
9.如權(quán)利要求1所述的表皮細(xì)胞動(dòng)態(tài)富集方法，其特征在于，步驟(3)中，蛋白凝膠為纖維蛋白膠，細(xì)胞懸液與蛋白凝膠的混合過程為:分別將細(xì)胞懸液與促凝劑、纖維蛋白膠混合，所述的促凝劑和纖維蛋白膠先進(jìn)行預(yù)混合，每5-10ml纖維蛋白膠中添加促凝劑1-3滴，再將細(xì)胞懸液和促凝劑/纖維蛋白膠灌入雙筒注射器的不同筒中，在同樣壓力作用下，細(xì)胞懸液和促凝劑/纖維蛋白膠同時(shí)擠出，纖維蛋白膠與促凝劑的總量和細(xì)胞懸液等量，混合均勻完成配液。
10.如權(quán)利要求1所述的表皮細(xì)胞動(dòng)態(tài)富集方法，其特征在于:所述的預(yù)處理、消化和配液是在表皮動(dòng)態(tài)消化儀或生物培養(yǎng)用搖床上進(jìn)行的，表皮細(xì)胞動(dòng)態(tài)消化儀包括底座，以及設(shè)置在底座上的控制面板、消化容器、過濾容器、混合容器、控制單元、加熱器、振動(dòng)器、傳感器和電源，其中，控制面板包括顯示屏和按鍵，振動(dòng)器安裝在消化容器的底部，使消化容器產(chǎn)生一定頻率的振動(dòng)；加熱器安裝在消化容器的外表面上，用于加熱消化容器內(nèi)的液體，溫度傳感器安裝在消化容器上，用于監(jiān)測(cè)消化容器的加熱溫度，上述加熱器、振動(dòng)器分別與控制單元的輸出端相連，控制面板和傳感器器分別與控制單元的輸入端相連，電源分別為控制面板、控制單元 、加熱器和振動(dòng)器供電。
【文檔編號(hào)】C12N5/071GK103642750SQ201310613989
【公開日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月27日
【發(fā)明者】韓春茂, 胡信雷, 魯建國, 韓陽 申請(qǐng)人:紹興振德醫(yī)用敷料有限公司