專利名稱：一株可以調(diào)節(jié)人腸道菌群的益生菌及其檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株可以調(diào)節(jié)人腸道菌群的益生菌-Lactobacillus pi ant arum P8及其檢測方法。應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)每日服用該菌株可以促進(jìn)腸道中有益菌群雙歧桿菌屬，普拉梭菌屬和奇異菌屬的生長從而達(dá)到調(diào)節(jié)腸道菌群比例，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)的效果。
背景技術(shù)：
一個健康成人腸內(nèi)擁有約4，400多種微生物，其中99%微生物僅由30 40種細(xì)菌構(gòu)成，主要為擬桿菌、雙岐桿菌屬、梭狀芽胞桿菌、腸道球菌、真桿菌、梭形桿菌屬、消化鏈球菌屬、乳酸菌及埃希桿菌屬等。腸道正常微生物群定植在宿主腸道粘膜，隨宿主長期進(jìn)化過程而形成。其中一部分是特定的優(yōu)勢種群，另一部分是一般的種群。根據(jù)腸道微生物的來源可分為原籍菌、外籍菌及共生菌群。它們與宿主環(huán)境形成相互依賴、相互制約的統(tǒng)一體。在正常生理情況下，主要表現(xiàn)為有益于宿主的微生物群落，但在病理情況下，也可能表現(xiàn)為對宿主有害的微生物群落。食用含益生菌食品可達(dá)到維持胃腸健康的目的，已經(jīng)受到人們的關(guān)注。目前我國批準(zhǔn)在食品中使用的益生菌有10余種，主要是乳桿菌和雙歧桿菌。研究顯示益生菌具有多種生理保健功能包括對細(xì)胞免疫促進(jìn)作用、處理乳糖不耐癥、降低血清膽固醇，調(diào)節(jié)人體腸道菌群平衡，促進(jìn)胃腸蠕動防止便秘，幫助消化；抗過敏；合成氨基酸及維生素B族；抑制致癌物質(zhì)及其它有害微生物；促進(jìn)體內(nèi)有益菌的生長。胃腸道益生菌生理功能還有待進(jìn)一步開發(fā)，通過未來研究我們可以進(jìn)一步了解益生菌與腸道菌群在腸道的相互作用。研究者已發(fā)現(xiàn)益生菌擔(dān)負(fù)著多種重要的生理功能，有維持人體微生態(tài)平衡的作用與健康關(guān)系非常密切。然而在益生菌眾多的生理功能及功效中，最重要的功能仍然是它對人體腸道環(huán)境以及腸道功能的影響，即人們常說的“整腸作用”?！罢c作用”是指通過選擇服用功能性益生菌以及由這些功能性益生菌制作的食品，可以改善腸道微生物組成，增加腸道蠕動，減少腸道內(nèi)腐敗物質(zhì)，使排便處于理想狀態(tài)，促進(jìn)及維護(hù)腸道健康。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株可以調(diào)節(jié)人腸道菌群的益生菌及其檢測方法本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)一株可以調(diào)節(jié)人腸道菌群的益生菌，其特征在于所述益生菌(Lactobacillus pi ant arum P8)分離自內(nèi)蒙古牧民手工制作的酸奶中，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心，保藏地址北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，分類命名植物乳桿菌，保藏號=CGMCCNo. 5468，保藏日期為2011年11月18日。可以調(diào)節(jié)人腸道菌群的益生菌的檢測方法，其特征是包括下列步驟(I)糞便樣品中宏基因組DNA的提取采用液氮凍融-CTAB法取I. Og糞便樣品洗滌處理，將洗脫的菌體于1.5mL離心管中，立即置于液氮中完全凍結(jié)，取出后放入65°C水浴中融化，反復(fù)凍融3次，加O. ImL10% SDS和10. OyL 10mg/mL蛋白酶K，于37 °C恒溫?fù)u床中200r/min搖動2h，室溫下12000g離心lOmin，收集上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中；上清液與等體積的氯仿于12000g離心lOmin，吸取上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中進(jìn)行酚氯仿抽提2次，經(jīng)O. I倍體積的醋酸鈉，I倍體積的冰異丙醇沉淀總DNA，然后70%乙醇洗滌沉淀2次，回溶備用；(2)腸道優(yōu)勢菌群特異性引物設(shè)計針對雙歧桿菌屬，擬桿菌門，所裝菌屬和奇異菌屬設(shè)計合成四組特異性引物，菌體引物信息見下表
權(quán)利要求
1.一株可以調(diào)節(jié)人腸道菌群的益生菌，其特征在于所述益生菌(LactobacillusPlantarum P8)分離自內(nèi)蒙古牧民手工制作的酸奶中，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心，保藏號=CGMCC No. 5468，保藏日期為2011年11月18日。
2.可以調(diào)節(jié)人腸道菌群的益生菌的檢測方法，其特征是包括下列步驟 (1)糞便樣品中宏基因組DNA的提取 采用液氮凍融-CTAB法取I. Og糞便樣品洗滌處理，將洗脫的菌體于I. 5mL離心管中，立即置于液氮中完全凍結(jié)，取出后放入65°C水浴中融化，反復(fù)凍融3次，加O. ImL 10% SDS和10. O μ L 10mg/mL蛋白酶K，于37°C恒溫?fù)u床中200r/min搖動2h，室溫下12000g離心IOmin,收集上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中；上清液與等體積的氯仿于12000g離心IOmin,吸取上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中進(jìn)行酚氯仿抽提2次，經(jīng)O. I倍體積的醋酸鈉，I倍體積的冰異丙醇沉淀總DNA，然后70 %乙醇洗滌沉淀2次，回溶備用； (2)腸道優(yōu)勢菌群特異性引物設(shè)計 針對雙歧桿菌屬，擬桿菌門，所裝菌屬和奇異菌屬設(shè)計合成四組特異性引物，菌體引物信息見下表
全文摘要
一株可以調(diào)節(jié)人腸道菌群的益生菌，其特征在于所述益生菌(Lactobacillus plantarum P8)分離自內(nèi)蒙古牧民手工制作的酸奶中，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心，保藏號CGMCC No.5468，保藏日期為2011年11月18日。本發(fā)明還公開了其檢測方法。
文檔編號C12R1/25GK102618459SQ20121006206
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月9日
發(fā)明者張佳超, 王麗鳳, 高鵬飛 申請人:北京和美科盛生物技術(shù)有限公司