專利名稱：一種單分散性磁性人鐵蛋白的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于磁性納米材料的仿生合成技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種單分散性的磁性 人鐵蛋白的制備方法。
背景技術(shù)：
超順磁磁鐵礦(Fe53O4)或者磁赤鐵礦(Y-Fe2O3)由于其優(yōu)良的磁性能以及納米尺 寸效應(yīng)，被廣泛地應(yīng)用于電子學(xué)(高密度磁存儲)、化工(磁流體、催化、涂料)、環(huán)境學(xué)(環(huán) 境修復(fù))和生物醫(yī)學(xué)(磁靶向藥物、磁共振造影增強劑、細胞標(biāo)記分離、DNA分離、疾病診 斷)等領(lǐng)域。但是在納米磁性顆粒的制備領(lǐng)域中，如何合成粒徑均一、形狀相同、分散性好 和單分散性的納米磁性顆粒一直是研究的熱點。鐵蛋白是天然的鐵礦化蛋白，它廣泛分布于微生物、植物、動物以及人體內(nèi)，在機 體內(nèi)發(fā)揮著解除二價鐵離子的毒性以及貯鐵的功能，在機體內(nèi)的鐵代謝以及鐵的生物礦化 過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。天然鐵蛋白由于蛋白亞基的高度自組裝，能夠形成球形的 籠狀蛋白殼結(jié)構(gòu)，其外直徑約為12nm，內(nèi)直徑約為8nm，尺寸高度均一。每個籠型的蛋白殼 內(nèi)部含有一鐵核，天然鐵蛋白的鐵核約為6-8nm，其成分是反鐵磁性的水合氧化鐵。天然鐵 蛋白的鐵核在酸性條件以及還原劑存在的條件下進行釋放從而形成空殼鐵蛋白，而且由于 空殼鐵蛋白仍然保持其均一的籠型結(jié)構(gòu)，所以能夠作為納米材料仿生合成的模板，合成的 納米材料通常具有尺寸均一、形狀相似、分散性好和具有天然的蛋白殼等優(yōu)點。磁性鐵蛋白是一種仿生合成材料，是一種具有磁鐵礦或者磁赤鐵礦內(nèi)核的鐵蛋 白。傳統(tǒng)的磁性鐵蛋白的合成通常是以天然鐵蛋白為原料，首先在酸性條件和還原劑存在 的條件下將原來的水合氧化鐵鐵核去除，形成空殼鐵蛋白，然后再通過化學(xué)條件的改變在 蛋白殼內(nèi)部形成磁鐵礦或者磁赤鐵礦顆粒(U. S. patent 5491219)。但是這種傳統(tǒng)合成磁 性鐵蛋白的路線通常需要去除鐵核形成空殼鐵蛋白這一步驟，這種步驟因為在酸性條件 下完成，容易造成蛋白殼的損傷；另外由于這個過程的繁瑣，蛋白的損失量也會增大。而 且前人的研究也同樣表明，這種傳統(tǒng)方法合成的磁性鐵蛋白容易聚集，存在磁相互作用 (Moskowitz et al.，1997)。這種聚集不僅可以影響磁性顆粒的磁學(xué)性質(zhì)，而且還會影響其 在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種單分散性磁性人鐵蛋白的制備方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的單分散性磁性人鐵蛋白的制備方法，以重組人鐵 蛋白為模板，通過仿生合成，在重組人鐵蛋白的內(nèi)部形成磁性納米顆粒，經(jīng)過分離純化得到 單分散性磁性人鐵蛋白，主要步驟如下1)以重組人鐵蛋白為模板，將人鐵蛋白的H亞基和L亞基的全長cDNA分別克隆和 構(gòu)建到質(zhì)粒上；2)將含有人鐵蛋白H亞基和L亞基的重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化或者共轉(zhuǎn)化細菌
3Rosetta (DE3) pLysS,加入IPTG (異丙基-β -D-硫代半乳糖苷)激活Τ7啟動子，誘導(dǎo)表達；3)表達結(jié)束后進行超聲破碎釋放蛋白；4)對蛋白進行分離和純化；5)將亞鐵鹽和氧化劑加入重組人鐵蛋白的溶液中進行反應(yīng)，控制ρΗ值為7 11， 控制溫度為25 80°C，在重組人鐵蛋白內(nèi)部形成強磁性的納米顆粒；亞鐵鹽的濃度為每次 加入的亞鐵原子數(shù)與蛋白分子數(shù)之比在10 200之間，最終每個蛋白分子加入的鐵原子數(shù) 可在100 5000之間；氧化劑的濃度為每次加入H2A的分子數(shù)與加入亞鐵離子的原子數(shù)之 比為2 1或3 1 ；蛋白濃度> 0. 25mg/ml ；6)排阻層析進行分離，離心和分子篩純化后得到單分散磁性人鐵蛋白顆粒。本發(fā)明的制備方法中，重組人鐵蛋白包括重組人鐵蛋白的H鏈、重組人鐵蛋白的L 鏈、重組人鐵蛋白的H鏈和L鏈的組裝體、重組人鐵蛋白的H鏈的突變體或融合蛋白和重組 人鐵蛋白的L鏈的突變體或融合蛋白。本發(fā)明的制備方法中，步驟1之后，對編碼序列進行測序保證具有正確的DNA序 列。本發(fā)明的制備方法中，步驟2中，是當(dāng)細菌繁殖到OD值為0. 7時，再加入IPTG激 活T7啟動子，在37°C誘導(dǎo)表達。本發(fā)明的制備方法其中，步驟3中，是細菌重懸在Tris-HCl緩沖溶液中進行超聲 破碎釋放蛋白。本發(fā)明的制備方法和，步驟4中，采用層析方法、硫酸銨沉淀、離子交換或分子排 阻層析分離蛋白。本發(fā)明的制備方法中，步驟5中，亞鐵鹽和氧化劑為水溶性亞鐵鹽硫酸亞鐵、硫 酸亞鐵銨或氯化亞鐵；氧化劑為雙氧水。本發(fā)明的制備方法中，步驟5中，控制ρΗ為8 8. 5 ；控制溫度為37°C或65°C。本發(fā)明的制備方法中，步驟6中，排阻層析所用的介質(zhì)是kpharose 4B或者是 superose 6，使用的緩沖溶液是pH = 7. 25的0. 025M Tris-HCl (ρΗ 7. 25)緩沖溶液，流速 為 0. 25ml/min。 本發(fā)明的制備方法中，在重組人鐵蛋白的內(nèi)部形成的磁性納米顆粒包括磁鐵礦或 者磁赤鐵礦。與傳統(tǒng)的磁性鐵蛋白以及其它磁性納米顆粒制備方法相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點；1)通過該法制備的磁性人鐵蛋白直接以無鐵核的重組人鐵蛋白為模板，在合成中 只需要一步就能合成，省略了傳統(tǒng)方法中需要去除鐵核的一步，因而可以避免繁雜步驟中 的蛋白損失或損傷，也符合工業(yè)生產(chǎn)規(guī)模的需要。2)通過該法制備的磁性人鐵蛋白具有完整的重組人鐵蛋白殼，由于重組人鐵蛋白 殼是通過基因工程方法生產(chǎn)的，可以大量獲得，而且更容易通過基因工程方法進行改造和 修飾。如可以在鐵蛋白的亞基上面融合藥物多肽，從而可以磁性人鐵蛋白成為集載藥、靶向 以及磁共振顯影等功能為一體的多功能磁性顆粒。3)通過該法制備的磁性人鐵蛋白所具備的人鐵蛋白殼是人鐵蛋白的重組人鐵蛋 白的H鏈，重組人鐵蛋白的L鏈或者是重組人鐵蛋白的H鏈和L鏈的組裝體，它們具有與人鐵蛋白相似的蛋白序列，因而很可能可以避免由于物種差異所對人體造成的免疫原性，因 而在人體的磁共振顯影、磁靶標(biāo)藥物、細胞標(biāo)記等生物醫(yī)學(xué)中可能有更廣泛的用途。4)通過該法制備的磁性人鐵蛋白是單分散的和無磁相互作用的，因而可以避免納 米磁性顆粒常存在的聚集問題，能夠長期地穩(wěn)定存在而且擁有更大的比表面積。5)通過該法制備的磁性人鐵蛋白的人鐵蛋白殼可以在pH為4 11中保持蛋白結(jié) 構(gòu)的完整性，而且可耐70 80°C的高溫。另外由于該磁性人鐵蛋白的高分散性，所以可以 方便地進行過濾除菌，這些特性非常有利于磁性人鐵蛋白的儲存和運輸。
圖1是本發(fā)明制備的單分散性的磁性人鐵蛋白的透射電鏡(TEM)負染照片。圖2a_圖2d是按實施例1_4所制備的單分散性的磁性人鐵蛋白的透射電鏡(TEM) 照片。圖3是本發(fā)明制備的單分散性的磁性人鐵蛋白的選區(qū)電子衍射(SAED)圖。圖4a_圖4b是本發(fā)明制備的單分散性的磁性人鐵蛋白在漲時的飽和等溫剩磁獲 得曲線和飽和等溫剩磁退磁曲線所建立的Wohlfarth-Cisowski檢測和Henkel圖。
具體實施例方式本發(fā)明所制得的磁性鐵蛋白直接以重組表達的人鐵蛋白亞基所組裝的蛋白殼為 模板，這種重組人鐵蛋白的特點在于沒有天然的水合氧化鐵鐵核，從而不需要進行傳統(tǒng)的 去除鐵核這一步，直接可以用于仿生合成粒徑均一、生物相容性好的磁性納米顆粒。另外 這種以人鐵蛋白為蛋白殼的磁性鐵蛋白很可能能夠避免由于蛋白的物種差異所造成的免 疫原性，從而使得這種磁性鐵蛋白在人體醫(yī)學(xué)中有更重要的用途。該方法制得的磁性鐵蛋 白還包括合成后的純化工藝，使得制備的磁性人鐵蛋白具有單分散性和無磁相互作用的特 點ο按照本發(fā)明的方法制備的磁性人鐵蛋白具有完整的重組人鐵蛋白殼和磁性納米 顆粒核，核的直徑可在1納米到10納米之間，取決于在合成過程中所加的鐵原子數(shù)，在水以 及極性溶劑中具有可分散性和溶解性。核的成分為!^e3O4或者Y-Fe203。本發(fā)明提供的制備單分散性的磁性人鐵蛋白的方法，包括以重組人鐵蛋白為模 板，通過仿生合成的方法，在重組人鐵蛋白的內(nèi)部形成磁性納米顆粒，然后經(jīng)過分離純化所 得到的單分散和無磁相互作用的磁性人鐵蛋白。本發(fā)明是兩步法制備單分散和無磁相互作用的磁性人鐵蛋白的方法，其主要內(nèi)容 有以下三點1)以重組人鐵蛋白為模板。其中重組人鐵蛋白包括重組人鐵蛋白的H鏈、重組人 鐵蛋白的L鏈、重組人鐵蛋白的H鏈和L鏈的組裝體，重組人鐵蛋白的H鏈的突變體或融合 蛋白，重組人鐵蛋白的L鏈的突變體或融合蛋白。使用基因工程領(lǐng)域常規(guī)的重組技術(shù)就能 構(gòu)建重組人鐵蛋白。在這一過程中，使用以PCR為基礎(chǔ)的方法將人鐵蛋白的H亞基和L亞 基的全長cDNA分別克隆和構(gòu)建到質(zhì)粒上，并對編碼序列進行測序保證具有正確的DNA序 列。再將含有人鐵蛋白H亞基和L亞基的重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化或者共轉(zhuǎn)化細菌Rosetta (DE3) PLysS0當(dāng)細菌繁殖到合適濃度如OD值為0.7 (650nm)時，加入ImM IPTG激活T7啟動子，在37°C誘導(dǎo)表達。表達結(jié)束后細菌重懸在Tris-HCl緩沖溶液中進行超聲破碎釋放蛋白。然 后對蛋白進行分離和純化，如采用合適的層析方法或其他方法如硫酸銨沉淀、離子交換、分 子排阻層析等從上清液中分離蛋白。透射電鏡結(jié)果顯示這些重組人鐵蛋白能自組裝形成球 狀的籠型結(jié)構(gòu)。其中重組蛋白自組裝形成的籠型結(jié)構(gòu)為空殼鐵蛋白，沒有明顯的鐵核。因 而可以直接用于磁性鐵蛋白合成的模板。2)以亞鐵鹽和合適比例的氧化劑在加入重組人鐵蛋白的溶液中反應(yīng)，通過控制反 應(yīng)條件，不破壞蛋白殼的籠型結(jié)構(gòu)，在重組人鐵蛋白內(nèi)部形成強磁性的納米顆粒。本發(fā)明所 采用的水溶性亞鐵鹽主要包括硫酸亞鐵、硫酸亞鐵銨、氯化亞鐵等水溶性亞鐵鹽，所采用的 氧化劑是雙氧水(H2O2)tj其中通過控制反應(yīng)條件包括控制PH值，控制溫度，控制蛋白濃度， 控制加入水溶性亞鐵鹽的濃度，控制加入氧化劑的濃度。其中控制PH值可在7 11之間 選擇，優(yōu)選PH為8 8. 5。其中控制溫度可在25 80°C之間選擇，其中優(yōu)選37°C和65°C。 其中控制蛋白濃度是指蛋白濃度可在> 0. 25mg/ml之間選擇。其中控制加入水溶性亞鐵鹽 的濃度是指每次加入反應(yīng)溶液后的亞鐵原子數(shù)與蛋白分子數(shù)之比在10 200之間，最終每 個蛋白分子加入的鐵原子數(shù)可在100 5000之間。其中控制加入氧化劑的濃度是指每次 加入H2O2的分子數(shù)與加入亞鐵離子的原子數(shù)之比為2 1或3 1。這種合適的亞鐵鹽和 雙氧水在合適的比例以及合適的PH和溫度下能在重組人鐵蛋白內(nèi)部形成粒度均一的!^e3O4 或者Y-Fe2O3納米顆粒。3)將合成后的磁性人鐵蛋白通過進一步的排阻層析進行分離后可以得到單分散 的和無磁相互作用的磁性人鐵蛋白顆粒。其中的排阻層析所用的介質(zhì)可以是kpharose 6B或者是superose 6，使用的緩沖溶液是0. 025MTris_HCl (pH 7.25)緩沖溶液，流速是 0. 25ml/min。通過分離得到的單分散性磁性鐵蛋白通過透射電鏡檢測顯示好的分散性，通 過低溫磁學(xué)的剩磁曲線的Wohlfarth-Cisowski檢測和Henkel圖檢測是無磁相互作用的納 米磁性顆粒。下面結(jié)合附圖和實施例作詳細地說明。實施例1在厭氧手套箱中用除去氧氣的水分別配置25mM的硫酸亞鐵銨50ml，8. 34mM的H2A 50ml和50mM的NaOH IOOml，將純化后的重組H鏈鐵蛋白溶液用除去氧氣的0. IM的氯化 鈉溶液稀釋到50ml，放入到反應(yīng)杯中。最終蛋白濃度在0. 25mg/ml (蛋白總量24. 4nmol, 重組H鏈蛋白分子量為513kD)。首先用電熱套將反應(yīng)杯中的蛋白溶液加熱到65°C，加熱 時加入攪拌子用磁力快速攪拌保證溶液溫度均勻，溫度恒定15min后用50mM的NaOH通過 恒定PH滴定儀將蛋白溶液的pH值調(diào)節(jié)到8. 5，然后通過自動加液器按照97. 6 μ 1/min的 速度向蛋白溶液中加入25mM的硫酸亞鐵銨(每個蛋白分子每分鐘進入100個鐵原子)和 8. 34mM的H2O2，最后分別加入硫酸亞鐵銨和H2A 2. M5ml，最終每個蛋白分子平均加入的鐵 原子數(shù)為2300個鐵原子。將合成后的磁性人鐵蛋白通過排阻層析介質(zhì)^^11虹0紹6B(70cm 長的柱子)，最后得到單分散性的磁性人鐵蛋白。圖1為所得的磁性鐵蛋白的透射電鏡 (TEM)的負染照片，由圖1可知該磁性人鐵蛋白由完整的重組人鐵蛋白包裹，顯示很好的分 散性。圖加是所得磁性人鐵蛋白核的透射電鏡照片，由圖加可知核的平均粒徑為3. 9nm。 圖3是磁性人鐵蛋白的選區(qū)電子衍射圖，由圖3可知磁性人鐵蛋白核的成分為磁鐵礦。圖 4是該磁性人鐵蛋白在漲時的飽和等溫剩磁獲得曲線和飽和等溫剩磁退磁曲線所建立的
6Wohlfarth-Cisowski檢測和Henkel圖，由圖4可知通過分離得到的磁性人鐵蛋白不存在磁 相互作用，在200mT就能達到飽和表明磁性人鐵蛋白核的成分為磁鐵礦。實施例2將純化后的重組H鏈鐵蛋白溶液用除去氧氣的0. IM的氯化鈉溶液稀釋到50ml， 放入到反應(yīng)杯中。最終蛋白濃度在lmg/ml，首先用電熱套將反應(yīng)杯中的蛋白溶液加熱到 65°C，加熱時加入攪拌子用磁力快速攪拌保證溶液溫度均勻，溫度恒定15min后用50mM 的NaOH通過恒定pH滴定儀將蛋白溶液的pH值調(diào)節(jié)到8. 5，然后通過自動加液器按照 390.4μ 1/min的速度向蛋白溶液中加入25mM的硫酸亞鐵銨(每個蛋白分子每分鐘進入 100個鐵原子)和8. 34mM的H2O2，最后分別加入硫酸亞鐵銨和H2&8. 98ml，最終每個蛋白分 子平均加入的鐵原子數(shù)為2300個鐵原子。其余操作均同實施例1。圖2b是所得的磁性人 鐵蛋白核的透射電鏡照片，由圖2b可知核的平均粒徑為4. 2nm。實施例3將純化后的重組H鏈鐵蛋白溶液用除去氧氣的0. IM的氯化鈉溶液稀釋到50ml， 放入到反應(yīng)杯中。最終蛋白濃度在0.5mg/ml，首先用電熱套將反應(yīng)杯中的蛋白溶液加熱 到37°C，加熱時加入攪拌子用磁力快速攪拌保證溶液溫度均勻，溫度恒定15min后用50mM 的NaOH通過恒定pH滴定儀將蛋白溶液的pH值調(diào)節(jié)到8. 5，然后通過自動加液器按照 195. 2 μ 1/min的速度向蛋白溶液中加入25mM的硫酸亞鐵銨(每個蛋白分子每分鐘進入 100個鐵原子)和8. 34mM的H2O2，最后分別加入硫酸亞鐵銨和H2&4. 49ml，最終每個蛋白分 子平均加入的鐵原子數(shù)為2300個鐵原子。其余操作均同實施例1。圖2c是所得的磁性人 鐵蛋白核的透射電鏡照片，由圖2c可知核的平均粒徑為4nm。實施例4將純化后的重組L鏈鐵蛋白溶液用除去氧氣的0. IM的氯化鈉溶液稀釋到50ml， 放入到反應(yīng)杯中。最終蛋白濃度在lmg/ml，首先用電熱套將反應(yīng)杯中的蛋白溶液加熱到 37°C，加熱時加入攪拌子用磁力快速攪拌保證溶液溫度均勻，溫度恒定15min后用50nM 的NaOH通過恒定pH滴定儀將蛋白溶液的pH值調(diào)節(jié)到8. 5，然后通過自動加液器按照 353. 2 μ 1/min的速度向蛋白溶液中加入25mM的硫酸亞鐵銨(每個蛋白分子每分鐘進入 100個鐵原子)和8. 34nM的H2O2,最后分別加入硫酸亞鐵銨和Η2&8. 125ml，最終每個蛋白 分子平均加入的鐵原子數(shù)為2300個鐵原子。其余操作均同實施例1。圖2d是所得的磁性 人鐵蛋白核的透射電鏡照片，由圖2d可知核的平均粒徑為4. 5nm。
權(quán)利要求
1.一種單分散性磁性人鐵蛋白的制備方法，以重組人鐵蛋白為模板，通過仿生合成，在 重組人鐵蛋白的內(nèi)部形成磁性納米顆粒，經(jīng)過分離純化得到單分散性磁性人鐵蛋白，主要 步驟如下1)以重組人鐵蛋白為模板，將人鐵蛋白的H亞基和L亞基的全長cDNA分別克隆和構(gòu)建 到質(zhì)粒上；2)將含有人鐵蛋白H亞基和L亞基的重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化或者共轉(zhuǎn)化細菌 Rosetta (DE3) pLysS,加入異丙基-β -D-硫代半乳糖苷激活Τ7啟動子，誘導(dǎo)表達；3)表達結(jié)束后進行超聲破碎釋放蛋白；4)對蛋白進行分離和純化；5)將亞鐵鹽和氧化劑加入重組人鐵蛋白的溶液中進行反應(yīng)，控制ρΗ值為7 11，控制 溫度為25 80°C，在重組人鐵蛋白內(nèi)部形成強磁性的納米顆粒；亞鐵鹽的濃度為每次加入 的亞鐵原子數(shù)與蛋白分子數(shù)之比在10 200之間，最終每個蛋白分子加入的鐵原子數(shù)可在 100 5000之間；氧化劑的濃度為每次加入H2A的分子數(shù)與加入亞鐵離子的原子數(shù)之比為 2 1或 3 1 ；蛋白濃度> 0. 25mg/ml ；6)排阻層析進行分離，離心和分子篩純化后得到單分散磁性人鐵蛋白顆粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其中，重組人鐵蛋白包括重組人鐵蛋白的H鏈、重組人 鐵蛋白的L鏈、重組人鐵蛋白的H鏈和L鏈的組裝體、重組人鐵蛋白的H鏈的突變體或融合 蛋白和重組人鐵蛋白的L鏈的突變體或融合蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其中，步驟1之后，對編碼序列進行測序保證具有正確 的DNA序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其中，步驟2中，是當(dāng)細菌繁殖到OD值為0.7時，再加 入IPTG激活T7啟動子，在37°C誘導(dǎo)表達。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其中，步驟3中，是細菌重懸在Tris-HCl緩沖溶液中進 行超聲破碎釋放蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其中，步驟4中，采用層析方法、硫酸銨沉淀、離子交換 或分子排阻層析分離蛋白。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其中，步驟5中，亞鐵鹽和氧化劑為水溶性亞鐵鹽硫 酸亞鐵、硫酸亞鐵銨或氯化亞鐵；氧化劑為雙氧水。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其中，步驟5中，控制ρΗ為8 8.5 ；控制溫度為37°C 或 65°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其中，步驟6中，排阻層析所用的介質(zhì)是^^1!虹0^6B 或者是superose 6，使用的緩沖溶液是pH = 7. 25的0. 025M Tris-HCl緩沖溶液，流速為 0. 25ml/min。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其中，在重組人鐵蛋白的內(nèi)部形成的磁性納米顆粒包 括磁鐵礦或者磁赤鐵礦。
全文摘要
一種單分散性磁性人鐵蛋白的制備方法，包括直接以重組人鐵蛋白為模板，通過一步仿生合成的方法，在重組人鐵蛋白的內(nèi)部形成磁性納米顆粒，然后經(jīng)過分離純化所得到的單分散性的和無磁相互作用的磁性人鐵蛋白。按照本發(fā)明的方法制備的磁性人鐵蛋白具有完整的重組人鐵蛋白殼和磁性納米顆粒核，核的成分為Fe3O4或者γ-Fe2O3，通常具有尺寸均一、形狀相似、分散性好的特點。核的平均直徑可控制在1納米到10納米之間，取決于在合成過程中所加的鐵原子數(shù)。通過該法制備的磁性人鐵蛋白是單分散的和無磁相互作用的，因而解決了納米磁性顆粒常存在的聚集問題，能夠長期地穩(wěn)定存在，在生物醫(yī)學(xué)、電子和環(huán)境領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景和市場前景。
文檔編號C12N15/74GK102115746SQ20091024450
公開日2011年7月6日 申請日期2009年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月30日
發(fā)明者曹長乾, 潘永信, 田蘭香 申請人:中國科學(xué)院地質(zhì)與地球物理研究所