一種從酵母中提取rna的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從酵母中提取RNA的方法，包括以下步驟：取13g活性干酵母，置250ml錐形瓶中，加入130ml蒸餾水，混勻，再加入1mg/ml的溶菌酶5ml，混勻，37℃水浴10-20min；倒入13gNaCl，溶解后，沸水浴1h；3500r/min離心8min，將上清倒入50ml燒杯中，調(diào)節(jié)pH，至2.0～2.5；將燒杯冰浴10min；將燒杯中物質(zhì)移入離心管中，3500r/min離心8min，棄上清，將沉淀移入10ml燒杯中，95%乙醇5～10ml洗滌；用布氏漏斗真空抽濾；干燥。采用本發(fā)明提供的RNA的提取方法，可快速、簡(jiǎn)單、高效的從酵母中提取出RNA。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種從酵母中提取RNA的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種從酵母中提取RNA的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]酵母是單細(xì)胞微生物。它屬于高等微生物的真菌類(lèi)。它和高等植物的細(xì)胞一樣，有細(xì)胞核、細(xì)胞膜、細(xì)胞壁、線(xiàn)粒體、相同的酵素和代謝途經(jīng)。酵母無(wú)害，容易生長(zhǎng)，空氣中、土壤中、水中、動(dòng)物體內(nèi)都存在酵母。有氧氣或者無(wú)氧氣都能生存。
[0003]酵母營(yíng)專(zhuān)性或兼性厭氧生活，未知專(zhuān)性厭氧的酵母，在缺乏氧氣時(shí)，發(fā)酵型的酵母通過(guò)將糖類(lèi)轉(zhuǎn)化成為二氧化碳和乙醇(俗稱(chēng)酒精)來(lái)獲取能量。[0004]在釀酒酵母測(cè)序計(jì)劃開(kāi)始之前，人們通過(guò)傳統(tǒng)的遺傳學(xué)方法已確定了酵母中編碼RNA或蛋白質(zhì)的大約2600個(gè)基因。通過(guò)對(duì)釀酒酵母的完整基因組測(cè)序，發(fā)現(xiàn)在12068kb的全基因組序列中有5885個(gè)編碼專(zhuān)一性蛋白質(zhì)的開(kāi)放閱讀框。這意味著在酵母基因組中平均每隔2kb就存在一個(gè)編碼蛋白質(zhì)的基因，即整個(gè)基因組有72%的核苷酸順序由開(kāi)放閱讀框組成。這說(shuō)明酵母基因比其它高等真核生物基因排列緊密。如在線(xiàn)蟲(chóng)基因組中，平均每隔6kb存在一個(gè)編碼蛋白質(zhì)的基因；在人類(lèi)基因組中，平均每隔30kb或更多的堿基才能發(fā)現(xiàn)一個(gè)編碼蛋白質(zhì)的基因。酵母基因組的緊密性是因?yàn)榛蜷g隔區(qū)較短與基因中內(nèi)含子稀少。酵母基因組的開(kāi)放閱讀框平均長(zhǎng)度為1450bp即483個(gè)密碼子，最長(zhǎng)的是位于ΧΠ號(hào)染色體上的一個(gè)功能未知的開(kāi)放閱讀框(4910個(gè)密碼子)，還有極少數(shù)的開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)度超過(guò)1500個(gè)密碼子。在酵母基因組中，也有編碼短蛋白的基因，例如，編碼由40個(gè)氨基酸組成的細(xì)胞質(zhì)膜蛋白脂質(zhì)的PMPl基因。此外，酵母基因組中還包含:約140個(gè)編碼RNA的基因，排列在XD號(hào)染色體的長(zhǎng)末端；40個(gè)編碼SnRNA的基因，散布于16條染色體；屬于43個(gè)家族的275個(gè)tRNA基因也廣泛分布于基因組中。表1提供了酵母基因在各染色體上分布的大致情況。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明的目的是提供了一種從酵母中提取RNA的方法，已解決現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
一種從酵母中提取RNA的方法，其特征包括以下步驟:
①取13g活性干酵母,置250ml錐形瓶中，加入130 ml蒸懼水,混勻，再加入I mg/ml的溶菌酶5 ml，混勻，37 °C水浴10-20 min ；
②倒入13g NaCl，溶解后，沸水浴I h ；
③3500r/min離心8 min,將上清倒入50 ml燒杯中，
④調(diào)節(jié)pH，至2.0~2.5 ；
⑤將燒杯冰浴10min ；
⑥將燒杯中物質(zhì)移入離心管中，3500r/min離心8 min，棄上清，將沉淀移入10 ml燒杯中，95%乙醇5~10 ml洗漆；
⑦用布氏漏斗真空抽濾；
⑧干燥。
[0007]為了達(dá)到更好的效果，進(jìn)一步改進(jìn):所述調(diào)節(jié)pH采用HC1。
[0008]進(jìn)一步，所述乙醇洗滌，采用95%的乙醇。
[0009]本發(fā)明的有益效果:采用本發(fā)明提供的RNA的提取方法，可快速、簡(jiǎn)單、高效的從酵母中提取出RNA。
【具體實(shí)施方式】
[0010]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0011]實(shí)施例1:
一種動(dòng)物細(xì)胞融合的方法， 其特征包括以下步驟: ①取13g活性干酵母,置250ml錐形瓶中，加入130 ml蒸懼水,混勻，再加入I mg/ml的溶菌酶5 ml，混勻，37 °C水浴10 min ；
②倒入13g NaCl，溶解后，沸水浴I h ；
③3500r/min離心8 min,將上清倒入50 ml燒杯中，
④調(diào)節(jié)pH,至2.0 ;
⑤將燒杯冰浴10min ；
⑥將燒杯中物質(zhì)移入離心管中，3500r/min離心8 min，棄上清，將沉淀移入10 ml燒杯中，95%乙醇5 ml洗滌；
⑦用布氏漏斗真空抽濾；
⑧干燥。
[0012]進(jìn)一步,調(diào)節(jié)pH采用HCl。
[0013]進(jìn)一步，乙醇洗滌，采用95%的乙醇。
[0014]實(shí)施例2:
一種動(dòng)物細(xì)胞融合的方法，其特征包括以下步驟:
①取13g活性干酵母,置250ml錐形瓶中，加入130 ml蒸懼水,混勻，再加入I mg/ml的溶菌酶5 ml，混勻，37 °C水浴15 min ；
②倒入13g NaCl，溶解后，沸水浴I h ；
③3500r/min離心8 min,將上清倒入50 ml燒杯中，
④調(diào)節(jié)pH,至2.3 ;
⑤將燒杯冰浴10min ；
⑥將燒杯中物質(zhì)移入離心管中，3500r/min離心8 min，棄上清，將沉淀移入10 ml燒杯中，95%乙醇8ml洗滌；
⑦用布氏漏斗真空抽濾；
⑧干燥。
[0015]進(jìn)一步,調(diào)節(jié)pH采用HCl。[0016]進(jìn)一步，乙醇洗滌，采用95%的乙醇。
[0017]實(shí)施例3:
一種動(dòng)物細(xì)胞融合的方法，其特征包括以下步驟:
①取13g活性干酵母,置250ml錐形瓶中，加入130 ml蒸懼水,混勻，再加入I mg/ml的溶菌酶5 ml，混勻，37 °C水浴20 min ；
②倒入13g NaCl，溶解后，沸水浴I h ；
③3500r/min離心8 min,將上清倒入50 ml燒杯中，
④調(diào)節(jié)pH,至2.5 ;
⑤將燒杯冰浴10min ；
⑥將燒杯中物質(zhì)移入離心管中，3500r/min離心8 min，棄上清，將沉淀移入10 ml燒杯中，95%乙醇10 ml洗滌；
⑦用布氏漏斗真空抽濾；
⑧干燥。
[0018]進(jìn)一步,調(diào)節(jié)pH采用HCl。
[0019]進(jìn)一步，乙醇洗滌，采用95%的乙醇。
[0020]實(shí)施例4:
一種動(dòng)物細(xì)胞融合的方法，其特征包括以下步驟:
取6克Nacl放入250ml錐形瓶中加入50ml的蒸懼水,加熱直至沸騰往其中加入干酵母粉12g，攪拌均勻，然后于沸水浴中提取60分鐘。再用自來(lái)水冷卻，把所得溶液分裝到8支離心管內(nèi)，以3500r/min離心12min，使提取液與菌體殘?jiān)确蛛x。將離心得到的上清液傾于小燒杯內(nèi)，并置于放有冰塊燒杯中冷卻。待溶液冷至10°C以下時(shí)，在攪拌下小心地用6mol/L HCL溶液調(diào)節(jié)pH至2.0~2.5。隨著pH值的下降，溶液中白色沉淀逐漸增加，到等電點(diǎn)時(shí)沉淀量最多(注意嚴(yán)格控制PH值)。以后再把所得溶液分裝到4支離心管中離心10分鐘。得到RNA沉淀。小心棄去上清液，取其沉淀再在真空干燥箱內(nèi)烘干。
[0021]上述雖然結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行了描述，但并非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性的勞動(dòng)即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種從酵母中提取RNA的方法，其特征包括以下步驟: ①取13g活性干酵母,置250ml錐形瓶中，加入130 ml蒸懼水,混勻，再加入I mg/ml的溶菌酶5 ml，混勻，37 °C水浴10-20 min ； ②倒入13g NaCl，溶解后，沸水浴I h ； ③3500r/min離心8 min,將上清倒入50 ml燒杯中， ④調(diào)節(jié)pH，至2.0~2.5 ； ⑤將燒杯冰浴10min ； ⑥將燒杯中物質(zhì)移入離心管中，3500r/min離心8 min，棄上清，將沉淀移入10 ml燒杯中，95%乙醇5~10 ml洗漆； ⑦用布氏漏斗真空抽濾； ⑧干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從酵母中提取RNA的方法，其特征在于:所述調(diào)節(jié)pH采用 HCl。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從酵母中提取RNA的方法，其特征在于:所述乙醇洗滌，采用95%的乙醇。
【文檔編號(hào)】C12N15/10GK103642795SQ201310592226
【公開(kāi)日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月22日
【發(fā)明者】簡(jiǎn)玉君 申請(qǐng)人:簡(jiǎn)玉君