異養(yǎng)小球藻的選育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種異養(yǎng)小球藻的選育方法，調(diào)節(jié)培養(yǎng)液使其pH為7—8，120℃，0.10-0.18Mp高溫滅菌30min，然后制篩選平板，再進(jìn)行異養(yǎng)小球藻的取樣篩選，最后在無菌條件下，接種小球藻于三角瓶中的無菌異養(yǎng)培養(yǎng)液中，進(jìn)行無光培養(yǎng)，震蕩轉(zhuǎn)速為200r/min，溫度為25℃，培養(yǎng)5天。培養(yǎng)過程簡單，培育時間短，藻細(xì)胞生物含量較高。
【專利說明】異養(yǎng)小球藻的選育方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于微藻培育【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及異養(yǎng)小球藻的選育方法。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]小球藻細(xì)胞內(nèi)含有豐富的葉綠素，屬于單細(xì)胞綠藻，是真核生物。小球藻中富含CGF (小球藻生長因子)，能迅速恢復(fù)機(jī)體造成的損傷，并可作為食品風(fēng)味改良劑，廣泛應(yīng)用于食品及發(fā)酵領(lǐng)域。小球藻產(chǎn)于淡水或咸水。淡水種常生長在較肥沃的水體中，有時在潮濕土壤、巖石、樹干上也能發(fā)現(xiàn)。在自然條件下水體中的個體不多，但在人工培養(yǎng)條件下能大量生長繁殖，產(chǎn)量很高，蛋白質(zhì)含量為干重的50%左右，還富含其他成分?，F(xiàn)有培育小球藻的方法比較復(fù)雜，培育時間長，且藻細(xì)胞生物含量也不高。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]為了克服現(xiàn)有【技術(shù)領(lǐng)域】存在的上述缺陷，本發(fā)明的目的在于，提供一種異養(yǎng)小球藻的選育方法，解決現(xiàn)有技術(shù)培育小球藻的方法比較復(fù)雜，培育時間長，且藻細(xì)胞生物含量也不高的問題。
[0007]本發(fā)明提供的異養(yǎng)小球藻的選育方法，包括以下步驟:
(1)調(diào)節(jié)培養(yǎng)液使其pH為7—8,120。。 ，0.10-0.18Mp高溫滅菌30min ；
(2)取滅菌后的培養(yǎng)液100ml，加入I一2g瓊脂溶解后滅菌，倒入滅過菌的培養(yǎng)皿，冷卻凝固后，制成篩選平板；
(3)取來自天然水體含有綠水的水樣，經(jīng)離心機(jī)離心后，倒去上清液，用無菌的培養(yǎng)液懸浮沉在離心管底部的細(xì)胞，然后再經(jīng)過離心后，除去上清，經(jīng)過3-5次重復(fù)，最后，將培養(yǎng)液加入離心管，使沿在底部的藻細(xì)胞懸浮，吸取藻細(xì)胞懸浮液2ml，均勻的涂在篩選平板表面，放在20-35°C的光照條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)5-10天后，在平板表面長出綠色的單克隆藻體；
(4)在無菌條件下，接種單克隆藻體于三角瓶中的無菌異養(yǎng)培養(yǎng)液中，進(jìn)行無光培養(yǎng)，震蕩轉(zhuǎn)速為200r/min，溫度為25°C，培養(yǎng)5天。
[0008]本發(fā)明提供的異養(yǎng)小球藻的選育方法，其有益效果在于，培養(yǎng)過程簡單，培育時間短，藻細(xì)胞生物含量較高。
[0009]
【具體實施方式】
[0010]下面結(jié)合一個實施例，對本發(fā)明提供的異養(yǎng)小球藻的選育方法進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0011]實施例
[0012]本實施例的異養(yǎng)小球藻的選育方法，包括以下步驟:
(1)調(diào)節(jié)培養(yǎng)液使其pH為7—8,120。。，0.10-0.18Mp高溫滅菌30min ；
(2)取滅菌后的培養(yǎng)液100ml，加入I一2g瓊脂溶解后滅菌，倒入滅過菌的培養(yǎng)皿，冷卻凝固后，制成篩選平板；
(3)取來自天然水體含有綠水的水樣，經(jīng)離心機(jī)離心后，倒去上清液，用無菌的培養(yǎng)液懸浮沉在離心管底部的細(xì)胞，然后再經(jīng)過離心后，除去上清，經(jīng)過3-5次重復(fù)，最后，將培養(yǎng)液加入離心管，使沿在底部的藻細(xì)胞懸浮，吸取藻細(xì)胞懸浮液2ml，均勻的涂在篩選平板表面，放在20-35°C的光照條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)5-10天后，在平板表面長出綠色的單克隆藻體；
(4)在無菌條件下，接種單克隆藻體于三角瓶中的無菌異養(yǎng)培養(yǎng)液中，進(jìn)行無光培養(yǎng)，震蕩轉(zhuǎn)速為200r/min，溫度為25°C，培養(yǎng)5天，藻細(xì)胞生物量達(dá)到25g/L。
【權(quán)利要求】
1.一種異養(yǎng)小球藻的選育方法，其特征在于:包括以下步驟: 一、調(diào)節(jié)培養(yǎng)液使其PH為7—8，120°C，0.10-0.18Mp高溫滅菌30min ； 二、取滅菌后的培養(yǎng)液100ml，加入I一2g瓊脂溶解后滅菌，倒入滅過菌的培養(yǎng)皿，冷卻凝固后，制成篩選平板； 三、取來自天然水體含有綠水的水樣，經(jīng)離心機(jī)離心后，倒去上清液，用無菌的培養(yǎng)液懸浮沉在離心管底部的細(xì)胞，然后再經(jīng)過離心后，除去上清，經(jīng)過3-5次重復(fù)，最后，將培養(yǎng)液加入離心管，使沿在底部的藻細(xì)胞懸浮，吸取藻細(xì)胞懸浮液2ml，均勻的涂在篩選平板表面，放在20-35°C的光照條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)5-10天后，在平板表面長出綠色的單克隆藻體； 四、在無菌條件下，接種單克隆藻體于三角瓶中的無菌異養(yǎng)培養(yǎng)液中，進(jìn)行無光培養(yǎng)，震蕩轉(zhuǎn)速為200r/min，溫度 為25°C，培養(yǎng)5天。
【文檔編號】C12N1/12GK103881914SQ201210554310
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月19日
【發(fā)明者】張述智, 夏偉, 朱紹輝, 張 浩, 王曉麗, 徐權(quán)汗, 李之詳, 許團(tuán)輝 申請人:青島中仁藥業(yè)有限公司