專利名稱：轉(zhuǎn)基因玉米安全性評(píng)價(jià)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及轉(zhuǎn)基因玉米安全性評(píng)價(jià)方法。
背景技術(shù)：
轉(zhuǎn)基因食品在人體內(nèi)是否具有基因損害效應(yīng)，是人們對(duì)其安全性產(chǎn)生懷疑的主要 原因。經(jīng)遺傳工程修飾的基因片段導(dǎo)入后，引發(fā)下游基因轉(zhuǎn)錄效應(yīng)，可能致使其最終產(chǎn)物 含有新的成分或改變現(xiàn)有成分的含量；調(diào)控基因(啟動(dòng)子，終止子)轉(zhuǎn)移效應(yīng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)， 如轉(zhuǎn)基因大豆35S啟動(dòng)子可能會(huì)通過(guò)基因的水平轉(zhuǎn)移插入到某一致癌基因上游，活化并導(dǎo) 致癌癥的發(fā)生。當(dāng)轉(zhuǎn)入多個(gè)基因片段進(jìn)入生物體時(shí)，發(fā)生非預(yù)期效應(yīng)的概率可能會(huì)比較高。 以目前的技術(shù)研究尚不能完全掌握這些非預(yù)期的未知有害因素，轉(zhuǎn)基因食品與現(xiàn)存食品僅 僅在化學(xué)上的相似性并不足以證明它對(duì)人類消費(fèi)是安全的，而應(yīng)更深入地對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞毒 性、遺傳毒性等相關(guān)方面的實(shí)驗(yàn)，以提供更有說(shuō)服力的數(shù)據(jù)和結(jié)論。有關(guān)轉(zhuǎn)基因食品是否對(duì) 人體健康造成危害的爭(zhēng)議日趨激烈，引起世界公眾的關(guān)注。隨著我國(guó)生物技術(shù)不斷發(fā)展和 我國(guó)對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的進(jìn)口量不斷增加，對(duì)其進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)和科學(xué)的安全管理是十分必要 的。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米所做安全性評(píng)價(jià)研究較少，主要集中在傳統(tǒng)毒理學(xué)方法 (動(dòng)物試驗(yàn))方面，采用代謝物分析、毒代動(dòng)力學(xué)、慢性毒性、亞慢性毒性、繁殖試驗(yàn)和致畸 試驗(yàn)等方法，在安全性評(píng)價(jià)的過(guò)程中，主要應(yīng)用全食喂養(yǎng)，觀察對(duì)動(dòng)物靶器官造成影響。但 整個(gè)過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)、費(fèi)用高，由于玉米市場(chǎng)價(jià)格波動(dòng)頻繁，過(guò)長(zhǎng)的檢查時(shí)間顯然不具有實(shí)用價(jià) 值，而且結(jié)果的準(zhǔn)確性容易受諸多因素的影響，比如單一喂食導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)不良、食物中其他 未知內(nèi)含物、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果外推到人存在種群間差異等。而傳統(tǒng)毒理學(xué)方法檢測(cè)層面仍停 留在組織、器官病理性改變層面，并未涉及細(xì)胞及基因?qū)用妗?br>
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種簡(jiǎn)單易行、花費(fèi)低、周期短、評(píng)價(jià)更為客觀 的轉(zhuǎn)基因玉米安全性評(píng)價(jià)方法。為此本發(fā)明采用以下技術(shù)方案它包括如下步驟(1)、提供人淋巴細(xì)胞、待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米的全蛋白、非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白、陽(yáng)性誘變 劑；(2)、對(duì)人淋巴細(xì)胞分成各組進(jìn)行孵育對(duì)人淋巴細(xì)胞與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育，對(duì)人淋巴細(xì)胞與非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育，對(duì)人淋巴細(xì)胞與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育，對(duì)人淋巴細(xì)胞與空白劑共同孵育；(3)、分別檢測(cè)與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞、與非轉(zhuǎn)基因玉米 全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞、與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞、與空白劑共同 孵育的人淋巴細(xì)胞的細(xì)胞損傷程度及遺傳損傷程度，根據(jù)人淋巴細(xì)胞的細(xì)胞損傷程度及遺
4傳損傷程度判別所述待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米的安全性。在采用上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可同時(shí)采用或組合采用以下進(jìn)一步的技 術(shù)方案檢測(cè)人淋巴細(xì)胞的細(xì)胞損傷程度的方法為CCK-8試驗(yàn)和中性紅試驗(yàn)，檢測(cè)人淋巴 細(xì)胞的遺傳損傷程度的方法為彗星試驗(yàn)和微核試驗(yàn)。所述陽(yáng)性誘變劑選取阿霉素、長(zhǎng)春新堿兩種；阿霉素用于模擬多通道DNA損傷，誘 使細(xì)胞出現(xiàn)多種類型DNA損傷；長(zhǎng)春新堿用于模擬染色體損傷，誘使細(xì)胞出現(xiàn)染色體畸變、 姐妹染色單體交換損傷。在步驟(2)對(duì)人淋巴細(xì)胞與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育中，對(duì)人淋巴細(xì)胞分成以下 2組進(jìn)行孵育對(duì)人淋巴細(xì)胞與與阿霉素共同孵育和對(duì)人淋巴細(xì)胞與與長(zhǎng)春新堿共同孵育；在步驟(3)中，與長(zhǎng)春新堿共同孵育的人淋巴細(xì)胞用于CCK-8試驗(yàn)、中性紅攝取試 驗(yàn)和微核試驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照，與阿霉素共同孵育的人淋巴細(xì)胞作為彗星試驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照。待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白的孵育終濃度為200、100、50、25、12. 5μ g/ml，并各分別孵 育1. 5h、6h、24h ；非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白的孵育終濃度為200、100、50、25、12· 5μ g/ml，并各 分別 1. 5h、6h、24h。在步驟(3)中，采用以下方法判定如與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與空白劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞 的細(xì)胞損傷程度及遺傳損傷程度無(wú)顯著差異，說(shuō)明所選取試驗(yàn)方法不能有效檢測(cè)陽(yáng)性誘 變劑引起的細(xì)胞毒性及遺傳毒性損傷，則不進(jìn)行與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋 巴細(xì)胞和與非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞細(xì)胞損傷程度及遺傳損傷程度對(duì) 比；如與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與空白劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞 的細(xì)胞損傷程度有顯著差異，再比較與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與 非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞細(xì)胞損傷程度，如無(wú)顯著差異，則判定待測(cè)轉(zhuǎn) 基因玉米與非轉(zhuǎn)基因玉米的細(xì)胞毒性相似，可安全食用；如細(xì)胞損傷程度存在顯著差異，則 認(rèn)為待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米較非轉(zhuǎn)基因玉米更具有細(xì)胞毒性，食用存在不安全性；如與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與空白劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞 的遺傳損傷程度有顯著差異，再比較與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與 非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞遺傳損傷程度，如無(wú)顯著差異，則判定待測(cè)轉(zhuǎn) 基因玉米與非轉(zhuǎn)基因玉米的遺傳毒性相似，可安全食用；如遺傳損傷程度存在顯著差異，則 認(rèn)為待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米較非轉(zhuǎn)基因玉米更具有遺傳毒性，食用存在不安全性。顯著性檢驗(yàn)的目的是確定樣本間的差異由于抽樣誤差所致的概率(P)大小，在統(tǒng) 計(jì)專業(yè)研究中，0. 05的P值通常被認(rèn)為是可接受閾值水平。如果這一概率較大(P > 0. 05)， 通常認(rèn)為不能排除樣本間的差異是由于抽樣誤差所致，即這兩個(gè)樣本均數(shù)(率或構(gòu)成比) 是由兩個(gè)相同的總體中抽到(實(shí)際上是來(lái)自同一總體)，統(tǒng)計(jì)學(xué)稱之為差異無(wú)顯著性；這一 概率若很小(P < 0. 05，即小概率事件)，則認(rèn)為兩個(gè)樣本均數(shù)(率或構(gòu)成比)是從兩個(gè)本 質(zhì)不同的總體中抽到，它們之間的差異屬于本質(zhì)不同的差異，不是抽樣誤差所致，而是由于 其他因素所致，統(tǒng)計(jì)學(xué)稱之為差異有顯著性；本發(fā)明將P < 0. 05作為參與對(duì)比的兩組數(shù)據(jù)存在顯著性差異的閾值。當(dāng)然，根據(jù)判定顯著差異的尺度不同，也可對(duì)所述閾值進(jìn)行上下調(diào)
本發(fā)明中所述數(shù)據(jù)對(duì)比是指在同種試驗(yàn)，同等實(shí)驗(yàn)條件下在對(duì)比對(duì)象之間進(jìn)行對(duì) 比，如彗星試驗(yàn)中，對(duì)多個(gè)與空白劑共同孵育1.5h后的人淋巴細(xì)胞樣本所測(cè)得的多個(gè)尾 部DNA百分比數(shù)據(jù)與對(duì)多個(gè)與阿霉素共同孵育1. 5h后的人淋巴細(xì)胞樣本所測(cè)得的多個(gè)尾 部DNA百分比數(shù)據(jù)相比較，利用前段所述方法，判斷與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育的人淋巴 細(xì)胞和與空白劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞的遺傳損傷程度是否有顯著差異。在本發(fā)明中所述空白劑可以選擇磷酸鹽緩沖液(PBS)或者生理鹽水。由于采用本發(fā)明的技術(shù)方案，本發(fā)明通過(guò)人淋巴細(xì)胞系傳代培養(yǎng)，將轉(zhuǎn)基因玉米 全蛋白提取物作用于人淋巴細(xì)胞，通過(guò)檢測(cè)人淋巴細(xì)胞損傷程度及遺傳損傷程度來(lái)評(píng)價(jià)其 安全性，評(píng)價(jià)方法周期短，費(fèi)用低，簡(jiǎn)便易行，檢測(cè)敏感度高，可用以系列型號(hào)轉(zhuǎn)基因玉米及 其相關(guān)衍生產(chǎn)物的安全性評(píng)價(jià)，具有實(shí)際的應(yīng)用前景。本發(fā)明既可獨(dú)立評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基因玉米，亦可與其他檢驗(yàn)方法結(jié)合，綜合評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基因玉 米安全性。進(jìn)一步地，本發(fā)明采用CCK-8試驗(yàn)、中性紅試驗(yàn)、彗星試驗(yàn)、微核試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)人淋 巴細(xì)胞的細(xì)胞損傷程度及遺傳損傷程度，可以對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米細(xì)胞毒性和遺傳毒性進(jìn)行綜合 評(píng)價(jià)，得到更客觀的結(jié)果。本發(fā)明在細(xì)胞毒性及遺傳毒性檢測(cè)方面各選取兩種不同檢測(cè)機(jī)理的試驗(yàn)，其目的 在于提高檢測(cè)靈敏度及準(zhǔn)確度。其中，CCK-8試驗(yàn)主要通過(guò)評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)脫氫酶的活力來(lái)檢測(cè) 細(xì)胞的存活率；中性紅試驗(yàn)通過(guò)測(cè)量溶酶體染料的攝人來(lái)反映細(xì)胞的存活率；彗星試驗(yàn)是 一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏、花費(fèi)少的技術(shù)，適于評(píng)價(jià)細(xì)胞DNA損傷程度；微核試驗(yàn)是一種快速、 簡(jiǎn)便檢測(cè)染色體損傷的方法，可用于評(píng)價(jià)細(xì)胞染色體損傷程度。CCK-8試驗(yàn)、中性紅試驗(yàn)同 屬細(xì)胞毒性檢測(cè)試驗(yàn)，但兩者的檢測(cè)機(jī)理不同，兩者有機(jī)結(jié)合，可有效提高檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn) 確度；彗星試驗(yàn)、微核試驗(yàn)同屬遺傳毒性檢測(cè)試驗(yàn)，但由于不同的生物學(xué)檢測(cè)終點(diǎn)，兩者可 有效互補(bǔ)，提高檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度。本發(fā)明中，所述陽(yáng)性誘變劑選擇面較廣，多種抗癌藥物如甲氨蝶呤、博來(lái)霉素等均 有細(xì)胞損傷及遺傳損傷作用，但損傷作用較為單一。本發(fā)明優(yōu)選阿霉素、長(zhǎng)春新堿作為陽(yáng)性誘變劑。阿霉素用于模擬多通道DNA損傷， 誘使細(xì)胞出現(xiàn)多種類型DNA損傷，導(dǎo)致細(xì)胞死亡；長(zhǎng)春新堿用于模擬染色體損傷，誘使細(xì)胞 出現(xiàn)染色體畸變、姐妹染色單體交換損傷，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。針對(duì)彗星試驗(yàn)、微核試驗(yàn)檢測(cè)細(xì) 胞生物學(xué)終點(diǎn)，這兩類陽(yáng)性誘變劑損傷類型多樣化，將該兩種陽(yáng)性誘變劑有機(jī)結(jié)合，能更為 理想地驗(yàn)證本發(fā)明中試驗(yàn)方法的靈敏度和準(zhǔn)確度。此外，長(zhǎng)春新堿誘使細(xì)胞出現(xiàn)染色體損 傷在細(xì)胞毒性方面要低于阿霉素直接引起的細(xì)胞DNA損傷。CCK-8試驗(yàn)、中性紅試驗(yàn)采用長(zhǎng) 春新堿作為陽(yáng)性誘變劑，也能更好地驗(yàn)證檢測(cè)方法的靈敏度。
具體實(shí)施例方式以下以型號(hào)為CrylAb轉(zhuǎn)基因玉米為實(shí)例進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本 發(fā)明做任何限定LCrylAb轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白制備
6
裂解提取1).取新鮮CrylAb轉(zhuǎn)基因玉米樣本。在液氮條件下，用研缽充分研磨成粉末。2).融解Western及IP細(xì)胞裂解液(適用于Western和免疫沉淀的細(xì)胞裂解液)， 混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入苯甲基磺酰氟(PMSF)，使苯甲基磺酰氟的 最終濃度為ImM。3).取50mg樣品，按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解 液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng) 減少裂解液的用量。)4).用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。5).充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清。注所有提取步驟均在4°C下進(jìn)行。蛋白濃縮清洗1).將上清液放入密理博Microcon Ultra-O. 5 3000超濾管；再放入1. 5ml離心管。2). 14000g離心，棄離心管里濾液；3).往超濾管中加入450ul 4°C預(yù)冷的IX磷酸緩沖液(PBS)；4). 14000g離心，棄離心管里濾液；5).重復(fù) 3、4 步驟;6).換新的1.5ml離心管，倒置超濾管，IOOOg離心，收集蛋白。將提取的轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白置于磷酸鹽緩沖液(PBS)中溶解并超聲振蕩混勻。把 配置好的lmg/ml的原液置于零下80度低溫冰箱保存，用時(shí)現(xiàn)取。2、非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白制備可選取作為對(duì)照非轉(zhuǎn)基因玉米的品種范圍較廣，任何非轉(zhuǎn)基因玉米品種皆可以作 為對(duì)照樣本，如玉米“龍單38”;“綏玉10”;“海玉十號(hào)”;“鑫玨1號(hào)”等，但在種系上與所評(píng) 價(jià)的轉(zhuǎn)基因玉米一致或接近為好。本例采用“吉單27”玉米，其全蛋白制備的具體步驟同 上。保存方法同上。3、細(xì)胞暴露Iml人淋巴細(xì)胞(密度為50000細(xì)胞)懸液移入24孔培養(yǎng)板中37°C培養(yǎng)，使細(xì)胞 生長(zhǎng)在培養(yǎng)板上。轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白和非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白的暴露時(shí)間和濃度見(jiàn)表1。磷 酸鹽緩沖液(PBS)作為空白劑陰性對(duì)照，長(zhǎng)春新堿作為CCK-8試驗(yàn)、中性紅攝取試驗(yàn)和微核 試驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照，阿霉素作為彗星試驗(yàn)(COMET)的陽(yáng)性對(duì)照。所有試驗(yàn)重復(fù)三次。表1在4種試驗(yàn)中蛋白暴露濃度和暴露時(shí)間濃度(Mg/ml)
時(shí)間
權(quán)利要求
轉(zhuǎn)基因玉米安全性評(píng)價(jià)方法，其特征在于它包括如下步驟(1)、提供人淋巴細(xì)胞、待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米的全蛋白、非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白、陽(yáng)性誘變劑；(2)、對(duì)人淋巴細(xì)胞分成各組進(jìn)行孵育對(duì)人淋巴細(xì)胞與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育，對(duì)人淋巴細(xì)胞與非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育，對(duì)人淋巴細(xì)胞與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育，對(duì)人淋巴細(xì)胞與空白劑共同孵育；(3)、分別檢測(cè)與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞、與非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞、與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞、與空白劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞的細(xì)胞損傷程度及遺傳損傷程度，根據(jù)人淋巴細(xì)胞的細(xì)胞損傷程度及遺傳損傷程度判別所述待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米的安全性。
2.如權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因玉米安全性評(píng)價(jià)方法，其特征在于檢測(cè)人淋巴細(xì)胞的細(xì) 胞損傷程度的方法為CCK-8試驗(yàn)和中性紅試驗(yàn)，檢測(cè)人淋巴細(xì)胞的遺傳損傷程度的方法為 彗星試驗(yàn)和微核試驗(yàn)。
3.如權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因玉米安全性評(píng)價(jià)方法，其特征在于所述陽(yáng)性誘變劑選取 阿霉素、長(zhǎng)春新堿兩種；在步驟(2)對(duì)人淋巴細(xì)胞與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育中，對(duì)人淋巴細(xì)胞分成以下2組 進(jìn)行孵育對(duì)人淋巴細(xì)胞與與阿霉素共同孵育和對(duì)人淋巴細(xì)胞與與長(zhǎng)春新堿共同孵育；在步驟(3)中，與長(zhǎng)春新堿共同孵育的人淋巴細(xì)胞用于CCK-8試驗(yàn)、中性紅攝取試驗(yàn)和 微核試驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照，與阿霉素共同孵育的人淋巴細(xì)胞用于彗星試驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照。
4.如權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因玉米安全性評(píng)價(jià)方法，其特征在于待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋 白的孵育終濃度為200、100、50、25、12· 5 μ g/ml,并各分別孵育1. 5h、6h、24h ；非轉(zhuǎn)基因玉 米全蛋白的孵育終濃度為200、100、50、25、12. 5μ g/ml，并各分別1. 5h、6h、24h。
5.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的轉(zhuǎn)基因玉米安全性評(píng)價(jià)方法，其特征在于在步驟(3) 中采用以下方法判定如與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與空白劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞的細(xì) 胞損傷程度及遺傳損傷程度無(wú)顯著差異，說(shuō)明所選取試驗(yàn)方法不能有效檢測(cè)陽(yáng)性誘變劑引 起的細(xì)胞毒性及遺傳毒性損傷，則不進(jìn)行與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞 和與非轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞細(xì)胞損傷程度及遺傳損傷程度對(duì)比；如與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與空白劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞的細(xì) 胞損傷程度有顯著差異，再比較與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與非轉(zhuǎn) 基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞細(xì)胞損傷程度，如無(wú)顯著差異，則判定待測(cè)轉(zhuǎn)基因 玉米與非轉(zhuǎn)基因玉米的細(xì)胞毒性相似，可安全食用；如細(xì)胞損傷程度存在顯著差異，則認(rèn)為 待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米較非轉(zhuǎn)基因玉米更具有細(xì)胞毒性，食用存在不安全性；如與所述陽(yáng)性誘變劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與空白劑共同孵育的人淋巴細(xì)胞的遺 傳損傷程度有顯著差異，再比較與待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞和與非轉(zhuǎn) 基因玉米全蛋白共同孵育的人淋巴細(xì)胞遺傳損傷程度，如無(wú)顯著差異，則判定待測(cè)轉(zhuǎn)基因 玉米與非轉(zhuǎn)基因玉米的遺傳毒性相似，可安全食用；如遺傳損傷程度存在顯著差異，則認(rèn)為待測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米較非轉(zhuǎn)基因玉米更具有遺傳毒性，食用存在不安全性。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種轉(zhuǎn)基因玉米安全性評(píng)價(jià)方法，該方法通過(guò)人淋巴細(xì)胞系傳代培養(yǎng)，將轉(zhuǎn)基因玉米全蛋白提取物作用于人淋巴細(xì)胞，通過(guò)檢測(cè)人淋巴細(xì)胞損傷程度及遺傳損傷程度來(lái)評(píng)價(jià)其安全性，評(píng)價(jià)方法周期短，費(fèi)用低，簡(jiǎn)便易行，檢測(cè)敏感度高、準(zhǔn)確，可用以系列型號(hào)轉(zhuǎn)基因玉米及其相關(guān)衍生產(chǎn)物的安全性評(píng)價(jià)，具有實(shí)際的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK101948924SQ20101029607
公開(kāi)日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月29日
發(fā)明者呂沁風(fēng), 吳忠華, 李 禾, 鄭偉, 陳吳建 申請(qǐng)人:浙江國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心