專利名稱：一種雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑及其復(fù)合冷凍保護劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑及其復(fù)合冷凍保護劑。
背景技術(shù)：
作為一種經(jīng)典的益生菌，雙歧桿菌的益生功能已得到了普遍的認(rèn)識，在功能食品中的應(yīng)用也得到了廣 泛的關(guān)注，其中在乳制品中的應(yīng)用最具有代表性。但是雙歧桿菌在發(fā)酵性能與生產(chǎn)性能上具有種種弊端。 首先，雙歧桿菌對于外界環(huán)境極度敏感，在發(fā)酵劑的制備過程中經(jīng)歷低溫，干燥，等逆境刺激存活率較低; 其次，雙歧桿菌是專性厭氧菌，對發(fā)酵條件要求較高，有氧發(fā)酵產(chǎn)酸速度低，并且風(fēng)味較差；在混合菌種 直投發(fā)酵劑的制備中菌種比率較難控制，最終產(chǎn)品中的活菌數(shù)不穩(wěn)定。將雙歧桿菌制備成直投發(fā)酵劑，作 為輔助發(fā)酵劑與傳統(tǒng)的乳酸菌直投發(fā)酵劑混合使用，既能保證產(chǎn)品中益生菌的數(shù)量，又能保證酸奶的質(zhì)地 和口味，控制凝乳時間，在功能乳制品中具有廣泛的應(yīng)用前景。
雙歧桿菌有效應(yīng)用于乳品發(fā)酵主要依賴于發(fā)酵劑的制備和保藏技術(shù)。目前雙歧桿菌發(fā)酵劑的開發(fā)主要 集中在冷凍干燥和噴霧干燥領(lǐng)域，但是這些技術(shù)會引起一系列副作用首先干燥過程中存活率僅為 30%-40%左右，由于雙歧桿菌對營養(yǎng)和生長條件要求較高，菌體生產(chǎn)成本較高，提高發(fā)酵劑制備過程中的 存活率對于生產(chǎn)應(yīng)用具有重大意義；其次發(fā)酵劑制備和保藏過程中持續(xù)的低水分活度會引起細(xì)胞壁，細(xì)胞 膜，DNA等的損傷，很多存活的細(xì)胞會失去其生理功能，從而失去益生菌的價值；第三，由于細(xì)胞損傷， 菌體耐受逆境的能力以及耐受產(chǎn)品和腸道中氧，酸，膽鹽等的能力也會下降，從而使得達(dá)到腸道和在腸道 中定殖的菌數(shù)不能保證，這也是雙歧桿菌應(yīng)用過程中的瓶頸。
深層冷凍技術(shù)通常用于組織，細(xì)胞，菌種等的保藏，對于生物活性的保持具有良好的效果，保藏時間 長保藏效果好。利用有效保護劑，深層冷凍技術(shù)用于發(fā)酵劑的制備存活率可接近100%，對于降低雙歧桿 菌的培養(yǎng)成本具有重要作用。常用的深冷保護劑包括二甲基亞砜，聚乙二醇，血清等價格昂貴，且不適宜 用于食品，限制了其在發(fā)酵劑生產(chǎn)中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及一種食源性的雙歧桿菌深層冷凍發(fā)酵劑，用于雙 歧桿菌直投發(fā)酵劑的制備，以保證雙歧桿菌在產(chǎn)品中菌數(shù)和功能特性。
根據(jù)保護劑作用機理的不同，可將保護劑分為滲透性保護劑，半滲透性保護劑和非滲透性保護劑。滲 透性保護劑能滲透到細(xì)胞內(nèi)部，在細(xì)胞內(nèi)充分水和，防止細(xì)胞過度脫水，可以降低高鹽對細(xì)胞的毒性，也 可以防止細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。半滲透性保護劑可以防止冷凍前細(xì)胞的質(zhì)壁分離，可以集中在細(xì)胞壁和細(xì)胞 質(zhì)之間作為一個緩沖層防止冰晶的生長，對細(xì)胞膜起到化學(xué)保護作用。非滲透性保護劑吸附在微生物細(xì)胞 的表面形成一個黏度較高的保護層通過增加溶液的粘度來阻止冰晶的生長，在細(xì)胞附近形成無定形結(jié)構(gòu)。各種機理的冷凍保護劑聯(lián)合使用對于活菌數(shù)和菌株功能的保持有顯著的作用，是制備高效深冷雙歧桿菌發(fā) 酵劑的關(guān)鍵。
脫脂乳是一種很好的緩沖體系，本身含有大量的蛋白質(zhì)、糖類等是一種理想的保護介質(zhì)，可以通過保 護細(xì)胞膜的穩(wěn)定性來阻止細(xì)胞損傷，其中的蛋白質(zhì)也可以作為被膜而對細(xì)胞起到保護作用，在脫脂乳中添 加不同的保護劑也可以不同程度的增強其保護效果。
糖類作為半滲透保護劑其作用在于，在冷凍過程中通過形成高粘度的玻璃態(tài)物質(zhì)而對蛋白質(zhì)起到保護 作用；與蛋白結(jié)合作為水的替代物防止蛋白質(zhì)的變性。除了保護蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能外，海藻糖和其它碳 水化合物還可以通過取代脂質(zhì)的親水頭部來降低細(xì)胞膜的相變溫度，從而可以防止細(xì)胞膜的相變和由此引 起的細(xì)胞膜的破漏。
谷氨酸的冷凍保護作用是保護劑的氨基和微生物蛋白質(zhì)的羧基結(jié)合從而起到對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定作用，并 且谷氨酸還可能提高細(xì)胞中的固定水分。
雙歧桿菌是嚴(yán)格厭氧菌發(fā)酵劑，制備過程中氧的脅迫會影響菌體的存活和活力，在發(fā)酵劑的組成中添 加抗氧化劑對雙歧桿菌的菌數(shù)和活力保持會有顯著效果。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是制備一種雙歧桿菌深層冷凍發(fā)酵劑及其有效冷凍保護劑。解決常規(guī)雙歧桿菌發(fā)酵劑 制備過程中存活率低，菌株活力下降的問題。
本發(fā)明用于雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑的保護劑重量分組成為脫脂乳6%-16%;海藻糖 2.5%-7.5%;果糖2.5°/0-7.5%;甘油1%-40/0; Vc0.01%-0.1%; L-Glu0.01%-0.1%。
所述雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑，優(yōu)選由下述重量分組成脫脂乳8%;海藻糖5%;果糖5%; 甘油3%; VcO.05%; L-Glu0.05%。
本發(fā)明制備的雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑，是雙歧桿菌菌體加入上述保護劑后，經(jīng)-80'C深層冷凍 后得到。
上述保護劑按照雙歧桿原菌液體積的20/1-1/5加入充分混合迅速于-8(TC冷凍。
所述雙歧桿菌菌體使用玉米漿干粉培養(yǎng)基或NPNL培養(yǎng)基或MRS培養(yǎng)基于37°C ， p恥.5-PH7. 0恒pH 厭氧培養(yǎng)15-24h培養(yǎng)得到。
所述菌體通過4000rpra-8000rpm, 8-20min離心得到。
所述玉米漿干粉培養(yǎng)基由下述組分制成玉米漿干粉55g/L,葡萄糖10g/L， L半胱氨酸鹽酸鹽0.05g/L, A液10mL/L， B液5ml/L。
所述A液由下述組分組成KH2P04 100g/L， K2HP04 100g/L。
所述B液由下述組分組成MgS04.7H20 2g/L,， FeS04.7H20 2g/L， Nacl 2g/L， MnS041.3g/L。 所述NPNL培養(yǎng)基由下述組分組成牛肉浸汁粉3g/L，蛋白胨10g/L，胰蛋白胨5g/L，植胨3g/L，
酵母浸出汁5g/L，牛肝浸粉10g/L，葡萄糖10g/L，可溶性淀粉0.5g/L,溶液A 10ml/L，溶液B 5ml/L，
吐溫80 lg/L，鹽酸半胱氨酸鹽0.5g/L。
所述A液由下述組分組成KH2P04 100g/L， K2HP04 100g/L。
所述B液由下述組分組成MgS04.7H20 2g/L,， FeS04.7H20 2g/L,， NaCl 2g/L， MnS04'1.3g/L。
所述MRS培養(yǎng)基由下述組分組成蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L,酵母粉5 g/L，葡萄糖20 g/L 醋酸鈉5g/L,檸檬酸二銨2 g/L， KH2P04 2g/，吐溫80 lg/L,硫酸鎂0. 58g/L，硫酸錳0. 28g/L,鹽酸 半胱氨酸鹽0.5g/L。
實驗表明雙歧桿菌在本發(fā)明的保護劑作用下制備深層冷凍保護劑，冷凍后菌數(shù)保持穩(wěn)定，滴定酸度 測定菌株活力保持良好，貯藏期間穩(wěn)定性良好，用于酸奶發(fā)酵產(chǎn)品活菌數(shù)達(dá)到107cfu/mL以上，達(dá)到直投 發(fā)酵劑要求。
圖1:酸奶發(fā)酵與貯藏過程中雙歧桿菌BBMN68活菌對數(shù)值變化。 . 圖2:酸奶發(fā)酵與IC藏過程中雙歧桿菌BBMN23活菌對數(shù)值變化。 圖3:酸奶發(fā)酵與貯藏過程中雙歧桿菌BBMN01活菌對數(shù)值變化。
具體實施方式
實施例1-24
(1)菌株培養(yǎng)將保藏的長雙歧桿菌BBMN68 (保藏于中國農(nóng)業(yè)大學(xué))傳代兩次恢復(fù)活力，鏡檢 培養(yǎng)液菌株形態(tài)，將活化菌株以107cfli/mL接種于玉米漿干粉培養(yǎng)基'恒pH7. 0厭氧培養(yǎng)24h。
玉米漿干粉培養(yǎng)基由下述組分制成玉米漿干粉55g/L，葡萄糖10g/L, L半胱氨酸鹽酸鹽0. 05g/L, A液10mL/L, B液5ml/i:。
所述A液由下述組分組成KIWU lOOg/L, K2HP04 100g/L。
所述B液由下述組分組成MgS04.7H20 2g/L， FeS04 .7H20 2g/L， Nacl 2g/L ， MnS041.3g/L。(2) 收集菌體將(1)得到菌液4000rpm， 10min離心得到菌體，收集菌泥。
(3) 添加保護劑-雙歧桿菌深層冷凍保護劑組成為
表l
保護劑組成
——賣愈MT 實施例2
實施例3 實施例4 實施例5 實施例6 實施例7 實施例8 實施例9 實施例10 實施例11 實施例12 實施例13 實施例14 實施例15 實施例16 實施例17 實施例18 實施例19 實施例20 實施例21 實施例22 實施例23 實施例24
脫脂乳w/w海藻糖w/w —6%2.5% —
10%
6%
10%
6%
10%
6%
10%
6%
10%
6%
10%6%.
腦
6%
10%
4% 12%
8%
8%
8%
8%
8%'
8%
2.5% 7.5% 7.5% 2.5% 2.5% 7.5% 7.5% 2.5% 2.5% 7.5% 7.5% 2.5% 2.5% 7.5% 7.5%
5% 5%
10%
5%
5%
5%
5%
5%
果糖w/w —.—2 0 2.5% 2.5% 2.5% 7.5% 7.5% 7.5% 7.5% 2.5% 2.5% 2.5% 2.5% 7.5% 7.5% 7.5% 7.5%
5% 5%
5%
10%
5%
5%
5%
5%
甘油w/w 2% 2% 2% 2% 2% 2% 2% 2% 4% 4% 4% 4% 4% 4% 4% 4%
3% 3%
3%
3%
1%
5%
3%
3%
0.075% 0.025% 0.025% 0.075% 0.075% 0.025% 0.025% 0.075% 0.075% 0.025% 0.025% 0.075% 0.075% 0.025% 0.025% 0.075%
0.05% 0.05%
0.05%
0.05%
0.05%
0.05%
0.1%
0.05%
L-Gluw/w冷凍后活力(°T) '0.075化—49.—4廠—一
0.075% 0.075% 0.075% 0.025% 0.025% 0.025% 0.025% 0.025% 0.025% 0.025% 0.025% 0.075% 0.075% 0.075% 0.075%
0.05% 0.05%
0.05%
0.05%
0.05%
0.05%
0.05%
0.05%
43.03 52.56
51.82
52.83 49.97 48.9 46.28 51.09 39.34 46.05
42.91 47.16 49.22 50.09 48.3
47.33 43.32
50.73
49.92 46.92 51.03 42.63 51.73將收集的菌體，加入1/10原菌液體積的表1所述述保護劑，攪拌混勻，得到濃縮菌體懸浮液，迅速 與-8(TC冷凍保藏。
(4)菌株活力測定
冷凍濃縮物接種于12%脫脂乳中，接種量1% (V/V), 37t培養(yǎng)7h，測定滴定酸度(。T)。
所述滴定酸度測定方法為取10mL上述發(fā)酵乳，用20mL蒸餾水稀釋，加2滴1%酚酞，用0. lmol/LNaOH 滴定，所消耗NaOH毫升數(shù)乘以10，即為中和100mL發(fā)酵乳所需的0. lmol/LNaOH毫升數(shù)，消耗lmL為1°T。 可以反映菌株的活力。
上述表l所列結(jié)果表明，保護劑作用下冷凍后菌株活力保持良好，最優(yōu)結(jié)果為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的脫脂 乳；質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的辟藻糖；質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的果糖；體積分?jǐn)?shù)為3%的甘油；質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%的Vc; 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%的L-Glu。
實施例25雙歧桿菌深層冷凍發(fā)酵劑的制備及應(yīng)用
(1)菌株培養(yǎng)將保藏的長雙歧桿菌BBMN68 (保藏于中國農(nóng)業(yè)大學(xué))傳代兩次恢復(fù)活力，鏡檢 培養(yǎng)液菌株形態(tài)，將活化菌株以107cfu/mL接種于玉米漿干粉培養(yǎng)基，恒pH7. 0厭氧培養(yǎng)24h。
玉米漿干粉培養(yǎng)基由下述組分制成玉米漿干粉55g/L，葡萄糖10g/L， L半胱氨酸鹽酸鹽0. 05g/L， A液10mL/L, B液5ml/L。
所述A液由下述組分組成KH2P04 100g/L， K2HP04 100g/L。
所述B液由下述組分組成MgS04.7H20 2g/L，， FeS04 .7H20 2g/L,， Nacl 2g/L ， MnS041.3g/L。
(2) 收集菌體將(1)得到菌液4000rpm， lOmin離心得到菌體，收集菌泥。
(3) 添加保護劑.-
雙歧桿菌深層冷凍保護劑組成為實施例24所述。
將收集的菌體，加入1/10原菌液體積的上述保護劑，攪拌混勻，得到濃縮菌體懸浮液，迅速與-8(TC 冷凍保藏。 .
(4) 發(fā)酵劑用于酸奶發(fā)酵
上述制得的發(fā)酵劑與傳統(tǒng)發(fā)酵劑同時接種12%的脫脂乳，42"C發(fā)酵至酸奶凝固，4'C保藏，測定保藏期間雙歧桿菌菌數(shù)。圖1為酸奶貯藏期間活菌數(shù)變化。
上述酸奶中雙歧桿菌活菌計數(shù)使用雙歧桿菌選擇性計數(shù)培養(yǎng)基。 ' 雙歧桿菌選擇性計數(shù)培養(yǎng)基組成為牛肉浸汁粉3g/L，蛋白胨10g/L，胰蛋白胨5g/L,植胨3g/L，
酵母浸出汁5g/L，牛肝浸粉10g/L，葡萄糖10g/L,可溶性淀粉0.5g/L,溶液A 10ml/L，溶液B 5ml/L，
C液40ml/L,吐溫80 1g/L，鹽酸半胱氨酸鹽0.5/L,瓊脂15g/L。
所述A液由下述組分組成KH2P04 100g/L， K2HP04 100g/L。
所述B液由下述組分組成MgS04.7H20 2g/L，， FeS04 .7H20 2g/L，， Nacl2g/L ， MnS041.3g/L。 所述溶液C組成為硫酸巴龍霉素lOOmg,硫酸新霉素400mg ，丙酸鈉15g ，氯化鋰3g，置于40ml 無菌水，0.45um微孔濾膜過濾，現(xiàn)配現(xiàn)用。
實施例26雙歧桿菌深層冷凍發(fā)酵劑的制備及應(yīng)用
(1) 菌株培養(yǎng)將保藏的青春雙歧桿菌BBMN23 (保藏于中國農(nóng)業(yè)大學(xué))傳代兩次恢復(fù)活力，鏡 檢培養(yǎng)液菌株形態(tài)，將活化菌株以107cfu/mL接種于MRS培養(yǎng)基，恒p朋.5厭氧培養(yǎng)18。
MRS培養(yǎng)基由下述組分組成蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L,酵母粉5g/L，葡萄糖20 g/L醋酸 鈉5g/L，檸檬酸二銨2 g/L, KHaPOJg/,吐溫80 lg/L,硫酸鎂0. 58g/L,硫酸錳0. 28g/L,鹽酸半胱氨 酸鹽0.5g/L。
(2) 收集菌體-將(1)得到菌液4500rpra， 8min離心得到菌體，收集菌泥。
(3) 添加保護劑
雙歧桿菌深層冷凍保護劑組成為實施例io所述。
將收集的菌體，加入1/20原菌液體積的上述保護劑，攪拌混勻，得到濃縮菌體懸浮液，迅速與-80"C 冷凍保藏。
(4) 發(fā)酵劑用于酸奶發(fā)酵
上述制得的發(fā)酵劑與傳統(tǒng)發(fā)酵劑同時接種12%的脫脂乳，42'C發(fā)酵至酸奶凝固，4'C保藏，測定保藏期 間雙歧桿菌菌數(shù)。圖2為酸奶貯藏期間活菌數(shù)變化。
上述酸奶中雙歧桿菌活菌計數(shù)使用雙歧桿菌選擇性計數(shù)培養(yǎng)基。
雙歧桿菌選擇性計數(shù)培養(yǎng)基組成為..牛肉浸汁粉3g/L,蛋白胨10g/L,胰蛋白胨5g/L，植胨3g/L， 酵母浸出汁5g/L，牛肝浸粉10g/L，葡萄糖10g/L，可溶性淀粉0.5g/L，溶液A !Om/L，溶液B 5m/L， C液40ml/L，吐溫80 1g/L,鹽酸半胱氨酸鹽0.5/L,瓊脂15g/L。所述A液由下述組分組成KH2P04 100g/L, K2HP04 100g/L。
所述B液由下述組分組成MgS04.7H20 2g/L,， FeS04 .7H20 2g/L,， Nac， 2g/L ， MnS041.3g/L。 所述溶液C組成為硫酸巴龍霉素lOOmg，硫酸新霉素400mg ，丙酸鈉15g ，氯化鋰3g,置于40ml 無菌水，0.Mum微孔雄膜過濾，現(xiàn)配現(xiàn)用。
實施例27雙歧桿菌深層冷凍發(fā)酵劑的制備及應(yīng)用
(1) 菌株培養(yǎng)將保藏的動物雙歧桿菌BBMN01 (保藏于中國農(nóng)業(yè)大學(xué))傳代兩次恢復(fù)活力，鏡 檢培養(yǎng)液菌株形態(tài)，將活化菌株以107cfu/mL接種于NPNL培養(yǎng)基，恒p朋.8厭氧培養(yǎng)12。
所述NPNL培養(yǎng)基由下述組分組成牛肉浸汁粉3g/L,蛋白胨10g/L,胰蛋白胨5g/L，植胨3g/L， 酵母浸出汁5g/L,牛肝浸粉10g/L，葡萄糖10g/L，可溶性淀粉0.5g/L,溶液A 10ml/L,溶液B 5ml/L， 吐溫80 lg/L,鹽酸半胱氨酸鹽0.5g/L。
所述A液由下述組分組成KH2P04 100g/L， K2HP04 100g/L。
所述B液由T述組分組成MgS04.7H20 2g/L， FeS04.7H20 2g/L, Nacl 2g/L MnS04l. g/L。
(2) 收集菌體將(1)得到菌液5000rpm， 15min離心得到菌體，收集菌泥。
(3) 添加保護劑 雙歧桿菌深層冷凍保護劑組成為實施例18所述。
將收集的菌體，加入1/5原菌液體積的上述保護劑，攪拌混勻，得到濃縮菌體懸浮液，迅速與-8(TC 冷凍保藏。
(4) 發(fā)酵劑用亍酸奶發(fā)酵
上述制得的發(fā)酵劑與傳統(tǒng)發(fā)酵劑同時接種12%的脫脂乳，42'C發(fā)酵至酸奶凝固，4'C保藏，測定保藏期
間雙歧桿菌菌數(shù)。圖3為酸奶n藏期間活菌數(shù)變化。
上述酸奶中雙歧桿菌活菌計數(shù)使用雙歧桿菌選擇性計數(shù)培養(yǎng)基。
雙歧桿菌選擇性計數(shù)培養(yǎng)基組成為牛肉浸汁粉3g/L，蛋白胨10g/L，胰蛋白胨5g/L，植胨3g/L, 酵母浸出汁5g/L,牛肝浸粉10g/L，葡萄糖10g/L,可溶性淀粉0.5g/L，溶液A 10ml/L，溶液B 5ml/L, C液40ml/L,吐溫80 1g/L，鹽酸半胱氨酸鹽0.5/L，瓊脂15g/L。
所述A液由下述組分組成KH2P04 100g/L， K2HP04 100g/L。
9所述B液由下述組分組成MgS04.7H20 2g/L,， FeS04 .7H20 2g/L,， Nacl 2g/L ， MnS041.3g/L。 所述溶液C組成為硫酸巴龍霉素100mg，硫酸新霉素400mg ，丙酸鈉15g ，氯化鋰3g，置于40ml 無菌水，0.45um微孔濾膜過濾，現(xiàn)配現(xiàn)用。
權(quán)利要求
1、一種用于制備雙歧桿菌深層冷凍發(fā)酵劑的復(fù)合保護劑，其特征在于該保護劑由下述重量份的組分組成脫脂乳6％-16％；海藻糖2.5％-7.5％；果糖2.5％-7.5％；甘油1％-4％；Vc0.01％-0.1％；L-Glu0.01％-0.1％；其余為水。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備雙歧桿菌深層冷凍發(fā)酵劑的復(fù)合保護劑，其特征在于該保護劑由 下述重量份的組分組成:.脫脂乳8%;海藻糖5%;果糖5%;甘油3%; VcO.05%; L-GluO.05%;其余為水。
3、 一種雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑，其特征在于在雙歧桿菌菌體中加入如權(quán)利要求1-2中任一所述的復(fù)合保護劑后，經(jīng)深層冷凍得到。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑，其特征在于，其制備方法為(1)將雙歧桿菌接種到玉米漿干粉培養(yǎng)基或NPNL培養(yǎng)基或MRS培養(yǎng)基中，于37'C, p朋.5-PH7. 0下 厭氧培養(yǎng)15-24h，離心，鄰00rpm-8000rpm, 8-20min收集菌體；(2)將收集的菌體加入1/20-1/5原菌液體積的上述復(fù)合保護劑，攪拌混勻，得到濃縮菌體懸浮液， 迅速于-8(TC下冷凍保藏。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑，其特征在于所述玉米漿千粉培養(yǎng)基 由下述組分制成玉米漿干粉55g/L,葡萄糖10g/L， L半胱氨酸鹽酸鹽0. 05g/L， A液10mL/L, B液5ml/L;所述A液由下述組分組成KH2P04 100g/L， K2HP04 100g/L;所述B液由下述組分組成MgS04.7H20 2g/L,， FeS04 .7H20 2g/L,， Nacl2g/L，， MnS041.3g/L。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑，其特征在于所述NPNL培養(yǎng)基由下述組 分組成牛肉浸汁粉3g/L，蛋白胨10g/L，胰蛋白胨5g/L，植胨3g/L，酵母浸出汁5g/L，牛肝浸粉 10g/L,葡萄糖10g/L,可溶性淀粉0.5g/L，溶液A 10ml/L,溶液B 5ml/L，吐溫80 lg/L，鹽酸半胱氨 酸鹽0.5g/L。所述A液由下述組分組成KH2P04 100g/L, K2HP04 100g/L;所述B液由下述組分組成MgS04.7H20 2g/L, FeS04.7H20 2g/L, Nacl 2g/L， MnS041.3g/L。
7、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑，其特征在于所述MRS培養(yǎng)基由下述組 分組成蛋白胨10g/L,'牛肉膏10g/L,酵母粉5g/L,葡萄糖20gZL,醋酸鈉5g/L，檸檬酸二銨2 g/L， KH2P042g/,吐溫80 lg/L，硫酸鎂0.58g/L,硫酸錳0. 28g/L,鹽酸半胱氨酸鹽0.5g/L。 '
8、 如權(quán)利要求3-7任一項所述的雙歧桿菌深層冷凍直投發(fā)酵劑在發(fā)酵酸奶中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雙歧桿菌深層冷凍發(fā)酵劑及其冷凍保護劑。通過高密度培養(yǎng)得到雙歧桿菌菌體，離心收集菌泥，并利用優(yōu)選復(fù)配保護劑重懸菌體，于-80℃深層冷凍保藏，有效的保持了雙歧桿菌的菌數(shù)和功能特性。本發(fā)明的雙歧桿菌深層冷凍發(fā)酵劑作為一種輔助發(fā)酵劑，對于益生菌有效應(yīng)用于乳品發(fā)酵有顯著效果。
文檔編號A23C9/12GK101606552SQ20091013651
公開日2009年12月23日 申請日期2009年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月6日
發(fā)明者任發(fā)政, 劉松玲, 劉愛萍, 明 張, 楊海鶯, 田寒友, 蔣菁莉, 亮 趙 申請人:任發(fā)政