專利名稱：一種小麥胚芽活性多肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從脫脂小麥胚芽粉中提取活性多肽的方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
小麥?zhǔn)鞘澜缟献钤缭耘嗟闹参镏唬彩鞘澜缟戏N植最廣泛的糧食作物，全世界約有35%-40%的人口以小麥作為主要糧食作物。據(jù)FAO統(tǒng)計(jì)，2005年中國小麥種植面積為 38 992萬畝，平均畝產(chǎn)280公斤，總產(chǎn)量為9616萬噸，約占全國糧食作物面積的27. 5%，占全國糧食總產(chǎn)量的22. 7%，僅次于水稻占第二位重要糧食作物。我國的小麥總產(chǎn)量為世界第一位，年總產(chǎn)量約為1. 10億噸，可以開發(fā)利用的小麥胚芽潛藏量高達(dá)觀0-420萬噸，目前小麥胚芽年產(chǎn)量可達(dá)3-5萬噸。小麥胚芽又稱麥芽粉、胚芽，是咖啡色屑狀粉末。麥芽是小麥發(fā)芽及生長的器官之一，約占整個(gè)麥粒的2. 5%，是整個(gè)麥粒營養(yǎng)價(jià)值最高的部分，不僅含有豐富優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)， 脂肪，還有多種維生素和礦物質(zhì)，以及多種微量元素，被譽(yù)為“人類天然的營養(yǎng)寶庫”。小麥胚芽蛋白含量高達(dá)30%，并含有人體必需的8種氨基酸，占總氨基酸的34. 74%。而且小麥胚芽蛋白質(zhì)中氨基酸的構(gòu)成比例與FA0/WH0頒布的模式值以及大豆、牛肉、雞蛋的氨基酸構(gòu)成比例基本接近，有很好的氨基酸平衡，在營養(yǎng)學(xué)上具有重要意義。目前對(duì)于小麥胚芽的利用，主要集中在三個(gè)方面第一，大部分小麥胚芽被混入麩皮中當(dāng)作飼料來用，造成資源的極大浪費(fèi)；第二，直接加到食品中，比如；麥胚烘烤食品、湯料、休閑小食品等；第三，提取小麥胚油，現(xiàn)在還處于起步階段。脫脂后的麥胚又被用作飼料廉價(jià)出售。小麥胚芽沒有得到合理利用，主要原因是對(duì)小麥胚芽的研究開發(fā)尚停留在營養(yǎng)源水平上，對(duì)于其保健功能研究不夠深入。小麥胚芽含有豐富的不飽和脂肪酸、酶和色素，如果將其混入面粉，不僅會(huì)影響面粉色澤，不利于面粉長期儲(chǔ)存，還會(huì)影響面粉烘焙品質(zhì)。由于小麥胚芽的轉(zhuǎn)化利用的研究較少，大部分的小麥胚芽得不到充分、合理、有效的利用。目前主要的提高其附加值的利用就是制備小麥胚芽油。脫脂后的小麥胚芽則更是少有人問津。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目在于提供一種小麥胚芽活性多肽的制備方法。服用本發(fā)明的方法制備的小麥胚芽活性多肽，通過減少體內(nèi)脂肪堆積，對(duì)營養(yǎng)性肥胖具有一定的預(yù)防作用。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗(yàn)研究，最終獲得了如下技術(shù)方案 一種小麥胚芽活性多肽的制備方法，包括如下步驟
(1)將脫脂麥胚粉加水混勻，使料液比為1 :8-10，110°C滅菌l(T30min，等溫度降到50 55°C，調(diào)pH至8.0，分別按每克脫脂麥胚粉添加1000U Alcalase蛋白酶、300U風(fēng)味蛋白酶，維持5(T55°C反應(yīng)1. 2-1. 5h，快速升溫至95°C，保持10 15min，水解液冷卻到常溫后， IOOOOrpm離心15min，取上清液，得粗制多肽液；
(2)在粗制多肽液用水稀釋3倍，按脫脂麥胚粉重量的1-1.洲加入活性炭，在5(T55°C 下攪拌反應(yīng)30min，15000rpm離心15min，取上清液，得粗制脫色多肽液；
(3)將粗制脫色多肽液先后經(jīng)濾紙過濾，IOOnm微濾膜過濾，500Da納濾膜過濾，得多肽濃縮液；
(4)將大孔樹脂DA201-C用無水乙醇浸泡16h，用乙醇洗至洗出液加適量水無白色渾濁，再用去離子水洗至無乙醇味，接著用4倍體積的6%( ν/ν)鹽酸溶液浸泡池，再用去離子水洗至中性，再用4倍體積的6%(w/w)氫氧化鈉溶液浸泡2h，再用去離子水洗至中性，得到處理好的濕樹脂；
(5)將處理好的濕樹脂裝入層析柱，以步驟(3)所得的多肽濃縮液進(jìn)行上樣，上樣速度為1. Oml/min,每15min取樣，測定電導(dǎo)率以及220nm處的吸光度值A(chǔ)220，當(dāng)A220達(dá)到0. 05 時(shí)，停止上樣，換用去離子水洗，上液速度為2ml/min，直至電導(dǎo)率不再變化，換用70%(v/v) 乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，洗脫流速為2ml/min，當(dāng)A220接近0. 05時(shí)開始收集樣品，最終當(dāng)A220 不再變化，則停止收集，所得樣品經(jīng)濃縮蒸去乙醇，冷凍干燥。優(yōu)選地，所述的一種小麥胚芽活性多肽的制備方法，其中步驟(5)中將處理好的濕樹脂裝入2. 5cmX 30cm層析柱中，床體積為180ml。通過動(dòng)物試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，利用上述方法制備的小麥胚芽活性多肽在預(yù)防小鼠因高脂飼喂導(dǎo)致的肥胖方面具有顯著的作用。因此，本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種產(chǎn)品新用途，即利用上述方法制備的小麥胚芽活性多肽在制備預(yù)防營養(yǎng)性肥胖的保健品、食品或藥品中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明涉及的小麥胚芽活性多肽的制備方法具有如下優(yōu)點(diǎn)和顯著的進(jìn)步本發(fā)明以脫脂的小麥胚芽作為原料，利用復(fù)合蛋白酶酶解脫脂后的小麥胚芽，來制得活性多肽，將其作為一種活性成分添加到產(chǎn)品中，提高小麥胚芽的附加值。尤其是，本發(fā)明制備的小麥胚芽活性多肽在預(yù)防小鼠因高脂飼喂導(dǎo)致的肥胖方面具有顯著的作用，這預(yù)示著這種活性多肽可以用于制備預(yù)防營養(yǎng)性肥胖的保健品、食品或藥品。因此，本發(fā)明不僅有著較高的經(jīng)濟(jì)效益，更重要的是適應(yīng)現(xiàn)代人對(duì)營養(yǎng)保健食品的需要，對(duì)于緩解我國十分緊缺的蛋白和油脂資源，豐富我國營養(yǎng)、保健與醫(yī)療食品的種類，提高我國人民的膳食營養(yǎng)與健康水平有著十分重要的意義。
具體實(shí)施例方式以下是本發(fā)明小麥胚芽活性多肽的具體制備例和應(yīng)用例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步作描述，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于這些實(shí)施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)施例1小麥胚芽活性多肽的制備
(1)將脫脂小麥胚芽粉(本發(fā)明涉及的脫脂小麥胚芽粉為市售產(chǎn)品，蛋白質(zhì)含量30%， 由河南彌諾食品有限公司生產(chǎn)。)加水混勻，使料液比為1 :8，110°C滅菌15min，等溫度降到50 55°C，調(diào)pH至8.0，分別按每克脫脂麥胚粉添加1000U Alcalase蛋白酶、300U風(fēng)味蛋白酶，維持50 55°C反應(yīng)1. 5h，快速升溫至95°C，保持lOmin，水解液冷卻到常溫后，IOOOOrpm 離心15min，取上清液，得粗制多肽液；
(2)在粗制多肽液用水稀釋3倍，按脫脂麥胚粉重量的1.洲加入活性炭，在5(T55°C下攪拌反應(yīng)30min，15000rpm離心15min，取上清液，得粗制脫色多肽液；
(3)將粗制脫色多肽液先后經(jīng)濾紙過濾，IOOnm微濾膜過濾，500Da納濾膜過濾，得多肽濃縮液；
(4)將大孔樹脂DA201-C用無水乙醇浸泡16h，用乙醇洗至洗出液加適量水無白色渾濁，再用去離子水洗至無乙醇味，接著用4倍體積的6%( ν/ν)鹽酸溶液浸泡池，再用去離子水洗至中性，再用4倍體積的6%(w/w)氫氧化鈉溶液浸泡2h，再用去離子水洗至中性，得到處理好的濕樹脂；
(5)將處理好的濕樹脂裝入2.5cmX30cm層析柱中，床體積為180ml，以步驟(3)所得的多肽濃縮液進(jìn)行上樣，上樣速度為l.Oml/min，每15min取樣，測定電導(dǎo)率以及220nm處的吸光度值A(chǔ)220，當(dāng)A220達(dá)到0. 05時(shí)，停止上樣，換用去離子水洗，上液速度為2ml/min，直至電導(dǎo)率不再變化，換用70%(v/v)乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，洗脫流速為2ml/min，當(dāng)A220接近 0. 05時(shí)開始收集樣品，最終當(dāng)A220不再變化，則停止收集，所得樣品經(jīng)濃縮蒸去乙醇，冷凍干燥，即得。實(shí)施例2小麥胚芽活性多肽對(duì)小鼠營養(yǎng)性肥胖的影響試驗(yàn)
選用昆明種小鼠60只(雄性，體重18 22g)。將小鼠按體重隨機(jī)分為如下4組空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組、試驗(yàn)組，每組15只。各組按表1的方式進(jìn)行飼喂。
權(quán)利要求
1.一種小麥胚芽活性多肽的制備方法，包括如下步驟(1)將脫脂麥胚粉加水混勻，使料液比為1:8-10，110°C滅菌l(T30min，等溫度降到 50 55°C，調(diào)pH至8.0，分別按每克脫脂麥胚粉添加1000U Alcalase蛋白酶、300U風(fēng)味蛋白酶，維持5(T55°C反應(yīng)1. 2-1. 5h，快速升溫至95°C，保持10 15min，水解液冷卻到常溫后， IOOOOrpm離心15min，取上清液，得粗制多肽液；(2)在粗制多肽液用水稀釋3倍，按脫脂麥胚粉重量的1-1.洲加入活性炭，在5(T55°C 下攪拌反應(yīng)30min，15000rpm離心15min，取上清液，得粗制脫色多肽液；(3)將粗制脫色多肽液先后經(jīng)濾紙過濾，IOOnm微濾膜過濾，500Da納濾膜過濾，得多肽濃縮液；(4)將大孔樹脂DA201-C用無水乙醇浸泡16h，用乙醇洗至洗出液加適量水無白色渾濁，再用去離子水洗至無乙醇味，接著用4倍體積的6%( ν/ν)鹽酸溶液浸泡池，再用去離子水洗至中性，再用4倍體積的6%(w/w)氫氧化鈉溶液浸泡2h，再用去離子水洗至中性，得到處理好的濕樹脂；(5)將處理好的濕樹脂裝入層析柱，以步驟(3)所得的多肽濃縮液進(jìn)行上樣，上樣速度為1. Oml/min,每15min取樣，測定電導(dǎo)率以及220nm處的吸光度值A(chǔ)220，當(dāng)A220達(dá)到0. 05 時(shí)，停止上樣，換用去離子水洗，上液速度為2ml/min，直至電導(dǎo)率不再變化，換用70%(v/v) 乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，洗脫流速為2ml/min，當(dāng)A220接近0. 05時(shí)開始收集樣品，最終當(dāng)A220 不再變化，則停止收集，所得樣品經(jīng)濃縮蒸去乙醇，冷凍干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥胚芽活性多肽的制備方法，其特征在于將處理好的濕樹脂裝入2. 5cmX 30cm層析柱中，床體積為180ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種小麥胚芽活性多肽在制備預(yù)防營養(yǎng)性肥胖的保健品、食品或藥品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從脫脂小麥胚芽粉中提取活性多肽的方法及應(yīng)用，該方法通過復(fù)合蛋白酶對(duì)脫脂小麥胚芽粉進(jìn)行水解，得粗制多肽液，然后進(jìn)行脫色，濾紙過濾，微濾膜過濾，納濾膜過濾，得多肽濃縮液，再通過大孔樹脂柱處理得產(chǎn)品。本發(fā)明制得的活性多肽，將其作為一種活性成分添加到產(chǎn)品中，提高小麥胚芽的附加值。
文檔編號(hào)A23J1/12GK102524514SQ20121001565
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月18日
發(fā)明者吳雷, 張麗琍, 張超, 祁斌 申請(qǐng)人:安徽燕之坊食品有限公司