專利名稱：一種甲烷氧化菌測(cè)試瓶的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種甲烷氧化菌測(cè)試瓶的生產(chǎn)方法，屬應(yīng)用微生物檢測(cè)方法技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在科研和生產(chǎn)實(shí)際工作中，常常需要對(duì)微生物的數(shù)量進(jìn)行測(cè)定。如對(duì)水體、空氣、 土壤等環(huán)境中的微生物的測(cè)定有利于監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)其污染程度；對(duì)飲用水和工業(yè)循環(huán)冷卻水中的微生物的測(cè)定可以評(píng)價(jià)其是否達(dá)標(biāo)；對(duì)油田污水注水中的微生物數(shù)量的測(cè)定則有助于評(píng)價(jià)污水注水的水質(zhì)等。因此，微生物數(shù)量的測(cè)定對(duì)科研和生產(chǎn)實(shí)際工作具有十分重要的指導(dǎo)作用和現(xiàn)實(shí)意義?；谑蜔N氣的垂直運(yùn)移理論和烴氧化菌的專屬性理論的微生物油氣勘探技術(shù)， 是一種新的近地表油氣勘探方法。該方法與傳統(tǒng)的油氣勘探方法相比，具有直接、有效、快速和經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì)，目前該技術(shù)已在眾多國(guó)家石油公司的油氣勘探中得到應(yīng)用，并取得了良好的應(yīng)用效果。在油氣微生物勘探過(guò)程中，一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)是必須對(duì)大量土壤或水樣中的氣態(tài)烴氧化菌指示菌進(jìn)行測(cè)定。在油氣微生物勘探技術(shù)中，由于采集的土壤或水樣樣品較多(一般200米到1000 米取一個(gè)樣品，取樣面積達(dá)6km2以上)，而樣品的保存時(shí)間較短(一般用冰箱冷藏，半個(gè)月內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室，并立即測(cè)量)，必須盡快測(cè)定樣品中的指示菌。地表微生物油氣勘探中最常用的指示菌有甲烷氧化菌(MOB，methane-oxidizing bacteria)、乙烷氧化菌(Ε0Β， ethane-oxidizing bacteria) > 1,^ (POB,propane-oxidizing bacteria)禾口7"化菌(BOB，butane-oxidizing bacteria)4種，因此需要快速準(zhǔn)確測(cè)量。目前，氣態(tài)烴氧化菌測(cè)試方法主要有兩種一種是平板菌落計(jì)數(shù)法，另一種是絕跡稀釋法。平板菌落計(jì)數(shù)法是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長(zhǎng)出一個(gè)菌落的原理設(shè)計(jì)的；取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)及稀釋倍數(shù)，計(jì)算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)；而絕跡稀釋法是將待測(cè)定的水樣逐級(jí)注入到試管中進(jìn)行接種稀釋，直到最后一個(gè)試管中無(wú)菌生長(zhǎng)為止，然后根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)情況和稀釋倍數(shù)，計(jì)算出水樣中細(xì)菌的數(shù)目。 這兩種方法都有明顯的不足，平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定結(jié)果誤差較大，方法十分繁雜；絕跡稀釋法操作極為繁瑣、費(fèi)時(shí)，包括清洗玻璃器皿、培養(yǎng)基的配制和滅菌、分裝等一系列復(fù)雜過(guò)程， 且要求無(wú)菌操作。而且，這兩種方法尤其不適于樣品數(shù)量很多的大規(guī)模工業(yè)勘探測(cè)量。因此，迫切需要研究出一種簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、針對(duì)性強(qiáng)的氣態(tài)烴氧化菌測(cè)定的新工具和新方法，以滿足油氣微生物勘探的實(shí)際生產(chǎn)要求。
發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種甲烷氧化菌測(cè)試瓶的生產(chǎn)方法，使所生產(chǎn)的測(cè)試瓶能夠快速準(zhǔn)確地測(cè)定甲烷氧化菌的菌數(shù)，用于油氣微生物勘探中甲烷氧化菌菌數(shù)的測(cè)定，滿足油氣微生物勘探的實(shí)際生產(chǎn)要求。本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)上述目的的。在常溫下，按重量百分比分別取氯化鈉0. 5%、氯化銨0. 5%、磷酸氫二鉀0. 2%, 硫酸鎂0. 05%，蒸餾水98. 75%;將氯化鈉、氯化銨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂依次用蒸餾水溶解， 加入到容器中混合、充分搖勻，并用0. 5mol/L鹽酸溶液或10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值到 6. 8-7. 8，即配制成制取甲烷氧化菌測(cè)試瓶所需的培養(yǎng)液；將12ml模制西林瓶清洗干凈、 干燥，用液體分裝器將所配制的培養(yǎng)液按每瓶9. Oml裝入瓶中，再用5. Oml注射器向瓶中注入市售甲烷氣體3. 0ml，立即用膠塞加蓋、封口 ；將經(jīng)加蓋、封口的測(cè)試瓶用高溫蒸汽滅菌鍋在121°C、0. 105MPa條件下進(jìn)行高溫滅菌18分鐘，冷卻后即制成甲烷氧化菌測(cè)試瓶。本發(fā)明與現(xiàn)有的技術(shù)相比具有如下有益效果1、本發(fā)明所生產(chǎn)的甲烷氧化菌測(cè)試瓶，能夠快速準(zhǔn)確地測(cè)定甲烷氧化菌的菌數(shù)、 生長(zhǎng)指示明顯、操作簡(jiǎn)單、可大大提高工作效率。2、培養(yǎng)液中的甲烷是唯一碳源，只適合甲烷氧化菌生長(zhǎng)，所培養(yǎng)出的微生物只是甲烷氧化菌，測(cè)試工作不會(huì)受其他細(xì)菌的干擾。
具體實(shí)施例方式在常溫下(以配制IL培養(yǎng)液為例，以此類推)，按重量百分比分別稱取氯化鈉 5. 0g、氯化銨5. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g、硫酸鎂0. 5g ；將氯化鈉、氯化銨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂依次用蒸餾水溶解，并加入到IL容量瓶中混合、再用蒸餾水定容到IL刻度線，充分搖勻，測(cè)定其酸堿度并用0. 5mol/L鹽酸溶液或10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值到6. 8—7. 8，即配制成制取甲烷氧化菌測(cè)試瓶所需的培養(yǎng)液。將12ml模制西林瓶清洗干凈、干燥，用液體分裝器將所配制的培養(yǎng)液按每瓶 9. Oml裝入瓶中，再用5. Oml注射器向瓶中注入市售甲烷氣體3. Oml，立即用A-13型藥用膠塞加蓋、用普通抗生素玻璃瓶鋁蓋經(jīng)專用封口器封口 ；最后將經(jīng)加蓋、封口的測(cè)試瓶用高溫蒸汽滅菌鍋在121°C、0. 105MPa條件下進(jìn)行高溫滅菌18分鐘，冷卻后即制成甲烷氧化菌測(cè)試瓶。采用甲烷氧化菌測(cè)試瓶測(cè)定待測(cè)水樣中的甲烷氧化菌的菌數(shù)時(shí)，系采用絕跡稀釋法原理，將待測(cè)水樣用無(wú)菌注射器逐級(jí)注入測(cè)試瓶中稀釋培養(yǎng)，直到最后一個(gè)測(cè)試瓶無(wú)菌生長(zhǎng)為止，可根據(jù)稀釋的倍數(shù)計(jì)算出待測(cè)水樣中甲烷氧化菌的數(shù)目?？刹捎靡韵碌姆椒ê筒襟E(1)準(zhǔn)備數(shù)支相同的Iml醫(yī)用注射器，用蒸餾水清洗干凈后高溫滅菌(高壓蒸汽滅菌鍋121°C、0. 105MPa下滅菌15分鐘)，冷卻備用；(2)根據(jù)待測(cè)水樣中甲烷氧化菌的大致多少，將數(shù)個(gè)上述所制成的甲烷氧化菌測(cè)試瓶排成一組，并依次編上序號(hào)1、2、3、4……；(3)用上述滅菌后的無(wú)菌注射器取1. OmL待測(cè)水樣并注入到1號(hào)甲烷氧化菌測(cè)試瓶?jī)?nèi)，充分震蕩10秒；(4)另取一支無(wú)菌注射器從搖勻后的1號(hào)甲烷氧化菌測(cè)試瓶?jī)?nèi)取出1. OmL液體注入到2號(hào)甲烷氧化菌測(cè)試瓶?jī)?nèi)，充分震蕩10秒；(5)再另取一支無(wú)菌注射器從搖勻后的2號(hào)甲烷氧化菌測(cè)試瓶?jī)?nèi)取出1. OmL液體注入到3號(hào)甲烷氧化菌測(cè)試瓶?jī)?nèi)，充分震蕩10秒；(6)依次重復(fù)上述操作程序，一直到最后一瓶為止；(7)把上述加入待測(cè)水樣后的一組甲烷氧化菌測(cè)試瓶放在30°C (或現(xiàn)場(chǎng)溫度)的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)14天后觀察測(cè)試瓶?jī)?nèi)的變化，判斷細(xì)菌的生長(zhǎng)情況；(8)判斷標(biāo)準(zhǔn)無(wú)菌存在的甲烷氧化菌測(cè)試瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液無(wú)變化，而有菌存在的甲烷氧化菌測(cè)試瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液變渾變濁，且培養(yǎng)液表面有甲烷氧化菌菌膜出現(xiàn)；因此，甲烷氧化菌測(cè)試瓶中的培養(yǎng)液變渾變濁，且培養(yǎng)液表面有甲烷氧化菌菌膜出現(xiàn)的，表示有甲烷氧化菌生長(zhǎng)；(9)根據(jù)甲烷氧化菌測(cè)試瓶?jī)?nèi)指示細(xì)菌生長(zhǎng)的情況和有菌生長(zhǎng)的測(cè)試瓶的瓶數(shù)， 查表1可計(jì)算出待測(cè)水樣中的甲烷氧化菌菌數(shù)。表1單瓶細(xì)菌最大可能值
權(quán)利要求
1.一種甲烷氧化菌測(cè)試瓶的生產(chǎn)方法，其特征在于在瓶中加入由氯化鈉、氯化銨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和蒸餾水等制成的培養(yǎng)液和甲烷氣體，經(jīng)加蓋、封口、高溫蒸汽滅菌制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種甲烷氧化菌測(cè)試瓶的生產(chǎn)方法，其特征在于在常溫下按重量百分比分別取氯化鈉0. 5%、氯化銨0. 5%、磷酸氫二鉀0. 2%、硫酸鎂0. 05%，蒸餾水 98. 75% ；將氯化鈉、氯化銨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂依次用蒸餾水溶解，加入到容器中混合、充分搖勻，并用0. 5mol/L鹽酸溶液或10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值到6. 8—7. 8，即配制成制取甲烷氧化菌測(cè)試瓶所需的培養(yǎng)液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種甲烷氧化菌測(cè)試瓶的生產(chǎn)方法，其特征在于將12ml模制西林瓶清洗干凈、干燥，用液體分裝器將所配制的培養(yǎng)液按每瓶9. Oml裝入瓶中，再用 5. Oml注射器向瓶中注入市售甲烷氣體3. 0ml，然后立即用膠塞加蓋、封口。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種甲烷氧化菌測(cè)試瓶的生產(chǎn)方法，其特征在于將經(jīng)加蓋、 封口的測(cè)試瓶用高溫蒸汽滅菌鍋在121°C、0. 105MPa條件下進(jìn)行高溫滅菌18分鐘，冷卻后即制成甲烷氧化菌測(cè)試瓶。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甲烷氧化菌測(cè)試瓶的生產(chǎn)方法，其特征在于在常溫下按重量百分比分別取氯化鈉0.5％、氯化銨0.5％、磷酸氫二鉀0.2％、硫酸鎂0.05％，蒸餾水98.75％；將氯化鈉、氯化銨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂依次用蒸餾水溶解后加入到容器中混合搖勻，調(diào)節(jié)其pH值到6.8-7.8，即配制成制取甲烷氧化菌測(cè)試瓶所需的培養(yǎng)液；用液體分裝器將所配制的培養(yǎng)液按每瓶9.0ml裝入西林瓶中，再用注射器向瓶中注入甲烷氣體3.0ml，經(jīng)加蓋、封口、高溫蒸汽滅菌、冷卻后即制成甲烷氧化菌測(cè)試瓶。本發(fā)明所生產(chǎn)的甲烷氧化菌測(cè)試瓶，能夠快速準(zhǔn)確地測(cè)定甲烷氧化菌的菌數(shù)、操作簡(jiǎn)單、能滿足油氣微生物勘探的實(shí)際生產(chǎn)要求。
文檔編號(hào)C12Q1/06GK102212467SQ20101014281
公開日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2010年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月7日
發(fā)明者易東, 易紹金 申請(qǐng)人:長(zhǎng)江大學(xué)