專(zhuān)利名稱(chēng)：酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于酶制劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶及其制備方法。
背景技術(shù)：
酵母含有豐富的蛋白質(zhì)，葡聚糖、甘露聚糖、維生素、礦物質(zhì)和大量的谷胱甘肽等， 另外還含有4 15%的可降解的核糖核酸(RNA)，通過(guò)酶解技術(shù)，分解酵母細(xì)胞壁，溶出蛋 白質(zhì)，蛋白酶進(jìn)一步將蛋白質(zhì)分解成小肽、氨基酸等，磷酸二酯酶再分解核糖核酸生成呈味 核苷酸(I+G)等物質(zhì)，制得酵母抽提物產(chǎn)品，它不但具有良好的營(yíng)養(yǎng)作用，而且還具有很好 的保健作用，是一種具有調(diào)味、營(yíng)養(yǎng)和保健等三大功能的新型調(diào)味品，可以替代現(xiàn)有味精等 產(chǎn)品，市場(chǎng)前景非常巨大。在天然調(diào)味品中，酵母抽提物占有重要地位，在歐美日等國(guó)家已 普遍用酵母抽提物來(lái)取代肉類(lèi)水解物或代替味精作日常調(diào)味品，也可替代牛肉膏等作為生 物發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)劑。我國(guó)的啤酒和甘蔗產(chǎn)量都居世界前列，其生產(chǎn)后的副產(chǎn)品啤酒酵母泥和甘蔗糖蜜 酵母為酵母的深加工酵母抽提物產(chǎn)品提供了豐富的酵母原料資源。2009年我國(guó)甘蔗糖蜜產(chǎn) 量達(dá)到280 340萬(wàn)噸，啤酒酵母泥的產(chǎn)量為50 60萬(wàn)噸，作廢棄物處理造成嚴(yán)重的資源 浪費(fèi)與環(huán)境污染，長(zhǎng)期以來(lái)廢酵母的經(jīng)濟(jì)價(jià)值沒(méi)有得到充分利用。開(kāi)發(fā)和綜合利用我國(guó)巨 大的酵母資源具有十分顯著的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和環(huán)保效益。酵母抽提物的生產(chǎn)工藝通常是自溶法，酸堿水解法和生物酶法等三種方法。自溶 法的生產(chǎn)時(shí)間長(zhǎng)、受雜菌污染易發(fā)臭、水解度低、蛋白利用率低；化學(xué)酸堿法存在含鹽量高、 風(fēng)味差、營(yíng)養(yǎng)損失大、安全性低等問(wèn)題；而生物酶法具有反應(yīng)條件溫和，無(wú)污染物排放，水解 速度快、酶解徹底、水解氨基態(tài)氮含量高、苦味小、鮮風(fēng)味佳等特點(diǎn)。據(jù)文獻(xiàn)檢索，自1993年 以來(lái)，國(guó)內(nèi)西北輕工學(xué)院、無(wú)錫輕工大學(xué)、華南理工大學(xué)、廣東微生物工業(yè)研究所等單位都 對(duì)酵母水解、酵母抽提物生產(chǎn)等做研究，采用的都是木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶 等單一或兩種合用的生物酶水解，其水解度與氨基態(tài)氮含量都較低，生產(chǎn)原料消耗與成本 高，鮮味與風(fēng)味一般。國(guó)外日本與丹麥等國(guó)家對(duì)酵母水解也做很多研究，例如丹麥諾唯信公 司應(yīng)用堿性蛋白酶或復(fù)合蛋白酶與風(fēng)味酶于酵母水解效果較好，但價(jià)格高。綜上所述，現(xiàn)市 場(chǎng)非常急需能全面滿(mǎn)足水解度高、氨基態(tài)氮高、鮮風(fēng)味佳、成本低等要求的酵母水解專(zhuān)用復(fù) 合酶。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)酵母水解存在的水解原料受限、破壁率低、蛋白質(zhì)利用率低、 水解度低、得率低、水解物質(zhì)切點(diǎn)不佳等的技術(shù)問(wèn)題，提供一種酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶及其制 備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是本發(fā)明人在深入研究傳統(tǒng)自溶法與現(xiàn)代生物酶水解機(jī)理基礎(chǔ)上，結(jié)合酵母的物質(zhì) 分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)能水解酵母的多種酶進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)了新的方法及工藝，也開(kāi)拓了另一種思路。酵母屬真菌，它的細(xì)胞包含多種多樣的生物活性物質(zhì)，蛋白質(zhì)含量高達(dá)35 50%，較 其他動(dòng)物蛋白原料如牛肉、豬肉等都高，含有大量的人體必需氨基酸，且氨基酸組成合理。 同時(shí)還含有豐富的維生素、礦物質(zhì)和大量的谷胱甘肽、葡聚糖和甘露聚糖等，另外含有4 15%的核糖核酸(RNA)，但這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)大多存在于酵母細(xì)胞內(nèi)，且絕大部分蛋白質(zhì)是不溶 性的，不能從細(xì)胞壁及細(xì)胞膜中滲出。所以必需借助科學(xué)的方法破壞細(xì)胞壁及細(xì)胞膜，使?fàn)I 養(yǎng)物質(zhì)裸露與釋放出來(lái)，并使這些物質(zhì)轉(zhuǎn)化成具有鮮美味道與營(yíng)養(yǎng)的有效成分。綜觀已有 的酵母分解法，由于他們采用的酶是單一的，或者是內(nèi)切酶，或者是外切酶或者是風(fēng)味酶， 對(duì)酵母物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)沒(méi)有針對(duì)性，對(duì)多種物質(zhì)成分復(fù)合性沒(méi)有有效與全面作用，因而分解 蛋白的效果較差，大部分不能完全將大分子的酵母蛋白變成目標(biāo)的多肽和氨基酸，營(yíng)養(yǎng)成 分不完全，更沒(méi)有好的口感和風(fēng)味。而本發(fā)明在所設(shè)定的溫度、PH值和時(shí)間的條件下，通過(guò) 酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶中的β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶等耦合作用打開(kāi)了酵母細(xì)胞 壁的復(fù)雜結(jié)構(gòu)，切斷其中穩(wěn)定的物理化學(xué)鍵，使蛋白分子結(jié)構(gòu)變得松散，非極性蛋白基團(tuán)暴 露出來(lái)，有利于蛋白內(nèi)切酶作用加快酵母蛋白水解；另外，在酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶中的內(nèi)切 酶作用下，切斷酵母蛋白大分子肽鏈內(nèi)部的肽鍵，生成分子量較小的蛋白胨和多肽等中間 產(chǎn)物，然后由酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶中的外切酶把多肽中游離羧基末端和氨基末端逐一切斷 肽鍵水解生成低分子小肽和生物活性氨基酸等物質(zhì)，輔以風(fēng)味酶輔助修飾作用，以獲得營(yíng) 養(yǎng)豐富、水解度高、功能性?xún)?yōu)及風(fēng)味好的酵母水解產(chǎn)品。核糖核酸(RNA)在酵母水解專(zhuān)用復(fù) 合酶中的磷酸二酯酶的作用下主要生成5' —核苷酸呈味物質(zhì)調(diào)控酵母水解液的香鮮味， 減少苦味使酵母蛋白水解產(chǎn)品的味道更好，香氣更濃郁。以下是具體反應(yīng)的酶解機(jī)理的化學(xué)反應(yīng)式
H2N-CH-CChiNH-CH-CO-NH-CH-CO 廠 NH-CH-CO- ■ · NH-CH-COOH — ~-
I T I I 丁 I 丁 I
R1R2R.<R4Rn
外切酶內(nèi)切酶外切酶
H2N-CH-C00H+H2N—CH-CO—NH-CH-C00H+H2N—CH-C00H+· · +H2N-CH-COOH
R1R2R3R4R
氨基酸肽氨基酸氨基酸本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的一種酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，包括β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、內(nèi)切酶、外切 酶、風(fēng)味酶和磷酸二酯酶，按配方設(shè)計(jì)比例混合均勻得到酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其成份及其 重量份數(shù)為β -葡聚糖酶為1 30份，甘露聚糖酶為1 30份，糖化酶為1 30份，內(nèi) 切酶為15 65份，外切酶為1 10份，風(fēng)味酶為1 10份，磷酸二酯酶為1 10份。酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶的制備方法，是先將β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、內(nèi) 切酶、外切酶、風(fēng)味酶和磷酸二酯酶分別經(jīng)過(guò)發(fā)酵、提取、凍干、粉碎，然后按配方設(shè)計(jì)比例 混合均勻得到酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其工藝操作過(guò)程為
5
(1) β-葡聚糖酶的制備以大豆或豆粕或麥麩為原料，采用綠色木霉 (Trichoderma viride)菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種按常規(guī)方法制備得到，保 存?zhèn)溆茫?2)甘露聚糖酶的制備以大豆或豆粕或麥麩為原料，采用綠色木霉 (Trichoderma viride)菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種按常規(guī)方法制備得到，保 存?zhèn)溆茫?3)糖化酶的制備以大豆或豆粕或麥麩為原料，采用綠色木霉(Trichoderma viride)菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種按常規(guī)方法制備得到，保存?zhèn)溆茫?4)內(nèi)切酶的制備以木瓜蛋白酶制備為例，從木瓜樹(shù)或果實(shí)取下新鮮木瓜漿，先 用自來(lái)水或蒸餾水或去離子水沖稀或溶解木瓜乳膠，然后通過(guò)凍融提取，再經(jīng)微濾、超濾濃 縮、真空冷凍干燥、粉碎得到木瓜蛋白酶，保存?zhèn)溆?；中性蛋白酶、堿性蛋白酶的制備，按常 規(guī)方法經(jīng)發(fā)酵提取得到；(5)外切酶的制備，以大豆或豆粕或麥麩為原料，粉碎，滅菌，加入米曲霉 (Aspergillus oryzae)或米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)菌禾中， 在30 50°C、70 90%的濕度條件下發(fā)酵1 5天，然后提取、微濾、超濾、凍干、粉碎得 到，保存?zhèn)溆茫?6)風(fēng)味酶的制備，以大豆或豆粕或麥麩為原料，粉碎，滅菌，加入毛霉 (Actinomucor elegans)、米曲霉(Aspergillus oryzae)等菌種，在 25 45°C、70 90% 的濕度條件下發(fā)酵1 4天，然后提取、微濾、超濾、凍干、粉碎得到，保存?zhèn)溆茫?7)磷酸二酯酶的制備，以大豆或豆粕或麥麩為原料，粉碎，滅菌，加入桔青霉 (Penicillium citrinum)菌種，在25 45°C、70 90%的濕度條件下發(fā)酵1 4天，然后 提取、微濾、超濾、凍干、粉碎得到，保存?zhèn)溆茫?8)將上述制備好的β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、內(nèi)切酶、外切酶、風(fēng)味酶 和磷酸二酯酶，按優(yōu)化配方設(shè)計(jì)成份及其重量份數(shù)混合均勻得到酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶。以上所述的β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶，是通過(guò)綠色木霉(Trichoderma viride)菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種發(fā)酵提取制備得到，其中β _葡聚糖酶 酶活力為1000 100000u/g，甘露聚糖酶酶活力為5000 200000u/g，糖化酶酶活力為 5000 200000u/g。以上所述的內(nèi)切酶，包括木瓜酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶的混合物，混合比例為 0 5 0 5 0 5，其總酶活力為10000 800000u/g。以上所述的外切酶，包括米曲霉(Aspergillus orvzae)或米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)中的一種或多種菌種發(fā)酵提取制備得到的生物酶， 其酶活力為1000 50000u/g。以上所述的風(fēng)味酶，包括毛霉(Actinomucor elegans)、米曲霉(Aspergillus oryzae)中的一種或兩種菌種發(fā)酵提取制備得到的生物酶，其酶活力為1000 50000u/g。以上所述的磷酸二酯酶，是從桔青霉(Penicillium citrinum)菌種發(fā)酵提取得到 的磷酸二酯酶，其酶活力為1000 70000u/g。以上所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其應(yīng)用于酵母水解條件為將糖蜜酵母、啤酒酵 母、面包酵母或其他加工廢酵母加水調(diào)到8 20%濃度，在4. 5 7. 0的PH值及45 70°C的溫度下，按底物重量的0. 1 0. 6%添加本發(fā)明產(chǎn)品酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，酶解10 25 小時(shí)，然后升溫到85°C以上持續(xù)15分鐘 1小時(shí)對(duì)水解液滅酶，再分離、濃縮、干燥，最后得 到酵母抽提物產(chǎn)品。以上所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，用于糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他生產(chǎn) 加工廢酵母等酵母深加工，按水解條件水解，得到酵母水解液，檢測(cè)水解液氨基酸含量大于 0. 83g/100ml，折干氨基態(tài)氮大于6. 73%，折干總氮大于12. 0 %，且具有很強(qiáng)的鮮味和濃郁 醬香味、很好的營(yíng)養(yǎng)性及食品安全性，不需要外部添加核苷酸(I+G)等物質(zhì)，不含對(duì)人體有 害物質(zhì)。以上所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，適用于糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他生 產(chǎn)加工廢酵母等酵母深加工的應(yīng)用。以上所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其酵母水解產(chǎn)品可用于生物發(fā)酵、調(diào)味品、肉類(lèi) 食品加工、水產(chǎn)品加工、方便面調(diào)料、膨化食品及營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)品等方面。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果1、本發(fā)明在傳統(tǒng)自溶法與現(xiàn)代生物酶水解機(jī)理的基礎(chǔ)上，結(jié)合酵母蛋白質(zhì)的細(xì)胞 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，用綠色木霉(Trichoderma viride)菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種發(fā) 酵提取出適合酵母細(xì)胞破壁的β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶，以便有效地溶解酵母細(xì) 胞壁結(jié)構(gòu)，使蛋白質(zhì)有效釋放出來(lái)。2、本發(fā)明從酵母物質(zhì)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及酶解機(jī)理角度篩選出適合酵母水解的內(nèi)切蛋白 酶混合物，更有效地把經(jīng)破壁后溶出的酵母蛋白質(zhì)水解成肽類(lèi)與氨基酸等物質(zhì)。3、本發(fā)明從中國(guó)傳統(tǒng)醬油生產(chǎn)的微生物中選用米曲霉(Aspergillus oryzae)或 米根霉(lihizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)等菌種誘變、發(fā)酵、提取、分離得 到蛋白質(zhì)水解外切酶，外切酶分解小分子蛋白質(zhì)及多肽等物質(zhì)成短肽及氨基酸獲得高的水 解度與氨基態(tài)氮。4、本發(fā)明從中國(guó)傳統(tǒng)腐乳生產(chǎn)的微生物中選用毛霉(Actinomucor elegans)、米 曲霉(Aspergillus oryzae)等菌種誘變、發(fā)酵、提取、分離得到蛋白質(zhì)水解風(fēng)味酶，使酵母 水解在外切酶分解小分子蛋白質(zhì)及多肽等物質(zhì)成短肽及氨基酸獲得高的水解度與氨基態(tài) 氮的同時(shí)，再輔以風(fēng)味酶輔助修飾作用，以獲得營(yíng)養(yǎng)豐富、水解度高、功能性?xún)?yōu)及風(fēng)味好的 酵母水解產(chǎn)品。5、本發(fā)明從酵母物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及酶解機(jī)理角度，從桔青霉(Penicillium citrinum)菌種誘變、發(fā)酵、提取、分離得到磷酸二酯酶，可分解酵母蛋白里的核糖核酸 (RNA)生成5'-核苷酸(I+G)呈味物質(zhì)，使酵母水解產(chǎn)品鮮味更佳。6、本發(fā)明的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶用于酵母水解，工藝由原來(lái)的細(xì)胞破壁工藝+蛋 白質(zhì)水解工藝兩步酶解法改進(jìn)為一步酶解法，水解時(shí)間由原來(lái)兩步時(shí)間總合達(dá)32小時(shí)縮 短至10 25小時(shí)，提高水解效率。7、本發(fā)明的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶用于酵母水解，使酵母蛋白質(zhì)利用率大于90 %， 氨基酸生成率75%以上。8、本發(fā)明的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶用于酵母水解，各種生物酶共同耦合作用，使酵 母水解液氨基酸含量大于0. 83g/100ml，折干氨基態(tài)氮大于6. 73%，折干總氮大于12. 0%。9、本發(fā)明的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶用于酵母水解，使酵母水解液核苷酸(I+G)含量高，具有很強(qiáng)的鮮味和濃郁醬香味、很好的營(yíng)養(yǎng)性及食品安全性，不需要外部添加核苷酸 (I+G)等物質(zhì)，不含對(duì)人體有害物質(zhì)。10、本發(fā)明的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶用于酵母水解，使酵母水解物質(zhì)切點(diǎn)合理，營(yíng)養(yǎng) 豐富，總氮含量高，具有很高的生物培養(yǎng)生長(zhǎng)性，可替代牛肉膏作為生物發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)劑。11、本發(fā)明的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，適用于糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他 生產(chǎn)加工廢酵母等酵母深加工，其酵母水解液可用于生物發(fā)酵、調(diào)味品、肉類(lèi)食品加工、水 產(chǎn)品加工、方便面調(diào)料、膨化食品及營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)品等方面。
圖1是本發(fā)明工藝流程示意圖。
具體實(shí)施例方式為便于理解本發(fā)明，結(jié)合附圖和具體實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將各實(shí)施例看 做是對(duì)本發(fā)明的任何限制。酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶的制備，是將β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、內(nèi)切酶、外 切酶、風(fēng)味酶和磷酸二酯酶分別經(jīng)過(guò)發(fā)酵、提取、凍干、粉碎，然后按優(yōu)化配方設(shè)計(jì)比例混合 均勻得到酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶。具體方法是實(shí)施例1β-葡聚糖酶的制備以大豆為原料，粉碎，滅菌，加入綠色木霉(Trichoderma viride)菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種，按常規(guī)方法發(fā)酵3天，然后提取、分離、 超濾、凍干，粉碎得到β-葡聚糖酶，保存?zhèn)溆?。甘露聚糖酶的制備以大豆為原料，粉碎，滅菌，加入綠色木霉菌種(Trichoderma viride)或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種，按常規(guī)方法發(fā)酵3天，然后提取、分離、超濾、 凍干，粉碎得到甘露聚糖酶，保存?zhèn)溆?。糖化酶的制備以大豆為原料，粉碎，滅菌，加入綠色木霉(Trichoderma viride) 菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種，按常規(guī)方法發(fā)酵3天，然后提取、分離、超濾、凍 干，粉碎得到糖化酶，保存?zhèn)溆?。?nèi)切酶的制備以木瓜蛋白酶制備為例，從木瓜樹(shù)或果實(shí)取下新鮮木瓜漿，先用自 來(lái)水或蒸餾水或去離子水沖稀或溶解木瓜乳膠，然后通過(guò)凍融提取，再經(jīng)微濾、超濾濃縮、 真空冷凍干燥、粉碎得到木瓜蛋白酶，密封保存?zhèn)溆谩Ｍ馇忻傅闹苽湟源蠖篂樵?，粉碎，滅菌，加入米曲?Aspergillus oryzae)或 米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)菌種，在 30°C、90%的濕度條件 下發(fā)酵1天，然后提取、微濾、超濾、凍干、粉碎得到外切酶，保存?zhèn)溆谩ｏL(fēng)味酶的制備以大豆為原料，粉碎，滅菌，加入毛霉(Actinomucor elegans)、米 曲霉(Aspergillus oryzae)等菌種，在25°C、70%的濕度條件下發(fā)酵1天，然后提取、微濾、 超濾、凍干、粉碎得到風(fēng)味酶，保存?zhèn)溆?。磷酸二酯酶的制備以大豆為原料，粉碎，滅菌，加入桔青?Penicillium citrinum)菌種，在25°C、70%的濕度條件下發(fā)酵1天，然后提取、微濾、超濾、凍干、粉碎得
到磷酸二酯酶酶，保存?zhèn)溆谩?br>
將上述的β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、內(nèi)切酶、外切酶、風(fēng)味酶和磷酸二酯 酶按重量份數(shù)5 10 17 38 10 10 10的比例，混合，得到酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶。本例產(chǎn)品采取紫外法進(jìn)行酶活測(cè)定，其中β-葡聚糖酶酶活為17500u/g，甘露聚 糖酶酶活為70000u/g，糖化酶的酶活為115000u/g，內(nèi)切酶的酶活為470000u/g，外切酶的 酶活為50000u/g，風(fēng)味酶的酶活為50000u/g，磷酸二酯酶的酶活70000u/g，置于10°C保存， 十二個(gè)月保質(zhì)。本實(shí)施例產(chǎn)品應(yīng)用結(jié)果(1)水解糖蜜酵母先將糖蜜酵母加水調(diào)到8 20%的濃度，在4. 5 7. 0的PH 值及45 70°C的溫度下，按底物重量的0. 1 0. 6%添加本實(shí)施例得到的產(chǎn)品酵母水解專(zhuān) 用復(fù)合酶，酶解10 25小時(shí)，結(jié)果見(jiàn)表1。表1 水解糖蜜酵母結(jié)果表
權(quán)利要求
1.一種酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其特征在于包括β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、內(nèi) 切酶、外切酶、風(fēng)味酶和磷酸二酯酶，其成份及其重量份數(shù)為β -葡聚糖酶為1 30份，甘 露聚糖酶為1 30份，糖化酶為1 30份，內(nèi)切酶為15 65份，外切酶為1 10份，風(fēng) 味酶為1 10份，磷酸二酯酶為1 10份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶的制備方法，其特征在于先將β-葡 聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、內(nèi)切酶、外切酶、風(fēng)味酶和磷酸二酯酶分別經(jīng)過(guò)發(fā)酵、提取、凍 干、粉碎，然后按配方設(shè)計(jì)比例混合均勻得到酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其工藝過(guò)程為(1)β-葡聚糖酶的制備以大豆或豆粕或麥麩為原料，采用綠色木霉(Trichoderma viride)菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種按常規(guī)方法制備得到，保存?zhèn)溆茫?2)甘露聚糖酶的制備以大豆或豆粕或麥麩為原料，采用綠色木霉(Trichoderma viride)菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種按常規(guī)方法制備得到，保存?zhèn)溆茫?3)糖化酶的制備以大豆或豆粕或麥麩為原料，采用綠色木霉(Trichoderma viride)菌種或黑曲霉(Aspergillus niger)菌種按常規(guī)方法制備得到，保存?zhèn)溆茫?4)內(nèi)切酶的制備，內(nèi)切酶的制備，以木瓜蛋白酶制備為例，從木瓜樹(shù)或果實(shí)取下新鮮 木瓜漿，先用自來(lái)水或蒸餾水或去離子水沖稀或溶解木瓜乳膠，然后通過(guò)凍融提取，再經(jīng)微 濾、超濾濃縮、真空冷凍干燥、粉碎得到木瓜蛋白酶，保存?zhèn)溆?；中性蛋白酶、堿性蛋白酶的 制備，按常規(guī)方法經(jīng)發(fā)酵提取得到；(5)外切酶的制備，以大豆或豆粕或麥麩為原料，粉碎，滅菌，加入米曲霉(Aspergillus oryzae)或米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)菌種，在 30 50°C、 70 90%的濕度條件下發(fā)酵1 5天，然后提取、微濾、超濾、凍干、粉碎得到，保存?zhèn)溆茫?6)風(fēng)味酶的制備，以大豆或豆粕或麥麩為原料，粉碎，滅菌，加入毛霉(Actinomucor elegans)、米曲霉(Aspergillus oryzae)等菌種，在25 45°C、70 90%的濕度條件下發(fā) 酵1 4天，然后提取、微濾、超濾、凍干、粉碎得到，保存?zhèn)溆茫?7)磷酸二酯酶的制備，以大豆或豆粕或麥麩為原料，粉碎，滅菌，加入桔青霉 (Penicillium citrinum)菌種，在25 45°C、70 90%的濕度條件下發(fā)酵1 4天，然后 提取、微濾、超濾、凍干、粉碎得到，保存?zhèn)溆茫?8)將上述制備好的β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、內(nèi)切酶、外切酶、風(fēng)味酶和磷 酸二酯酶，按配方設(shè)計(jì)成份及其重量份數(shù)混合均勻得到酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其特征在于所述的葡聚糖酶、甘 露聚糖酶、糖化酶，是通過(guò)綠色木霉菌種或黑曲霉菌種發(fā)酵制備提取得到，其中β -葡聚糖 酶酶活力為1000 100000u/g，甘露聚糖酶酶活力為5000 200000u/g，糖化酶酶活力為 5000 200000u/g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其特征在于所述的內(nèi)切酶，包括木瓜 酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶的混合物，混合比例為0 5 0 5 0 5，其總酶活力為 10000 800000u/g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其特征在于所述的外切酶，包括米 曲霉或米根霉、黑曲霉中的一種或多種菌種發(fā)酵制備得到的生物酶，其酶活力為1000 50000u/g。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其特征在于所述的風(fēng)味酶，包括毛霉、米曲霉菌中的一種或兩種菌種發(fā)酵制備得到的生物酶，其酶活力為1000 50000u/g。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其特征在于所述的磷酸二酯酶，是從 桔青霉發(fā)酵物提取得到的磷酸二酯酶，其酶活力為1000 70000u/g。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其特征在于所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù) 合酶，其應(yīng)用于酵母水解條件為將糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他加工廢酵母加水 調(diào)到8 20%濃度，在4. 5 7. 0的PH值及45 70°C的溫度下，按底物重量的0. 1 0. 6% 添加上述酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，酶解10 25小時(shí)，然后升溫到85°C以上持續(xù)15分鐘 1 小時(shí)對(duì)水解液滅酶，再分離、濃縮、干燥，最后得到酵母抽提物產(chǎn)品。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶，其特征在于所述的酵母水解專(zhuān)用 復(fù)合酶用于糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他生產(chǎn)加工廢酵母等酵母深加工，按水解 條件水解，得到酵母水解液，檢測(cè)水解液氨基酸含量大于0. 83g/100ml，折干氨基態(tài)氮大于 6. 73%，折干總氮大于12. 0%o
10.如權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶在糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他 生產(chǎn)加工廢酵母等酵母深加工方面的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求1所述的酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶的酵母水解產(chǎn)品在生物發(fā)酵、調(diào)味品、肉 類(lèi)食品加工、水產(chǎn)品加工、方便面調(diào)料、膨化食品及營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)品方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶及其制備方法，本復(fù)合酶包括的酶成份及其重量份數(shù)為β-葡聚糖酶為1～30份，甘露聚糖酶為1～30份，糖化酶為1～30份，內(nèi)切酶為15～65份，外切酶為1～10份，風(fēng)味酶為1～10份，磷酸二酯酶為1～10份。其制備方法是先將β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、內(nèi)切酶、外切酶、風(fēng)味酶和磷酸二酯酶分別經(jīng)過(guò)發(fā)酵、提取、凍干、粉碎，然后按配方設(shè)計(jì)比例混合均勻得到酵母水解專(zhuān)用復(fù)合酶。由于在多種生物酶共同耦合水解作用，使酵母水解時(shí)間由傳統(tǒng)的20～32小時(shí)縮短至10～25小時(shí)，蛋白質(zhì)利用率大于90％，氨基酸生成率75％以上，氨基酸含量大于0.83g/100ml，折干總氮大于12.0％。
文檔編號(hào)A23L1/221GK102115734SQ201010584810
公開(kāi)日2011年7月6日 申請(qǐng)日期2010年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月13日
發(fā)明者劉漢靈, 黃月桂 申請(qǐng)人:南寧龐博生物工程有限公司