發(fā)酵培養(yǎng)基及制備方法和應(yīng)用、乳酸菌葡聚糖的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種發(fā)酵培養(yǎng)基及制備方法和應(yīng)用、乳酸菌葡聚糖的制備方法。所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法為：將番茄汁水溶液與蔗糖混合至溶解，用堿調(diào)節(jié)pH，滅菌，即可；所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的pH為5.0～10.0。所述的乳酸菌葡聚糖的制備方法為：（1）將腸膜明串珠菌（Leuconostoc?mesenteroides）發(fā)酵菌種接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，好氧培養(yǎng)，得發(fā)酵液；（2）將所述的發(fā)酵液加熱，冷卻，稀釋，離心，取上清液直接加入乙醇，靜置，收集沉淀物并溶于水，直接干燥，即可。本發(fā)明提供的發(fā)酵培養(yǎng)基來(lái)源廣泛、成本低廉、天然安全，采用該發(fā)酵培養(yǎng)基制備的葡聚糖產(chǎn)量比采用傳統(tǒng)化學(xué)合成培養(yǎng)基制備的葡聚糖的產(chǎn)量更高。
【專利說(shuō)明】發(fā)酵培養(yǎng)基及制備方法和應(yīng)用、乳酸菌葡聚糖的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種發(fā)酵培養(yǎng)基及制備方法和應(yīng)用、乳酸菌葡聚糖的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]以微生物為來(lái)源的多糖尤其是胞外多糖，是某些特定微生物(如乳酸菌、土壤桿菌、根瘤菌等)在生長(zhǎng)代謝過(guò)程中分泌到細(xì)胞壁外的一類由單一或多種單糖以糖苷鍵聚合而成的高分子化合物。其中，依附于微生物細(xì)胞壁外的多糖被稱為莢膜多糖，而粘液多糖則以滲透于生長(zhǎng)環(huán)境中的形式存在。
[0003]大量研究證實(shí)，乳酸菌胞外多糖不但可以賦予發(fā)酵乳制品特殊的風(fēng)味、改善產(chǎn)品質(zhì)地與穩(wěn)定性，還具有一定的降血脂、調(diào)節(jié)免疫和抗腫瘤等保健功能。因此，在食品添加劑(如增稠劑、乳化劑、穩(wěn)定劑等)的安全性受到廣泛關(guān)注的情況下，乳酸菌胞外多糖因?yàn)槠淞己玫陌踩院妥吭降纳砼c加工性能，在醫(yī)藥、日用化妝品和食品行業(yè)得到廣泛的應(yīng)用。
[0004]眾所周知，明串珠菌是一類高產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌，其中，腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)可以合成多種類型的葡聚糖(一種以葡萄糖為單糖組成單位，由α-1，3、α-1，4或α _1，6糖苷鍵鍵合而成的葡萄糖高分子聚合物)，其中，右旋糖苷(一種主要由葡萄糖以α-1，6糖苷鍵聚合而成的高分子葡聚糖)因具有良好的膨脹性而作為代血衆(zhòng)在醫(yī)藥工業(yè)上得到廣泛應(yīng)用。由腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)產(chǎn)生的各種葡聚糖的應(yīng)用相當(dāng)廣泛，不僅可作為食品中低熱量食品添加劑來(lái)使用，而且在醫(yī)藥領(lǐng)域還具有調(diào)節(jié)免疫、抗癌等臨床功效。
[0005]然而在目前由明串珠菌制備葡聚糖的工藝中，發(fā)酵基料的組成復(fù)雜、部分成分來(lái)源緊缺，導(dǎo)致發(fā)酵基料成本高昂；采用這些基料發(fā)酵后，在提取制備多糖的過(guò)程中，通常為了去除蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì)而加入氯仿、正丁醇、三氟三氯乙烷、三氯乙酸等有機(jī)溶劑，這些因素對(duì)商業(yè)化生產(chǎn)的成本、多糖的品質(zhì)以及多糖在食品、醫(yī)療領(lǐng)域應(yīng)用的安全性均存在不良影響。
[0006]因此，尋找一種來(lái)源廣泛、價(jià)格低廉的明串珠菌產(chǎn)糖介質(zhì)，同時(shí)提高明串珠菌發(fā)酵廣生的匍聚糖的提取效率和品質(zhì)，是明串珠菌多糖制備方法的關(guān)鍵。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于克服了現(xiàn)有技術(shù)中的葡聚糖制備工藝的發(fā)酵培養(yǎng)基成本聞、存在有機(jī)溶劑殘留等缺陷，提供了一種生廣成本低、工藝簡(jiǎn)潔、制備效率聞并能廣泛工業(yè)應(yīng)用的發(fā)酵培養(yǎng)基及制備方法和應(yīng)用、乳酸菌葡聚糖的制備方法。
[0008]本發(fā)明是通過(guò)下述技術(shù)方案來(lái)解決上述技術(shù)問(wèn)題的:
[0009]本發(fā)明提供一種發(fā)酵培養(yǎng)基，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為番茄汁蔗糖培養(yǎng)基，其包括蔗糖和番茄汁水溶液。
[0010]所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，所述的蔗糖與所述的番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比較佳地為lg: 20mL~lg: 5mL,更佳地為lg:1OmL~lg: 5mL,尤其更佳地為3g:20mL。所述的番茄汁水溶液中番茄汁的濃度較佳地為20%~100%，更佳地為100%，所述的百分比為體積百分比。
[0011]本發(fā)明還提供所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的制備方法。該制備方法包括下述步驟:將番茄汁水溶液與蔗糖混合至溶解，用堿調(diào)節(jié)pH，滅菌，即可；所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的pH 為 5.0 ~10.0。
[0012]所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的pH較佳地為6.0~10.0，更佳地為7.0。用堿調(diào)節(jié)前，番茄汁水溶液與蔗糖的混合液的PH —般為4.3~4.5。所述的溶解為本領(lǐng)域常規(guī)操作，較佳地為先加熱后冷卻。
[0013]其中，所述的番茄汁水溶液中的番茄汁采用本領(lǐng)域常規(guī)制備方法制得，一般包括如下步驟:將成熟番茄洗凈、去皮后，進(jìn)行機(jī)械破碎，分離，取上清液，即可。
[0014]所述的分離為本領(lǐng)域常規(guī)分離技術(shù)，較佳地為過(guò)濾、抽濾和離心中的一種或多種；其中，所述的過(guò)濾的介質(zhì)為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為多層紗布或無(wú)紡布；所述的離心為本領(lǐng)域常規(guī)操作，較佳地為2000g~3000g，IOmin~20min離心。
[0015]所述的堿為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為食品級(jí)堿，更佳地為Na2C03、NaHC03和NaOH中的一種或多種。所述的滅菌為本領(lǐng)域常規(guī)操作，所述的滅菌的溫度較佳地為95°C~125°C;所述的滅菌的時(shí)間較佳地為5min~30min。
[0016]按照上述方法制得的番茄汁的主要理化指標(biāo)為:固形物含量3.28g/100mL~
4.04g/100mL，灰分 0.46g/100mL ~0.59g/100mL，蛋白質(zhì) 0.39g/100mL ~0.52g/100mL，月旨肪 0.014g/100mL ~0.020g/100mL，碳水化合物 2.42g/100mL ~2.88g/100mL。
[0017]本發(fā)明還提供所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基在制備乳酸菌葡聚糖中的應(yīng)用。
[0018]本發(fā)明還提供了一種乳酸菌葡聚糖的制備方法，其包括如下步驟:
[0019](I)將腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)發(fā)酵菌種接種于前述番爺汁蔗糖培養(yǎng)基中，好氧培養(yǎng)，得發(fā)酵液；
[0020](2)將所述的發(fā)酵液加熱，冷卻，稀釋，離心，取上清液直接加入乙醇，靜置，收集沉淀物并溶于水，直接干燥，即可。
[0021]步驟(I)中,所述的發(fā)酵菌種為常規(guī)腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)菌種，較佳地為腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) LM57、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) LM79、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) LD106和保藏號(hào)為 CGMCC N0.6432 的腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) BD1710中的一種或多種，更佳地為保藏號(hào)為CGMCC N0.6432的腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)BD1710。
[0022]步驟(I)中，在所述的接種時(shí)，所述的發(fā)酵菌種一般以種子液的形式接種，其中活菌數(shù)一般為 1.0XlO9 ~3.0X 109CFU/mL。
[0023]步驟(I)中，所述的接種為本領(lǐng)域常規(guī)操作，所述的發(fā)酵菌種的接種量較佳地為0.5%~4.0%，更佳地為2.0%~4.0%，尤其更佳地為2.0%，所述的百分比為種子液占番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的體積百分比。
[0024]步驟(I)中，所述的好氧培養(yǎng)為本領(lǐng)域常規(guī)操作。所述的好氧培養(yǎng)的溫度較佳地為25°C~34°C，更佳地為25°C~31 °C，尤其更佳地為28°C。所述的好氧培養(yǎng)的時(shí)間較佳地為24h~54h，更佳地為30h~54h，尤其更佳地為48h。所述的好氧培養(yǎng)的方式較佳地為搖床培養(yǎng)或發(fā)酵罐通氣培養(yǎng)。
[0025]步驟(2)中，所述的加熱和冷卻為本領(lǐng)域常規(guī)操作，所述的加熱的溫度較佳地為95°C~100°C ;所述的加熱的時(shí)間較佳地為IOmin~30min ;所述的冷卻的終溫較佳地為15?~25?。 [0026]步驟(2)中，所述的稀釋的稀釋劑為本領(lǐng)域常規(guī)使用的稀釋劑，較佳地為無(wú)菌水。所述的無(wú)菌水與所述的發(fā)酵液的體積比較佳地為3:1~5:1。所述的離心為本領(lǐng)域常規(guī)操作，較佳地為7000g~13000g, IOmin~20min離心。
[0027]步驟(2)中，所述的乙醇的濃度較佳地為80%~100%，所述的百分比為體積百分t匕。所述的乙醇與所述的上清液的體積比較佳地為2:1~4:1。所述的靜置為本領(lǐng)域常規(guī)操作，所述的靜置的時(shí)間較佳地為4h~24h。所述的干燥為本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)，較佳地為直接冷凍干燥、在溫度不超過(guò)115°C下干燥或真空冷凍干燥。
[0028]按照本發(fā)明的制備方法制得的乳酸菌葡聚糖，其主要理化指標(biāo)為:水分
0.89g/100g ~2.19g/100g,灰分 0.19g/100g ~0.26g/100g,蛋白質(zhì) 0.68g/100g ~
0.79g/100g，碳水化合物 96.87g/100g ~98.13g/100g。
[0029]在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。
[0030]本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0031]本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于:本發(fā)明提供的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的來(lái)源廣泛、成本低廉、天然安全，而且經(jīng)腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)發(fā)酵菌種發(fā)酵后獲得的葡聚糖產(chǎn)量比采用傳統(tǒng)化學(xué)合成培養(yǎng)基制備的葡聚糖的產(chǎn)量更高。本發(fā)明的制備方法克服了傳統(tǒng)葡聚糖制備工藝中加入三氯乙酸等有機(jī)溶劑去蛋白所導(dǎo)致的殘留困擾，其可作為一種新型的葡聚糖制備方法應(yīng)用于科研、食品、制藥和相關(guān)領(lǐng)域中，應(yīng)用前景十分廣闊。
【專利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0032]圖1為28°C、180rpm的好氧條件下，不同接種量下乳酸菌葡聚糖產(chǎn)量的檢測(cè)結(jié)果示意圖。
[0033]圖2為28°C、ISOrpm的好氧條件下，發(fā)酵液的pH不同時(shí)乳酸菌葡聚糖產(chǎn)量的檢測(cè)
結(jié)果示意圖。
[0034]圖3為28°C、ISOrpm的好氧條件下，不同番茄汁濃度下乳酸菌葡聚糖產(chǎn)量的檢測(cè)結(jié)果示意圖。
[0035]圖4為28°C、ISOrpm的好氧條件下，不同蔗糖濃度下乳酸菌葡聚糖產(chǎn)量的檢測(cè)結(jié)果示意圖。
[0036]圖5為ISOrpm的好氧條件下，不同發(fā)酵溫度下乳酸菌葡聚糖產(chǎn)量的檢測(cè)結(jié)果示意圖。
[0037]圖6為乳酸菌葡聚糖糖基組成的色譜圖。
[0038]圖7為最佳條件下腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)BD1710在番爺汁蔗糖培養(yǎng)基和化學(xué)合成培養(yǎng)基中的產(chǎn)糖能力示意圖。
【具體實(shí)施方式】[0039]下面通過(guò)實(shí)施例的方式進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說(shuō)明書(shū)選擇。[0040]本發(fā)明中所述的室溫是指進(jìn)行試驗(yàn)的操作間的溫度，一般為25°C。所述的發(fā)酵菌種為保藏號(hào)為CGMCC N0.6432的腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)BD1710,或丹尼克斯(中國(guó))有限公司提供的腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) LM57、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)LM79、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)LD106中的一種。
[0041]下述實(shí)施例中:
[0042]番茄汁的制備:將成熟番茄清洗、去皮后，進(jìn)行機(jī)械破碎，分離，取上清液，即可。其中，實(shí)施例1中的分離為多層紗布過(guò)濾，實(shí)施例2~6中的分離為抽濾，實(shí)施例7~10中的分離為2000g，20min離心。
[0043]發(fā)酵菌種(種子液)的制備:將腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)BD1710的凍干粉以少量無(wú)菌蒸餾水溶解，用接種環(huán)挑取一環(huán)劃線于M17蔗糖培養(yǎng)基(以5%(w/v)蔗糖取代M17培養(yǎng)基中0.5% (w/v)的乳糖，0X0IDLTD.，英國(guó))上，28°C好氧培養(yǎng)24h后取出，用接種環(huán)挑取單菌落放入ImL M17蔗糖培養(yǎng)基中，運(yùn)用渦旋震蕩器將菌落均勻分散于該液體培養(yǎng)基內(nèi)，28°C、180rpm搖床培養(yǎng)24h后取出，以2%( v/v)接種量接種于50mL上述M17鹿糖培養(yǎng)基中，再置于28°C、180rpm搖床培養(yǎng)24h,即可。腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) LM57、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) LM79、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) LD106的種子液的制備過(guò)程同上。
[0044]化學(xué)合成培養(yǎng)基的制備:將蛋白胨10g、酵母抽提物5g、蔗糖150g、K2HP0420g、MgSO4.7Η200.2g、MnSO40.01g、NaCl0.01g、CaCl20.02g、FeSO40.0lg 與 IL 蒸餾水均勻混合，充分溶解后，以堿調(diào)節(jié)pH至7.0,在100°C下滅菌IOmin,即可。
[0045]實(shí)施例1
[0046]將發(fā)酵菌種腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) BD1710 分別按 0.5%、
1.0%、2.0%、4.0%的接種量(所述的百分比為體積百分比)接入番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，所述的蔗糖與所述的番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為3g:20mL，所述的番茄汁水溶液中番茄汁的濃度為100%，？!1為7.0，281:、180印111搖床培養(yǎng)，并在不同的好氧培養(yǎng)時(shí)間下，取發(fā)酵液制備葡聚糖并稱重，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。
[0047]從圖1可以看出，接種量為0.5% (v/v)的發(fā)酵液中葡聚糖含量為0.05g/L~29.84g/L，接種量為1.0% (v/v)的發(fā)酵液中葡聚糖含量為0.07g/L~30.50g/L，接種量為
2.0% (v/v)的發(fā)酵液中葡聚糖含量為0.12g/L~32.15g/L，接種量為4.0% (v/v)的發(fā)酵液中葡聚糖含量為0.13g/L~31.90g/L。由此可見(jiàn)，接種量較佳地為2.0% (v/v)~4.0%(v/v)，更佳的是2.0% (v/v)。發(fā)酵時(shí)間較佳地為30h~54h，更佳地為48h。
[0048]實(shí)施例2
[0049]將發(fā)酵菌種腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) BD1710 以 2.0% (v/v)的接種量分別接入初始PH為5.0,6.0,7.0,8.0,9.0、10.0的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，所述的蔗糖與所述的番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為3g:20mL，所述的番茄汁水溶液中番茄汁的濃度為100%,28°C、180rpm搖床培養(yǎng)48h后取發(fā)酵液,制備葡聚糖并稱重,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。[0050]從圖2可以看出，采用初始pH為5.0的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基發(fā)酵時(shí)葡聚糖含量為
7.20g/L，采用初始pH為6.0的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基發(fā)酵時(shí)葡聚糖含量為26.72g/L，采用初始pH為7.0的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基發(fā)酵時(shí)葡聚糖含量為32.15g/L，采用初始pH為8.0的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基發(fā)酵時(shí)葡聚糖含量為26.00g/L，采用初始pH為9.0的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基發(fā)酵時(shí)葡聚糖含量為25.30g/L，采用初始pH為10.0的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基發(fā)酵時(shí)葡聚糖含量為24.80g/L。由此可見(jiàn)，番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的初始pH較佳地為6.0~10.0，更佳的是7.0。
[0051]實(shí)施例3
[0052]將發(fā)酵菌種腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) BDl7IO 以 2.0% (v/v)的接種量分別接入番茄汁濃度為20%、40%、60%、80%、100% (v/v)，蔗糖與番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為3g:20mL，初始pH為7.0的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，28°C、180rpm搖床培養(yǎng)48h后取發(fā)酵液，制備葡聚糖并稱重，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3。
[0053]從圖3可以看出，采用番茄汁的濃度為20% (v/v)的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基時(shí)葡聚糖含量為5.00g/L，采用番茄汁的濃度為40% (v/v)的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基時(shí)葡聚糖含量為
10.60g/L，采用番茄汁的濃度為60% (v/v)的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基時(shí)葡聚糖含量為14.40g/L，采用番茄汁的濃度為80% (v/v)的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基時(shí)葡聚糖含量為18.40g/L，采用番茄汁的濃度為100% (v/v)的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基時(shí)葡聚糖含量為32.15g/L。由此可見(jiàn)，番茄汁濃度較佳地為100% (v/v)。
[0054]實(shí)施例4
[0055]將發(fā)酵菌種腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) BD1710 以 2.0% (v/v)的接種量接入蔗糖與番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比分別為lg:20mL (以5.0%表示)、lg:1OmL(以10.0%表示)、3g:20mL (以 15.0%表示)、lg: 5mL (以20.0%表示)，番茄汁的濃度為100%,pH為7.0的番爺汁鹿糖培養(yǎng)基中，28°C、180rpm搖床培養(yǎng),并于不同的好氧培養(yǎng)時(shí)間下,取發(fā)酵液，制備葡聚糖并稱重，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖4。
[0056]從圖4可以看出，采用蔗糖與番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為lg:20mL的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基時(shí)葡聚糖含量為0.02g/L~18.90g/L，采用蔗糖與番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為lg:1OmL的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基時(shí)葡聚糖含量為0.04g/L~29.10g/L，采用蔗糖與番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為3g:20mL的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基時(shí)葡聚糖含量為0.03g/L~32.15g/L，采用蔗糖與番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為lg:5mL的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基時(shí)葡聚糖含量為0.04g/L~29.80g/L。由此可見(jiàn)，蔗糖與番茄汁水溶液的質(zhì)量體積較佳地為lg:1OmL~lg:5mL,更佳地為 3g:20mL。
[0057]實(shí)施例5
[0058]將發(fā)酵菌種腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) BD1710 以 2% (v/v)的接種量接入番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中蔗糖與番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為3g: 20mL，所述的番茄汁的濃度為100%，pH為7.0,分別置于25°C、28°C、31°C、34°C的好氧培養(yǎng)溫度下、轉(zhuǎn)速為ISOrpm的搖床培養(yǎng)48h發(fā)酵，取發(fā)酵液，制備葡聚糖并稱重，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖5。
[0059]從圖5可以看出，25°C的好氧培養(yǎng)條件下獲得的發(fā)酵液中葡聚糖含量為29.40g/L，28°C的好氧培養(yǎng)條件下獲得的發(fā)酵液中葡聚糖含量為32.15g/L，31°C的好氧培養(yǎng)條件下獲得的發(fā)酵液中葡聚糖含量為28.20g/L，34°C的好氧培養(yǎng)條件下獲得的發(fā)酵液中葡聚糖含量為16.72g/L。由此可見(jiàn)，好氧培養(yǎng)的溫度較佳地為25°C~31 °C，更佳的為28°C。
[0060]實(shí)施例6
[0061]將發(fā)酵菌種腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)BD1710 以 2%(v/v)接種量接入番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中蔗糖與番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為3g: 20mL，所述的番茄汁的濃度為100%，pH為7.0，28°C，并置于120rpm、180rpm、240rpm搖床培養(yǎng)48h,或以發(fā)酵罐通氣培養(yǎng)的方式控制發(fā)酵液溶氧1.0mg02/L、3.0mg02/L、5.0mgO2/L進(jìn)行好氧培養(yǎng)48h，發(fā)酵結(jié)束后取發(fā)酵液按上述方法制備葡聚糖，結(jié)果分別見(jiàn)表1和表2。
[0062]表1搖床培養(yǎng)測(cè)試結(jié)果
[0063]
【權(quán)利要求】
1.一種發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為番茄汁蔗糖培養(yǎng)基，所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基包括蔗糖和番茄汁水溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的蔗糖與所述的番茄汁水溶液的質(zhì)量體積比為lg:20mL~lg:5mL,較佳地為lg:1OmL~lg:5mL,更佳地為3g:20mL;所述的番茄汁水溶液中番茄汁的濃度為20%~100%，較佳地為100%，所述的百分比為體積百分比。
3.—種如權(quán)利要求1或2所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，其包括下述步驟:將番茄汁水溶液與蔗糖混合至溶解，用堿調(diào)節(jié)PH，滅菌，即可；所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的pH為5.0~10.0。
4.如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的pH為6.0~10.0，較佳地為7.0。
5.如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述的番茄汁水溶液中的番茄汁由下述方法制得:將成熟番茄洗凈、去皮后，進(jìn)行機(jī)械破碎，分離，取上清液，即可；所述的分離為過(guò)濾、抽濾和離心中的一種或多種；其中，所述的過(guò)濾的介質(zhì)為多層紗布或無(wú)紡布；所述的離心為2000g~3000g, IOmin~20min離心。
6.如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述的堿為食品級(jí)堿，較佳地為Na2C03、NaHC03和NaOH中的一種或多種；所述的滅菌的溫度為95°C~125°C;所述的滅菌的時(shí)間為5min~30min。
7.—種如權(quán)利要求1或2所述的發(fā)酵培養(yǎng)基在制備乳酸菌葡聚糖中的應(yīng)用。
8.一種乳酸菌葡聚糖的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟: (1)將腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)發(fā)酵菌種接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，好氧培養(yǎng)，得發(fā)酵液；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為如權(quán)利要求1或2所述的發(fā)酵培養(yǎng)基； (2)將所述的發(fā)酵液加熱，冷卻，稀釋，離心，取上清液直接加入乙醇，靜置，收集沉淀物并溶于水，直接干燥，即可。
9.如權(quán)利要求8所述的乳酸菌葡聚糖的制備方法，其特征在于，所述的發(fā)酵菌種為腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) LM57、腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) LM79、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) LD106 和保藏號(hào)為CGMCC N0.6432 的腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) BD1710 中的一種或多種；所述的發(fā)酵菌種以種子液的形式接種，其中活菌數(shù)為1.0X IO9~3.0X 109CFU/mL;所述的發(fā)酵菌種的接種量為0.5%~4.0%，較佳地為2.0%~4.0%，更佳地為2.0%，所述的百分比為種子液占發(fā)酵培養(yǎng)基的體積百分比。
10. 如權(quán)利要求8或9所述的乳酸菌葡聚糖的制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的好氧培養(yǎng)的溫度為25°C~34°C，較佳地為25 V~31°C，更佳地為28°C ;所述的好氧培養(yǎng)的時(shí)間為24h~54h，較佳地為30h~54h，更佳地為48h ;所述的好氧培養(yǎng)的方式為搖床培養(yǎng)或發(fā)酵罐通氣培養(yǎng)； 步驟(2)中，所述的加熱的溫度為95°C~100°C;所述的加熱的時(shí)間為IOmin~30min ；所述的冷卻的終溫為15°C~25°C ;所述的稀釋的稀釋劑為無(wú)菌水；所述的無(wú)菌水與所述的發(fā)酵液的體積比為3:1~5:1 ;所述的離心為7000g~13000g, IOmin~20min離心;所述的乙醇的濃度為80%~100%，所述的百分比為體積百分比；所述的乙醇與所述的上清液的體積比為2:1~4:1 ;所述的靜置的時(shí)間為4h~24h ;所述的干燥為直接冷凍干燥、在溫度不超過(guò)115°C下干燥或 真空冷凍干燥。
【文檔編號(hào)】C12R1/01GK103468611SQ201310396237
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月3日
【發(fā)明者】韓瑨, 吳正鈞, 劉振民, 郭本恒 申請(qǐng)人:光明乳業(yè)股份有限公司