專利名稱：一種高效發(fā)酵床用微生物菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，確切的說是一種發(fā)酵床用微生物菌劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
近年來隨著我國養(yǎng)豬業(yè)規(guī)?；?、集約化的迅猛發(fā)展，畜禽糞便及污水排放對環(huán)境的污染日顯嚴(yán)重。據(jù)統(tǒng)計，現(xiàn)在全國每年畜牧生產(chǎn)的固體廢棄物總量約為30億噸，僅長沙市每年就約有8000萬噸畜禽養(yǎng)殖廢水、120萬噸以上固體糞便排出，大部分養(yǎng)殖場只經(jīng)過沼氣池簡單處理后就直接外排，對環(huán)境造成了較大的污染。目前傳統(tǒng)養(yǎng)豬的糞尿處理技術(shù)大多采用堆肥發(fā)酵、沼氣發(fā)酵、好氧發(fā)酵烘干技術(shù)等方式進(jìn)行處理，堆肥發(fā)酵處理糞便占用土地，對環(huán)境的空氣污染較大，沼氣發(fā)酵具有季節(jié)局限性，好氧發(fā)酵烘干技術(shù)成本較高，在實際利用中均有一定的局限性。益生菌發(fā)酵床養(yǎng)豬技術(shù)是根據(jù)微生態(tài)原理和生物發(fā)酵理論，將鋸末屑、稻殼、粉碎的農(nóng)作物秸稈、微生物菌劑和米糠、糖等輔助發(fā)酵劑按一定比例混合均勻，鋪在豬舍發(fā)酵池內(nèi)，自然發(fā)酵，形成微生物發(fā)酵床，生豬飼養(yǎng)其上，利用微生物對畜禽糞尿“原位降解”，達(dá)到生態(tài)環(huán)境“零污染”的新型養(yǎng)殖模式。由于發(fā)酵床墊料的配比、厚度、所處的地理生態(tài)環(huán)境不同，使得墊料的透氣性、吸水性、空氣濕度和環(huán)境溫度不同；由于生豬在不斷的產(chǎn)生排泄物，必須及時的降解，因此選用安全、穩(wěn)定、定殖能力強(qiáng)、降解率高且功能具有互補(bǔ)作用的菌株組成的復(fù)合微生物菌劑是發(fā)酵床清潔養(yǎng)殖的有利保證。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種有效促進(jìn)畜禽糞尿“原位降解”，顯著降低畜禽糞尿中氨及其它腐敗物的產(chǎn)生，且能提高豬肉品質(zhì)的發(fā)酵床用微生物菌劑及其制備方法。本發(fā)明的目的是通過以下方式實現(xiàn)的一種高效發(fā)酵床用復(fù)合微生物菌劑的制備方法，包括以下步驟1)枯草芽孢桿菌發(fā)酵物制備首先，將枯草芽孢桿菌經(jīng)過斜面菌種活化、搖瓶種子培養(yǎng)；然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量為總體積的50 70%，接種量占培養(yǎng)基體積的0. 1 0. 3%，發(fā)酵溫度34 37°C，通空氣180 200rpm攪拌培養(yǎng)，通氣體積與發(fā)酵液體積的比值0.9 1 1 1，罐壓0.03 0.05MPa;發(fā)酵終點為芽孢數(shù)不低于總菌數(shù)的90%，且發(fā)酵液的活菌數(shù)在1. OX 101° 1. 5 X 101(lCfU/mL之間；發(fā)酵罐培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為葡萄糖0. 5 0. 7 %，淀粉0. 3 0. 5 %，豆餅粉0. 8 1. 2 %，硫酸錳 0. 0062 %，酵母粉0. 5 0. 8 %，蛋白胨0. 3 0. 5 %，氯化鐵0.01%，磷酸二氫鉀0. 4 %，碳酸鈣0. 1%，硫酸鎂0.05%，其余為水，？!1 7. 2 7. 4;最后進(jìn)行固體吸附發(fā)酵液用麥麩按1 2 1 3的重量比例吸附，吸附后低溫抽濕干燥，粉碎，粉劑產(chǎn)品含菌量在2. OXlO9 5. 0X109cfu/g之間；2)地衣芽孢桿菌發(fā)酵物制備首先，將地衣芽孢桿菌經(jīng)過斜面菌種活化、搖瓶種子培養(yǎng)；所述的地衣芽孢桿菌， 保藏號為 CGMCC No. 4835 ；然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量為總體積的50 70%，接種量占培養(yǎng)基體積的0. 1 0. 3%，發(fā)酵溫度45 50°C，通空氣180 200rpm攪拌培養(yǎng)，通氣體積與發(fā)酵液體積的比值0.9 1 1 1，罐壓保持在0.03 0.05MPa，發(fā)酵終點為芽孢數(shù)不低于總菌數(shù)的90%，且發(fā)酵液的含菌數(shù)在8. OX IO9 1. 2 X 101(lCfU/mL之間；發(fā)酵罐培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為淀粉1. 0 1. 5%，糊精0. 5 0. 8%，豆餅粉1. 2 1. 5%，硫酸銨 0. 6 0. 8 %，酵母粉0. 3 0. 4 %，碳酸鈣0.2%，氯化鈉0.4%，磷酸二氫鉀0.02%，其余為水，pH 7. 0 7. 2 ；最后進(jìn)行固體吸附發(fā)酵液用麥麩按1 2 1 3的重量比例吸附，吸附后低溫抽濕干燥，粉碎，粉劑產(chǎn)品含菌量在1. 5X IO9 4. 0X109cfu/g之間；3)產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵物制備首先，將產(chǎn)朊假絲酵母經(jīng)過斜面菌種活化、搖瓶種子培養(yǎng)；然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量為總體積的50 70%，接種量占培養(yǎng)基體積的0. 3 0. 5%，發(fā)酵溫度25 ^°C，通空氣120 150rpm攪拌培養(yǎng)，通氣體積與發(fā)酵液體積的比值1 1 1. 1 1，罐壓保持在0. 03 0. 05MPa,46 48小時發(fā)酵完畢后發(fā)酵液的含菌數(shù)在2. OX IO9 3. OX IO9CfuAiL之間；發(fā)酵罐培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為葡萄糖3. 5 4. 0 %，硫酸銨1. 5 2. 0 %，酵母粉0. 2 0. 25 %，磷酸二氫鉀0. 1 %，氯化鈉0.01%，硫酸鎂0.05%，其余為水，pH 6.0 6.5 ；最后進(jìn)行固體吸附發(fā)酵液用麥麩按1 1的重量比例吸附，吸附后低溫抽濕干燥，粉碎，粉劑產(chǎn)品含菌量在1. 5 X IO9 2. 5X109cfu/g之間；4)高效發(fā)酵床用復(fù)合微生物菌劑復(fù)配按重量百分比草芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑30 40%，地衣芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑30 40 %，產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵物粉劑20 % 30 %，充分混勻即可。所述的高效發(fā)酵床用復(fù)合微生物菌劑的活菌總數(shù)不低于1. OX 109cfu/g。步驟1)所述的斜面菌種活化的培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為蛋白胨1%，NaCl 0. 5%，酵母膏0. 5%，瓊脂1. 5% 2. 0%，其余為水，pH 7. 2-7. 4 ；步驟1)所述的搖瓶種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基是在步驟1)所述的斜面培養(yǎng)基中不加瓊脂，具體操作取活化的新鮮斜面菌種一環(huán)，接種于搖瓶種子液體培養(yǎng)基中，裝量為 100mL/500mL，轉(zhuǎn)速為180 200rpm，34 37°C恒溫培養(yǎng)22 24h后，80°C水浴熱處理10 分鐘，即可。步驟幻所述的斜面菌種活化的培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為葡萄糖0. 4%，麥芽提取物1%，酵母提取物0.4%，碳酸鈣0.2%，瓊脂1.5% 2.0%，其余為水，pH 7. 0 7. 2 ；步驟2~)所述的搖瓶種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基是在步驟2~)所述的斜面培養(yǎng)基中不加瓊脂，具體操作取活化的新鮮斜面菌種一環(huán)，接種于搖瓶種子液體培養(yǎng)基中，裝量為 100mL/500mL，轉(zhuǎn)速為180 200rpm，45 50°C恒溫培養(yǎng)28 30h后，終止培養(yǎng)。
步驟3)所述的斜面菌種活化的培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基；步驟幻所述的搖瓶種子培養(yǎng)具體操作取活化的新鮮斜面菌種一環(huán)，接種于搖瓶種子液體培養(yǎng)基中，裝量為150mL/500mL，轉(zhuǎn)速為120 150rpm，25 恒溫培養(yǎng)30 3 后，終止培養(yǎng)；所述的搖瓶種子的培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母浸膏1%，其余為水，pH 6. 0 6. 5。一種高效發(fā)酵床用微生物菌劑是由上述的方法制備而成的菌劑。所述的地衣芽孢桿菌，保藏號為CGMCC No. 4835。本發(fā)明的優(yōu)勢優(yōu)良菌種的選擇枯草芽孢桿菌好氧菌，能產(chǎn)生蛋白酶，淀粉酶等多種酶類，可明顯提高動物生長速率和飼料利用率。在飼料加工過程及酸性環(huán)境中有較高的穩(wěn)定性，繁殖速度快，抗逆性好，分解糞尿能力強(qiáng)。經(jīng)過優(yōu)化后的菌株適宜溫度為30°C 37°C，接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，24h時產(chǎn)蛋白酶和產(chǎn)淀粉酶活力分別為2706u/mL、31. 33IMMU ；接種在豬糞尿提取液中反應(yīng)25天后，對COD的降解率、NH3-N降解率分別為86. 5%、70. 7%。地衣芽孢桿菌從健康豬排放的腐熟豬糞中篩選分離得到，高溫生長菌。能夠產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶等。在高溫階段，菌較活躍。經(jīng)過優(yōu)化后的菌株適宜溫度為45°C 55 °C，接種在豬糞尿提取液中反應(yīng)25天后，對NH3-N降解率為75. 2%。產(chǎn)朊假絲酵母兼氧菌，適宜生長溫度25°C ^°C，pH值6. 0 6. 5。為動物提供蛋白質(zhì)和維生素，幫助消化，刺激動物生長，抑制病源微生物繁殖，提高機(jī)體免疫力。接種在豬糞尿提取液中反應(yīng)2天后，對NH3-N降解率為83. 5%。本發(fā)明產(chǎn)品發(fā)酵床用復(fù)合微生物菌劑接種在豬糞尿提取液中反應(yīng)25天后COD降解率達(dá)到了 89. 9%,NH3-N去除率達(dá)84.5%。本發(fā)明菌株的保藏信息如下 保藏日期2011年5月9日
保藏單位名稱中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC) 保藏編號CGMCC No. 4835
分類命名地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。 本發(fā)明的有益效果本發(fā)明產(chǎn)品根據(jù)不同有益菌株的功能互補(bǔ)性構(gòu)建的，其組成明確，質(zhì)量穩(wěn)定。特別是經(jīng)過本發(fā)明獨特發(fā)酵工藝后，實際上得到的是菌劑與發(fā)酵代謝產(chǎn)物的混合物，可能能夠產(chǎn)生諸多有益的物質(zhì)。通過實際的生產(chǎn)檢驗發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明產(chǎn)品用于發(fā)酵床養(yǎng)豬能利用微生物對畜禽糞尿“原位降解”，達(dá)到減少養(yǎng)豬場對生態(tài)環(huán)境的污染，實現(xiàn)循環(huán)生態(tài)農(nóng)業(yè)目的；同時能提高生豬福利，提高豬肉品質(zhì)。
具體實施例方式以下實施方式旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。本發(fā)明采用的3株菌株名稱及菌種來源如下枯草芽孢桿菌(ACCC10619)，購買于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心；地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)，從健康豬排放的腐熟豬糞中篩選分離得到，經(jīng)中科院微生物研究所鑒定。并于2011年5月9日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心進(jìn)行了保藏，地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)，保藏號為 CGMCCNo. 4835。篩選過程如下將腐熟的健康豬糞樣品和富集培養(yǎng)基(新鮮豬糞)按一定比例 (重量比)充分混合，逐步加入鋸木屑和稻殼，調(diào)節(jié)物料的含水率在55%左右，裝于干凈塑料桶中，靜止室溫培養(yǎng)，每天攪拌數(shù)次，測定培養(yǎng)過程中臭氣變化和減重率變化情況，直到糞尿基本無臭且減重不明顯時，移種繼續(xù)振蕩培養(yǎng)，逐步提高富集培養(yǎng)基濃度至95%，每一輪培養(yǎng)至無臭，減重不明顯時為止。將富集培養(yǎng)物通過多次平板涂布分離，獲得糞尿分解能力強(qiáng)的菌株4株。其中1株菌株菌落較大，邊緣不整齊；菌體呈桿狀，有芽孢，革蘭氏染色陽性；淀粉水解試驗、明膠水解、氧化酶試驗、接觸酶試驗、甲基紅試驗、檸檬酸鹽試驗、VP < PH6試驗陽性；VP > pH7試驗陰性。經(jīng)中科院微生物研究所鑒定為地衣芽孢桿菌。產(chǎn)朊假絲酵母(ACCC20060)，購買于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心。實施例1 復(fù)合菌劑制備1.枯草芽孢桿菌發(fā)酵物制備斜面菌種活化取冰箱保存斜面菌種，無菌操作接種于新鮮試管斜面培養(yǎng)基中， 37°C恒溫培養(yǎng)過夜，制成新鮮試管斜面菌種。斜面培養(yǎng)基蛋白胨l%，NaCl 0.5%，酵母膏 0. 5%，瓊脂 1. 5% 2. 0%，其余為水，pH 7. 2-7. 4。搖瓶種子培養(yǎng)取活化的新鮮斜面菌種一環(huán)，無菌操作接種于搖瓶種子液體培養(yǎng)基中，裝量為100mL/500mL，轉(zhuǎn)速為180 200rpm，；34 37°C恒溫培養(yǎng)22 24h后，80°C水浴熱處理10分鐘，即可。所述的搖瓶種子的培養(yǎng)基是在斜面培養(yǎng)基中不加瓊脂。發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量為總體積的50 70%，接種量占培養(yǎng)基體積的 0. 1 0. 3%，發(fā)酵溫度；34 37°C，通空氣攪拌培養(yǎng)(180 200rpm)，通氣體積比0.9 1 1 1，罐壓保持在0.03-0. 05MPa，接種后根據(jù)泡沫情況適當(dāng)調(diào)整排氣量和罐壓，防止逃液。 當(dāng)泡沫逐漸消失后，加大通氣量。每4小時取樣鏡檢一次。發(fā)酵終點為芽孢數(shù)占總菌數(shù)的 90%以上。放罐樣用平板計數(shù)法測定總菌數(shù)。發(fā)酵液的含菌數(shù)在1. OX IOltl-L 5X IOltlCfu/ ml之間。發(fā)酵罐培養(yǎng)基葡萄糖0. 5 0. 7 %，淀粉0. 3 0. 5 %，豆餅粉0. 8 1. 2 %，硫酸錳0. 0062 %，酵母粉0. 5 0. 8 %，蛋白胨0. 3 0. 5 %，氯化鐵0.01%，磷酸二氫鉀0.4%， 碳酸鈣0. 1%，硫酸鎂0.05%，其余為水，？!1 7. 2 7. 4。固體吸附發(fā)酵液用麥麩按1 2 1 3的重量比例吸附，吸附后低溫抽濕干燥，粉碎，測定含菌量后，入庫保存。粉劑產(chǎn)品含菌量在2.0X 109-5.0X 109cfu/g之間。2.地衣芽孢桿菌發(fā)酵物制備斜面菌種活化的培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為葡萄糖0.4%，麥芽提取物1%，酵母提取物0.4%，碳酸鈣0. 2 %，瓊脂1. 5 % 2. 0 %，其余為水，pH 7. 0 7. 2 ；取活化的新鮮斜面菌種一環(huán)，接種于搖瓶種子液體培養(yǎng)基中，裝量為 100mL/500mL,轉(zhuǎn)速為180 200rpm，45 50°C恒溫培養(yǎng)28 30h后，終止培養(yǎng)。所述的搖瓶種子的培養(yǎng)基是在斜面培養(yǎng)基中不加瓊脂。然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量為總體積的50 70%，接種量占培養(yǎng)基體積的0. 1 0. 3%，發(fā)酵溫度45 50°C，通空氣攪拌培養(yǎng)(180 200rpm)，通氣體積比 (通氣量與發(fā)酵液體積的比值)0. 9 1 1 1，罐壓保持在0.03 0.05MPa，發(fā)酵終點為芽孢數(shù)不低于總菌數(shù)的90%;發(fā)酵液的含菌數(shù)在8. OX IO9 1. 2 X 101(lCfU/mL之間；發(fā)酵罐培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為淀粉1. 0 1. 5 %，糊精0. 5 0. 8 %，豆餅粉1. 2 1. 5 %，硫酸銨0. 6 0. 8 %，酵母粉0. 3 0. 4 %，碳酸鈣0.2%，氯化鈉0.4%，磷酸二氫鉀0.02%， 其余為水，pH 7. 0 7. 2 ；最后進(jìn)行固體吸附發(fā)酵液用麥麩按1 2 1 3的重量比例吸附，吸附后低溫抽濕干燥，粉碎，粉劑產(chǎn)品含菌量在1. 5X IO9 4. 0X109cfu/g之間。3.產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵物制備斜面菌種活化的培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基；取活化的新鮮斜面菌種一環(huán)，接種于搖瓶種子液體培養(yǎng)基中，裝量為 150mL/500mL，轉(zhuǎn)速為120 150rpm，25 恒溫培養(yǎng)30 3 后，終止培養(yǎng)。所述的搖瓶種子的培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母浸膏1%，其余為水，pH
6. 0 6. 5o然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量為總體積的50 70%，接種量占培養(yǎng)基體積的0. 3 0. 5%，發(fā)酵溫度25 ，通空氣攪拌培養(yǎng)(120 150rpm)，通氣體積比 (通氣量與發(fā)酵液體積的比值)1 1 1. 1 1，罐壓保持在0.03 0.0510^，46 48小時發(fā)酵完畢；發(fā)酵液的含菌數(shù)在2. OX IO9 3. OX IO9CfuAiL之間；發(fā)酵罐培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為葡萄糖3. 5 4. 0 %，硫酸銨1. 5 2. 0 %，酵母粉0. 2 0. 25 %，磷酸二氫鉀 0. 1%，氯化鈉0.01%，硫酸鎂0.05%，其余為水，pH 6.0 6.5 ；最后進(jìn)行固體吸附發(fā)酵液用麥麩按1 1的重量比例吸附，吸附后低溫抽濕干燥，粉碎，粉劑產(chǎn)品含菌量在1. 5 X IO9 2. 5X109cfu/g之間。4.發(fā)酵菌復(fù)配按重量百分比枯草芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑30 40%，地衣芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑 30 40%，產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵物粉劑20 30%，充分混勻后真空包裝即得到復(fù)合菌劑。實施例2 利用本發(fā)明的復(fù)合菌劑制備發(fā)酵床的養(yǎng)豬功效1.發(fā)酵床制備發(fā)酵床墊料由鋸末屑、稻殼按1 1的重量比構(gòu)成，或由鋸末屑、谷殼、農(nóng)作物秸稈按5 3 2的重量比構(gòu)成。鋸末屑、谷殼、農(nóng)作物秸稈起吸附菌劑、保持水分、疏松透氣、 為功能微生物提供C、N源等作用。制作發(fā)酵床前最好將鋸末屑、稻殼、秸稈等在太陽下曝曬 1 2天，欄舍要徹底消毒。發(fā)酵床墊料應(yīng)無霉變、無腐敗，無惡臭或其他異味。物料粒徑在2 10mm，碳氮比率40 100 1，糞大腸桿菌數(shù)彡lOOcfu/g，蛔蟲卵死亡率彡98%，pH值7. 5左右?；瘜W(xué)膠合板鋸末屑不能用作墊料。在發(fā)酵池內(nèi)將本發(fā)明產(chǎn)品、墊料、輔助發(fā)酵劑加水混合均勻，鋪在發(fā)酵池內(nèi)，墊料的水分含量45%左右，堆積發(fā)酵3天左右，當(dāng)墊料中層溫度達(dá)到45°C 55°C時深翻一次，再發(fā)酵3天左右，待中層溫度降至40°C左右時，將堆積的墊料耙平，符合要求就可以進(jìn)豬了， 不符合要求則重新發(fā)酵消毒。發(fā)酵床墊料壓實后厚度為80cm，比采食臺面低IOcm左右。2.試驗分組2009年7月5日 12月8日在某養(yǎng)豬場進(jìn)行了本發(fā)明產(chǎn)品發(fā)酵床養(yǎng)殖技術(shù)養(yǎng)豬試驗。墊料由鋸末屑、稻殼按1 1的重量比構(gòu)成。按產(chǎn)期，體重相近的原則，選擇同品種、同批次、平均體重(16. 35士2. 33)kg的雜交(本地白早X大約克$ )豬180頭，每頭豬掛上耳標(biāo)，隨機(jī)分成3組，每組4次重復(fù)，每重復(fù)8頭公豬，7頭母豬。試驗I組為對照組，傳統(tǒng)水泥地圈欄；試驗II組，用本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑制成的發(fā)酵床養(yǎng)殖，菌劑組分及其重量百分比組成為枯草芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑35%，地衣芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑35%，產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵物粉劑30%，發(fā)酵劑的用量200g/立方米墊料；試驗III組，用本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑制成的發(fā)酵床養(yǎng)殖，菌劑組分及其重量百分比組成為枯草芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑 40%，地衣芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑40%，產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵物粉劑20%，發(fā)酵劑的用量200g/ 立方米墊料。3.實驗結(jié)果如下表1圈舍環(huán)境及生豬體表觀察結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種高效發(fā)酵床用復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)枯草芽孢桿菌發(fā)酵物制備首先，將枯草芽孢桿菌經(jīng)過斜面菌種活化、搖瓶種子培養(yǎng)；然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量為總體積的50 70%，接種量占培養(yǎng)基體積的0. 1 0. 3%，發(fā)酵溫度34 37°C，通空氣180 200rpm攪拌培養(yǎng)，通氣體積與發(fā)酵液體積的比值0.9 1 1 1，罐壓0.03 0.05MPa;發(fā)酵終點為芽孢數(shù)不低于總菌數(shù)的 90 %，且發(fā)酵液的活菌數(shù)在1. 0 X 101° 1. 5 X 101(lCfU/mL之間；發(fā)酵罐培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為葡萄糖0. 5 0. 7%，淀粉0. 3 0. 5%，豆餅粉0. 8 1. 2%，硫酸錳0. 0062%, 酵母粉0. 5 0. 8 %，蛋白胨0. 3 0. 5 %，氯化鐵0.01%，磷酸二氫鉀0.4%，碳酸鈣0.1%， 硫酸鎂0.05%，其余為水，pH 7. 2 7. 4;最后進(jìn)行固體吸附發(fā)酵液用麥麩按1 2 1 3的重量比例吸附，吸附后低溫抽濕干燥，粉碎，粉劑產(chǎn)品含菌量在2. OX IO9 5. OX IO9CfVg之間；2)地衣芽孢桿菌發(fā)酵物制備首先，將地衣芽孢桿菌經(jīng)過斜面菌種活化、搖瓶種子培養(yǎng)；所述的地衣芽孢桿菌，保藏號為 CGMCC No. 4835 ；然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量為總體積的50 70%，接種量占培養(yǎng)基體積的0. 1 0. 3%，發(fā)酵溫度45 50°C，通空氣180 200rpm攪拌培養(yǎng)，通氣體積與發(fā)酵液體積的比值0.9 1 1 1，罐壓保持在0.03 0.05MPa，發(fā)酵終點為芽孢數(shù)不低于總菌數(shù)的90 %，且發(fā)酵液的含菌數(shù)在8. 0 X IO9 1. 2 X 101(lCfU/mL之間；發(fā)酵罐培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為淀粉1. 0 1. 5%，糊精0. 5 0. 8 %，豆餅粉1. 2 1. 5 %，硫酸銨0. 6 0.8%,酵母粉0. 3 0. 4 %，碳酸鈣0.2%，氯化鈉0.4%，磷酸二氫鉀0. 02 %，其余為水，pH 7. 0 7. 2 ；最后進(jìn)行固體吸附發(fā)酵液用麥麩按1 2 1 3的重量比例吸附，吸附后低溫抽濕干燥，粉碎，粉劑產(chǎn)品含菌量在1. 5 X IO9 4. OX IO9CfVg之間；3)產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵物制備首先，將產(chǎn)朊假絲酵母經(jīng)過斜面菌種活化、搖瓶種子培養(yǎng)；然后進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量為總體積的50 70%，接種量占培養(yǎng)基體積的0. 3 0. 5%，發(fā)酵溫度25 ^°C，通空氣120 150rpm攪拌培養(yǎng)，通氣體積與發(fā)酵液體積的比值1 1 1. 1 1，罐壓保持在0.03 0.05MPa，46 48小時發(fā)酵完畢后發(fā)酵液的含菌數(shù)在2. OX IO9 3. OX IO9CfuAiL之間；發(fā)酵罐培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為葡萄糖3. 5 4. 0 %，硫酸銨1. 5 2. 0 %，酵母粉0. 2 0. 25 %，磷酸二氫鉀0.1%，氯化鈉 0. 01%，硫酸鎂0. 05%，其余為水，pH 6. 0 6. 5 ；最后進(jìn)行固體吸附發(fā)酵液用麥麩按1 1的重量比例吸附，吸附后低溫抽濕干燥，粉碎，粉劑產(chǎn)品含菌量在1.5X IO9 2. 5XlO9CfVg之間；4)高效發(fā)酵床用復(fù)合微生物菌劑復(fù)配按重量百分比草芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑30 40 %，地衣芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑30 40 %，產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵物粉劑20 % 30 %，充分混勻即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的高效發(fā)酵床用復(fù)合微生物菌劑的活菌總數(shù)不低于1. OX 109cfu/g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述的斜面菌種活化的培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為蛋白胨l%，NaCl 0. 5%, 酵母膏0. 5%，瓊脂1. 5% 2. 0%，其余為水，pH 7. 2-7. 4 ；步驟1)所述的搖瓶種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基是在步驟1)所述的斜面培養(yǎng)基中不加瓊脂，具體操作取活化的新鮮斜面菌種一環(huán)，接種于搖瓶種子液體培養(yǎng)基中，裝量為 100mL/500mL，轉(zhuǎn)速為180 200rpm，34 37°C恒溫培養(yǎng)22 24h后，80°C水浴熱處理10 分鐘，即可。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述的斜面菌種活化的培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比為葡萄糖0.4%，麥芽提取物1%，酵母提取物0.4%，碳酸鈣0.2%，瓊脂1. 5% 2.0%，其余為水，pH 7. 0 7. 2 ；步驟2)所述的搖瓶種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基是在步驟幻所述的斜面培養(yǎng)基中不加瓊脂，具體操作取活化的新鮮斜面菌種一環(huán)，接種于搖瓶種子液體培養(yǎng)基中，裝量為 100mL/500mL，轉(zhuǎn)速為180 200rpm，45 50°C恒溫培養(yǎng)28 30h后，終止培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟幻所述的斜面菌種活化的培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基；步驟幻所述的搖瓶種子培養(yǎng)具體操作取活化的新鮮斜面菌種一環(huán)，接種于搖瓶種子液體培養(yǎng)基中，裝量為150mL/500mL，轉(zhuǎn)速為120 150rpm，25 恒溫培養(yǎng)30 3 后，終止培養(yǎng)；所述的搖瓶種子的培養(yǎng)基各組分質(zhì)量百分比葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母浸膏1%，其余為水，pH 6. 0 6. 5。
6.一種高效發(fā)酵床用微生物菌劑，其特征在于，是由權(quán)利要求1-5任意一項所述的方法制備而成的菌劑。
7.一株用于高效發(fā)酵床用微生物菌劑發(fā)酵制備用菌株，其特征在于，所述的菌株為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)，保藏號為 CGMCC No. 4835。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高效發(fā)酵床用微生物菌劑及其制備方法，該菌劑是按重量百分比枯草芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑30～40％，地衣芽孢桿菌發(fā)酵物粉劑30～40％，產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵物粉劑20～30％，充分混勻得到的。其能有效促進(jìn)畜禽糞尿“原位降解”，顯著降低畜禽糞尿中氨及其它腐敗物的產(chǎn)生，且能提高豬肉品質(zhì)。
文檔編號C12N1/16GK102286376SQ20111016696
公開日2011年12月21日 申請日期2011年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月21日
發(fā)明者吳勝蓮, 吳迎奔, 周映華, 尹紅梅, 張德元, 王震, 許麗娟, 賀月林, 陳薇 申請人:湖南省微生物研究所