專利名稱：一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法。屬生物工程技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
腈類化合物是一類主要的污染物，腈基水解細(xì)胞將氰基變成羧基不但能減少環(huán)境污染，而且得到的羧酸類物質(zhì)還是一類十分有用的化合物。將一種腈水解酶產(chǎn)生菌固定化， 加入適量底物甘氨腈，通過最適酶反應(yīng)條件的選擇，得到產(chǎn)物甘氨酸。這種固定化細(xì)胞可以反復(fù)多次利用，提高底物轉(zhuǎn)化率。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案為將腈水解酶產(chǎn)生菌包埋在海藻酸鈉/PEG400小珠中，加入 Tris-Hcl緩沖液(含CaCl2)，加入底物甘氨腈，在一定溫度，pH值條件下反應(yīng)一定時間得到產(chǎn)物甘氨酸溶液，將溶液加熱至70°C -80°C濃縮，使多余的底物揮發(fā)，濃縮至原體積一半后冷卻至室溫，加3-4倍乙醇或甲醇重結(jié)晶，得到甘氨酸。上述過程中，Tris-Hcl緩沖液的量為10mL，其中含0. 5g/LCaCl2，底物甘氨腈濃度為75mM，溫度為30°C，pH值為7.0，反應(yīng)時間120min。
具體實施例方式下面的實例將具體說明本發(fā)明的操作方法，但不能作為對本發(fā)明的限定。實例一1.腈水解酶產(chǎn)生菌固定化將菌體懸浮于pH7. 0的Tris-Hcl緩沖液，并加入經(jīng)高壓蒸汽滅菌的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2. 5%和5%海藻酸鈉與PEG400的共混物，混勻后用注射器平穩(wěn)注入濃度為0. IMCaCl2溶液中，4°C固化池，得到的小珠經(jīng)紗布過濾后用Tris-Hcl緩沖液洗去表面的未固定的細(xì)胞和CaCl2溶液，晾干后制得。2.甘氨酸的生產(chǎn)方法在上述制得的海藻酸鈉/PEG400小珠中，加入IOmL Tris-Hcl緩沖液(含0. 5g/ LCaCl2)，加入濃度為75mM的底物甘氨腈，30°C，pH 7. 0，反應(yīng)120min得到產(chǎn)物甘氨酸。實例二在海藻酸鈉/PEG400小珠中，加入IOmL Tris-Hcl緩沖液(含0. 5g/LCaCl2)，加入濃度為75mM的底物甘氨腈，pH 7. 0，反應(yīng)120min，對不同溫度下固定化細(xì)胞的比酶活進(jìn)行測定(見表1)，結(jié)果表明在30°C時，固定化細(xì)胞的比酶活最高，因此反應(yīng)體系的最適溫度為 30 "C。表1不同溫度下固定化細(xì)胞的比酶活
權(quán)利要求
1.一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法，其特征在于將腈水解酶產(chǎn)生菌包埋在海藻酸鈉/PEG400小珠中，加入TriS-Hcl緩沖液(含CaCl2)，加入底物甘氨腈，在一定溫度，PH值條件下反應(yīng)一定時間得到產(chǎn)物甘氨酸溶液，將溶液加熱濃縮，使多余的底物揮發(fā)， 濃縮至原體積一半后冷卻至室溫，加乙醇或甲醇重結(jié)晶，得到甘氨酸。
2.如權(quán)利要求1所述的一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法，其特征在于所述的Tris-Hcl緩沖液的量為10mL，其中含0. 5g/LCaCl2。
3.如權(quán)利要求1所述的一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法，其特征在于所述的底物甘氨腈濃度為75mM。
4.如權(quán)利要求1所述的一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法，其特征在于所述的反應(yīng)溫度為30°C，pH值為7. 0，反應(yīng)時間120min。
5.如權(quán)利要求1所述的一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法，其特征在于所述的加熱濃縮溫度為70°C -80°C
6.如權(quán)利要求1所述的一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法，其特征在于所述的加乙醇或甲醇的量為濃縮后溶液體積的3-4倍。
全文摘要
本發(fā)明屬生物工程技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種固定化腈水解酶產(chǎn)生菌生產(chǎn)甘氨酸的方法。具體是將一種腈水解酶產(chǎn)生菌固定化，加入適量底物甘氨腈，通過最適酶反應(yīng)條件的選擇，得到產(chǎn)物甘氨酸。這種固定化細(xì)胞可以反復(fù)多次利用，提高底物轉(zhuǎn)化率。
文檔編號C12P13/04GK102559793SQ201010578180
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月8日
發(fā)明者鄧超, 陳敬華, 馬莉 申請人:無錫恒宇生物科技有限公司