一種拮抗害蟲(chóng)的新穎蘇云金桿菌菌株的制作方法

專(zhuān)利名稱(chēng)：一種拮抗害蟲(chóng)的新穎蘇云金桿菌菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種新穎的蘇云金桿菌菌株，特別是關(guān)于一種具有crylAb、CrylAC、 crylD、crylE基因片段的蘇云金桿菌菌株，該菌株可用于拮抗鱗翅目的害蟲(chóng)。
背景技術(shù)：
隨著人們對(duì)于生活質(zhì)量的重視以及環(huán)保意識(shí)的興起，目前以生物性殺蟲(chóng)劑取代傳 統(tǒng)農(nóng)藥來(lái)避免食物鏈的最終累積的趨勢(shì)已成為主流，而且傳統(tǒng)農(nóng)藥的使用已破壞生態(tài)系統(tǒng) 平衡，并產(chǎn)生抗藥性的問(wèn)題，以致某些害蟲(chóng)發(fā)生猖獗，造成很大的防治困難及損失。其中，以 蘇云金桿菌為生物性殺蟲(chóng)劑中最廣為應(yīng)用，且使用簡(jiǎn)便又安全。蘇云金桿菌(蘇力菌，Bacillus thuringiensis)是一種昆蟲(chóng)病源細(xì)菌，為革蘭氏 陽(yáng)性桿菌，在營(yíng)養(yǎng)缺乏或環(huán)境不良的時(shí)候，蘇云金桿菌會(huì)進(jìn)入不分裂的半靜止期，或是分化 形成孢子和殺蟲(chóng)結(jié)晶蛋白，其結(jié)晶蛋白具有專(zhuān)一性，對(duì)特定的昆蟲(chóng)具有毒性，且毒性大小依 昆蟲(chóng)的種類(lèi)有所強(qiáng)弱，但對(duì)人類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、害蟲(chóng)的天敵、蜜蜂等均無(wú)害。因此，過(guò)去20年來(lái)科學(xué) 家已分離出許多蘇云金桿菌內(nèi)的殺蟲(chóng)基因，并研制成重組基因產(chǎn)品，或是將殺蟲(chóng)基因直接 注入植物體內(nèi)而免去噴灑殺蟲(chóng)劑的動(dòng)作等等。真正活化蘇云金桿菌內(nèi)孢子的是腸液的堿性 環(huán)境，而非蛋白酶，腸道的高PH值不僅對(duì)蘇云金桿菌結(jié)晶的溶解、消化很重要，且對(duì)毒性表 現(xiàn)相當(dāng)重要。蘇云金桿菌的內(nèi)毒素基因位于質(zhì)體上，因此很容易進(jìn)行轉(zhuǎn)殖基因工程。早期的內(nèi) 毒素重組基因大多限制于單一基因片段的轉(zhuǎn)殖。最近則利用多重內(nèi)毒素基因或是差異性很 大的基因，甚至是嵌合(chimeric)基因，以增強(qiáng)殺蟲(chóng)效果、擴(kuò)大殺蟲(chóng)范圍。 各類(lèi)蘇云金桿菌毒蛋白間的類(lèi)源關(guān)系，因其內(nèi)含質(zhì)體核酸序列的變異所產(chǎn)生的殺 蟲(chóng)結(jié)晶蛋白不同，殺蟲(chóng)對(duì)象亦互異，主要分成六大類(lèi)(Hofte and ffhiteley, 1989 ；Gill et al.,1992 ；Gleave et al.,1993 ；Lereclus et al.,1993 ；Shin et al.,1995 ；Kostichka et al.，1996)，其中Cryl類(lèi)對(duì)鱗翅目有毒殺蟲(chóng)效果；Cry2類(lèi)對(duì)鱗翅目及雙翅目或只對(duì)雙 翅目有效；Cry3類(lèi)只對(duì)鞘翅目有效；Cry4只對(duì)雙翅目有效；Cry5不產(chǎn)生結(jié)晶，部分可殺鱗 翅目和鞘翅目，部分則否；CytA則是無(wú)特定殺蟲(chóng)作用范圍，但會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞溶解和溶血的效 果(cytolytic and hemolytic efficiency)；其中以Cryl所編碼(encode)的氨基酸最多， 而CytA最少。中國(guó)臺(tái)灣專(zhuān)利號(hào)385229揭露了一種新穎的生物殺蟲(chóng)組合物，其包含一種由殺蟲(chóng) 細(xì)菌與病毒，如蘇云金桿菌結(jié)晶蛋白質(zhì)或孢子或相關(guān)混合物，和核多角體病毒，從中挑選而 得的活性殺蟲(chóng)成份；一種聚合物；及一種無(wú)機(jī)光線阻礙劑。此發(fā)明亦包含生物殺蟲(chóng)組合物 的方法和控制昆蟲(chóng)的方法；中國(guó)臺(tái)灣專(zhuān)利號(hào)385229專(zhuān)利與本發(fā)明的差異在于本發(fā)明的新 穎蘇云金桿菌菌株是利用基因片段產(chǎn)生的內(nèi)毒素拮抗害蟲(chóng)，并非以結(jié)晶蛋白或孢子或相關(guān) 混合物控制害蟲(chóng)。美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6500617揭露了一種非天然獲得抗蟲(chóng)基因的方法，此方法以DNA重組 的方式建立重組基因庫(kù)，并純化重組抗蟲(chóng)基因的有效多肽，其中此對(duì)昆蟲(chóng)有毒性的多肽為蘇云金桿菌的S-內(nèi)毒素；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6500617專(zhuān)利與本發(fā)明的差異在于，本發(fā)明的新穎蘇 云金桿菌菌株是以天然方式獲得該抗蟲(chóng)基因片段，而非以DNA重組的方式獲得。美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6177615揭露了一種新穎合成的蘇云金桿菌核酸片段，該核酸片段可 以轉(zhuǎn)譯出S -內(nèi)毒素，具有拮抗鱗翅目昆蟲(chóng)的殺蟲(chóng)活性，此發(fā)明也揭露此序列可轉(zhuǎn)譯成結(jié) 晶蛋白；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6177615專(zhuān)利與本發(fā)明的差異在于，本發(fā)明的新穎蘇云金桿菌菌株所 含的抗蟲(chóng)基因片段并非合成，而是本身即具有該基因片段，經(jīng)由篩選獲得該新穎菌株并使 用。美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5994266揭示了一種殺蟲(chóng)組合物，其殺蟲(chóng)成分為δ -內(nèi)毒素或可引發(fā) 殺蟲(chóng)活性的片段，且該S-內(nèi)毒素或可引發(fā)殺蟲(chóng)活性的片段選自cry I A, cry I B, cry I C， cry I D, cry II A, cry II B, cry II C, cry III A, cry III B, cry III C, cry IV A, cry IV B, cry IV C，cry IV D，cry V及cry VI，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5994266專(zhuān)利與本發(fā)明的差異在于，本發(fā)明 的新穎蘇云金桿菌菌株所含的抗蟲(chóng)基因片段并非經(jīng)人工方式獲得，而是本身即具有該基因 片段，經(jīng)由篩選得到該新穎菌株并用于拮抗昆蟲(chóng)。由上述文獻(xiàn)可知蘇云金桿菌的內(nèi)毒素基因產(chǎn)物具拮抗昆蟲(chóng)效果，故目前科學(xué)家大 多以遺傳工程的方式篩選或合成具多種抗蟲(chóng)活性基因的片段。本發(fā)明的新穎蘇云金桿菌菌 株，為一天然菌株，具crylAb、CrylAC、CrylD、CrylE，經(jīng)篩選后獲得該菌株，并非由人為進(jìn)行 遺傳工程合成，僅利用不同基因片段的引物對(duì)(primer)進(jìn)行篩選及確認(rèn)，得到具有多種抗 蟲(chóng)活性基因片段的新穎蘇云金桿菌
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一目的在于提供一種蘇云金桿菌菌株，應(yīng)用于生物性控制蟲(chóng)害的技術(shù) 領(lǐng)域，利用一 PCR篩選方式鑒定出含crylAb、crylAc、crylD、crylE基因的菌株(strain)， 該蘇云金桿菌菌株可有效拮抗害蟲(chóng)的侵襲。本發(fā)明的第二目的在于提供一種蘇云金桿菌菌株，應(yīng)用于生物性控制蟲(chóng)害的技術(shù) 領(lǐng)域，可制成一種用于控制害蟲(chóng)的組合物，該組合物為一可接受的載體及一殺蟲(chóng)有效劑量 的S -內(nèi)毒素，對(duì)受害蟲(chóng)侵襲的區(qū)域或預(yù)防害蟲(chóng)寄生的區(qū)域施加一有效劑量的該組合物， 可有效防治害蟲(chóng)的生長(zhǎng)，進(jìn)而提升作物的產(chǎn)能。本發(fā)明的第三目的在于提供一種蘇云金桿菌菌株，應(yīng)用于生物性防治蟲(chóng)害的技術(shù) 領(lǐng)域，利用蘇云金桿菌菌株和/或其內(nèi)毒素控制害蟲(chóng)的方法，所防治的害蟲(chóng)包含夜蛾科、螟 蛾科或菜蛾科。本發(fā)明首先提供了一種拮抗害蟲(chóng)的蘇云金桿菌菌株，該蘇云金桿菌菌株具有 cryIAb> crylAc、crylD 禾口 crylE 基因片段。根據(jù)上述方案，所述蘇云金桿菌菌株進(jìn)一步含有cry2A基因片段。本發(fā)明還提供了一種用于控制害蟲(chóng)的組合物，該組合物包括可接受的載體及殺蟲(chóng) 有效劑量的S -內(nèi)毒素，所述內(nèi)毒素得自具有(3巧認(rèn)13、(^7認(rèn)(3、(^710和(^7比基因片段的 蘇云金桿菌菌株。根據(jù)上述方案，其中所述蘇云金桿菌菌株，進(jìn)一步含有cry2A基因片段。本發(fā)明還提供了一種控制害蟲(chóng)的方法，該方法包括對(duì)受害蟲(chóng)侵襲的區(qū)域或預(yù)防害蟲(chóng)寄生的區(qū)域施加有效劑量的蘇云金桿菌菌株和/或具其內(nèi)毒素的組合物，其特征在于所述蘇云金桿菌菌株為具有crylAb、crylAc, crylD和 crylE基因片段的蘇云金桿菌菌株。根據(jù)上述方案，其中所述蘇云金桿菌菌株進(jìn)一步含有crt2A基因片段。

根據(jù)上述方案，其中所述蘇云金桿菌菌株的內(nèi)毒素為δ-內(nèi)毒素。本發(fā)明還提供了一種利用蘇云金桿菌菌株和/或其內(nèi)毒素防治害蟲(chóng)的方法，該方 法包括對(duì)受害蟲(chóng)侵襲的區(qū)域或預(yù)防害蟲(chóng)寄生的區(qū)域施加有效劑量的所述蘇云金桿菌菌 株和/或具其內(nèi)毒素的組合物，其特征在于所述蘇云金桿菌菌株為具有crylAb、crylAc, crylD, crylE基因片段的蘇云金桿菌菌株。根據(jù)上述方案，其中所述蘇云金桿菌菌株進(jìn)一步含有crt2A基因片段。根據(jù)上述方案，其中所述蘇云金桿菌菌株可用于控制害蟲(chóng)。根據(jù)上述方案，其中所述害蟲(chóng)選自夜蛾科、螟蛾科或菜蛾科所組成群組的其中之
ο根據(jù)上述方案，其中所述夜蛾科選自玉米穗蟲(chóng)或擬尺蠖的族群。根據(jù)上述方案，其中所述螟蛾科選自豆莢螟、大菜螟或粉斑螟蛾的族群。根據(jù)上述方案，其中所述菜蛾科選自小菜蛾的族群。根據(jù)上述方案，其中所述蘇云金桿菌菌株的內(nèi)毒素為δ -內(nèi)毒素。本發(fā)明還提供了一種經(jīng)分離的蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis)菌株F201 及其代謝物。所述的蘇云金桿菌菌株F201已經(jīng)于2009年7月10日保藏在德國(guó)微生物和細(xì) 胞培養(yǎng)物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, DSMZ)(德國(guó)微生物和細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心地址Inhoffenstr. 7B D_38124Braunschweig)， 取得的保藏編號(hào)為DSM 22750。本發(fā)明所述的蘇云金桿菌菌株F201亦稱(chēng)為蘇云金桿菌 DSM22750。


圖1為本發(fā)明的蘇云金桿菌菌株(F201)以PCR擴(kuò)增的cryl基因產(chǎn)物的電泳分析圖；圖2為本發(fā)明的蘇云金桿菌菌株(F201)以PCR擴(kuò)增的cry2基因產(chǎn)物的電泳分析 圖。用于專(zhuān)利程序的微生物保存保藏日期2009年7月10日；保藏單位德國(guó)微生物和細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心(DSMZ)；保藏編號(hào)DSM22750 ；分類(lèi)命名蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis)。為了易于說(shuō)明，本發(fā)明藉由下述的較佳實(shí)施例并配合附圖而得到充分了解，并使 得熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以據(jù)以完成本發(fā)明，然本發(fā)明的實(shí)施型態(tài)并不限制于下列實(shí)施 例中。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種新穎的蘇云金桿菌菌株，該蘇云金桿菌菌株能夠抑制害蟲(chóng)的生長(zhǎng)。以下為該蘇云金桿菌菌株的來(lái)源、純化與分離方式、鑒定方式以及拮抗標(biāo)的害蟲(chóng)的效果 的詳細(xì)說(shuō)明。菌種采集根據(jù)Smith and Couche (1991)的方法，選擇座落于非農(nóng)業(yè)區(qū)的中國(guó)臺(tái)灣臺(tái)北市 區(qū)-行政院農(nóng)業(yè)委員會(huì)林業(yè)試驗(yàn)所臺(tái)北植物園，以采集不同科、不同種的植物，每棵植物選 取距離地面3m以上的分枝，以大型封口袋帶攜回，并保存于4°C備用。菌種分離與鑒定攜回植物分枝，處理前先陰干，每一分枝取3葉片，以滅菌過(guò)的不銹鋼圓柱模型 (直徑4. 4cm)，在一葉片上截取固定葉面積(30cm2) —片，正反面總計(jì)葉面積120cm2/樣品 (sample)為量，用滅菌棉花棒沾Triton X-100 (Amresco)稀釋液(50p pm) 6ml刷洗葉面及葉 背，收集洗葉水，進(jìn)行離心(15，OOOxg, 6分鐘)，收集沉淀物以0. 5ml無(wú)菌水再次懸浮(Smith and Couche,1991)。依據(jù) Akiba and Katoh (1986)，Travers et al. (1987)，Chak and Yang (1990)， Chilcott and Wigley (1993)等四種方法進(jìn)行分離。經(jīng)熱處理過(guò)的洗葉懸浮液，涂于 NA (nutrient agar)平板培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)五天，挑單一菌落，在位相差光學(xué)顯微鏡下，以 1，000倍油鏡進(jìn)行觀察，并選取含結(jié)晶及孢子的菌株，分別編號(hào)保存于4°C (Kao et al., 1996)。菌種培養(yǎng)各菌株分別以無(wú)菌水懸浮稀釋?zhuān)贜A平板培養(yǎng)基以劃線法，再純化3次并確認(rèn)， 挑單一菌落，分別移到 5ml LB 液體培養(yǎng)基(Luria-Bertani Medium :bacto-tryptone 1%, bacto-yeast extract 0. 5%, NaCl 1%, pH 7· 0)，于恒溫振蕩培養(yǎng)箱(28°C, 250rpm)隔夜 培養(yǎng)，再取0. 5ml繼代培養(yǎng)5ml同條件3小時(shí)。菌種鑒定對(duì)繼代培養(yǎng)后的菌株進(jìn)行分析，挑選一菌株命名為F201(即本發(fā)明的蘇云金桿菌 DSM 22750)，進(jìn)行菌種型態(tài)分析與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。DNA聚合酶鏈連鎖反應(yīng)(PCR)與載體選殖本發(fā)明參照Kalman et al. (1993)所發(fā)表的各個(gè)內(nèi)毒素特異性的核苷酸引物(如 下所示)的組合來(lái)確認(rèn)本發(fā)明的F201蘇云金桿菌中的內(nèi)毒素基因型態(tài)。(1) cryIAb基因片段的擴(kuò)增以cryl專(zhuān)一性序列作為反向引物(SEQ ID NO. 1)以及以cryIAb專(zhuān)一性序列作為 正向引物(SEQ ID NO. 2)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)來(lái)確認(rèn)是否有cryIAb基因片段的存在。(2) cryIAc基因片段的擴(kuò)增以cryl專(zhuān)一性序列作為反向引物(SEQ ID NO. 3)以及以cryIAc專(zhuān)一性序列作為 正向引物(SEQ ID N0. 4)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)來(lái)確認(rèn)是否有cryIAc基因片段的存在。(3)crylD基因片段的擴(kuò)增以cryl專(zhuān)一性序列作為反向引物(SEQ ID N0. 3)以及以crylD專(zhuān)一性序列作為 正向引物(SEQ ID N0. 5)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)來(lái)確認(rèn)是否有crylD基因片段的存在。(4) crylE基因片段的擴(kuò)增以cryl專(zhuān)一性序列作為反向引物(SEQ ID N0. 3)以及以crylE專(zhuān)一性序列作為正向引物(SEQ ID NO. 6)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)來(lái)確認(rèn)是否有crylE基因片段的存在。(5)cry2A基因片段的擴(kuò)增以cry II A2專(zhuān)一性序列作為反向引物(SEQ ID NO. 7)以及以cry II Al專(zhuān)一性序 列作為正向引物(SEQ ID NO. 8)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)來(lái)確認(rèn)是否有cry2A基因片段的存在。F201蘇云金桿菌的內(nèi)毒素基因組合請(qǐng)參閱圖1，其為利用上述SEQ ID NO. 1 6引物對(duì)進(jìn)行PCR的篩選結(jié)果。根據(jù) Kalman et al. (1993)，已知crylAb基因片段長(zhǎng)度為238bp、crylAc基因片段長(zhǎng)度為487bp、 crylD基因片段長(zhǎng)度為414bp、crylE基因片段長(zhǎng)度為883bp。因此，根據(jù)圖1所示的片段長(zhǎng) 度可以得知本發(fā)明F201蘇云金桿菌具有crylAb、crylAc、CrylD、CrylE的內(nèi)毒素多重基因 片段。請(qǐng)參閱圖2，其為利用上述SEQ ID NO. 7和SEQ ID N0. 8引物對(duì)進(jìn)行PCR的篩選結(jié) 果。根據(jù)Kalman et al. (1995)，已知cry2A基因片段長(zhǎng)度為569bp。因此，根據(jù)圖2所示 的片段長(zhǎng)度可以得知本發(fā)明F201蘇云金桿菌進(jìn)一步具有cry2A的內(nèi)毒素基因片段。F201蘇云金桿菌拮抗標(biāo)的害蟲(chóng)的活件本發(fā)明更進(jìn)一步提供一種具有殺蟲(chóng)作用的組合物，其中該組合物包含有效劑量的 F201蘇云金桿菌菌株的培養(yǎng)物以及其可接受的載體。并且，該培養(yǎng)物中包含有內(nèi)毒素。采 用有效生產(chǎn)殺蟲(chóng)內(nèi)毒素的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)方法及發(fā)酵方式(YamamOtO，1990)培養(yǎng)本發(fā)明的F201 蘇云金桿菌菌株或其變異株(Yamamoto,T. 1990. Identification of entomocidal toxins of Bacillus thuringiensis by high-performance liquid chromatography. Pp. 46-60. In "Analytical Chemistry of Bacillus thuringiensis". L. A. Hickle, and W. L. Fitch Eds. American Chemical Society, Washington, D. C.)。再取發(fā)酵后的培養(yǎng)沉淀物，依發(fā)酵 后的培養(yǎng)沉淀物中總蛋白在混拌后飼料中的質(zhì)量含量(PPm)的不同，進(jìn)行試驗(yàn)以確認(rèn)其拮 抗標(biāo)的害蟲(chóng)的效果。實(shí)施例部分，共有三科，分別為夜蛾科、螟蛾科及菜蛾科，此類(lèi)昆蟲(chóng)是蔬菜、豆科作 物、纖維作物等的害蟲(chóng)，會(huì)造成作物開(kāi)花受影響、無(wú)法結(jié)穗等傷害，使得農(nóng)民收成受到極大 的損失。以下針對(duì)此三科昆蟲(chóng)，分別測(cè)試F201對(duì)其拮抗的效果；對(duì)照組則使用市售Valent Bioscience公司的見(jiàn)達(dá)利(Xentari)作為比較，分別測(cè)試?yán)ハx(chóng)幼蟲(chóng)的死亡率，以下表1為 F201試驗(yàn)昆蟲(chóng)的科別總表；表2為各科供試?yán)ハx(chóng)進(jìn)行試驗(yàn)的數(shù)據(jù)總表。表1F201試驗(yàn)昆蟲(chóng)分科
權(quán)利要求
1.一種拮抗害蟲(chóng)的蘇云金桿菌菌株，該蘇云金桿菌菌株具有cirlAb、CtylAC、CiTlD和 crylE基因片段。
2.如權(quán)利要求1所述的蘇云金桿菌菌株，該蘇云金桿菌菌株中還含有cry2A基因。
3.一種用于控制害蟲(chóng)的組合物，該組合物包括可接受的載體及殺蟲(chóng)有效劑量的δ-內(nèi) 毒素，所述內(nèi)毒素得自具有crylAb、crylAc, crylD和crylE基因片段的蘇云金桿菌菌株。
4.如權(quán)利要求3所述的用于控制害蟲(chóng)的組合物，其中所述蘇云金桿菌菌株還含有 crt2A基因。
5.一種控制害蟲(chóng)的方法，該方法包括對(duì)受害蟲(chóng)侵襲的區(qū)域或預(yù)防害蟲(chóng)寄生的區(qū)域施加有效劑量的蘇云金桿菌菌株和/或 具其內(nèi)毒素的組合物，其特征在于所述蘇云金桿菌菌株為具有crylAb、crylAc, crylD和 crylE基因片段的蘇云金桿菌菌株。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述蘇云金桿菌菌株還含有cry2A基因。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述蘇云金桿菌菌株的內(nèi)毒素為δ-內(nèi)毒素。
8.一種利用蘇云金桿菌菌株和/或其內(nèi)毒素防治害蟲(chóng)的方法，該方法包括對(duì)受害蟲(chóng)侵襲的區(qū)域或預(yù)防害蟲(chóng)寄生的區(qū)域施加有效劑量的所述蘇云金桿菌菌株和/ 或具其內(nèi)毒素的組合物，其特征在于所述蘇云金桿菌菌株為具有crylAb、crylAc, crylD和 crylE基因片段的蘇云金桿菌菌株。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述蘇云金桿菌菌株還含有cry2A基因。
10.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述害蟲(chóng)選自夜蛾科、螟蛾科或菜蛾科。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述夜蛾科選自玉米穗蟲(chóng)或擬尺蠖的族群。
12.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述螟蛾科選自豆莢螟、大菜螟或粉斑螟蛾的族群。
13.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述菜蛾科選自小菜蛾的族群。
14.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述蘇云金桿菌菌株的內(nèi)毒素為δ-內(nèi)毒素。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種拮抗害蟲(chóng)的新穎蘇云金桿菌菌株，應(yīng)用于生物性控制蟲(chóng)害的技術(shù)領(lǐng)域，利用一PCR篩選方式鑒定出含cry1Ab、cry1Ac、cty1D、cty1E基因的該菌株，該菌株可制成一種用于控制害蟲(chóng)的組合物，該組合物包括可接受的載體及殺蟲(chóng)有效劑量的δ-內(nèi)毒素，對(duì)受害蟲(chóng)侵襲的區(qū)域或預(yù)防害蟲(chóng)寄生的區(qū)域施加有效劑量的該組合物，可有效防治害蟲(chóng)的生長(zhǎng)。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102051337SQ20091021014
公開(kāi)日2011年5月11日 申請(qǐng)日期2009年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月27日
發(fā)明者曾經(jīng)洲, 郭雪, 高穗生 申請(qǐng)人:行政院農(nóng)業(yè)委員會(huì)農(nóng)業(yè)藥物毒物試驗(yàn)所