正交q-核糖體的制作方法

專利名稱：正交q-核糖體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于四聯(lián)密碼子的翻譯的核糖體。
背景技術(shù)：
由于64個三聯(lián)體密碼子各自都被用來編碼天然氨基酸或多肽的終止，因此需要新的空白密碼子用于細胞遺傳密碼的擴展。原則上，四聯(lián)體密碼子可能提供256個空白密碼子。在化學(xué)計量學(xué)上經(jīng)氨?；瘮U展的反密碼子tRNA已經(jīng)通過輸入先前氨酰化的tRNAa15在體外系統(tǒng)和有限的體內(nèi)系統(tǒng)中用于以非常低的效率應(yīng)答4堿基密碼子而引入非天然氨基酸n_13。這是本領(lǐng)域的一個問題。
在一種情況下，4堿基的抑制子和琥珀密碼子已經(jīng)以非常規(guī)的方法低效率地用于 編碼兩種普通的氨基酸16。事實上，天然核糖體解碼四聯(lián)體密碼子的低效率已嚴重限制了它們用于遺傳密碼的擴展，這是本領(lǐng)域的一個問題。本發(fā)明旨在克服與現(xiàn)有技術(shù)有關(guān)的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人突變了某些核糖體組分用以產(chǎn)生具有翻譯四聯(lián)體密碼子的新技能的核糖體。突變集中于16S rRNA。本發(fā)明產(chǎn)生的核糖體有時也被稱為四聯(lián)體核糖體或Q-核糖體(RiboQ)。一方面，本發(fā)明涉及包含位于A1196的突變的16S rRNA。一方面，本發(fā)明涉及包含位于A1196的突變和選自C1195T、A1197G、C1195A的至少一種進一步的突變的16S rRNA。另一方面，本發(fā)明涉及進一步包含位于Cl 195和/或Al 197的突變的上文所述的16S rRNA。另一方面，本發(fā)明涉及上文所述的16S rRNA，其包含(i)C1195A 和 A1196G ;或者(ii)C1195T、A1196G 和 A1197G ;或者(iii)A1196G 和 A1197G。另一方面，本發(fā)明涉及能夠翻譯四聯(lián)體密碼子的核糖體，所述核糖體包含如上所述的 16S rRNA。另一方面，本發(fā)明涉及如上述的16S rRNA在翻譯包含至少一個四聯(lián)體密碼子的mRNA中的用途。
具體實施例方式一方面，本發(fā)明涉及包含位于A1196的突變的16S rRNA。合適地，所述突變是A1196G。
另一方面，本發(fā)明涉及進一步包含位于Cl 195和/或Al 197的突變的如上所述的16S rRNA。另一方面，本發(fā)明涉及如上所述的16S rRNA，其包含(1)(1195六和六11966;或者 (2) Cl 195T、Al 196G 和 Al 197G ;或者(3)A1196G 和 A1197G。
另一方面，本發(fā)明涉及如上所述的16S rRNA，其進一步包含A531G和U534A。另一方面，本發(fā)明涉及能翻譯四聯(lián)體密碼子的核糖體，所述核糖體包含如上所述的 16S rRNA。另一方面，本發(fā)明涉及如上述的16S rRNA在翻譯包含至少一個四聯(lián)體密碼子的mRNA中的用途。合適地，本發(fā)明包含位于A1196的突變的16S rRNA包括A1196G。該特定突變是本文例示的各優(yōu)選16S rRNA，例如Q1、Q2、Q3和Q4(均具有A1196G，即在1196位為G)所共有的。合適地,本發(fā)明的16S rRNA還包含位于Al 197的突變。合適地,本發(fā)明包含位于A1197突變的16S rRNA包括A1197G。該特定突變是本文例示的75%的優(yōu)選16S rRNA，例如Q1、Q2和Q3(均具有A1197G，即在1197位為G)所共有的。合適地，本發(fā)明的16S rRNA包含位于A1196的突變和位于A1197的突變。最合適地，本發(fā)明的16S rRNA包含A1196G和A1197G。Ql、Q2和Q3均包含該突變組合。合適地，本發(fā)明的16S rRNA可以包含位于C1195的突變。該突變可以是C1195T或者C1195A。合適地，本發(fā)明的包含Cl 195突變的16S rRNA還包含Al 196突變，例如Al 196G。合適地，當本發(fā)明的16S rRNA包含A1197G時，其還包含C1195T。合適地，當本發(fā)明的16SrRNA包含A1196G和A1197G時，其還包含C1195T。合適地，當本發(fā)明的16S rRNA包含A1196G并且A1197為野生型(即在1197為A)時，其還包含C1195A。可以存在或者可以不存在更進一步的突變。Ribo-X 和 Ribo-Q本文的Ribo-Q 16S rRNA序列已經(jīng)由Ribo-X作為起始16S rRNA序列而制備。Ribo-X是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的已公布的16S rRNA序列。更具體地，Ribo-X指的是與野生型相比具有兩個取代，即A531G和U534A的16SrRNA序列。所以，合適地，本文中所描述的每個Ribo-Q 16S rRNA序列除了具有本文討論的每個更進一步的突變或取代之外,還具有A531G和U534A。應(yīng)該認為，除非文中指明，否則本發(fā)明的16rRNA除了具有所討論的其他任何突變外還均具有A531G和U534A。因此，合適地，本發(fā)明的16SrRNA與野生型相比均包含至少3個突變，即A1196、A531G和U534A，最合適的是A1196G、A531G和U534A。在需要任何更多細節(jié)的情況下，Ribo-X在PCT/GB2007/004562 (W02008/065398公開)中有深入討論。該文獻(尤其是Ribo-X 16S rRNA序列的細節(jié))通過引用專門并入本文，其中Ribo-X 16SrRNA是“背景”或親本序列，本發(fā)明的Ribo-Q 16S rRNA由此衍生和/或產(chǎn)生。合適地，本發(fā)明的16S rRNA 包含 A1196G 和 A1197G(Ribo-Ql、Ribo-Q2、Ribo-Q3)。合適地，本發(fā)明的16S rRNA 包含 C1195T 和 A1196G 和 A1197G(Ribo-Q3)。
合適地，本發(fā)明的16S rRNA 包含 C1195T 和 A1196G(Ribo-Q4)。在一個實施方式中，本發(fā)明的16S rRNA由野生型16S rRNA序列與A531G、U534A、A1196G 以及 A1197G(Ribo-Ql)所組成。在一個實施方式中，本發(fā)明的16S rRNA由野生型16S rRNA序列與A531G、U534A、A1196G、A1197G以及多達八個進一步的突變/取代組成(Ribo_Q2)。在一個實施方式中，本發(fā)明的16S rRNA由野生型16S rRNA序列與A531G、U534A、C1195T、A1196G 以及 A1197G(Ribo_Q3)組成。在一個實施方式中，本發(fā)明的16S rRNA由野生型16S rRNA序列與A531G、U534A、C1195T 以及 A1196G(Ribo-Q4)組成。
本發(fā)明涉及通過四聯(lián)體解碼核糖體的演化來編碼多種非天然氨基酸。定義本文所使用的術(shù)語“正交(orthogonal) ”是指與其它核酸合作的能力不同于天然的內(nèi)源性核酸的核酸，例如rRNA或mRNA。正交mRNA、rRNA和tRNA以高效合作的匹配組(關(guān)連組)提供。例如，當正交rRNA作為核糖體的一部分時，它將高效地翻譯匹配的關(guān)連正交mRNA，而非天然的內(nèi)源性mRNA。為了簡化，包含正交rRNA的核糖體在本文中被稱為“正交核糖體”，并且正交核糖體將高效翻譯關(guān)連的正交mRNA。正交密碼子或正交mRNA密碼子是存在于正交mRNA中的密碼子，它僅被關(guān)連的正交核糖體翻譯，或者與天然的內(nèi)源性核糖體相比被關(guān)連的正交核糖體更有效地翻譯，或者被關(guān)連的正交核糖體翻譯不同于天然的同源性核糖體。正交縮寫為0(如在0-mRNA中)。因此，作為實例，正交核糖體(0-核糖體) 正交mRNA (0-mRNA)對是由含有不指導(dǎo)內(nèi)源性核糖體的翻譯的核糖體結(jié)合位點的mRNA和有效且特異性地翻譯正交mRNA但絲毫也不翻譯細胞mRNA的正交核糖體所構(gòu)成。本文所使用的“演化”(例如表述“演化的正交核糖體”中)是指通過變化和選擇對分子功能的開發(fā)。例如，在所需位置變化的rRNA分子庫可以根據(jù)本文所描述的程序進行選擇。通過選擇過程獲得演化的rRNA。當被用在0-mRNA 0_核糖體對背景下時，本文使用的術(shù)語“mRNA”是指包含由關(guān)連0-核糖體高效翻譯但不能被天然的野生型核糖體翻譯的正交密碼子的mRNA。另外，它可以包含突變的核糖體結(jié)合位點(尤其是從AUG起始密碼子上游到相對于AUG的-13位的序列)，該位點高效介導(dǎo)0-核糖體而非野生型核糖體的翻譯起始。其余的mRNA可以變化，從而使得任何蛋白的編碼序列在該核糖體結(jié)合位點下游的放置將產(chǎn)生由正交核糖體而非內(nèi)源性核糖體高效翻譯的mRNA。當被用在0-mRNA 0_核糖體對背景時，本文使用的術(shù)語“rRNA”是指被突變從而使得rRNA為正交rRNA和使得包含rRNA的核糖體為正交核糖體的rRNA，即其僅高效翻譯關(guān)連的正交mRNA。野生型核糖體rRNA的一級、二級和三級結(jié)構(gòu)以各種保守結(jié)構(gòu)的功能( 環(huán)、發(fā)夾、鉸鏈等)而為人周知。0-rRNA通常在16S rRNA中包含突變，而16S rRNA負責在翻譯過程中結(jié)合tRNA。0-rRNA還可以在小rRNA亞基的3'區(qū)包含突變，而小rRNA亞基負責翻譯的起始和與mRNA的核糖體結(jié)合位點的相互作用。當“0-rRNA”術(shù)語在本文中使用時，“0-rRNA”在細胞中的表達對細胞無毒。毒性通過細胞死亡來測定，或者可選擇地，通過生長速率相對于不表達“0-mRNA”的細胞延緩80%或以上而測定。相對于缺乏0-rRNA的類似細胞的生長，0-rRNA的表達優(yōu)選延緩生長小于50 %，優(yōu)選小于25 %，更優(yōu)選小于10 %，且更優(yōu)選完全不延緩生長。本文使用的術(shù)語“更高效地翻譯”和“更高效地介導(dǎo)翻譯”表示關(guān)連0-核糖體對給定0-mRNA的翻譯效率比在相同細胞或細胞類型中野生型核糖體或非關(guān)連0-核糖體對0-mRNA的翻譯效率高至少25%，更優(yōu)選地，為后者的至少2、3、4或8或更多倍。作為一種標尺，例如，可以相對于通過天然或非關(guān)連正交核糖體利用至少一個正交密碼子翻譯編碼氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶的0-mRNA來評價翻譯效率。當被用于指核苷酸序列時，本文使用的術(shù)語“對應(yīng)(對應(yīng)于)”表示給定序列在一種分子(例如16S rRNA)中的位置與其在另一分子(例如來自另一物種的16S rRNA)中處于相同位置?！疤幱谙嗤恢谩北聿划斢肨atusova和Madden(1999，"Blast 2 sequences-anew tool for comparing protein and nucleotidesequences^, FEMS Microbiol.Lett. 174:247-250)描述的且可從美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)獲得的BLAST序列比 對算法“BLAST 2 Sequences”比對時，“對應(yīng)的”序列彼此相互對齊。為了避免任何疑問，使用BLAST 2. 2. 11版(在NCBI網(wǎng)站上可以使用，或者也可以從該網(wǎng)站下載)，默認參數(shù)如下程序，blastn ;匹配賞分，I ;錯配罰分，-2 ;開放缺口和擴展缺口分別罰5和2 ;缺口 X落下(dropoff), 50 ;預(yù)期 10. 0 ;字長 11 ;和過濾開啟(filter on)。本文使用的術(shù)語“選擇性標記”是指這樣的基因序列，該序列允許通過加入相應(yīng)的選擇試劑而在群中選擇編碼和表達該基因序列的細胞。本文使用的術(shù)語“包含在核糖體結(jié)合位點與mRNA相互作用的序列的區(qū)域”是指這樣的序列區(qū)域，該序列區(qū)域包含在翻譯起始過程中通過例如堿基配對或其他相互作用而與mRNA進行物理相互作用的16S rRNA 3’末端附近的核苷酸。所述“區(qū)域”包含在核糖體結(jié)合位點與mRNA中的核苷酸堿基配對或其他物理相互作用的核苷酸，和此類核苷酸的5個5’或3’核苷酸內(nèi)的核苷酸。該“區(qū)域”還包含對應(yīng)于大腸桿菌16S rRNA的722和723位核苷酸的堿基，其在鄰近核糖體和mRNA間形成的Shine-Delgarno螺旋的小溝處形成凸起(bulge) o本文使用的術(shù)語“變化”是指庫中的單個成員的序列在給定位點是變化的。引入變化的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并且可以在給定位點引入隨機或小于完全隨機的變化?！巴耆S機”是指給定核苷酸可以是G、A、T或C中的任意一個(或在RNA中，為G、A、U和C中的任意一個)?！靶∮谕耆S機”是指給定位點可以被多于一個不同的核苷酸占據(jù)，但并非被G、A、T (在RNA中是U)或C中的所有占據(jù)，例如當變化允許在給定位點為G或A時，其不允許為U或C,或者允許為G、A或U時,不允許為C。本文使用的術(shù)語“核糖體結(jié)合位點”是指在翻譯起始時核糖體結(jié)合的mRNA區(qū)域。如本文所定義的，原核生物mRNA的“核糖體結(jié)合位點”包括Shine-Delgarno共有序列和相對于起始密碼子AUG的-13到+1核苷酸。本文使用的術(shù)語“非天然氨基酸”是指不同于蛋白質(zhì)中天然存在的20種氨基酸的氨基酸。非限制性的實例包括P-乙?；?L-苯丙氨酸、P-碘-L-苯丙氨酸、0-甲基-L-酪氨酸、P-炔丙基氧基苯丙氨酸、P-炔丙基-苯丙氨酸、L-3- (2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、0-4-烯丙基-L-酪氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、三-0-乙酰基-GlcNAcb-絲氨酸、L-多巴、氟化苯丙氨酸、異丙基-L-苯丙氨酸、p-疊氮基-L-苯丙氨酸、p-?；?L-苯丙氨酸、p-苯甲?；?L-苯丙氨酸、L-磷酸絲氨酸、膦?；z氨酸(phosphonoserine)、膦?；野彼?phosphonotyrosine)、p-溴苯基丙氨酸、p_氨基-L-苯丙氨酸、異丙基-L-苯丙氨酸、酪氨酸的非天然類似物；谷氨酰胺的非天然類似物；苯丙氨酸的非天然類似物；絲氨酸的非天然類似物；蘇氨酸的非天然類似物；烷基、芳基、酰基、疊氮基、氰基、鹵、肼、酰肼、羥基、烯基、炔基、醚、巰基、磺?；⑽?、酯、硫代酸、硼酸鹽、硼化、磷、膦酰基、磷化氫、雜環(huán)、烯酮、亞胺、醛、羥胺、酮或氨基取代的氨基酸，或它們的組合；具有光活化交聯(lián)劑的氨基酸；自旋標記的氨基酸；熒光氨基酸；結(jié)合金屬的氨基酸；含金屬的氨基酸；放射活性氨基酸；光敏化和/或光敏異構(gòu)氨基酸；含有生物素或生物素類似物的氨基酸；含酮氨基酸；含有聚乙二醇或聚醚的氨基酸；重原子取代的氨基酸；化學(xué)可裂解或光可裂解的氨基酸；側(cè)鏈延長的氨基酸；含有有毒基團的氨基酸；糖取代的氨基酸；含碳連接糖的氨基酸；氧化還原活性的氨基酸；含a -羥基的氨基酸；氨基硫代酸；a，a 二取代氨基酸；b_氨基酸；非脯氨酸或組氨酸的環(huán)形氨基酸和除苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸以外的芳香族氨基酸。
國際專利申請PCT/GB2006/002637描述了正交核糖體/mRNA對的產(chǎn)生，其中0-mRNA中的核糖體結(jié)合位點特異結(jié)合所述0-核糖體。簡而言之，細菌核糖體是rRNA和蛋白質(zhì)的2. 5MDa的復(fù)合物，負責將mRNA翻譯成蛋白質(zhì)(The Ribosome,卷 LXVI Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, New York; 2001)。mRNA和核糖體30S亞基之間的相互作用是翻譯過程中的早期事件(Laursen, B. S. , Sorensen, H. P. , Mortensen, K. K. & SperIing-Petersen, H.U. ,Microbiol Mol Biol Rev 69，101-123 (2005))，并且已知 mRNA 的數(shù)個特性用于控制包括第一密碼子(ffikstrom, P. M. , Lind, L. K. , Berg, D. E. & Bjork, G. R. , J Mol Biol224, 949-966 (1992))、核糖體結(jié)合序列(包括 Shine Delgarno (SD)序列)(Shine, J. &Delgarno, L. , Biochem J 141，609-615(1974)，Steitz, J. A. & Jakes, K. , Proc Natl AcadSci U S A 72, 4734-4738 (1975), Yusupova, G. Z. , Yusupov, M. M. , Cate, J. H. & Noller,H. F. , Cell 106, 233-241(2001))和這些序列之間的間隔(Chen, H. , Bjerknes, M. , Kumar,R. &Jay, E. , Nucleic Acids Res 22，4953-4957 (1994))在內(nèi)的基因的表達。在某些情況下，mRNA 的結(jié)構(gòu)(Gottesman, S. et al. , The Ribosome,卷 LXVI (Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork;2001), Looman, A. C. , Bodlaender,J. , de Gruyter, M.,Vogelaar, A. & van Knippenberg, P. H. , Nucleic Acids Res14，5481-5497 (1986))，Liebhaber，S. A. , Cash, F. & Eshleman,S.S.,JMol Biol226，609-621 (1992)或代謝物的結(jié)合(Winkler, ff.，Nahvi, A. &Breaker, R. R.，Nature419，952-956 (2002))影響翻譯的起始，極少數(shù)情況下，mRNA在無SD序列也可以翻譯，但這些序列的翻譯是低效率的(Laursen, B. S. , Sorensen, H. P. , Mortensen, K.K. & Sperling-Petersen, H. U. , Microbiol Mol Biol Rev 69,101-123 (2005)),并且通過可選的起始途徑而操控(Laursen, B. S. , Sorensen, H. P. , Mortensen, K. K. &Sperling-Petersen, H. U. Initiation of protein synthesis in bacteria. MicrobiolMol Biol Rev 69, 101-123 (2005)) 對大多數(shù)的細菌基因而言，mRNA的SD區(qū)域是轉(zhuǎn)化效率的主要決定因素。典型的SD序列GGAGG通過RNA-RNA堿基配對與16S rRNA的3’末端包含CXUCC序列(被稱為抗Shine Delgarno (ASD))的區(qū)域相互作用。在大腸桿菌中，估計有 4, 122 個翻譯起點(Shultzaberger, R. K. , Bucheimer, R. E. , Rudd, K. E. &Schneider, T.D. , J Mol Biol 313，215-228 (2001))，并且這些起點在SD樣序列和AUG起始密碼子之間的間距，在SD樣序列和核糖體之間的互補程度，以及在16S rRNA 3’末端與mRNA相互作用的確切序列區(qū)域方面不同。因此，核糖體驅(qū)動由較復(fù)雜的序列組而非僅從典型的ShineDelgarno(SD)序列的翻譯。作為澄明，確信與16S rRNA 3’末端結(jié)合的mRNA序列被稱為SD序列且具體的序列GGAGG被稱為典型的SD序列。SD序列中的突變往往會導(dǎo)致快速的細胞裂解和死亡(Lee, K.，Holland-Staley,C. A. & Cunningham, P. R. , RNA 2, 1270-1285 (1996) , Wood, T. K. & Peretti, S.ff.，Biotechnol. Bioeng 38，891-906 (1991))。這種突變的核糖體錯誤調(diào)控細胞的翻譯并且不是正交的。在ASD區(qū)域的甚至單個變化就能通過對蛋白質(zhì)組合成的災(zāi)難性且全面的錯誤調(diào)節(jié)而導(dǎo)致細胞死亡的觀察結(jié)果，強調(diào)了細胞存活對ASD區(qū)域的突變的敏感性(Jacob，W.F. , Santer, M. & Dahlberg, A. E. , Proc Natl Acad Sci U S A 84,4757-4761(1987)。rRNA 中的其他突變可導(dǎo)致功能性核糖體的加工或組裝的不足。PCT/GB2006/02637介紹了針對野生型核糖體和mRNA調(diào)整復(fù)制性(duplicated)大腸桿菌核糖體mRNA對的分子特異性從而產(chǎn)生多個正交核糖體 正交mRNA對的方法。在所述這些配對中，核糖體僅高效地翻譯正交mRNA，而正交mRNA不是細胞核糖體的高效底物。本文所描述的不翻譯內(nèi)源性mRNA的正交核糖體允許期望的關(guān)連mRNA的特異翻譯而不干擾細胞的基因表達。預(yù)測并測量這些正交對之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)，顯示正交核糖體 mRNA對可以用Boolean邏輯在轉(zhuǎn)錄后對細胞編程。PCT/GB2006/02637描述了正交翻譯裝置的演化的陽性和陰性選擇機制。所述選擇方法適用于不斷演化的多個正交核糖體 mRNA對(0-核糖體 0-mRNA)。該文獻還描述了對關(guān)連和非關(guān)連0-核糖體和0-mRNA之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)的成功預(yù)測。本發(fā)明在此提供了新的進一步修飾的正交核糖體和產(chǎn)生擴展核糖體的分子解碼性質(zhì)的此類0-核糖體的方法。具體而言，本文演化了更有效地解碼四聯(lián)體密碼子的正交核糖體。本發(fā)明公開了經(jīng)演化的正交核糖體，其增強了合成的遺傳密碼擴展的效率。本發(fā)明提供了由正交核糖體和正交mRNA構(gòu)成的細胞組件。這些配對在大腸桿菌中與天然的核糖體-mRNA對并行但獨立地發(fā)揮作用。正交核糖體不合成蛋白質(zhì)組，可偏向于使用不同于天然核糖體的tRNA解碼規(guī)則進行操作。本發(fā)明在此證明了用于置于活細胞中正交mRNA背景下的密碼子(例如四聯(lián)體密碼子)的高效、高保真解碼的正交核糖體(ribo-Q)的演化。本發(fā)明組合了 ribo-Q、正交mRNA和正交氨?；?tRNA合成酶/tRNA對以顯著提高位點特異性非天然氨基酸在大腸桿菌中的引入效率。這有利地允許在多個位點引入非天然氨基酸的蛋白質(zhì)的高效合成，和/或使截短蛋白的功能和/或表型效應(yīng)最小化，例如在使用非天然氨基酸的引入來測試蛋白質(zhì)在體內(nèi)的功能的實驗中。正交密碼子本發(fā)明描述了能夠翻譯正交mRNA密碼子的演化核糖體，這表示所述核糖體按照正交遺傳密碼而不是通用遺傳密碼來翻譯mRNA信息。這引入多種可能，包括在細胞中具有兩個獨立的遺傳系統(tǒng)的可能，其中通過密碼子的差異消除串擾(cross-talk);或編碼不同多肽的mRNA分子的可能，其中根據(jù)所述多肽而使密碼子用于翻譯所述mRNA分子?？梢杂善浣M裝正交遺傳密碼子的正交密碼子，是除通用三聯(lián)體密碼子以外的密碼子。下表I顯示了通用遺傳密碼子
權(quán)利要求
1.包含位于Al196的突變的16S rRNA。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的16SrRNA，其中，所述突變是A1196G?！?br> 3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的16SrRNA，其進一步包含位于Cl 195和/或Al 197的突 變。
4.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的16SrRNA，其包含 (i)C1195A和 A1196G;或(ii)C1195T、A1196G和 A1197G ;或(iii)A1196G和 A1197G。
5.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的16SrRNA，其進一步包含A531G和U534A。
6.能夠翻譯四聯(lián)體密碼子的核糖體，所述核糖體包含前述任一項權(quán)利要求所述的16SrRNA。
7.前述任一項權(quán)利要求所述的16SrRNA在翻譯包含至少一個四聯(lián)體密碼子的mRNA中的用途。
8.基本如本文所述16SrRNA、核糖體、細胞或方法。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的16SrRNA、核糖體、細胞或方法，其參考附圖
所述。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含位于A1196的突變的16S rRNA，還涉及進一步包含位于C1195和/或A1197的突變的16S rRNA，還涉及包含(i)C1195A和A1196G、或(ii)C1195T、A1196G和A1197G或(iii)A1196G和A1197G的16S rRNA。本發(fā)明還涉及包含這類16S rRNA的核糖體及其用途。
文檔編號C12N15/11GK102782132SQ201080064303
公開日2012年11月14日 申請日期2010年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月21日
發(fā)明者海因茨·諾伊曼, 王凱航, 賈森·欽 申請人:醫(yī)藥研究委員會