防治棉花黃萎病的菌劑及其制備方法和它們的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種防治棉花黃萎病菌劑，該菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其中，所述菌體包括枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）、短小芽孢桿菌（Bacillus?pumilus）、蠟樣芽孢桿菌（Bacillus?cereus）、灰綠鏈霉菌（Streptomyces?viridogriseus）和熒光假單胞桿菌（Pseudomonas?fluorescens）。本發(fā)明提供的菌劑能夠有效地防治棉花黃萎病，降低棉花黃萎病大爆發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)，提高棉農(nóng)收入，具有廣闊的應(yīng)用前景。本發(fā)明還提供了所述菌劑的制備方法及該菌劑在預(yù)防棉花黃萎病中的應(yīng)用。
【專利說明】防治棉花黃萎病的菌劑及其制備方法和它們的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種菌劑及其制備方法和應(yīng)用；更確切地說，涉及一種防治棉花黃萎病的菌劑及其制備方法和它們?cè)诜乐蚊藁S萎病中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]棉花黃萎病是由大麗輪枝菌引起的一種真菌性病害，是一種危害性很大的維管束系統(tǒng)病害，由大麗輪枝菌引起的棉花黃萎病是幾乎所有棉花生產(chǎn)國(guó)棉花生產(chǎn)的主要限制因素。由于高抗黃萎病的棉花品種較少，且對(duì)黃萎病致病的機(jī)理以及棉花抗黃萎病的遺傳方式的了解還比較少，因此，目前對(duì)棉花黃萎病的防治還是以生物防治為主，但現(xiàn)有的生物菌劑對(duì)棉花黃萎病的防治效果均不夠理想，因此，迫切需要開發(fā)一種能夠有效防治棉花黃萎病的菌劑。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有生物菌劑存在的防治棉花黃萎病的效果不理想的問題，提供一種能夠有效防治棉花黃萎病的菌劑及其制備方法和它們的應(yīng)用。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)第一個(gè)發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種菌劑，該菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其中，所述菌體包括枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)、臘樣芽抱桿菌(Bacillus cereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)第二個(gè)發(fā)明目的，本發(fā)明還提供了一種菌劑的制備方法，其中，該方法包括:該方法包括:將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)、臘樣芽抱桿菌(Bacillus cereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
[0006]本發(fā)明還提供了所述的菌劑在預(yù)防棉花黃萎病中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明提供的的菌劑能夠有效防治棉花黃萎病，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0008]本發(fā)明提供了一種菌劑，該菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其中，所述菌體包括枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽抱桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽抱桿菌(Bacilluscereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonasfluorescens)。
[0009]所述菌劑中含有的菌體的量可以在很大范圍內(nèi)改變，優(yōu)選情況下，每克所述菌劑所含的總活菌數(shù)可以為1-5X101(I個(gè)。
[0010]優(yōu)選地，所述菌劑中，以所述菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-50%、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-50%、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-50%、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-50%、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-50%
[0011]更優(yōu)選地，以所述菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的25-35%、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的25-35 %、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-15 %、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-15 %、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-15%。
[0012]根據(jù)本發(fā)明，所述培養(yǎng)基的種類可以在很大范圍內(nèi)改變，可以為各種能夠用于培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、灰綠鏈霉菌、熒光假單胞桿菌的培養(yǎng)基，例如，可以為馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基和CM培養(yǎng)基中的一種或幾種，優(yōu)選為馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。上述培養(yǎng)基能夠商購(gòu)得到或者根據(jù)“微生物培養(yǎng)基手冊(cè)”(Microbiology CultureMedia Manual)的記載制備得到。例如，馬鈴薯鹿糖培養(yǎng)基(馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂15~20g，水1000mL)的制備方法可以為:將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂15~20g，加水至1000mL, 121 °C滅菌即可。[0013]本發(fā)明還提供了所述菌劑的制備方法，其中，該方法包括:將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽抱桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽抱桿菌(Bacilluscereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomyces viridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonasfluorescens)接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
[0014]根據(jù)本發(fā)明，所述培養(yǎng)的方法包括:在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽抱桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽抱桿菌(Bacilluscereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonasfluorescens)，并將分別培養(yǎng)得到的微生物按照比例混合。優(yōu)選情況下，通過在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)及培養(yǎng)后的混合，使得到的每克菌劑的總活菌數(shù)為1-5X101(I個(gè)。
[0015]在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，通過在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)及培養(yǎng)后按照比例的混合，所述混合的條件沒有特別的限制，只要能夠使得到的菌劑滿足以下條件即可:以使所述菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10_50%、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus )的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10_50%、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50% ;優(yōu)選地，以所述菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25_35%、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25-35%、蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-15%、灰綠鏈霉菌(Streptomyces viridogriseus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-15%、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-15%。
[0016]根據(jù)本發(fā)明，所述枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、灰綠鏈霉菌、熒光假單胞桿菌的菌種可以通過商購(gòu)得到，例如，中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心保藏的枯草芽孢桿菌(ACCC01659)、短小芽孢桿菌(ACCC01171)、蠟樣芽孢桿菌(ACCC05302)、灰綠鏈霉菌(ACCC41544)和熒光假單胞桿菌(ACCC10040)。
[0017]根據(jù)本發(fā)明，所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的培養(yǎng)方法沒有特別的限制為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，可以在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中接種2-5重量份的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的菌株，30°C培養(yǎng)，直至枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)的活菌數(shù)為1-5X 1O 10個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0018]所述短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的培養(yǎng)方法沒有特別的限制為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，可以在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中接種2-5重量份的短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的菌株,30°C培養(yǎng),直至短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)為1-5 X 1O 10個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0019]所述蠟樣芽孢桿菌(BaciIIus cereus)的培養(yǎng)方法沒有特別的限制，例如，可以在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中接種2-5重量份的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的菌株，30°C培養(yǎng)，直至蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為1-5X 10 10個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0020]所述灰綠鏈霉菌(Streptomyces viridogriseus)的培養(yǎng)方法沒有特別的限制，例如，可以在IO O重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中接種2 - 5重量份的灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的菌株,30 V培養(yǎng)，直至灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的活菌數(shù)為 1-5X101。個(gè) / 克的培養(yǎng)基。
[0021]所述突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的培養(yǎng)方法沒有特別的限制，例如，可以在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中接種2-5重量份的熒光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的菌株，30 °C培養(yǎng)，直至突光假單胞桿菌(Pseudomonasfluorescens)的活菌數(shù)為1_5X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0022]本發(fā)明還提供了所述的菌劑在防治棉花黃萎病中的應(yīng)用。
[0023]下面通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更進(jìn)一步的說明。
[0024]實(shí)施例1
[0025](1)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂20g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種5重量份的枯草芽孢桿菌(ACCC01659)，3(TC培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為I X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0026](2)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂20g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種3重量份的短小芽孢桿菌(ACCC01171)，30°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至短小芽孢桿菌的活菌數(shù)為IX 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0027](3)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂20g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種4重量份的蠟樣芽孢桿菌(ACCC05302)，3(TC培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至蠟樣芽孢桿菌的活菌數(shù)為I X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0028](4)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂20g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種5重量份的灰綠鏈霉菌(ACCC41544)，30°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至灰綠鏈霉菌的活菌數(shù)為IX101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0029](5)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂20g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種5重量份的熒光假單胞桿菌(ACCC10040)，3(TC培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至熒光假單胞桿菌的活菌數(shù)為IX 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0030](6)將步驟(1)至(5)中分別得到的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomyces viridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)按照比例進(jìn)行混合，使得到的菌劑中，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20%、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20 %、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20 %、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20 %、突光假單胞桿菌(Pseudomonasfluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20%，得到菌劑Al。
[0031]實(shí)施例2
[0032](I)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂15g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種4重量份的枯草芽孢桿菌(ACCC01659)，3(TC培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.8 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0033](2)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂15g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種2重量份的短小芽孢桿菌(ACCC01171)，30°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至短小芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.8 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0034](3)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂15g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種3重量份的蠟樣芽孢桿菌(ACCC05302)，3(TC培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至蠟樣芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.8 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0035](4)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂15g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種4重量份的灰綠鏈霉菌(ACCC41544)，30°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至灰綠鏈霉菌的活菌數(shù)為0.8 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0036](5)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂15g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種4重量份的熒光假單胞桿菌(ACCC10040)，3(TC培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至熒光假單胞桿菌的活菌數(shù)為0.8 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0037](6)將步驟(1)至(5)中分別得到的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽抱桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽抱桿菌(Bacillus cereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)按照比例進(jìn)行混合，使得到的菌劑中，枯草芽孢桿菌(Baci I Ius subti I i s )的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15 %、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15%、臘樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15%、灰綠鏈霉菌(Streptomyces viridogriseus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25%,得到菌劑A2。
[0038]實(shí)施例3 [0039](I)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂18g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種3重量份的枯草芽孢桿菌(ACCC01659)，3(TC培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.5 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0040](2)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂18g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種4重量份的短小芽孢桿菌(ACCC01171)，30°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至短小芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.5 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0041](3)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂18g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種2重量份的蠟樣芽孢桿菌(ACCC05302)，3(TC培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至蠟樣芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.5 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0042](4)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂18g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種2重量份的灰綠鏈霉菌(ACCC41544)，30°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至灰綠鏈霉菌的活菌數(shù)為0.5 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0043](5)在100重量份的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(將200g去皮馬鈴薯切碎，煮爛后取得土豆汁，加入20g葡萄糖或者蔗糖，加入瓊脂18g，加水至lOOOmL，121°C滅菌)中接種2重量份的熒光假單胞桿菌(ACCC10040)，3(TC培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至熒光假單胞桿菌的活菌數(shù)為0.5 X 101°個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0044](6)將步驟(1)至(5)中分別得到的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomyces viridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)按照比例進(jìn)行混合，使得到的菌劑中，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25%、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25 %、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10 %、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20 %、突光假單胞桿菌(Pseudomonasfluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20%，得到菌劑A3。
[0045]實(shí)施例4
[0046]根據(jù)與實(shí)施例3相同的方法制備菌劑A4，不同在于，將步驟(1)至(5)中分別得到的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽抱桿菌(Bacillus cereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomyces viridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)按照比例進(jìn)行混合，使得到的菌劑中，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%、臘樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10%、灰綠鏈霉菌(Streptomyces viridogriseus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15%、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15%,,得到菌劑A4。
[0047]實(shí)施例5-8
[0048]分別使用實(shí)施例1-4中制得的菌劑A1-A4對(duì)播種前的感病棉花種子進(jìn)行處理，具體步驟如下:分別取5g的菌劑混種于I公斤的脫絨棉花種子，攪拌均勻后播種于盛有滅菌土的營(yíng)養(yǎng)缽中，期間適量澆水保濕，待2周后棉花幼苗長(zhǎng)出第一片真葉，取出營(yíng)養(yǎng)缽置于含有5xl06CFU/mL的大麗輪枝菌孢子懸浮液中，3mL/株，處理后繼續(xù)培養(yǎng)4周，調(diào)查棉苗黃萎病發(fā)病率。結(jié)果表明，棉花種子經(jīng)菌劑處理后棉苗對(duì)黃萎病的抗性顯著提高，結(jié)果如下表1所示。
[0049]對(duì)比例I
[0050]根據(jù)與實(shí)施例5-8相同的方法進(jìn)行處理，不同在于沒有使用菌劑，結(jié)果如下表1所示。[0051]表1
[0052]
【權(quán)利要求】
1.一種防治棉花黃萎病的菌劑，該菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其特征在于，所述菌體包括枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌劑，其中，每克所述菌劑所含的總活菌數(shù)為1-5X101(I個(gè)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的菌劑，其中，以所述菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10_50%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菌劑，其中，以所述菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25-35%、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25-35%、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-15 %、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-15 %、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10_15%。
5.權(quán)利要求1所述的菌劑的制備方法，其特征在于，該方法包括:將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽抱桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽抱桿菌(Bacilluscereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonasfluorescens)接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
6.根據(jù)權(quán)利 要求5所述的制備方法，其中，所述接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法包括:在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、臘樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)和突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens),并將分別培養(yǎng)得到的微生物按照比例混合。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其中，通過在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)及培養(yǎng)后的混合，使得到的每克菌劑的總活菌數(shù)為1-5X101(I個(gè)，其中，以總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10_50%、短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、臘樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其中，以所述菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25-35%、短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25-35%、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-15%、灰綠鏈霉菌(Streptomycesviridogriseus)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-15%、突光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-15%。
9.權(quán)利要求1-4中的任意一項(xiàng)所述的菌劑在防治棉花黃萎病中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12R1/39GK103525742SQ201310524820
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】戴小楓, 馬雪峰, 陳捷胤, 李蕾, 孔志強(qiáng), 包郁明, 肖紅利, 徐 明, 桂月晶, 祁偉彥, 王新艷 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所