專利名稱：一種油酸脫氫酶基因及其所編碼的蛋白質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種油酸脫氫酶基因及其所編碼的蛋白質(zhì)，屬于基因工程領(lǐng)域，具
體地涉及到植物中油酸合成的關(guān)鍵酶及其編碼基因。
背景技術(shù)：
油酸作為必須脂肪酸，在醫(yī)療、保健等方面具有重要作用，而A"-油酸去飽和酶 (delta-12 oleate desaturase FAD2)是植物產(chǎn)生多聚不飽和脂肪酸的關(guān)鍵酶，催化油酸 脫飽和產(chǎn)生亞油酸。油酸脫氫酶只存在于植物和微生物中，在人和哺乳動(dòng)物中不存在，所以 人體不能自身合成亞油酸，必須從體外攝取。人們先后從藍(lán)細(xì)菌，擬南芥、芝麻、花生及棉花 中分離到質(zhì)體或微粒體的油酸脫氫酶基因。 油酸脫氫酶的活性受溫度調(diào)節(jié)，溫度可以調(diào)控油酸的去飽和過(guò)程，從而控制油酸 的含量。然而，不同植物的油酸脫氫酶受溫度的影響程度不同。
我們首次報(bào)道了雙子葉植物播娘蒿的油酸脫氫酶基因。
發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問(wèn)題 本發(fā)明的目的在于公開一種油酸脫氫酶基因及其所編碼的蛋白質(zhì)，該基因來(lái)自播 娘蒿，可作為目的基因?qū)胫参铮种苼営退岬暮铣?，促使油酸的更多積累，進(jìn)行植物品種 改良。 技術(shù)方案 本發(fā)明油酸脫氫酶基因(DsFAD2)，其核苷酸序列SEQ ID NO. 1為 ACGAATGTGGCCACCACGCTTTCAGCGACTACCAGTGGCTAGATGACACAGT
CCCCAAGAAGAAATCTGCAATCAAGTGGTACGGCAAATACCTCAACAACCCT
CGATGTATAGGGAGGCAAAGGAGTGTATCTATGTAGAACCGGACAGGGAAGG
TGAGAAGAAAGGTGTGTACTGGTACAACAATAAGTTATGAGGATGATGGTGA CGCTG。 上述的油酸脫氫酶基因(DsFAD2)基因來(lái)自播娘蒿，其編碼的蛋白質(zhì)來(lái)自播娘蒿 (Descurainia sophia)，它具有如下所示的氨基酸序列SEQ ID NO. 2 :
MGAGGRMPVPSSSKKSETDALKRVPCEKPPFSLGDLKKAIPPHCFKRSIPRSFSYL SDYQWLDDTVGLIFHSFLLVPYFSWKYSHRRHHSNTGSLERDEVFVPKKKSAIK
WYGKYLNNPVGRIVMLIVQFTLGWPLYLAFNVSGRPYDGFACHFFPNAPIYNDR PSLPHYDSSEWDWLRGAMATVDRDYGILNKVFHNITDTHVAHHLFSTMPHYNA
MEATKAIKPILGDYYQFDGTPWYKAMYREAKECIYVEPDREGEKKGVYWYNN
KL。
有益效果 1、本發(fā)明公開了一種油酸脫氫酶基因(DsFAD2)及其所編碼的蛋白質(zhì)。油酸脫氫 酶基因在雙子葉植物播娘蒿中是首次報(bào)道，可應(yīng)用于雙子葉植物的遺傳改良。該基因來(lái)自 播娘蒿(Descurainia sophia)，轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)證明DsFAD2基因轉(zhuǎn)化油菜，可提高油菜中的亞 油酸和亞麻酸含量；而轉(zhuǎn)該基因反義片段則會(huì)抑制亞油酸合成，從而顯著提高油菜籽油酸 含量。所編碼的蛋白質(zhì)具有油酸脫氫酶功能。 2、本發(fā)明人提供的DsFAD2基因能催化油酸脫飽和產(chǎn)生亞油酸。mRNA表達(dá)分析表 明DsFAD2基因?qū)儆诮M成型表達(dá)，但是DsFAD2基因在播娘蒿根和角果中表達(dá)量較高。
3、本發(fā)明的DsFAD2基因來(lái)自播娘蒿，具有適合于播娘蒿等雙子葉植物表達(dá)的優(yōu) 化密碼子，其基因工程受體植物除了單子葉植物，如小麥、玉米、水稻等之外更加適合于擬 南芥、油菜、煙草、棉花等雙子葉植物。 4、利用本發(fā)明DsFAD2基因作為目的基因構(gòu)建植物反義表達(dá)載體，以種子特異性 啟動(dòng)子，遺傳轉(zhuǎn)化油菜等雙子葉植物，抑制亞油酸的合成，促使油酸的更多積累。轉(zhuǎn)化可經(jīng) 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因槍法、花粉管通道法或其它方法轉(zhuǎn)化植物。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1根據(jù)GenBank中擬南芥和其它物種FAD2序列設(shè)計(jì)了播娘蒿中DsFAD2引物FAD2P1和FAD2 P2。以播娘蒿角果總RNA為起始材料，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA作為PCR擴(kuò)增的模 板，運(yùn)用引物組合FAD2 P1和FAD2 P2，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到一條明亮的條帶，測(cè)序。利用RACE 試劑盒的反轉(zhuǎn)錄體系，將播娘蒿角果總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA作為模板，運(yùn)用基因特異性引物 GST和錨定引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，DsFAD2的特異性引物為5' FAD2 GST和3' FAD2 GST，分 別得到一條明亮的條帶。測(cè)序后序列比對(duì)顯示，它們都含有引物設(shè)計(jì)時(shí)保守區(qū)域重復(fù)的一 段序列，Blast搜索顯示這些序列都很可能是這些基因所缺少的那一部分。根據(jù)上面的信 息在DsFAD2非編碼區(qū)設(shè)計(jì)了它的全長(zhǎng)引物DsFAD2. 1和DsFAD2. 2，上述所用引物如下
FAD2P1:5' -ACTTGCTTCCAGTGCCCTTA-3'
FAD2P2:5' -TCGCAAAGTGCAATGTCTTC-3'
5' FAD2GST:5' -TCCTCTCTCCGATTCCCAC-3'
3' FAD2GST:5' -AAATCACTCACCAGTCACCACT-3'
DsFAD2.1:5' -CTCCAGAAACATGGGTGC-3'
DsFAD2.2:5' -CAGCGATGAGAAGAACAATAC—3' 并以全長(zhǎng)引物DsFAD2. 1、 DsFAD2. 2進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到特異性條帶，獲得播娘蒿油 酸脫氫酶基因的全長(zhǎng)序列。以總RNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈后，用高保真Taq 酶(購(gòu)自大連寶生物工程有限公司)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR程序如下94t:預(yù)變性3min，94t: 變性60s， 56"復(fù)性90s， 72"延伸2min， 32個(gè)循環(huán)后，72"再延伸10min，最后4"保存。PCR 回收產(chǎn)物連接到pMD19-T克隆載體上(購(gòu)自大連寶生物工程有限公司)，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌 T0P10 (北京天為時(shí)代生物工程有限公司)，以來(lái)自目的片段上的引物序列為引物，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，鑒定陽(yáng)性克隆；序列的測(cè)定委托上海Invitrogen生物技術(shù)有限公司完成。(見SEQ ID NO. 1)。 BLAST的結(jié)果及分子建模結(jié)果證明從播娘蒿中新得到的基因確為一個(gè)編碼油酸脫 氫酶基因(delta-12 oleate desaturase FAD2)，該基因編碼產(chǎn)物具有催化合成亞油酸的 功能。 實(shí)施例2 上述獲得播娘蒿油酸脫氫酶基因DsFAD2的cDNA序列SEQ ID NO. 1，其編碼的蛋白 質(zhì)，來(lái)自播娘蒿(Descurainia sophia)，它的氨基酸序列為SEQ ID NO. 2， DsFAD2cDNA全長(zhǎng) 1343bp，0RF1152bp編碼383個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)編碼蛋白分子量為44. 1KD，等電點(diǎn)PI為8. 63。 根據(jù)氨基酸序列比對(duì)的結(jié)果顯示，DsFAD2與其他作物中FAD2的一致性為90% _73%，其中 和擬南芥相似性最高為90% 。該序列有3個(gè)高度保守的組氨酸Boxes,這一特性是所有膜 結(jié)合去飽和酶的共同特性，這些組氨酸Boxes用以結(jié)合催化所需的兩個(gè)鐵離子，是去飽和 酶行使功能所必須的。它和其它作物中的FAD2 —樣在N端沒有明顯的信號(hào)肽，但在C端發(fā) 現(xiàn)有一富含芳香族氨基酸的信號(hào)肽，被認(rèn)為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)修復(fù)信號(hào)?？缒^(qū)預(yù)測(cè)顯示該序列存 在5個(gè)跨膜區(qū)。
實(shí)施例3 用DsFAD2全長(zhǎng)引物進(jìn)行半定量RT-PCR分析播娘蒿根、莖、葉、花蕾、花和角果的表 達(dá)，結(jié)果表明，播娘蒿花蕾，花和幼嫩角果中的表達(dá)是逐漸增加的，這一結(jié)果反映了油酸脫 氫酶在脂肪酸去飽和化的過(guò)程中起著重要作用，它們是花發(fā)育過(guò)程中花粉形成所必須的。 DsFAD2在冷脅迫下表達(dá)量是基本恒定的；在傷害脅迫下受到誘導(dǎo)表達(dá)。
實(shí)施例4 利用全長(zhǎng)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR所得產(chǎn)物用BamHI和SacI進(jìn)行雙酶切，回收 酶切產(chǎn)物并將其插入植物轉(zhuǎn)化載體PBI121，構(gòu)建重組轉(zhuǎn)基因反義載體PBI121-DsFAD2，將 轉(zhuǎn)基因載體PBI121-DsFAD2轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，提PCR陽(yáng)性菌落的質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定。雙 酶切載體PBI121-DsFAD2，酶切后分別得到了預(yù)期大小目的片段，對(duì)克隆到載體PBI121的 DsFAD2進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與基因的序列進(jìn)行比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)DNA序列完全相同。將驗(yàn)證正 確的轉(zhuǎn)基因載體PBI121-DsFAD2轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，對(duì)轉(zhuǎn)化后的抗性單菌落進(jìn)行PCR檢測(cè) 挑選陽(yáng)性單克隆測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果與DsFAD2基因序列比對(duì)，序列比對(duì)結(jié)果表明序列完全相 同，表明轉(zhuǎn)基因載體已經(jīng)轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌LBA4404。采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將播娘蒿油酸脫氫 酶基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜蘇油1號(hào)。對(duì)獲得的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR，RT-PCR及Southern雜交 進(jìn)行陽(yáng)性驗(yàn)證，證明該基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入蘇油1號(hào)。 對(duì)轉(zhuǎn)基因后代種子的脂肪酸含量進(jìn)行測(cè)定，轉(zhuǎn)正義的DsFAD2轉(zhuǎn)基因植株亞油 酸含量從20. 1% ±0. 86提高到25. 5% ±0. 67，平均提高了 5.4% ;亞麻酸含量從7. 0% ±0. 27提高到8. 3% ±0. 19，平均提高了 1.3% ;轉(zhuǎn)反義的DsFAD2轉(zhuǎn)基因植株油酸含量從 60. 8% ±0. 78提高到70. 2% ±0. 89，平均提高了 9. 4% ;亞油酸含量從20. 1% ±0. 86降 低到16. 1% ±0. 46，平均降低了 4. 0X;說(shuō)明DsFAD2基因轉(zhuǎn)化油菜，可提高油菜中的亞油酸 和亞麻酸含量；而轉(zhuǎn)該基因反義片段則會(huì)抑制亞油酸合成，從而顯著提高油菜籽油酸含量。
上述實(shí)施例1、2表明本發(fā)明中來(lái)源于播娘蒿的油酸脫氫酶基因DsFAD2。實(shí)施例 3、4表明該基因有提高種子油酸含量的功能。此類基因由于來(lái)源于雙子葉植物，具有雙子葉 植物優(yōu)化的密碼子，與單子葉植物來(lái)源的油酸脫氫酶基因相比，更加適合于擬南芥、油菜、 煙草、棉花等雙子葉作物提高油酸含量的遺傳改良。 本發(fā)明人從雙子葉植物播娘蒿(Descurainia sophia)中克隆了一個(gè)cDNA，編碼 油酸脫氫酶基因，命名為DsFAD2。根據(jù)氨基酸序列比對(duì)的結(jié)果顯示，DsFAD2與其他作物中 FAD2的一致性為90% _73%，其中和擬南芥相似性最高為90%。該序列有3個(gè)高度保守的 組氨酸Boxes,這一特性是所有膜結(jié)合去飽和酶的共同特性，這些組氨酸Boxes用以結(jié)合催 化所需的兩個(gè)鐵離子，是去飽和酶行使功能所必須的。它和其它作物中的FAD2—樣在N端 沒有明顯的信號(hào)肽，但在C端發(fā)現(xiàn)有一富含芳香族氨基酸的信號(hào)肽，被認(rèn)為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)修復(fù) 信號(hào)?？缒^(qū)預(yù)測(cè)顯示該序列存在5個(gè)跨膜區(qū)。 mRNA表達(dá)分析表明DsFAD2在播娘蒿花蕾、花和幼嫩角果中的表達(dá)是逐漸增加的， 這一結(jié)果反映了油酸脫氫酶在脂肪酸去飽和化的過(guò)程中起著重要作用，它們是花發(fā)育過(guò)程 中花粉形成所必須的。DsFAD2在冷脅迫下表達(dá)量是基本恒定的；在傷害脅迫下受到誘導(dǎo)表 達(dá)。 綜上所述，本發(fā)明人提供的DsFAD2基因是首次在雙子葉植物中分離的新基因，其 功能是催化亞油酸的生物合成。本發(fā)明所述的一種植物油酸脫氫酶基因已經(jīng)在很多植物中 發(fā)現(xiàn)?？衫帽景l(fā)明DsFAD2基因作為目的基因構(gòu)建植物反義表達(dá)載體，使用種子特異性的 NAPIN啟動(dòng)子，使該基因特異的在種子中表達(dá)。所用的表達(dá)載體可為Ti質(zhì)粒，Ri質(zhì)粒，植物 病毒載體等。轉(zhuǎn)化方法可用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因槍法、花粉管通道法或其它方法轉(zhuǎn)化植物。
本發(fā)明的DsFAD2基因來(lái)自播娘蒿，具有適合于播娘蒿等雙子葉植物表達(dá)的優(yōu)化 密碼子，其基因工程受體植物除了單子葉植物，如小麥、玉米、水稻等之外更加適合于擬南芥、油菜、煙草、棉花等雙子葉植物。 本發(fā)明涉及的序列及記號(hào)分列如下 (l)SEQ ID NO. 1的信息 (i)序列特征 (A)長(zhǎng)度1343bp (B)類型核苷酸 (C)鏈性單鏈 (D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性 (ii)分子類型核苷酸 (iii)序列描述SEQ ID NO. 1 (2) SEQ ID NO. 2的信息 (i)序列特征 (A)長(zhǎng)度383a. a (B)類型氨基酸 (C)鏈性單鏈 (D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性 (ii)分子類型蛋白質(zhì) (iii)序列描述SEQ ID NO. 2 (3) SEQ ID NO. 3的信息 (i)序列特征 (A)長(zhǎng)度20b (B)類型核苷酸 (C)鏈性單鏈 (D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性 (ii)分子類型核苷酸 (iii)序列描述SEQ ID NO. 3 (4) SEQ ID NO. 4的信息 (i)序列特征 (A)長(zhǎng)度20b (B)類型核苷酸 (C)鏈性單鏈 (D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性 (ii)分子類型核苷酸 (iii)序列描述SEQ ID NO. 4 (5) SEQ ID NO. 5的信息 (i)序列特征 (A)長(zhǎng)度:19b (B)類型核苷酸 (C)鏈性單鏈
(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型核苷酸(iii)序列描述:SEQ IDNO. 5(6) SEQ ID NO. 6的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22b(B)類型核苷酸(C)鏈性單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型核苷酸(iii)序列描述:SEQ IDNO. 6(7) SEQ ID NO. 7的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度18b(B)類型核苷酸(C)鏈性單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型核苷酸(iii)序列描述:SEQ IDNO. 7(8) SEQ ID NO. 8的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度21b(B)類型核苷酸(C)鏈性單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型核苷酸(iii)序列描述:SEQ IDNO. 8SEQUENCE LISTING〈110〉南京農(nóng)業(yè)大學(xué)〈120〉 一種油酸脫氫酶基因及其所編碼的蛋白質(zhì)
〈130〉DsFAD2〈140>2009-10-26〈141>2009-10-26〈150>2009-10-20〈151>2009-10-20〈160>8〈170>PatentIn version3. 5〈210>1〈211>1343
〈212〉DNA〈213〉Descurainia sophia〈400〉1ctccagaaacgtggteg皿tgccggttccttcttcttccaagnate gga60aaccgatgctcte皿gcgggtgccgtgcgagaaaccgcctttctcgctgggagatcttea120ga皿gctetcccaccgcattgtttcaaacgctcaatccctcgctctttctccteccttet180cactgacatcattetegtctcatgcttctectetgtcgccaccaattecttctctetcct240ccctcaccctctctcttecttggcttggcccctetettgggtctgtcaaggctgtgtcct300teccggtgtttgggtrategcccacgaatgtggccaccacgctttcagcgacteccagtg360gctegatgacacagtcggtcttetcttccattctttcctccttgtcccttacttctcctg420ga皿tec3gccatcgccgtcaccattccaacacgggttccctcg皿3gagatg皿gtgtt■tgtccccaaggtecggca皿tecctcaacaaccctgttgg540gcg皿tcgtgatgttgattgtccagttcaccctcggctggccattgtecttggccttcaa600tgtctcgggcagaccctetgacggctttgcatgccatttcttcccaaacgctcccatcte660c皿cgaccgggaacgcctccagatetecatctcagatgccggtettctcgctgtctgcte720tggtcttteccgttetgctgctgcac皿ggaatggcctcgatgatctgctteteeggagt780accgcttctgategtg皿cgggttcctcgtcttgatcacttecttgcagcacactcatcc840ctcgttgcctcactecgattcatccgagtgggattggttetggcteccgt■tetggaatcctteac皿ggtgttccacaaccacacgtggc960tcatcatctgttctcgacaatgccgcatteteacgc皿tg g皿gctec皿aggcgate朋1020gccaatectcggagactettatcagttcgatgg皿caccg tggteteagg cgatgteteg1080gg郷c咖ggagtgtatctatgteg皿ccgg織ggg皿ggtg卿卿皿ggtgtgte1140ctggtecaacg郷atgatgggatctttca cttgtttgag1200ttgtctttgtcteag朋g皿gctetggtttgtttcaatea tcttattgtccattttgttg1260tgttttgacattttggcteaattetgtgatgtggg皿gtt 3gtgttC皿3 tgttttgtgt1320ctgtattgtt cttctcatcg ctg1343〈210〉2〈211〉383〈212〉PRT〈213〉Descurainia sophia〈400〉2Met Gly Ala Gly Gly Arg Met ProVal Pro Ser Ser Ser Lys Lys Ser151015Glu Thr Asp Ala Leu Lys Arg ValPro Cys Glu Lys Pro)ro Phe Ser202530Leu Gly Asp Leu Lys Lys Ala liePro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser354045lie Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leulie Thr Asp lie lielie Val Ser505560<image>image see original document page 10</image>
370 :〈210>3〈211>20〈212>DNA〈213〉Descurainia sophia〈400>3acttgcttcc agtgccctta<210〉4〈211>20〈212>DNA<213>Descurainia sophia〈400>4tcgcaaagtg caatgtcttc〈210>5〈211>19〈212>DNA〈213>Descurainia sophia〈400〉5tcctctctcc gattcccac〈210>6〈211〉22〈212>DNA〈213>Descurainia sophia<400>6aaatcactca ccagtcacca ct〈210>7<211>18〈212>DNA〈213>Descurainia sophia〈400>7ctccagaaac atgggtgc〈210>8〈211>21〈212〉DNA〈213>Descurainia sophia〈400>8cagcgatgag朋gaac肌te c
375 380
20
20
19
22
18
2權(quán)利要求
一種雙子葉植物油酸脫氫酶基因(DsFAD2)，來(lái)自播娘蒿(Descurainia sophia)，命名為DsFAD2基因，其核苷酸序列SEQ ID NO.1為CTCCAGAAACATGGGTGCAGGTGGTAGAATGCCGGTTCCTTCTTCTTCCAAGAAATCGGAAACCGATGCTCTAAAGCGGGTGCCGTGCGAGAAACCGCCTTTCTCGCTGGGAGATCTTAAGAAAGCTATCCCACCGCATTGTTTCAAACGCTCAATCCCTCGCTCTTTCTCCTACCTTATCACTGACATCATTATAGTCTCATGCTTCTACTATGTCGCCACCAATTACTTCTCTATCCTCCCTCACCCTCTCTCTTACTTGGCTTGGCCCCTATATTGGGTCTGTCAAGGCTGTGTCCTTACCGGTGTTTGGGTCATAGCCCACGAATGTGGCCACCACGCTTTCAGCGACTACCAGTGGCTAGATGACACAGTCGGTCTTATCTTCCATTCTTTCCTCCTTGTCCCTTACTTCTCCTGGAAATACAGCCATCGCCGTCACCATTCCAACACGGGTTCCCTCGAAAGAGATGAAGTGTTTGTCCCCAAGAAGAAATCTGCAATCAAGTGGTACGGCAAATACCTCAACAACCCTGTTGGGCGAATCGTGATGTTGATTGTCCAGTTCACCCTCGGCTGGCCATTGTACTTGGCCTTCAATGTCTCGGGCAGACCCTATGACGGCTTTGCATGCCATTTCTTCCCAAACGCTCCCATCTACAACGACCGGGAACGCCTCCAGATATACATCTCAGATGCCGGTATTCTCGCTGTCTGCTATGGTCTTTACCGTTATGCTGCTGCACAAGGAATGGCCTCGATGATCTGCTTCTACGGAGTACCGCTTCTGATAGTGAACGGGTTCCTCGTCTTGATCACTTACTTGCAGCACACTCATCCCTCGTTGCCTCACTACGATTCATCCGAGTGGGATTGGTTAAGGGGAGCTATGGCTACCGTAGACAGAGACTATGGAATCCTTAACAAGGTGTTCCACAACATCACGGACACACACGTGGCTCATCATCTGTTCTCGACAATGCCGCATTATAACGCAATGGAAGCTACAAAGGCGATAAAGCCAATACTCGGAGACTATTATCAGTTCGATGGAACACCGTGGTATAAGGCGATGTATAGGGAGGCAAAGGAGTGTATCTATGTAGAACCGGACAGGGAAGGTGAGAAGAAAGGTGTGTACTGGTACAACAATAAGTTATGAGGATGATGGTGAAACAGTGGATCTTTCACTTGTTTGAGTTGTCTTTGTCTAAGAAGAAGCTATGGTTTGTTTCAATAATCTTATTGTCCATTTTGTTGTGTTTTGACATTTTGGCTAAATTATGTGATGTGGGAAGTTAGTGTTCAAATGTTTTGTGTCTGTATTGTTCTTCTCATCGCTG
2.權(quán)利要求l所述的一種雙子葉植物油酸脫氫酶基因所編碼的蛋白質(zhì)，來(lái)自播娘 蒿(Descurainia sophia)，命名為DsFAD2蛋白質(zhì)，它具有如下所示的氨基酸序列SEQ ID NO. 2 :NKL。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種油酸脫氫酶基因及其所編碼的蛋白質(zhì)，屬于基因工程領(lǐng)域。播娘蒿油酸脫氫酶基因DsFAD2的cDNA序列SEQ ID NO.1及其編碼的氨基酸序列SEQ ID NO.2。本發(fā)明基因?yàn)殡p子葉植物播娘蒿的首次報(bào)道，參與播娘蒿種子貯藏亞油酸的生物合成，mRNA表達(dá)分析表明該基因受傷害誘導(dǎo)，不受溫度影響。轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)證明DsFAD2基因轉(zhuǎn)化油菜，可提高油菜中的亞油酸和亞麻酸含量；而轉(zhuǎn)該基因反義片段則會(huì)抑制亞油酸合成，從而顯著提高油菜籽油酸含量。
文檔編號(hào)C12N9/02GK101696415SQ20091023368
公開日2010年4月21日 申請(qǐng)日期2009年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月28日
發(fā)明者唐三元, 張紅生, 田琳琳, 管榮展, 鄭秀, 陳健美 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué);