專利名稱：一株暗雙孢agr0073菌株及其抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株暗雙孢真菌及其抗香蕉小竇氏葉斑病的微生物制劑的制備方法和應(yīng)用，屬微生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
香蕉小竇氏葉斑病又稱煤紋病,是由半知菌亞門簇生長螺孢菌VHelminthospriumtorulosum (Syd) Ashby]侵染引起的一種香蕉生產(chǎn)上較為嚴(yán)重葉部病害之一。早在20世紀(jì)30年代初期在中美洲和南太平洋地區(qū)普遍發(fā)生，70年代我國的臺灣、廣東、海南、云南等蕉區(qū)亦普遍發(fā)現(xiàn)。主要為害葉片引起蕉葉干枯，葉片的光合作用面積明顯減少，導(dǎo)致植株早 衰，影響果實(shí)充實(shí)，可減產(chǎn)30%以上。此外，病株的果實(shí)品質(zhì)欠佳、不耐貯藏，容易腐爛。隨著國際貿(mào)易的發(fā)展，水果的遠(yuǎn)距離銷售和人員流動的增加，擴(kuò)大了病害轉(zhuǎn)播的途徑，使病害的傳播更為迅速和廣泛，也給研究者們帶來了巨大的挑戰(zhàn)。目前對香蕉小竇氏葉斑病的防治尚無有效方法。在農(nóng)業(yè)防治方面主要采用合理密植、清除園內(nèi)雜草、合理施肥等技術(shù)提高植株抗病力外，對該病的控制主要還是集中在化學(xué)藥劑防治。目前普遍采用的有銅制劑、有機(jī)硫類殺菌劑和敵力脫、抑霉唑等抑制留醇類殺菌齊U，但是施藥要求做好病害的監(jiān)測和預(yù)測預(yù)報工作，否則防效不理想，造成浪費(fèi)和對環(huán)境造成污染，提高成本，而且僅局限在小范圍內(nèi)控制病害的發(fā)生與蔓延。研究者們認(rèn)為，在探討香蕉小竇氏葉斑病發(fā)生規(guī)律的基礎(chǔ)上，研究切實(shí)有效的防治方法是當(dāng)前研究工作的重點(diǎn)。隨著病原菌生理小種的變異和抗藥性產(chǎn)生，生物防治因環(huán)境和防治成本的要求而普遍受到研究者的重視。有研究表明，從香蕉葉面上篩選到具有拮抗活性的細(xì)菌菌株，其在培養(yǎng)基條件下對香蕉小竇氏葉斑病菌表現(xiàn)出拮抗作用，但很難在香蕉葉面繁殖，防病能力有限。目前，尚無抗小竇氏葉斑病微生物制劑田間應(yīng)用的相關(guān)報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株對香蕉小竇氏葉斑病防治效果好的暗雙孢菌株及抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的1、本發(fā)明提供的一株暗雙抱菌株是暗雙抱fflW5,ae,)AGR0073 CGMCC No. 6644菌株。2、一種抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑的制備方法，其步驟如下
(I)試管種培養(yǎng)
將暗雙孢(Cbrifeft3 ffl 5ae)AGR0073 CGMCC No. 6644菌株接種到試管固體培養(yǎng)基斜面上，于28°C下培養(yǎng)120h，獲得試管種；所述的固體培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂 15g，蒸餾水 1000ml, pH 7. O ；(2)液體種子培養(yǎng)米用二角瓶搖瓶培養(yǎng)，方法是①配制液體種子培養(yǎng)基，按液體種子培養(yǎng)基配方所述的各成分及其含量混合而成液體種子培養(yǎng)基，所述的液體種子培養(yǎng)基的配方是馬鈴薯200g，蔗糖20. 0g，酵母浸膏5. Og, 蒸餾水 1000ml, pH 7. O ；②在每個三角瓶中裝入IOOml所述的液體種子培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻后接入 Icm2的試管種，28°C下于轉(zhuǎn)速為220 r · mirT1的搖床上培養(yǎng)72h得液體種子；(3)制備所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑米用二角瓶搖瓶培養(yǎng)，方法是①配制液體發(fā)酵培養(yǎng)基，按液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方所述的各成分及其含量混合而成液體發(fā)酵培養(yǎng)基，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方是馬鈴薯200g，蔗糖20. 0g，酵母浸膏5. 0g，蒸餾水 1000ml, pH 7. O ；②在每個三角瓶中裝入200ml液體發(fā)酵培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻后接入IOml步驟(2)培養(yǎng)得到的液體種子，28°C下于轉(zhuǎn)速為220 r ^mirT1的搖床上培養(yǎng)120h得發(fā)酵液；③在發(fā)酵液中加入等體積的以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計的100%丙酮，經(jīng)搖床振蕩12h后，用轉(zhuǎn)速為 4000r mirT1的離心機(jī)離心15min,取上清液并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上25°C蒸發(fā)去除丙酮,用水稀釋到原發(fā)酵液體積，即得到所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑。
3、一種抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑，所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑含有暗雙孢musae) AGR0073 CGMCC No. 6644 菌株。
4、一種抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑,按上述技術(shù)方案2所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑的制備方法制備得到。
5、上述技術(shù)方案 I 所述的暗雙抱(fflW5,ae,)AGR0073 CGMCC No. 6644 菌株在抗香蕉小竇氏葉斑病中的應(yīng)用。
6、上述技術(shù)方案3或4所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑在抗香蕉小竇氏葉斑病中的應(yīng)用。
將本發(fā)明所述的含有暗雙孢ffl 5ae)AGR0073 CGMCC No. 6644菌株的微生物制劑，采用孢子萌發(fā)抑制法、菌絲生長抑制法及盆栽活體試驗(yàn)三種方法，試驗(yàn)該制劑對香蕉小竇氏葉斑病的防治作用表明本發(fā)明所述的含有暗雙孢(Cbri/aaa W5ae)AGR0073 CGMCC No. 6644菌株的微生物制劑對香蕉小竇氏葉斑病具有顯著的離體和活體防效，防治香蕉小竇氏葉斑病效果顯著，可用于香蕉作物上小竇氏葉斑病的防治。
本發(fā)明所述的暗雙抱(Cbrt/afla musae) AGR0073 CGMCC No. 6644菌株及其抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑在孢子萌發(fā)抑制法試驗(yàn)中，對香蕉小竇氏葉斑病菌孢子的萌發(fā)抑制率達(dá)到100% ;在菌絲生長抑制法試驗(yàn)中，對香蕉小竇氏葉斑病菌菌絲生長的抑菌圈直徑平均為20.48mm (5次重復(fù))，兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明暗雙孢musae ) KGWQl , CGMCC No. 6644菌株及其抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑對香蕉小竇氏葉斑病菌生長具有很強(qiáng)的抑制活性。
盆栽活體試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明暗雙孢(Cbrt/afla musae) AGR0073 CGMCC No.6644菌株及其抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑對盆栽香蕉的小竇氏葉斑病表現(xiàn)出了顯著的防治效果，平均防治效果達(dá)到91. 71%。本發(fā)明具有原料成本低、生產(chǎn)工藝簡單、防治效果好等優(yōu)點(diǎn)，具有較好的應(yīng)用前
本發(fā)明所述的Cordana musae AGR0073 CGMCC No. 6644 菌株于 2012 年 09 月 29日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏號是CGMCCNo. 6644，該普通微生物中心地址中國北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號。
具體實(shí)施方式
·
以下各實(shí)施例所用的各種試劑均為常規(guī)試劑，這些試劑及其它試驗(yàn)材料均可從商業(yè)渠道購買到。以下各實(shí)施例無特別說明為常規(guī)方法。實(shí)施例1 暗雙孢fiMAsadAGROOTS CGMCC No. 6644 菌株的獲得、鑒定
和培養(yǎng)。1、暗雙孢CGMCC No. 6644 菌株的獲得。1.1 材料1.1來源
本發(fā)明所述的暗雙抱musae) AGR0073 CGMCC No. 6644菌株是從中國云南省西雙版納傣族自治州動臘縣動捧鎮(zhèn)一株巴西蕉(M/sa AAA Cavendish subgroup cv.Brazil)根部分離得到。1.2培養(yǎng)基
培養(yǎng)基配方:馬鈴薯200g ;蔗糖20 g ;蒸餾水1000m I ；pH7. O。1. 3 方法
樣品消毒處理預(yù)先取巴西蕉健康植株根部用自來水沖洗干凈、晾干水分后，采用以下方法進(jìn)行表面消毒0. 2%升汞消毒30s，無菌水沖洗后75%乙醇消毒60s，最后再用無菌水沖洗、晾干。所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)。分離培養(yǎng)上述巴西蕉根組織樣品經(jīng)處理完畢后，在無菌條件下，切成
0.2cmX0. 2cm片段移植于上述培養(yǎng)基內(nèi)，置于28°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。5 — IOd后，培養(yǎng)基中可見有菌落形成，挑取植物組織周圍的菌落轉(zhuǎn)接入斜面培養(yǎng)基中，經(jīng)純化后即得到內(nèi)生真菌。所述的培養(yǎng)基的制備方法是取馬鈴薯200g去皮后切成小塊，加蒸餾水IOOOmL煮沸30分鐘，過濾后得到1000ml濾液，然后加入葡萄糖20g，瓊脂15g，pH 7. O。分類鑒定采用真菌學(xué)插片培養(yǎng)方法，對分離獲得的內(nèi)生真菌進(jìn)行顯微形態(tài)特征的觀察、分類鑒定。在顯微鏡下觀察菌絲、有性或無性孢子、孢子著生狀態(tài)等形態(tài)特征，確定所分離獲得的內(nèi)生真菌的分類地位。分類檢索參照文獻(xiàn)[1、2、3、4 ]。[I]魏景超·真菌鑒定手冊[M].上海上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1979.
[2]H. L巴尼特，B. B亨特.沈崇堯譯.半知菌屬圖解[M].北京科學(xué)出版社，1977.
[3]中國科學(xué)院微生物研究所.常見與常用真菌[M].北京科學(xué)出版社，1978.
[4]邵力平，沈瑞祥，張素軒，等·真菌分類學(xué)[M]北京中國林業(yè)出版社，1984. 上述得到的內(nèi)生真菌菌株在培養(yǎng)基平板上形成不規(guī)則橘黃色菌落，氣生菌絲灰白、絨毛狀。菌落生長較慢，接種3-4天后出現(xiàn)菌落，一個月左右產(chǎn)孢；分生孢子雙胞、倒卵形，無色至淡褐色，隔膜處稍縊縮，臍點(diǎn)明顯突出，大小為(14 18. 5) μ mX (9. O 11. 5) μ m。分生孢子梗直立或微彎曲，無分枝，褐色，隔膜數(shù)個。形態(tài)鑒定結(jié)果與Cordana musae的形態(tài)相吻合。
經(jīng)上述鑒定表明所分離獲得的菌株為暗雙孢(Cbrt/afla fiMAsae),其代號定為 AGR0073，所述的Cbri/aaa musae AGR0073菌株于2012年09月29日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏號是CGMCC No. 6644，該普通微生物中心地址中國北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號。
該暗雙孢CGMCCNo. 6644 菌株的培養(yǎng)保存方法 短期培養(yǎng)保存將暗雙孢(Cbri/afla musae) KQRQQl , CGMCC No. 6644菌株接種在PDA固體斜面培養(yǎng)基上(即馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)，待菌充分生長后，棉塞部分用油·紙包扎好，移至2 — 8°C的冰箱中保藏。
長期培養(yǎng)保存將暗雙孢CGMCC No. 6644菌株接種在裝有脫脂牛乳濾紙片的安瓿管中，待菌絲長滿后，用真空泵抽氣至干，熔封后_20°C低溫保存。
實(shí)施例2 :孢子萌發(fā)抑制法試驗(yàn)1、抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑及其制備方法抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑的制備方法，其步驟如下(1)試管種培養(yǎng)將所述的暗雙孢(Cbrifeft3 ffl 5ae)AGR0073 CGMCC No. 6644菌株接種到試管固體培養(yǎng)基斜面上，于28°C下培養(yǎng)120h，獲得試管種；所述的固體培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯200g ;蔗糖 20g ;瓊脂 15g ;蒸懼水 1000ml ；pH7. O ；(2)液體種子培養(yǎng)采用500ml三角瓶搖瓶培養(yǎng)，方法是①配制液體種子培養(yǎng)基，按液體種子培養(yǎng)基配方所述的各成分及其含量混合而成液體種子培養(yǎng)基，所述的液體種子培養(yǎng)基的配方是馬鈴薯200g ;蔗糖20. Og ;酵母浸膏5. Og ； 蒸餾水 1000ml ；pH 7. O ；②在每個三角瓶中裝入IOOml所述的液體種子培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻后接入 Icm2的試管種，28°C下于轉(zhuǎn)速為220 r · mirT1的搖床上培養(yǎng)72h得液體種子；(3)制備所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑采用500ml三角瓶搖瓶培養(yǎng)，方法是①配制液體發(fā)酵培養(yǎng)基，按液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方所述的各成分及其含量混合而成液體發(fā)酵培養(yǎng)基，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方是馬鈴薯200g ;蔗糖20. Og ;酵母浸膏5. Og ;蒸餾水 1000ml ；pH 7. O ；②在每個三角瓶中裝入200ml液體發(fā)酵培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻后接入IOml步驟(2)培養(yǎng)得到的液體種子，28°C下于轉(zhuǎn)速為220 r mirT1的搖床上培養(yǎng)120h得到發(fā)酵液；③在發(fā)酵液中加入等體積的以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計的100%丙酮，經(jīng)搖床振蕩12h后，用轉(zhuǎn)速為4000 r · mirT1的離心機(jī)離心15min,取上清液并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上25°C蒸發(fā)去除丙酮,用水稀釋到原發(fā)酵液體積，即得到所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑。本發(fā)明所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑可以通過上述方法制備得到。2、制備香蕉小竇氏葉斑病菌分生孢子懸浮液
香蕉小竇氏葉斑病菌分生孢子懸浮液的制備方法及其致病菌的分離按本領(lǐng)域的常規(guī)方法，具體是在云南省元江縣的香蕉種植區(qū)采集小竇氏葉斑病典型病葉，用單孢分離法進(jìn)行病原菌的分離，并通過柯赫氏法則驗(yàn)證菌株的致病性。菌株在PDA斜面上保存，備用。將香蕉小竇氏葉斑病菌接種到培養(yǎng)基上28°C下培養(yǎng)，待菌絲長滿培養(yǎng)基后用自來水洗去氣生菌絲，于400nm日光燈照射下培養(yǎng)產(chǎn)分生孢子，2 — 3d待產(chǎn)生分生孢子后，用蒸餾水洗下分生孢子，并稀釋成濃度為在IOX 10低倍鏡下、每個視野30 - 40個分生孢子的香蕉小竇氏葉斑病分生孢子懸浮液備用。3、孢子萌發(fā)抑制試驗(yàn)
將上述制備的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑與配制好的香蕉小竇氏葉斑病菌分生孢子懸浮液等體積混合，取75 μ I加在凹玻片上，每處理5個重復(fù)，同時設(shè)清水為空白對照。在28°C下保濕培養(yǎng)24h后察看空白對照分生孢子的萌發(fā)情況，以芽管長度超過分生孢子小端直徑一半時為萌發(fā)，當(dāng)空白對照分生孢子的萌發(fā)率達(dá)到85%后，觀察抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑對香蕉小竇氏葉斑病菌分生孢子萌發(fā)的抑制情況。其中對照孢子萌發(fā)率是97. 62%，處理的5個重復(fù)的孢子萌發(fā)率均為零，按以下公式計算孢子萌發(fā)抑制率為100%。孢子萌發(fā)抑制率=(對照孢子萌發(fā)率一處理孢子萌發(fā)率)/(對照孢子萌發(fā)率)X 100% 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用含有本發(fā)明所述的暗雙孢(Cbri/aaa musae) AGR0073 CGMCC No.
6644菌株的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑對香蕉小竇氏葉斑病菌分生孢子的萌發(fā)抑制率為100%。實(shí)施例3 :菌絲生長抑制試驗(yàn)
菌絲生長抑制試驗(yàn)在內(nèi)徑為9cm的已滅菌培養(yǎng)皿中倒入IOml的水瓊脂培養(yǎng)基，水瓊脂培養(yǎng)基配方為瓊脂15g，蒸餾水1000ml，pH7. O。將實(shí)施例2制備的香蕉小竇氏葉斑病菌分生孢子懸浮液Iml與10 ml培養(yǎng)基充分混勻，倒入已盛有IOml的水瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，制成雙層帶菌培養(yǎng)基。菌絲生長抑制實(shí)驗(yàn)采用常規(guī)的杯碟法，即在每個帶菌雙層平板上放置牛津杯，在牛津杯內(nèi)加入實(shí)施例2所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑O. 2ml,以清水為空白對照，重復(fù)5個樣品，置28°C恒溫箱中培養(yǎng)72h后，用十字交叉法測量抑菌圈直徑。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)5次重復(fù)抑菌圈直徑測量結(jié)果分別為19. 40mm、21. 5 mm、20. 7 mm、19. 6mm、21. 2 mm,平均為20. 48 mm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明含有本發(fā)明所述的暗雙孢(CbrtZaaa musae)AGR0073 CGMCC No. 6644菌株的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑對香蕉小竇氏葉斑病菌的菌絲生長具有較強(qiáng)的抑制作用。實(shí)施例4溫室盆栽活體試驗(yàn)
試驗(yàn)用香蕉苗的準(zhǔn)備方法在塑料大棚中，將組培的香蕉苗洗凈根部的培養(yǎng)基后，移栽于育苗袋中，待香蕉苗長出3 4片葉(約I個月)后，再移植于直徑30cm的育苗盆中，移栽后經(jīng)常淋水保濕，每周施肥(每株2g/次復(fù)合肥溶于水中施用，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計，復(fù)合肥中的N-P2O5-K2OS 15-15-15) f 2次。待香蕉苗長出6 8片葉(約2個月)后，備用。
將實(shí)施例2所制備的本發(fā)明抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑噴施在長勢一致的上述盆栽香蕉植株上，待藥液晾干后，用懸滴法將實(shí)施例2制備的香蕉小竇氏葉斑病菌分生孢子懸浮液接種在香蕉葉片上，每株香蕉苗接種3 - 5片葉，每片葉接種10滴，同時設(shè)清水為空白對照，接種后置于28°C培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)6d后，觀察本發(fā)明抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑對香蕉葉片上香蕉小竇氏葉斑病發(fā)病的抑制情況，統(tǒng)計各處理葉片接種點(diǎn)發(fā)病率、發(fā)病嚴(yán)重度和病情指數(shù)，并計算防治效果。
藥效的計算采用下列兩公式病情指數(shù)=[〔Σ (病級葉數(shù)X代表級數(shù))〕/ (葉數(shù)總數(shù)X最高代表級值)]X 100防治效果(％)=[(對照組病情指數(shù)-處理組病情指數(shù))/對照組病情指數(shù)]X 100%實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)含有本發(fā)明所述的暗雙孢musae) AGR0073 CGMCC No. 6644菌株的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑對香蕉小竇氏葉斑病4次重復(fù)的溫室盆栽防治效果分別為92.47%、91.24%、90. 97%、92. 14%，平均為91. 71%。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明含有本發(fā)明所 述的暗雙孢musae) AGR0073 CGMCC No. 6644菌株的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑在盆栽香蕉上也表現(xiàn)出顯著的防治效果，其對香蕉小竇氏葉斑病的平均防治效果為 91. 71%，與其室內(nèi)離體抑菌效果具有較好的相關(guān)性。表明本發(fā)明所述的暗雙孢(Cbrifez7a musae)AGR0073 CGMCC No. 6644菌株及其抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑能實(shí)際應(yīng)用，對香蕉小竇氏葉斑病具有顯著的離體和活體防效，防治香蕉小竇氏葉斑病效果顯著。
權(quán)利要求
1.暗雙孢(Cbrifeft3musae) AGR0073 CGMCC No. 6644 菌株。
2.一種抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑的制備方法，其特征在于步驟如下(1)試管種培養(yǎng)將暗雙孢(Cbrifeft3 ffl 5ae)AGR0073 CGMCC No. 6644菌株接種到試管固體培養(yǎng)基斜面上，于28°C下培養(yǎng)120h，獲得試管種；所述的固體培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯200g，蔗糖20g， 瓊脂 15g，蒸餾水 1000ml, pH 7. O ；(2)液體種子培養(yǎng)米用二角瓶搖瓶培養(yǎng)，方法是①配制液體種子培養(yǎng)基，按液體種子培養(yǎng)基配方所述的各成分及其含量混合而成液體種子培養(yǎng)基，所述的液體種子培養(yǎng)基的配方是馬鈴薯200g，蔗糖20. 0g，酵母浸膏5. Og, 蒸餾水 1000ml, pH 7. O ；②在三角瓶中裝入IOOml所述的液體種子培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻后接入Icm2 的試管種，28°C下于轉(zhuǎn)速為220 r · mirT1的搖床上培養(yǎng)72h得液體種子；(3)制備所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑米用二角瓶搖瓶培養(yǎng)，方法是①配制液體發(fā)酵培養(yǎng)基，按液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方所述的各成分及其含量混合而成液體發(fā)酵培養(yǎng)基，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方是馬鈴薯200g，蔗糖20. 0g，酵母浸膏5. 0g，蒸餾水 1000ml, pH 7. O ；②在三角瓶中裝入200ml液體發(fā)酵培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻后接入IOml步驟(2)培養(yǎng)得到的液體種子，28°C下于轉(zhuǎn)速為220 r · mirT1的搖床上培養(yǎng)120h得發(fā)酵液；③在發(fā)酵液中加入等體積的以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計的100%丙酮，經(jīng)搖床振蕩12h后，用轉(zhuǎn)速為 4000r mirT1的離心機(jī)離心15min,取上清液并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上25°C蒸發(fā)去除丙酮,用水稀釋到原發(fā)酵液體積，即得到所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑。
3.一種抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑，其活性成分為權(quán)利要求1所述的暗雙孢 (.Cordana musae) KQRQQl , CGMCC No. 6644 菌株。
4.一種抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑，按權(quán)利要求2所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑的制備方法制備得到。
5.權(quán)利要求1所述的暗雙抱(CbrtZaaamusae ^) AGR0073 CGMCC No. 6644菌株在抗香蕉小竇氏葉斑病中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求3或4所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑在抗香蕉小竇氏葉斑病中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株暗雙孢AGR0073菌株及其抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑與應(yīng)用，屬微生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。所述的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑的活性成分為暗雙孢(Cordanamusae)AGR0073CGMCCNo.6644菌株。該微生物制劑可以通過試管種培養(yǎng)、菌株液體種子培養(yǎng)、菌株液體發(fā)酵培養(yǎng)得到。含有該菌株的抗香蕉小竇氏葉斑病微生物制劑對香蕉小竇氏葉斑病具有顯著的離體和活體防效，對香蕉小竇氏葉斑病菌孢子的萌發(fā)抑制率達(dá)到100%；對香蕉小竇氏葉斑病菌的抑菌圈直徑平均為20.48mm，盆栽活體試驗(yàn)結(jié)果表明對香蕉小竇氏葉斑病的平均防治效果達(dá)到91.71%。
文檔編號C12R1/645GK102994397SQ201210486198
公開日2013年3月27日 申請日期2012年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月26日
發(fā)明者楊佩文, 曾莉, 番華彩, 郭志祥, 李元廣 申請人:云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境資源研究所