專利名稱：海洋低溫右旋糖酐酶與產(chǎn)酶方法及其產(chǎn)生菌s6-2的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物，特別是一種分離自中國江蘇省連云港海域的弧菌S6-2 (Vibrio sp. S6-2) CGMCC NO. 4011 (已于2010年7月16日保藏在中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏編號為CGMCC NO. 4011)；本發(fā)明還涉及該菌株產(chǎn) 海洋低溫右旋糖酐酶的方法及其產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
右旋 n if (Dextean) (a homoglycan of D-glucopyranose) ^ 95% % α -1, 6 糖酐鍵的多糖。右旋糖酐酶(Dextranase, α -D-1, 6-Glucan-6-D_Glucanohydrolase， EC3.2. 1. 11)，又叫α-葡聚糖酶，是專一切割右旋糖酐(Dextean)中α-1，6糖酐鍵的水解 酶。右旋糖酐酶有很重要的應(yīng)用價值，在齲齒防治、制糖工業(yè)和藥用右旋糖酐的生產(chǎn)等方面 發(fā)揮著越來越重要的作用。右旋糖酐酶在制糖工業(yè)中降解多糖聚合物，降低多糖的相對分 子質(zhì)量，從而降低糖的黏性。而在口腔疾病研究的領(lǐng)域中，右旋糖酐酶能有效阻滯唾液糖蛋 白和粘性葡聚糖所組成的口腔牙菌斑形成，對齲齒和牙周病的防治具有重要的意義。在血 液替代品制造中該酶被用于控制右旋糖酐的水解；并且可以增強(qiáng)抗菌藥物的療效。目前國內(nèi)外報道的產(chǎn)生右旋糖酐酶微生物主要為青霉(/^/7ici#i )、斯達(dá)油 月旨酵母 iLipomyces s tarkeyi )、對角毛殼菌(Chae tomium gracile )、曲霄(Aspergillus ustus )、芽孢桿菌、Bacillus)、鏈球菌QStr印tococcus )均能產(chǎn)生右旋糖酐酶。低溫酶(cold-adapted-enzyme)，是指在低溫條件下能有效催化生化反應(yīng)的一類 酶，低溫酶具有最適溫度低，低溫下催化活性高，高溫下容易失活等性質(zhì)，在工業(yè)生產(chǎn)中可 以節(jié)約能源及減少中溫菌的污染，這些催化性質(zhì)使低溫酶在工業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用中具有很大的優(yōu) 勢。目前右旋糖酐酶主要分離于口腔、陸地及溫泉，大部分酶為中溫酶，最適溫度大多為 50°C，導(dǎo)致右旋糖酐酶在應(yīng)用時能量消耗大，成本高。低溫酶主要來源于低溫生態(tài)環(huán)境如海 水、海底沉積物、冰川、高山、南北極的低溫微生物產(chǎn)生，隨著陸地資源的不斷開發(fā)而面臨枯 竭，近年來人們逐漸將海洋微生物作為獲得低溫蛋白酶的新來源。目前國內(nèi)外對海洋微生 物產(chǎn)右旋糖酐酶的研究尚未見報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的能產(chǎn)低溫右旋 糖酐酶的來自海洋的弧菌S6-2。本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題是提供上述弧菌S6-2產(chǎn)低溫右旋糖酐酶的方 法及產(chǎn)品。本發(fā)明的特征包括弧菌S6-2 (Kzlrio sp. S6-2)菌株本身(以下稱菌株S6-2)，以 及利用該菌株產(chǎn)低溫右旋糖酐酶的方法，以及利用該菌株所產(chǎn)的右旋糖酐酶產(chǎn)品。本發(fā)明所涉及的菌株S6-2是在中國江蘇省連云港海域的海水中分離到的弧菌 S6-2 (Vibrio sp. S6-2)，該弧菌S6-2于2010年7月16日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏編號為CGMCC NO. 4011。保藏單位地址北京市朝陽 區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所。以下對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的闡述。一、本發(fā)明菌株S6-2的形態(tài)特征與生理生化特征。1.1形態(tài)特征
菌株S6-2為革蘭氏陰性桿狀細(xì)菌、無芽孢，大小約為1. 31-1. 58 μ mXO. 53-0. 79 μ m， 參見圖1。在含有右旋糖酐固體培養(yǎng)基上的菌落特征菌落直徑2mm-5mm，圓形、乳白色、濕 潤、透明，菌落長出后加入95%乙醇，冷凍3、h，菌落周圍出現(xiàn)透明圈，參見圖2。1.2生理生化特征
菌株S6-2的生理生化特征以及與其它弧菌的比較見圖3、4。菌株S6-2V-P試驗(yàn)陰性、 MR試驗(yàn)陽性，無氯化鈉不能生長，能液化明膠，有運(yùn)動能力；能利用蔗糖、果糖，而不能利用 乳糖、半乳糖、甘露糖、木糖醇、纖維二糖、阿拉伯糖、蜜二糖、山梨醇。通過Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (second edition)分析比較，初步判定該菌株S6-2為弧菌屬 {Vibri)。1. 3菌株S6-2的分子生物學(xué)鑒定
用Takara試劑盒提取DNA模板，并于_40°C保存。正向弓丨物Pl :5 -GAGAGTTTGATCCTGGCT-3 ,反向弓丨物 P2 5 -CGGCTACCTTGTTACGAC-3 。反應(yīng)體系 50 1，Taq 酶 2U，反應(yīng)條件為 95°C預(yù)變性 5min， 94°C變性lmin，53°C退火30s，72°C延伸90、35個循環(huán)，721延伸IOmin0 PCR產(chǎn)物的純化、 克隆、測序由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成。擴(kuò)增菌株S6-2的16S rDNA，其長 度為1500bp。將菌株S6-2的16S rRNA基因序列提交GenBank數(shù)據(jù)庫，通過16S rDNA序列 同源性比較，可以初步確認(rèn)該菌為弧菌屬(mrio)。將親緣關(guān)系較近的菌株16S rDNA應(yīng)用 MEGA軟件進(jìn)行多重比較，用中鄰接法(Neibor-joining method)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，從進(jìn)化樹表 明菌株S6-2與Vibrio alginolyticus (HM771350)親緣關(guān)系最近。參見圖5。二、本發(fā)明菌株S6-2的生長特性
本發(fā)明提供的菌株S6-2，對其生長特性進(jìn)行了細(xì)致的研究，基本摸清不同條件下該菌 的生長情況。2. 1本發(fā)明中涉及的培養(yǎng)基
2216E培養(yǎng)基蛋白胨0. 5%，酵母粉0. 1%，瓊脂2%，陳海水配制，pH8。初篩培養(yǎng)基蛋白胨1%，牛肉膏0.5%，右旋糖酐0.2%，瓊脂2%，陳海水配制，pH 8. 0 ；
產(chǎn)酶培養(yǎng)基酵母膏0. 1%，蛋白胨0. 1%，右旋糖酐1%，陳海水配制，PH 8. 0。微量礦物鹽溶液(每升)CuS04*5H20，0.01g; ZnSO4 ·7Η20，0. lg; CoCl2 ·6Η20， 0. 005g; MnCl2 ·4Η20, 0. 2g; Na2MoO4 ·2Η20, 0. lg; KBr, 0. 05g; ΚΙ, 0. 05g; H3BO3, 0. Ig； NaF, 0. 05g; LiCl, 0. 05g; Al2 (S04) 3，0. 05g; NiCl2 ·6Η20, 0. Olg; VoSO4 ·2Η20, 0. 005g; H2WO4 · 2H20, 0. 002g; Na2SeO4j 0. 005g; SrCl · 6H20, 0. 005g; BaCl2, 0. 005g。2. 2種子液的制備將保藏在2216E培養(yǎng)基的弧菌S6-2接種到2216E培養(yǎng)基中， 轉(zhuǎn)速180r/min，裝液量20%，培養(yǎng)12h。2. 3溫度對菌株S6-2生長的影響將種子液以2%接種量于2216E培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速180r/min，裝液量20%，分別在不同溫度下 培養(yǎng)，每隔一段時間測定細(xì)胞濃度，選擇在600nm波長下測定OD值，該菌株能夠在4°C下生 長，其生長溫度范圍為4-37°C，最適生長溫度為25°C，見圖6。2. 4 pH對弧菌S6-2生長的影響
在2216E培養(yǎng)基中加入終濃度為lOmmol/L的磷酸醋酸硼酸(1 1 :1)作為緩沖液， 使培養(yǎng)基的PH分別為4. 0-11. 0之間，在25°C培養(yǎng)24小時，測定細(xì)胞濃度，生長pH范圍為 6-11，最適生長pH為7.0，見圖7。2. 5 NaCl對菌株S6-2生長的影響
按照2. 2方法制備種子液，在2216E培養(yǎng)基(將陳海水改用微量礦物鹽溶液代替，每升 培養(yǎng)基加入IOml)中加入NaCl，使之為0%到12%的NaCl，在25°C培養(yǎng)24小時，測定細(xì)胞濃 度，生長的NaCl濃度為0. 5%-10%，最適生長的NaCl濃度為4%，見圖8。三、菌株S6-2產(chǎn)低溫右旋糖酐酶的方法
發(fā)明人對弧菌S6-2 {vibrio S6-2)產(chǎn)低溫右旋糖酐酶的產(chǎn)酶條件進(jìn)行了研究。3. 1發(fā)酵時間對菌株S6-2產(chǎn)酶的影響
將種子液接入到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，在25°C、180r/min下，振蕩培養(yǎng)48h，每4h取出測酶活 力及0D·。在24h之前，產(chǎn)酶量上升速度較快，到發(fā)酵24h時(即菌體生長到穩(wěn)定期)產(chǎn)酶 量最高，隨時間增加，酶活力逐漸下降，見圖9。3. 2發(fā)酵溫度對菌株S6-2產(chǎn)酶影響
在不同溫度下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，結(jié)果顯示20-30°C時右旋糖酐酶產(chǎn)量達(dá)到最高，低于 20°C、高于30°C的情況下產(chǎn)酶均迅速下降。15°C和35°C時分別只有最高產(chǎn)酶量13. 7%和 50. 3%的產(chǎn)酶量。低于20°C時菌體生長緩慢，產(chǎn)酶量也相應(yīng)降低；而溫度高于30°C后，菌體 代謝太快，衰老快，不利于產(chǎn)酶，見圖10。3. 3培養(yǎng)基pH對菌株S6-2產(chǎn)酶的影響
在不同PH條件下發(fā)酵培養(yǎng)24h后測定右旋糖酐酶活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明隨著pH的升高， 酶產(chǎn)量逐漸增加，當(dāng)PH達(dá)到7. 0時產(chǎn)酶量達(dá)到最大；pH繼續(xù)升高，酶產(chǎn)量迅速下降。在低 于pH5. 0或高于pH10. 0時酶產(chǎn)量均很低，見圖11。3. 4 NaCl濃度對菌株S6-2產(chǎn)酶的影響
NaCl濃度對產(chǎn)酶影響不太顯著。起初，產(chǎn)右旋糖酐酶的量隨NaCl濃度的增加而逐漸增 加，當(dāng)培養(yǎng)基NaCl濃度升至4%時，產(chǎn)右旋糖酐酶最高，進(jìn)一步升高NaCl濃度則會對菌體生 長和右旋糖酐酶酶活積累產(chǎn)生一定的抑制作用。3. 5裝液量對菌株S6-2產(chǎn)酶的影響
搖瓶裝液量分別為10%、15%、20%、25%、30%和40%進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，結(jié)果表明，裝液量太少 溶氧過大，對菌體造成傷害不利于產(chǎn)酶，裝液量太多溶氧太差，不利于菌體生長，同樣降低 產(chǎn)酶，結(jié)果顯示裝液量在25%時產(chǎn)酶最高，見圖12。3. 6不同碳氮源對菌株S6-2產(chǎn)酶的影響
分別在培養(yǎng)基中添加不同的碳源和氮源進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵24h后測定發(fā)酵液酶活 力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在碳源的比較中，麥芽糖最能促進(jìn)產(chǎn)酶，葡萄糖和可溶性淀粉次之，乳糖、纖 維素不利于產(chǎn)酶，培養(yǎng)基中添加不同碳源對產(chǎn)酶的影響較大；不同氮源的發(fā)酵結(jié)果顯示， 酵母膏最有利于產(chǎn)酶，胰蛋白胨和蛋白胨、酪蛋白、玉米粉次之，無機(jī)氮源不利于產(chǎn)酶，見圖13。本實(shí)驗(yàn)證明適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)基中的碳氮源，可以較高地促進(jìn)右旋糖酐酶的產(chǎn)出。四、低溫右旋糖酐酶的性質(zhì) 4. 1粗酶液的制備
將弧菌S6-2 (Vibrio sp. S6-2)菌株接種到2216E培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)速180r/min，裝液量 20%，培養(yǎng)12h，得種子液；將種子液以2%的接種量接種于產(chǎn)酶培養(yǎng)基，180r/min，25°C培養(yǎng) 24h, 10000r/min離心 5min，取上清液經(jīng)過硫酸銨、DEAE-s印harose Flat Flow和 S印hacryl S-200方法制備低溫右旋糖酐酶。4. 2酶作用溫度對酶活性的影響
將右旋糖酐酶置于不同溫度下與底物發(fā)生反應(yīng)，測定酶活力，結(jié)果見圖14，酶的最適作 用溫度為20°C，5°C仍有34%的酶活力，在5°C 50°C溫度范圍時有較高的催化活力。4. 3酶的熱穩(wěn)定性 取適量酶液分別在不同溫度(201、301、401和60°C)下保溫2. 5h，每隔0. 5到Ih取
出一組樣品，迅速置于4°C冰箱內(nèi)，待保溫結(jié)束后統(tǒng)一在標(biāo)準(zhǔn)條件下測定殘余酶活，以未處 理酶液的酶活設(shè)為100%，結(jié)果見圖15，在60°C保溫2h后該酶仍具有50%以上的活性。4. 4酶的作用pH對酶活性的影響
將酶液與在不同PH的1. 0 %的右旋糖酐溶液中在20°C下進(jìn)行酶活力測定，不同pH值 的緩沖液為:50mM檸檬酸鈉緩沖液(pH3. 0到6. 0) ；50mM磷酸鈉緩沖液(pH 6. 0到8. 0)； 50mM Tris-鹽酸緩沖液(pH 8.0 to 9.0) ；50mM甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液(pH9. 0到10. 0)。 結(jié)果見圖16，pH7. 0該酶的活性最高。4.5酶的pH穩(wěn)定性
將50ul酶液與150ul不同pH的緩沖液混合，緩沖液為伯瑞坦-羅賓森 (Britton-Robinson)緩沖溶液，pH 分別為 3. 0,4. 0,5. 0,6. 0,7. 0,8. 0,9. 0,10. 0，在 20°C水 浴鍋中保溫Ih取出測定殘余酶活，將未處理酶液的酶活設(shè)為100%。結(jié)果見圖17，結(jié)果表明 在20° C保溫下Ih后，右旋糖酐酶在pH6. 0-10. 0范圍內(nèi)穩(wěn)定，殘余酶活力保持在50%以 上，在？朋.0有11.6%殘余酶活。4. 6金屬離子、化學(xué)試劑對酶的作用
將各種金屬離子與酶液混合，使其最終濃度達(dá)到1.0 1111、5.01111，然后在201下測酶活， 結(jié)果見圖18。將各種化學(xué)試劑與酶液混合，使其達(dá)到預(yù)定濃度，測定酶活，結(jié)果見圖19。結(jié) 果發(fā)現(xiàn)低濃度的Al3+對右旋糖酐酶有激活作用，高濃度的Al3+會抑制該酶活性。Hg2+、Pb2+、 Mn2+、Mg2+、Li2+、Co3+、Cu2+、Zn2+對酶有不同程度的抑制作用。其它金屬離子如Ca2+、Ba2+和 Fe3+對該酶的影響不大。化學(xué)試劑SDS、尿素、DTT和NBS對酶有抑制作用。4.7右旋糖酐酶活測定。①右旋糖酐酶活測定方法取1%右旋糖酐溶液100 μ L加入100 μ L酶液，空白 以100 μ L滅活的酶液代之，20°C反應(yīng)15min，立即放入冰浴中終止反應(yīng)，加入200 μ L DNS 100°C煮沸5min，終止反應(yīng)并顯色，加入3mL去離子水振蕩混勻，取200 μ L于96孔酶標(biāo)板上 于520nm下進(jìn)行吸光值測定。②酶活力單位定義上述反應(yīng)條件下每分鐘水解右旋糖酐產(chǎn)生1 μ g麥芽糖所需 的酶量，定義為一個酶活力單位(U)。本發(fā)明方法所產(chǎn)低溫右旋糖酐酶在齲齒防治、制糖工業(yè)和藥用右旋糖酐的生產(chǎn)等方面發(fā)揮著重要的作用。
圖1為菌株S6-2形態(tài)染色特征(10X 100)。圖2為菌株S6-2在含右旋糖酐平板上的透明圈。圖3為菌株S6-2的生理生化特征圖表。圖4為菌株S6-2理化特征與其它弧菌的比較圖表。圖5為菌株S6-2的16S rRNA進(jìn)化樹分析圖。圖6 為溫度對菌株 S6-2 生長的影響圖。5°C(^)，10°C(_)，15°CC4)，20°Cra)， 250C (Δ),30°C (0),35°C (X)。圖7為pH對菌株S6-2生長的影響圖。圖8為NaCl對菌株S6-2生長的影響圖。圖9為時間對菌株S6-2生長和產(chǎn)酶的影響圖。圖10為溫度對菌株S6-2產(chǎn)酶的影響圖。圖11為pH對菌株S6-2產(chǎn)酶的影響圖。圖12為裝液量對菌株S6-2產(chǎn)酶的影響圖。圖13為碳氮源對菌株S6-2產(chǎn)酶的影響圖表。圖14為溫度對酶活性的影響圖。圖15為溫度對酶熱穩(wěn)定性的影響圖，20°C ( ),30°C (_)，40°C (A),60°C (X)0圖16為pH對酶活力的影響圖。圖17為pH對酶穩(wěn)定性的影響圖。圖18為金屬離子對酶活力的影響圖表。圖19為化學(xué)試劑對酶活力的影響圖表。本發(fā)明弧菌S6-2 iVibriosp. S6-2)己于2010年7月16日保藏在中國微生物菌 種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏編號為CGMCC NO. 4011。保藏單位地址北 京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所。
具體實(shí)施例方式以下參照附圖，進(jìn)一步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn) 一步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對其權(quán)利的限制。實(shí)施例1。一種弧菌S6-2 (Kzlriosp. S6_2)CGMCC NO. 4011。該菌株具有以下特 征菌株為革蘭氏陰性桿狀細(xì)菌、無芽孢，大小約為1. 31-1. 58 μ mXO. 53-0. 79 μ m ；在含有 右旋糖酐固體培養(yǎng)基上的菌落特征菌落直徑2mm-5mm，圓形、乳白色、濕潤、透明，菌落長 出后加入95%乙醇，冷凍；T4h，菌落周圍出現(xiàn)透明圈；菌株V-P試驗(yàn)陰性、MR試驗(yàn)陽性，無氯 化鈉不能生長，能液化明膠，有運(yùn)動能力；能利用蔗糖、果糖，而不能利用乳糖、半乳糖、甘露 糖、木糖醇、纖維二糖、阿拉伯糖、蜜二糖、山梨醇。弧菌S6-2的生長特性為該菌株生長溫 度范圍為4-37°C，生長pH范圍為6-11 ；生長的NaCl濃度范圍為0. 5%-10% ；該菌株最適生 長溫度為25°C ；最適生長pH為7. 0 ；最適生長的NaCl濃度為4%。實(shí)施例2。一種如實(shí)施例1所述的弧菌S6-2 CGMCC NO. 4011產(chǎn)低溫右旋糖酐酶的方法，其步驟如下將弧菌S6-2 {vibrio sp. S6-2)菌株接種到2216E培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)速 180r/min，裝液量20%，培養(yǎng)12h，得種子液；將種子液以2%的接種量接種于產(chǎn)酶培養(yǎng)基， 180r/min，25°C 培養(yǎng) 24h, 10000r/min 離心 5min，取上清液經(jīng)過硫酸銨、DEAE-sepharose Flat Flow和S印hacryl S-200方法制備低溫右旋糖酐酶。 實(shí)施例3。一種如實(shí)施例2所述的方法所產(chǎn)低溫右旋糖酐酶，該低溫右旋糖酐酶 具有以下特征所述的低溫右旋糖酐酶的性質(zhì)為右旋糖酐酶的最適作用溫度為20°C，在 60°C保溫2h后該酶仍具有50%以上的活性；右旋糖酐酶在pH6. 0-10. 0范圍內(nèi)穩(wěn)定，Hg2+、 Pb2+、Mn2+、Mg2+、Li2+、Co3+、Cu2+、Zn2+對酶有不同程度的抑制作用；Al3+對該酶有激活作用； SDS、尿素、DTT和NBS對該酶有抑制作用。
權(quán)利要求
一種弧菌S6 2(Vibrio sp. S6 2)CGMCC N0.4011。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述弧菌S6-2(Vibrio sp. S6-2) CGMCC NO. 4011,其特 征在于該菌株具有以下特征弧菌S6-2為革蘭氏陰性桿狀細(xì)菌、無芽孢，大小約為 1.31-1. 58 μ mXO. 53-0. 79 μ m ；在含有右旋糖酐固體培養(yǎng)基上的菌落特征菌落直徑 2mm-5mm,圓形、乳白色、濕潤、透明，菌落長出后加入95%乙醇，冷凍3 4h，菌落周圍出現(xiàn)透 明圈；菌株V-P試驗(yàn)陰性、MR試驗(yàn)陽性，無氯化鈉不能生長，能液化明膠，有運(yùn)動能力；能利 用蔗糖、果糖，而不能利用乳糖、半乳糖、甘露糖、木糖醇、纖維二糖、阿拉伯糖、蜜二糖和山 梨醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述弧菌S6-2( Vibrio sp. S6-2) CGMCC NO. 4011，其特征在于， 其生長特性為該菌株生長溫度范圍為4-37°C，生長pH范圍為6-11 ；生長的NaCl濃度范圍 為 0. 5-10%ο
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述弧菌S6-2( Vibrio sp. S6-2) CGMCC NO. 4011，其特征在于， 其生長特性為該菌株最適生長溫度為25°C ；最適生長pH為7. 0 ；最適生長的NaCl濃度為4%。
5.一種如權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)所述的弧菌S6-2 ( Vibrio sp. S6-2 ) CGMCC NO. 4011產(chǎn)低溫右旋糖酐酶的方法，其特征在于，其步驟如下將弧菌S6-2 {vibrio sp. S6-2)菌株接種到2216E培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)速180r/min，裝液量20%，培養(yǎng)12h，得種子液；將種子 液以2%的接種量接種于產(chǎn)酶培養(yǎng)基，180r/min，25°C培養(yǎng)24h，10000r/min離心5min，取上 清液經(jīng)過硫酸銨、DEAE-s印harose Flat Flow和S印hacryl S-200方法制備低溫右旋糖酐 酶。
6.一種如權(quán)利要求5所述的方法所產(chǎn)低溫右旋糖酐酶，其特征在于所述的低溫右旋 糖酐酶的理化性質(zhì)為酶的適合作用溫度為20°C，在60°C保溫2h后該酶仍具有50%以上的 活性；右旋糖酐酶在 ρΗ6· 0-10. 0 范圍內(nèi)穩(wěn)定，Hg2+、Pb2+、Mn2+、Mg2+、Li2+、Co3+、Cu2+、Zn2+對酶 有不同程度的抑制作用；Al3+對該酶有激活作用；SDS、尿素、DTT和NBS對該酶有抑制作用。
全文摘要
本發(fā)明是一種海洋弧菌S6-2(Vibriosp.S6-2)CGMCCN0.4011。該菌株生長溫度范圍為4-37℃，最適生長溫度為25℃；生長pH范圍為6-11，最適生長pH為7.0；生長的NaCl濃度為0.5%-10%，最適生長的NaCl濃度為4%。本發(fā)明還公開了一種利用弧菌產(chǎn)海洋低溫右旋糖酐酶的方法及按該方法得到的低溫右旋糖酐酶產(chǎn)品。該低溫右旋糖酐酶在齲齒防治、制糖工業(yè)和藥用右旋糖酐的生產(chǎn)等方面發(fā)揮著重要的作用。
文檔編號C12N1/20GK101993848SQ20101053467
公開日2011年3月30日 申請日期2010年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月8日
發(fā)明者劉姝, 呂明生, 房耀維, 曹茜, 李瑛 , 焦豫良, 王東, 王淑軍 申請人:淮海工學(xué)院