專利名稱：一種利用胰蛋白酶定向水解鵪鶉蛋清制備可溶性肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種利用胰蛋白酶定向水解鵪鶉蛋清制備可溶性肽的方法。
背景技術(shù)：
鵪鶉蛋是我國傳統(tǒng)的營養(yǎng)滋補(bǔ)類食品，其因營養(yǎng)豐富、味道鮮美而深受人們喜愛， 而且無論是蛋白質(zhì)含量還是氨基酸結(jié)構(gòu)都遠(yuǎn)優(yōu)于雞蛋。鵪鶉蛋蛋清中含人體所必須的8種必需氨基酸，尤其是含硫氨基酸較多，經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明蛋清蛋白是一種比奶酪更好的蛋白質(zhì)。過去的科學(xué)研究認(rèn)為，蛋白質(zhì)經(jīng)消化道酶促水解后，主要以氨基酸的形式被吸收。 近兩年的科學(xué)研究認(rèn)為，人體吸收蛋白質(zhì)的主要形式不是以氨基酸，而是以多肽的形式吸收的，這是人體吸收蛋白質(zhì)機(jī)制研究的重大突破。將蛋白質(zhì)以多肽形式供應(yīng)人體后具有不需消化、直接吸收、吸收快速并且百分之百被人體吸收的優(yōu)點(diǎn)。因此采用酶解工藝將鵪鶉蛋清蛋白定向水解為可溶性肽更加有利于人體的吸收。申請(qǐng)?zhí)枮?00810197415的專利申請(qǐng)文件公開了一種蛋清蛋白多肽制備工藝，該工藝步驟為
1)取若干克蛋清蛋白，加入足夠的蒸餾水，混合攪拌并研磨成均勻的蛋清蛋白漿液；
2)將上述步驟1中蛋清蛋白漿液的溫度升高至40 60°C、將蛋清蛋白漿液的PH值調(diào)節(jié)至7. 0 9. 0的范圍；再將其溫度升高至60 80°C、pH值維持在7. 0 9. 0的范圍，加入所取蛋清蛋白重量6 8%的植物蛋白水解專用酶進(jìn)行第一次酶解，在此過程中維持其溫度在40 60°C、pH值在7. 0 9. 0的范圍，持續(xù)5 7小時(shí)，得到第一次酶解液；
3)將上述步驟2中酶解液的溫度升高至70 90°C的范圍，并保持10 30分鐘，使其中的植物蛋白水解專用酶滅活，將經(jīng)過酶滅活處理的第一次酶解液的溫度降低至40 60°C、pH值維持在7. 0 9. 0的范圍，加入所取蛋清蛋白重量2 4%的B-環(huán)糊精，在此過程中維持其溫度在40 60°C、pH值在7. 0 9. 0的范圍，持續(xù)2 4小時(shí)，得到第二次己去除苦味的蛋清蛋白溶液；
4)將上述步驟3中得到的第二次己去除苦味的蛋清蛋白溶液的溫度降低至50°C以下進(jìn)行過濾處理，再靜置3 5小時(shí)得到蛋清蛋白上清液，在所得的上層清液中加入占其體積 1 3%的活性岌粉末，持續(xù)攪拌并加熱升溫至微沸，保持20 40分鐘，然后再次進(jìn)行過濾處理，得到已除去異味成份的蛋清蛋白多肽濾液；
5)將上述步驟4中得到的蛋清蛋白多肽濾液再經(jīng)過真空濃縮和干燥后，制得無苦味的的蛋清蛋白多肽粉。上述步驟通過步驟1、步驟2即可得到多肽液，步驟3、4、5是對(duì)多肽液品質(zhì)的進(jìn)一步提升及再加工，包括脫苦、去異味、生產(chǎn)多肽粉。但是該方法步驟2中提出蛋清蛋白漿液的溫度范圍值60-80°C屬于蛋白質(zhì)的可逆變性范疇，不能將蛋清蛋白或其他蛋白進(jìn)行非可逆變性，同時(shí)蛋清中的干擾蛋清蛋白降解的抑制性酶類也不能得以破壞，降低了蛋清蛋白寡肽的酶解效率；同時(shí)該申請(qǐng)文件中指出對(duì)蛋清蛋白漿液進(jìn)行酶解選用植物蛋白水解專用酶，我們知道對(duì)不同蛋白質(zhì)進(jìn)行水解，酶種類的選擇非常重要，選用不同的酶對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解效率及最終產(chǎn)品品質(zhì)都有較大區(qū)別，根據(jù)該申請(qǐng)文件不能得知何種酶可以達(dá)到最佳酶解效果。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種效率高、產(chǎn)品品質(zhì)好的定向水解鵪鶉蛋清制備可溶性肽的方法，以克服目前蛋清蛋白多肽制備工藝中效率低、步驟繁瑣的技術(shù)問題。本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種利用胰蛋白酶定向水解鵪鶉蛋清制備可溶性肽的方法，該方法包括下列步驟
A、取鵪鶉蛋蛋清，加入其重量1-5倍的水勻漿Ι-lOmin，得到鵪鶉蛋清勻漿液；
B、將步驟A得到的鵪鶉蛋清勻漿液煮沸3 5min，使其徹底變性，得鵪鶉蛋清變性液；
C、將步驟B得到的蛋清變性液離心分離，參數(shù)100(T5000r/min、時(shí)間3 15min，棄去上清液，保留沉淀溶液得鵪鶉蛋清蛋白沉淀液；
D、在步驟C得到的鵪鶉蛋清蛋白沉淀液中加入其重量3-5倍的水，加入胰蛋白酶，加酶量100-400 u/g底物，pH調(diào)至8-10，溫度為40-60°C，時(shí)間為4-6 h，得鵪鶉蛋清可溶性肽溶液。上述步驟在步驟D之后還包括將可溶性肽溶液噴霧干燥得到寡肽干粉。本發(fā)明的有益效果為步驟B通過加熱煮沸變性可使蛋清蛋白達(dá)到不可逆變性， 進(jìn)而可以通過離心與可溶性物質(zhì)達(dá)到分離；同時(shí)通過步驟B的變性及步驟C的離心分離可以使得蛋清中的干擾蛋清蛋白降解的抑制性酶類得以破壞，可以顯著提高鵪鶉蛋蛋清蛋白寡肽的酶解效率。本方法通過對(duì)多種蛋白酶的酶解效果進(jìn)行比較，采用胰蛋白酶不僅具有酶解效率高，同時(shí)酶解液不具有較重的苦味、腥味或異味，可以將酶解后的產(chǎn)物經(jīng)噴霧干燥或直接勾兌制成寡肽產(chǎn)品，不需要額外的去苦、去異味工序，進(jìn)而降低生產(chǎn)成本的目的。
附圖為7種酶進(jìn)行酶解的水解度對(duì)比圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
人工剝離鵪鶉蛋蛋皮，分離蛋清及蛋黃，將剝開的蛋黃稱重，然后裝置于樣品袋內(nèi)，放置于4°C冰箱保存；將剝開的蛋清加入其重量3倍的水勻漿5min，得鵪鶉蛋清勻漿液；將鵪鶉蛋清勻漿液煮沸變性細(xì)^，使其徹底變性，得鵪鶉蛋清變性液；將蛋清變性液離心分離，參數(shù)3000r/min、時(shí)間lOmin，棄去上清液，保留沉淀溶液得鵪鶉蛋清蛋白沉淀液，鵪鶉蛋清蛋白沉淀液若需保存放入4°C冰箱保存；鵪鶉蛋清蛋白沉淀液中加入其重量4倍的水， 加入胰蛋白酶，加酶量188 u/g底物，pH調(diào)至8，溫度為52°C，時(shí)間為5 h，得鵪鶉蛋清可溶性肽溶液。利用i^olin-酚法測定水解度，將會(huì)得到水解度為91%的可溶性肽溶液，無異味， 口感較佳、性狀良好。實(shí)施例2
人工剝離鵪鶉蛋蛋皮，分離蛋清及蛋黃，將剝開的蛋黃稱重，然后裝置于樣品袋內(nèi)，放置于4°C冰箱保存；將剝開的蛋清加5倍體積的水勻漿IOmin得鵪鶉蛋清勻漿液；將鵪鶉蛋清勻漿液煮沸變性&iiin，使其徹底變性，得鵪鶉蛋清變性液；將蛋清變性液離心分離，參數(shù)5000r/min、時(shí)間15min，棄去上清液，保留沉淀溶液得鵪鶉蛋清蛋白沉淀液，鵪鶉蛋清蛋白沉淀液若需保存放入4°C冰箱保存；鵪鶉蛋清蛋白沉淀液中加入其重量3倍的水，加入胰蛋白酶，加酶量400 u/g底物，pH調(diào)至10，溫度為60°C，時(shí)間為6 h，得鵪鶉蛋清可溶性肽溶液。利用i^olin-酚法測定水解度，將會(huì)得到水解度為91%的可溶性肽溶液，將可溶性肽溶液噴霧干燥得到寡肽干粉，提高了產(chǎn)品的可溶性，可應(yīng)用于功能性飲料及保健品等方面， 擴(kuò)大了活性肽的應(yīng)用領(lǐng)域。實(shí)施例3
人工剝離鵪鶉蛋蛋皮，分離蛋清及蛋黃，將剝開的蛋黃稱重，然后裝置于樣品袋內(nèi)，放置于4°C冰箱保存；將剝開的蛋清加入其重量1倍的水勻漿lmin，得鵪鶉蛋清勻漿液；將鵪鶉蛋清勻漿液煮沸變性:3min，使其徹底變性，得鵪鶉蛋清變性液；將蛋清變性液離心分離，參數(shù)lOOOr/min、時(shí)間3min，棄去上清液，保留沉淀溶液得鵪鶉蛋清蛋白沉淀液，鵪鶉蛋清蛋白沉淀液若需保存放入4°C冰箱保存；鵪鶉蛋清蛋白沉淀液中加入其重量5倍的水，加入胰蛋白酶，加酶量100 u/g底物，pH調(diào)至9，溫度為40°C，時(shí)間為4 h，得鵪鶉蛋清可溶性肽溶液。利用i^olin-酚法測定水解度，將會(huì)得到水解度為91%的可溶性肽溶液。上述實(shí)施例得到可溶性肽溶液經(jīng)檢測酶解液中的氨基酸組成及百分含量的比值如下表
表1酶解液中的氨基酸組成及百分含量分析結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種利用胰蛋白酶定向水解鵪鶉蛋清制備可溶性肽的方法，該方法包括下列步驟A、取鵪鶉蛋蛋清，加入其重量1-5倍的水勻漿Ι-lOmin，得到鵪鶉蛋清勻漿液；B、將步驟A得到的鵪鶉蛋清勻漿液煮沸3 5min，使其徹底變性，得鵪鶉蛋清變性液；C、將步驟B得到的蛋清變性液離心分離，參數(shù)100(T5000r/min、時(shí)間3 15min，棄去上清液，保留沉淀溶液得鵪鶉蛋清蛋白沉淀液；D、在步驟C得到的鵪鶉蛋清蛋白沉淀液中加入其重量3-5倍的水，加入胰蛋白酶，加酶量100-400 u/g底物，pH調(diào)至8-10，溫度為40-60°C，時(shí)間為4-6 h，得鵪鶉蛋清可溶性肽溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用胰蛋白酶定向水解鵪鶉蛋清制備可溶性肽的方法， 其特征在于所述步驟D之后還包括將可溶性肽溶液噴霧干燥得到寡肽干粉。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。為克服目前蛋清蛋白多肽制備工藝中效率低、步驟繁瑣的技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種利用胰蛋白酶定向水解鵪鶉蛋清制備可溶性肽的方法，該方法包括將鵪鶉蛋清勻漿、煮沸變性、離心分離、胰蛋白酶酶解，得鵪鶉蛋清可溶性肽溶液。本方法采用胰蛋白酶不僅具有酶解效率高，同時(shí)酶解液不具有較重的苦味、腥味或異味，可以將酶解后的產(chǎn)物經(jīng)噴霧干燥或直接勾兌制成寡肽產(chǎn)品，不需要額外的去苦、去異味工序，進(jìn)而降低生產(chǎn)成本的目的。
文檔編號(hào)C12P21/06GK102286583SQ201110175839
公開日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2011年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月28日
發(fā)明者李曉琳, 李桂玲, 李澤瑤, 王鵬, 胡增淼 申請(qǐng)人:泰祥集團(tuán)技術(shù)開發(fā)有限公司