專利名稱：一種從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及溶栓物質(zhì)的提取，具體的說是一種從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
在現(xiàn)代社會生活中，血栓性疾病是一種常見病，常表現(xiàn)為心肌梗死、缺血性腦梗死、靜脈血栓栓塞。據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的數(shù)據(jù)顯示，心腦血管疾病已經(jīng)成為危害人類健康的第一殺手。目前，我國約有1.1億人患有高血壓、動脈硬化等心腦血管疾病，其發(fā)病具有高死亡率、高復(fù)發(fā)率、高致殘率的特點。因此，開發(fā)具有預(yù)防和治療血栓性疾病的功能食品，具有廣闊的市場前景與深遠(yuǎn)的社會意義。納豆是由黃豆經(jīng)納豆菌發(fā)酵而成的一種健康食品，其中所含豐富的納豆激酶，被公認(rèn)為是一種安全的食用血栓預(yù)防劑。它不同于目前使用的大多數(shù)以激活纖維蛋白溶酶為基礎(chǔ)的溶栓藥物，納豆激酶可直接溶解血液中的交聯(lián)形式的纖維蛋白。長期食用納豆對預(yù)防心腦血管疾病具有積極作用。此外，納豆中還富含優(yōu)質(zhì)小分子蛋白質(zhì)(多肽)、超氧化物歧化酶(S0D)、異黃酮等生理活性物質(zhì)及對人體有益的納豆菌，因而被譽為"超級健康食品"、“世界第一健康美食”等。特別是每天堅持食用100克左右的納豆對人體免疫功能、調(diào)節(jié)血脂、預(yù)防心血管疾病、增加骨密度等都能起到很好的保健作用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)的方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)的方法將原料納豆用無菌水于在40C -10°C下浸提5-8小時，而后過濾收集浸提液，將4°C -10°C的無水乙醇加入到浸提液中靜置沉淀3-5小時后離心，沉淀即為得到的納豆溶栓物質(zhì)。所述浸提時納豆與無菌水的質(zhì)量比為1: 1-3。所述無水乙醇加入到浸提液中至乙醇終濃度體積比為70-80%，靜置沉淀3-5小時。所述無水乙醇加入到浸提液中靜置沉淀后在4-10°C，以6000-10000轉(zhuǎn)/分鐘，離心8_10min，將所得沉淀凍干，即為納豆溶栓物質(zhì)。本發(fā)明所具有的優(yōu)點1.依照本發(fā)明的方法提取的溶栓物質(zhì)提取純度高，其溶栓物質(zhì)是固態(tài)發(fā)酵納豆溶栓活性的30倍；2.本發(fā)明提取方法成本低所用試劑為可回收乙醇，比傳統(tǒng)鹽析方法節(jié)約能源；3.本發(fā)明提取方法中沉淀分離容易，加入冰乙醇后抽提物以膠狀聚合物的形式析出，工業(yè)操作簡單。
圖1為本發(fā)明實施例提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，其為以尿激酶活力(UI)為橫坐標(biāo)，溶纖圈面積的對數(shù)值為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖2為本發(fā)明實施例提供的所得溶栓物質(zhì)活性示意圖。
具體實施例方式實施例1納豆為原料(購自沈陽科健生物技術(shù)有限公司)，以無菌水1:1質(zhì)量6°C浸提6小時，過濾浸提物得浸提液。將4°C的無水乙醇加入到浸提液中至乙醇體積濃度為70%。靜置沉淀3小時后在4°C，以6000轉(zhuǎn)/分鐘，離心lOmin，將所得沉淀在真空條件下凍干(真空泵條件-50到-70°C，16-24h)，即為納豆溶栓物質(zhì)。實施例2在納豆中加入無菌水1 :1質(zhì)量6°C浸提8小時，過濾浸提物得浸提液。將6°C的無水乙醇加入到浸提液中至乙醇體積濃度為80%。靜置沉淀4小時后在10°C，以10000轉(zhuǎn)/分鐘，離心8min，將所得沉淀在真空條件下凍干(真空泵條件-50到_70°C，16_24h)，即為納豆溶栓物質(zhì)。實施例3在納豆中加入無菌水2 I質(zhì)量10°C浸提5小時，過濾浸提物得浸提液。將6°C的無水乙醇加入到浸提液中至乙醇體積濃度為80%。靜置沉淀5小時后在8°C，以8000轉(zhuǎn)/分鐘，離心9min，將所得沉淀在真空條件下凍干(真空泵條件-50到_70°C，16_24h)，即為納豆溶栓物質(zhì)。實施例4在納豆中加入無菌水2 I質(zhì)量10°C浸提8小時，過濾浸提物得浸提液。將4°C的無水乙醇加入到浸提液中至乙醇體積濃度為70%。靜置沉淀5小時后在9°C，以9000轉(zhuǎn)/分鐘，離心8min，將所得沉淀在真空條件下凍干(真空泵條件-50到_70°C，16_24h)，即為納豆溶栓物質(zhì)。實施例5在納豆中加入無菌水3 I質(zhì)量4°C浸提5小時，過濾浸提物得浸提液。將10°C的無水乙醇加入到浸提液中至乙醇體積濃度為80%。靜置沉淀4小時后在6°C，以7000轉(zhuǎn)/分鐘，離心9min，將所得沉淀在真空條件下凍干(真空泵條件-50到_70°C，16_24h)，即為納豆溶栓物質(zhì)。實施例6在納豆中加入無菌水3 I質(zhì)量4°C浸提6小時，過濾浸提物得浸提液。將10°C的無水乙醇加入到浸提液中至乙醇體積濃度為70%。靜置沉淀3小時后在4°C，以6000轉(zhuǎn)/分鐘，離心9min，將所得沉淀在真空條件下凍干(真空泵條件-50到_70°C，16_24h)，即為納豆溶栓物質(zhì)。測其溶栓活性。本實施例采用瓊脂糖-纖維蛋白平板法測其溶栓活性大小，在同一纖維蛋白平白內(nèi)，點不同濃度的尿激酶各20 μ L，37°C培養(yǎng)16小時，測量溶纖圈直徑。以尿激酶活力(UI)為橫坐標(biāo)，溶纖圈面積的對數(shù)值為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(參見圖1)。將上述各實施例所得納豆溶栓物質(zhì)，點于同一纖維蛋白平板上，37°C培養(yǎng)16小時，測溶圈大小，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品的活性相對于尿激酶的單位數(shù)，以單位IU/mg表示溶栓活力(參見圖2)。
權(quán)利要求
1.一種從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)的方法，其特征在于將原料納豆用無菌水于在4°C -10°C下浸提5-8小吋，而后過濾收集浸提液，將4°C -1O0C的無水こ醇加入到浸提液中靜置沉淀3-5小時后離心，沉淀即為得到的納豆溶栓物質(zhì)。
2.按權(quán)利要求1所述的從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)的方法，其特征在于所述浸提時納豆與無菌水的質(zhì)量比為1: 1-3。
3.按權(quán)利要求1所述的從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)的方法，其特征在于所述無水こ醇加入到浸提液中至こ醇終濃度體積比為70-80%，靜置沉淀3-5小吋。
4.按權(quán)利要求1所述的從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)的方法，其特征在于所述無水こ醇加入到浸提液中靜置沉淀后在4-10°C，以6000-10000轉(zhuǎn)/分鐘，離心8-10min，將所得沉淀凍干，即為納豆溶栓物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及溶栓物質(zhì)的提取，具體的說是一種從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)的方法。將原料納豆用無菌水于在4℃-10℃下浸提5-8小時，而后過濾收集浸提液，將4℃-10℃的無水乙醇加入到浸提液中靜置沉淀3-5小時后離心，沉淀即為得到的納豆溶栓物質(zhì)。本發(fā)明通過浸提和乙醇沉淀達到從固態(tài)發(fā)酵納豆中分離溶栓物質(zhì)目的。本發(fā)明具有提取活性高、得率高、成本低和環(huán)保的優(yōu)點。
文檔編號A23L1/29GK103039966SQ20111031314
公開日2013年4月17日 申請日期2011年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月14日
發(fā)明者付煊赫, 劉曉潔, 蘇振成, 張惠文 申請人:沈陽科健生物技術(shù)有限公司