專利名稱：轉(zhuǎn)基因玉米快速篩選試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是實現(xiàn)對食品中M0N810、BtlU NK603,59122和1507五種轉(zhuǎn)基因玉米快速篩選的試劑盒。
背景技術(shù)：
目前食品中的轉(zhuǎn)基因成分檢測技術(shù)比較成熟，但是由于轉(zhuǎn)基因作物種類繁多，因此必須建立一種快速的篩選方法。在大力推進轉(zhuǎn)基因生物研發(fā)的同時，要同步發(fā)展其快速篩選技術(shù)，不斷優(yōu)化食品中轉(zhuǎn)基因成分的檢測方法。因此，建立一種食品中轉(zhuǎn)基因成分的快速篩選試劑盒就很必要。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實現(xiàn)了食品中M0N810、BtlU NK603,59122和1507五種轉(zhuǎn)基因玉米的快速篩選。(1)根據(jù)這五種轉(zhuǎn)基因玉米中導(dǎo)入的公共元件和功能元件設(shè)計出相應(yīng)的具有相同PCR反應(yīng)條件的引物。第一步初篩，同時對啟動子CaMV 35S,P-ract,Ubi Siil和終止子 NOS、pinll共五種公共元件(初篩基因)進行PCR檢測，以初步確定食品中是否含有轉(zhuǎn)基因元件；第二步定位，同時對cp^psps、pat、crylF、cryIAb, cry35Ab五種功能元件(定位基因)進行檢測。(2)標(biāo)準(zhǔn)品將快速篩選方法中的5個初篩基因CaMV 35S、P_ract、Ubi ZmUNOS, pin II整合到一個質(zhì)粒上形成“初篩質(zhì)?！?，將5個定位基因Cp^pSpS、pat、CrylF、CrylAb、 cry35Ab整合到一個質(zhì)粒上形成“定位質(zhì)?！?，制成標(biāo)準(zhǔn)品，在檢測過程中作為陽性對照，對試劑盒進行質(zhì)量控制，也可作為定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)粒通過大腸桿菌轉(zhuǎn)染和培養(yǎng)而實現(xiàn)增殖。(3)結(jié)果查詢軟件根據(jù)篩選結(jié)果，結(jié)果查詢軟件可以單一查詢或者邏輯判斷檢測結(jié)果為哪種轉(zhuǎn)基因作物，以及該種作物的受體生物、新性狀、外源基因信息等基本信息。本發(fā)明與現(xiàn)階段國內(nèi)對轉(zhuǎn)基因作物的檢測手段相比，具有以下功能特點(1)能夠同時對5種轉(zhuǎn)基因玉米進行檢測；(2)檢測時間短，只需兩個PCR步驟；(3)有配套的結(jié)果查詢軟件，縮短了對檢測結(jié)果進行判斷的時間；(4)有配套的標(biāo)準(zhǔn)品，可以對試劑盒進行有效的質(zhì)量控制，并且可以作為熒光定量PCR檢測的標(biāo)準(zhǔn)。
具體實施例方式利用試劑盒中的反應(yīng)體系、引物，直接加入待測樣品，通過兩步 PCR程序進行檢測。將所得結(jié)果輸入結(jié)果查詢軟件，軟件自動給出受試物中可能存在的轉(zhuǎn)基因作物及其相關(guān)的受體生物、新性狀、外源基因等信息。還可以進行熒光定量PCR，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度算出待測物中外源基因的含量。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌的保存方式取出菌液，按3 1加入甘油，攪勻，液氮速凍，然后放入-70度超低溫冰箱，可保2年活力，需要使用時，冰上解凍，沾取菌液加到新培養(yǎng)基里活化培養(yǎng)。或直接放置于4°C冰箱保存兩天。生物材料樣品保藏信息保藏單位名稱中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼:100101 ；保藏日期2010年10月20日；
保藏編號CGMCC4228 ；分類命名大腸埃希氏菌(Escherichia coli)。
權(quán)利要求
1.篩選中使用的引物為根據(jù)M0N810、Btll、NK603、59122和1507這五種轉(zhuǎn)基因玉米中導(dǎo)入的公共元件 CaMV 35S、P-ract、Ubi ZmU NOS, ρ in II 和功能元件 cp4 印 sps、pat、crylF、 cryIAb, cry35Ab設(shè)計出的相應(yīng)引物。
2.將權(quán)利要求1中的5個初篩基因和5個定位基因分別以一定的方式連接起來，連接到通用質(zhì)粒中。將整合有兩段新序列的兩個質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品，在權(quán)利要求1中的篩選過程中作為陽性對照，對試劑盒進行質(zhì)量控制；還可將其作為濃度標(biāo)準(zhǔn)進行熒光定量PCR檢測， 對外源基因的含量進行分析。
3.權(quán)利要求1的檢測結(jié)果，可以利用結(jié)果查詢軟件進行單一查詢或者邏輯判斷，以確定檢測結(jié)果為哪種轉(zhuǎn)基因玉米，以及該轉(zhuǎn)基因玉米的受體生物、新性狀、外源基因等信息。
全文摘要
轉(zhuǎn)基因玉米快速篩選試劑盒。根據(jù)MON810、Bt11、NK603、59122和1507五種轉(zhuǎn)基因玉米中導(dǎo)入的CaMV 35S、P-ract、Ubi Zm1、NOS、pin II五種公共元件(初篩基因)和cp4epsps、pat、cry1F、cry1Ab、cry35Ab五種功能元件(定位基因)設(shè)計出相應(yīng)的引物。通過兩步定性PCR檢測完成檢測第一步初篩，同時對五種公共元件進行檢測，以初步確定食品中是否含有這幾種轉(zhuǎn)基因玉米；第二步定位，同時針對五種功能元件進行檢測。將快速篩選方法中的五個初篩基因和五個定位基因分別整合到兩個質(zhì)粒上，制成標(biāo)準(zhǔn)品，在檢測過程中作為陽性對照，對試劑盒進行質(zhì)量控制。根據(jù)檢測結(jié)果，可以在結(jié)果查詢軟件中進行單一查詢或者邏輯判斷，篩選出可能含有的一種或幾種轉(zhuǎn)基因玉米，以及相關(guān)的受體生物、新性狀、外源基因等信息。
文檔編號C12Q1/68GK102191317SQ20111000268
公開日2011年9月21日 申請日期2011年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月7日
發(fā)明者嚴(yán)衛(wèi)星, 劉玉梅, 張文眾, 李寧, 賈旭東, 雍凌 申請人:中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與食品安全所