專利名稱：：油菜熱激蛋白基因hsp17.8及其應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于分子生物學領域。具體地說，本發(fā)明涉及一種油菜熱激蛋白基因HSP17.8，本發(fā)明提供了這個基因的核酸序列以及蛋白序列，同時還涉及該基因在作物耐熱育種中的用途。油菜熱激基因HSP17.8在擬南芥中的過量表達表明，此基因可顯著增強植物的耐熱性，為高溫逆境下提高作物的產(chǎn)量提供保證。
背景技術：
：植物在生長發(fā)育過程中往往會受到各種非生物因子的脅迫，其中溫度是影響植物生長的主要因子。隨著工業(yè)化進程的加快，全球生態(tài)環(huán)境惡化，溫室效應導致全球氣溫升高，20世紀全球平均氣溫已經(jīng)上升0.6'C，而且預計到本世紀末全球氣溫仍將上升1.4-5.8°C。同時，極端性天氣現(xiàn)象(如夏季高溫等)在全球許多區(qū)域?qū)⒊霈F(xiàn)得更加頻繁，且持續(xù)時間更長。在許多地區(qū)，高溫已成為影響作物生長的主要因素，對農(nóng)作物的危害不僅表現(xiàn)在產(chǎn)量降低，而且嚴重影響品質(zhì)。對高溫下植物生理變化的分析研究表明植物的光合作用能力被抑制、細胞膜系統(tǒng)的穩(wěn)定性受到損傷、細胞老化和死亡；細胞蛋白質(zhì)廣泛降解和凝集，導致所合成的蛋白質(zhì)錯誤折疊和現(xiàn)有蛋白質(zhì)的變性同時，研究表明，在高溫脅迫下，所有生物都將產(chǎn)生熱激反應(Heatshockresponse)。超過適宜生長溫度1015。C(亞致死范圍)，植物熱激反應即被誘導，基因表達全局轉(zhuǎn)換，其中大多數(shù)基因的表達下降或者削弱，而熱激基因迅速地高水平表達，使熱激蛋白(HeatShockProteins,HSP)合成迅速增加以恢復正常的細胞活性和生理活性，保護細胞和生物體免受嚴重損害。熱激蛋白的作用很容易使人類認識到植物耐熱性的獲得與熱激蛋白表達積累的關系。因此，有關熱激蛋白基因研究在很多實驗室展開，并獲得了重要進展。HSP廣泛存在于植物細胞膜、細胞質(zhì)、葉綠體、線粒體等組織中，是一組結構保守的蛋白質(zhì)，根據(jù)同源程度及分子量大小可分為HSP100,HSP90，HSP70,HSP60，HSP40,小分子HSP及泛素等亞家族(PappE,NardaiG,SotiC,CsermelyP.Molecularchaperones,stressproteinsandredoxhomeostasis.Biofactors,2003,17:249-257)。HSP通過2個途徑以分子伴侶的方式減少熱脅迫對細胞造成的有害影響(1)協(xié)助蛋白質(zhì)跨膜運輸，防止蛋白質(zhì)前體積累，與未折疊蛋白質(zhì)形成絡合物以維持其轉(zhuǎn)移能力；(2)維持蛋白質(zhì)的正常折疊狀態(tài)，促進錯誤折疊的蛋白質(zhì)降解；在蛋白質(zhì)從頭折疊及應激條件下能起到穩(wěn)定多肽鏈、防止蛋白質(zhì)失活的作用。它參與靶蛋白活性和功能調(diào)節(jié)，但不是靶蛋白的組成部分。不同的HSP對靶蛋白的作用機理可能不同。sHSP蛋白家族是一類屬于分子伴侶超級家族的分子量為12-40kDa的熱激蛋白，也是目前為止植物中最為復雜和重要的一類HSP。在高等植物中極為豐富，均為核基因編碼，基于不同的氨基酸序列結構分屬于7個多基因家族，其中I、II類sHSP存在于細胞溶質(zhì)中，III類則定位于細胞核中，其余4類分別存在于葉綠體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和過氧化物酶體中。在體外實驗中，sHSP以不依賴ATP的方式結合在部分未折疊的蛋白上，阻止它們發(fā)生不可逆的降解。在sHSP的幫助下，依賴于ATP的大分子量熱激蛋白幫助未折疊蛋白重新折疊并發(fā)揮作用(StuderSandNarberhausF-Chaperoneactivityandhomo-andhetero-oligomerformationofbacterialsmallheatshockproteins.JBiolChem，2000,275:37212-37218)。在目前所提出的sHSP功能模型中，sHSP多聚體分解成二聚體并通過保守區(qū)域和非保守區(qū)域結合蛋白。除作"分子伴侶"的功能之外，sHSP同樣被認為可以調(diào)節(jié)膜脂的組成和流動性。體內(nèi)界定植物sHSP的功能仍存在很大的困難，因為幾乎所有的sHSP在熱激條件下都大量表達。同時，擬南芥sHSP突變體非常有限，這在一定程度上限制了sHSP的研究。盡管如此，sHSP的研究仍然開展的如火如荼(SachinKotak，JaneLarkindale，UngLee，PascalvonKoskull-Doring,Complexityoftheheatstressresponseinplants.CurtOpinPlantBiol，2007,10:310-316)。研究表明很多植物sHSP不但在熱激時表達，同時也可能會在其它逆境脅迫時表達。番茄sHSP，tom66和tomlll可被低溫誘導，HSP21被發(fā)現(xiàn)包含在抗氧化途徑中，I類AtHSP17.6A則可被滲透壓所誘導，轉(zhuǎn)基因研究發(fā)現(xiàn)細胞質(zhì)中II類sHSP17.7在水稻中的過量表達不但提高了轉(zhuǎn)基因株系的耐熱性，同時其抗紫外線能力增強。定位于線粒體sHSP的過量表達提高了煙草的耐熱性。葉綠體的sHSP的過量表達提供了可以保護番茄和煙草中光合系統(tǒng)II的證據(jù)，月季中I類sHSP17.5的突變體失去了獲得性耐熱的表型。另外，sHSP熱激時積累雖然可以保護細胞不被損傷，但可被誘導的sHSP常溫下過量表達不一定都會提高高溫下的耐熱性，過量表達HSP21的轉(zhuǎn)基因株系僅僅是在強光條件下才能提高其耐熱性，Sun等發(fā)現(xiàn)AtHSP17.6A的過表達僅僅提高了擬南芥在干旱和鹽脅迫下的滲透能力。目前為止，還未發(fā)現(xiàn)過有關I類SHSP過量表達提高植物耐熱性方面的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是在于提供了一種油菜熱激蛋白基因HSP17.8，本發(fā)明提供了這個基因的核苷酸序列和氨基酸序列，如SEQIDNO:1所示的DNA序列，包括與SEQIDNO:1所示的DNA序列至少有70%同源性的基因序列；也包括在添加、取代、插入或缺失一個或多個核苷酸而產(chǎn)生的突變體等位基因或衍生物。本發(fā)明中的SEQIDNO:2所示的蛋白質(zhì)屬于小分子熱激蛋白，其中進行一個或幾個氨基酸的替換、插入或缺失氨基酸可以獲得功能類似物。因此，本發(fā)明也包括與SEQIDNO:2所示的氨基酸序列至少70%同源性的序列。本發(fā)明的另一個目的是在于提供了一種油菜熱激蛋白基因HSP17.8在提高擬南芥(植物)耐熱性中的應用。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術措施油菜熱激蛋白基因HSP17.8及與油菜70%同源的擬南芥HSP17.8的獲得1)自一對耐熱性存在差異的油菜品系中差減得到該基因EST序列，在NCBI數(shù)據(jù)庫中檢索已發(fā)表的擬南芥HSP17.8基因序列(ATlg07400)，并以此編碼區(qū)序列BLASTNCBIEST數(shù)據(jù)庫，尋找與之同源的油菜HSP17.8基因的EST序列，并設計基因編碼序列的兩側引物(正向引物[5'-ATGTCGTTGATTCCAAGCTTC-3'];反向引物[5，-TCAGCCAGAGATCTGGATAG-3，])。擬南芥HSP17.8基因根據(jù)數(shù)據(jù)庫中的序列設計引物(正向引物[5'-ATGTCGCTTATTCCAAGCTTC-3'];反向引物[5'-TTAGCCAGAGATATCAATAG-3，])。2)以油菜、擬南芥cDNA第一鏈為模板進行RT-PCR擴增，將擴增得到的片段進行測序，獲得油菜及擬南芥HSP17.8基因序列，一種DNA分子，油菜堿基序列如SEQIDNO:1所示的核苷酸序列，擬南芥基因序列與數(shù)據(jù)庫中己發(fā)表的相同。通過上述方法獲得了油菜及擬南芥熱激蛋白基因HSP17.8，采用一種提高HSP17.8表達活性的轉(zhuǎn)基因擬南芥，其特征在于轉(zhuǎn)基因植物表現(xiàn)為HSP17.8含量增加，比受體對照(非轉(zhuǎn)基因植株)的耐熱性有所增強。其具體技術措施是提供了一種PCR8/GW/T0P0質(zhì)粒(invitrogen公司，商業(yè)途徑獲得)，可以與表達載體質(zhì)粒重組構建基因表達質(zhì)粒。提供了一種質(zhì)粒表達載體Pearleygate100(invitrogen公司，從商業(yè)途徑獲得)，它含有35S啟動子和翻譯控制件。提供了一種可在植物中表達的宿主菌，農(nóng)桿菌(根癌農(nóng)桿菌GV3101，invitrogen公司，商業(yè)途徑獲得)。本發(fā)明提供了一種能夠過量表達HSP17.8的轉(zhuǎn)基因擬南芥的方法，其特征在于擬南芥中HSP17.8含量增加。其應用過程包括下列步驟1)將克隆得到的油菜、擬南芥熱激蛋白基因HSP17.8分別與PCR8/GW/T0P0質(zhì)粒連接，命名為t叩o-Bnhspl7.8和topo-Ahsp17.8，利用PCR8/GW/T0P0質(zhì)粒與質(zhì)粒表達載體Pearleygate100可以體外重組的特性將熱激蛋白基因HSP17.8轉(zhuǎn)移至表達載體，命名為Pearleygate100-Bnhspl7.8和Pearleygatel00-Ahsp17.8;2)將步驟1)中制備的載體Pearleygate100-Bnhspl7.8和Pearleygate100-Ahspl7.8轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌GV3101，再導入擬南芥植株中；3)篩選陽性植株。種植擬南芥TO代所收獲的種子，待10天左右噴灑除草劑(Liberty,Invitrogen公司)用于篩選陽性植株，葉片DNA提取后進行PCR鑒定，最終確認基因已入的陽性植株。本發(fā)明中所用的術語"轉(zhuǎn)基因植物"是指含有導入的基因并能夠穩(wěn)定地增強或抑制所導入的基因表達并產(chǎn)生具有特定的生物學性狀的植物。本發(fā)明中所提到的植物包括水稻、小麥、玉米等受高溫逆境影響較大的糧食作物，也包括油菜、大豆、棉花等經(jīng)濟作物，還包括夏季生長的黃瓜、番茄等蔬菜作物?？寺”景l(fā)明中所述的熱激蛋白基因HSP17.8的方法是本領域中所常采用的方法。提取植物葉片DNA是常用的分子生物學技術，提取mRNA的方法也有多種成熟的技術，試劑盒(TRIzolReagent)可從商業(yè)途徑獲得(Invitrogen公司)，而構建cDNA文庫也是常用的分子生物學技術。構建本發(fā)明中所述的載體構建和將載體轉(zhuǎn)染入植株所用到的酶切、連接、花序侵染等方法也是本領域中常用技術。其中所涉及的質(zhì)粒(入門載體PCR8/GW/T0P0，質(zhì)粒表達載體Pearleygate100)，轉(zhuǎn)染用媒體(如根癌農(nóng)桿菌GV3101和所用試劑成分如蔗糖、6-BA等)可從商業(yè)途徑獲得。Hspl7.8基因作為小分子熱激蛋白可發(fā)揮其分子伴侶的作用協(xié)助蛋白質(zhì)跨膜運輸，防止蛋白質(zhì)前體積累，與未折疊蛋白質(zhì)形成絡合物以維持其轉(zhuǎn)移能力；維持蛋白質(zhì)的正常折疊狀態(tài)，促進錯誤折疊的蛋白質(zhì)降解；在蛋白質(zhì)從頭折疊及應激條件下能起到穩(wěn)定多肽鏈、防止蛋白質(zhì)失活的作用。以不依賴ATP的方式結合在部分未折疊的蛋白上，阻止它們發(fā)生不可逆的降解。在sHSP的幫助下，依賴于ATP的大分子量熱激蛋白幫助未折疊蛋白重新折疊并發(fā)揮作用。在目前所提出的sHSP功能模型中，sHSP多聚體分解成二聚體并通過保守區(qū)域和非保守區(qū)域結合蛋白。除作"分子伴侶"的功能之外，sHSP同樣被認為可以調(diào)節(jié)膜脂的組成和流動性。本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明是國內(nèi)外首次公開油菜小分子熱激蛋白基因HSP17.8序列，它屬于細胞質(zhì)I類小分子熱激蛋白，目前其過量表達可提高植物耐熱性的功能沒有相關報道。本發(fā)明實驗結果表明轉(zhuǎn)基因擬南芥HSP17.8的含量與受體對照(非轉(zhuǎn)基因植株)相比均有很大程度的提高，其耐熱性也因此得到增強。因此本發(fā)明提出可利用HSP17.8的過量表達來增強植物耐熱性以便用于農(nóng)作物及蔬菜的抗熱品種選育，由此減緩高溫對經(jīng)濟作物產(chǎn)量和品質(zhì)造成的傷害。圖1植物表達載體示意圖將HSP17.8基因編碼區(qū)序列與PCR8/GW/T0P0質(zhì)粒連接后篩選正向載體，獲得PCR8/GW/T0P0-hspl7.8，然后PCR8/GW/TOP0-hspl7.8質(zhì)粒與表達載體PearleygatelOO進行重組，并篩選陽性克隆獲得Pearleygate100-hspl7.8。圖2除草劑篩選過后的轉(zhuǎn)基因植株示意圖擬南芥花序侵染后的植株收獲種子TO代，播種2周后噴灑除草劑篩選陽性植株。圖3轉(zhuǎn)HSP17.8基因擬南芥T1代的PCR鑒定結果示意圖123為轉(zhuǎn)油菜熱激蛋白基因，ABC為轉(zhuǎn)擬南芥熱激基因，WT為對照野生植株。圖4轉(zhuǎn)基因植株與對照植株45t:高溫處理后的比較示意圖轉(zhuǎn)基因植株與對照植株在24'C固體培養(yǎng)基生長一周后45'C高溫處理1小時，再放置24'C恢復兩周后的表型觀察。圖中可以看出野生型對照ffT無存活，轉(zhuǎn)基因株系表現(xiàn)不同程度的耐熱性。圖5轉(zhuǎn)基因植株與對照植株角果成熟期36'C高溫處理后的比較示意圖轉(zhuǎn)HSP17.8基因株系在角果成熟期36。C高溫生長2天后，野生型植株迅速變黃并枯萎，而轉(zhuǎn)基因植株生長狀態(tài)基本不變，表現(xiàn)出良好的耐熱性。具體實施方式通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)，或Draper等人(Blackwell科學出版社，1988)所述的條件，或按照所用試劑制造廠商所建議的條件。1.一種油菜、擬南芥熱激蛋白基因HSP17.8的獲得在NCBI數(shù)據(jù)庫中檢索已發(fā)表的擬南芥HSP17.8基因序列，BLAST到油菜EST序列并拼接出油菜HSP17.8編碼區(qū)全長。設計基因編碼序列的兩側引物(正向引物[5，-ATGTCGTTGATTCCAAGCTTC-3，];反向引物[5，-TCAGCCAGAGATCTGGATAG-3'])，擬南芥HSP17.8基因根據(jù)數(shù)據(jù)庫中的序列設計引物(正向引物[5，-ATGTCGCTTATTCCAAGCTTC-3，];反向引物[5，-TTAGCCAGAGATATCAATAG-3'])，用于從油菜和擬南芥中擴增HSP的對應序列。1、提取油菜、擬南芥mRNA。RNA的提取(TRIZ0LTMKit提取RNA)液氮研磨lOOmg材料A.加ltnlTRIZOL，室溫(20-25。C，下同)放置5min。B.加入200ul氯仿，劇烈振蕩30s，室溫放置2min。C.12000g，15min,4。C，取上清至新管中，加入500ul異丙醇，混勻后室溫放置15min。D.12000g，15min，4。C，去上清，加入lml70%(無水酒精與H20的體積比)乙醇。E.7500g，7min，4。C,去上清，空氣千燥。F.DEPC—H20溶解。2、c副A第一鏈的反轉(zhuǎn)錄采用RevertAidHMinusFirstStrandcDNASynthesisKit(Fermentas)，操作參照所用試劑盒說明進行。3、以cDNA為模板進行PCR擴增，得到了一種油菜熱激蛋白基因HSP17.8，其堿基序列為SEQIDNO:l所示的核苷酸序列。一種分離的蛋白質(zhì)，其序列為SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。2.油菜、擬南芥HSP17.8在提高擬南芥耐熱性中的應用2.1HSP表達載體的構建及擬南芥的轉(zhuǎn)化將PCR擴增得到的基因序列與T0P0入門載體(invitrogen公司)連接后，轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細胞DH5a(invitrogen公司)中，壯觀酶素篩選，載體引物(T7引物)與基因引物(基因上游引物)擴增鑒定正向插入克隆，質(zhì)粒經(jīng)小量制備后與PearleygatelOO(invitrogen公司)進行重組，并轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細胞DH5a中，卡那霉素篩選，其插入片段經(jīng)載體引物(35S啟動字序列引物)與基因引物(基因下游引物)PCR鑒定，示意圖見圖A。擬南芥的轉(zhuǎn)化過程-試劑配制滲透培養(yǎng)基(1L):1/2xMurashige-Skoog;5%(質(zhì)量比)蔗糖;0.5克MES;用K0H調(diào)至pH5.7;再加10微升lmg/ml的6-BA母液；200微升SilwetL-77轉(zhuǎn)化步驟(1)制備好已轉(zhuǎn)化了相應質(zhì)粒的農(nóng)桿菌(根癌農(nóng)桿菌GV3101)菌液10ml，在轉(zhuǎn)化前一天晚上，轉(zhuǎn)入大瓶培養(yǎng)過夜，第二天取出使用時農(nóng)桿菌液0.D600當在1.2到1.6之間。(2)室溫5000rpm離心15分鐘。(3)棄上清，將農(nóng)桿菌沉淀懸浮于相應體積的滲透培養(yǎng)基里，使0.D600在0.8左右。(4)將整個植株直接浸泡至農(nóng)桿菌懸浮液30s。(5)避光培養(yǎng)過夜，然后正常培養(yǎng)至結子。2.2轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選和驗證轉(zhuǎn)化子的篩選將春化過的擬南芥種子種于澆過飽和PNS營養(yǎng)液的人工土中，并用保鮮膜罩上。兩天后人工模擬自然條件光照(光照16小時，暗8小時)，三天后揭膜。人工培養(yǎng)室條件相對濕度80%，恒溫20-240C，光照強度80-200umol/M2/S，光照周期為8h黑暗、16h光照培養(yǎng)。一周左右，噴除草劑篩選陽性植株。PCR鑒定(1)用于PCR的轉(zhuǎn)化植株總DNA的提取A.70%(體積比)乙醇擦洗葉片，稱取大約100mgB.加入600ul抽提緩沖液(O.2MTris—Cl，0.25NaCl，25mMEDTA，0.5%SDS，pH7.5)，室溫快速研磨。C.1.5mlEpendorff管中渦旋混勻5-10s。D.12000rpm，25min，室溫。取上清，加等體積異丙醇，一20攝氏度沉淀過夜。E.12000rpm，15min，室溫。加入70°/。乙醇200ul泡洗DNA沉淀。F.12000rpm，15min，室溫。去乙醇。倒置于紙巾上，待乙醇揮發(fā)干凈。G.加無菌水100ul溶解粗提DNA沉淀。用分光光度計測定或電泳估測其濃度。H.以總DNA為模板，進行PCR。(2)PCR程序PCR反應混合液的配比同質(zhì)粒PCR鑒定，依據(jù)植物表達載體中目的基因及其上游35S啟動子序列和基因下游引物[5'-TCAGCCAGAGATCTGGATAG-3']，反應的時間和溫度作如下94。C3tnin94。C45s，59。C45s72°C2min30s，30cycles72°C5min檢測結果顯示，大多數(shù)轉(zhuǎn)化植株均能夠擴增出預期大小的電泳條帶，而陰性對照則沒有，表明轉(zhuǎn)基因擬南芥基因組屮已經(jīng)含有外源基因DNA片段，結果如圖C示。2.3擬南芥熱激實驗轉(zhuǎn)基因Tl代植株于MS固體培養(yǎng)基中23'C/2rC，16/8小時生長一周后45'C熱激1小時，兩周后觀察植株存活狀態(tài)。實驗結果表明，轉(zhuǎn)基因植株相對于野生型擬南芥在高溫處理后成活率更高，耐熱性明顯提高(圖4)。轉(zhuǎn)基因T2代植株生長至角果成熟期時放入36'C高溫生長2天后，與轉(zhuǎn)基因植株相比野生型植株迅速變黃并枯萎(圖5)。轉(zhuǎn)基因株系高溫生長實驗結果顯示，在23'C/2rC環(huán)境中，轉(zhuǎn)基因及野生型擬南芥種子產(chǎn)量無明顯區(qū)別，而在32'C/3CTC環(huán)境中，轉(zhuǎn)基因植株與對照植株在產(chǎn)量有較明顯的區(qū)別。在30'C—32'C環(huán)境中，野生型株系的產(chǎn)量比正常條件下降低了30°/以上，而轉(zhuǎn)基因株系與正常條件下相比降低了不到l(m(表l)。表l轉(zhuǎn)基因擬南芥在不同溫度下產(chǎn)量的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>SEQUENCELISTING<110>中國農(nóng)業(yè)科學院油料作物研究所<120>油菜熱激蛋白基因HSP17.8及其應用<130>油菜熱激蛋白基因HSP17.8及其應用<160>2<170>Patentlnversion3.3<210>1<211>472<212>DNA<213>油菜<400>1atgtcgttgattccaagcttcttcggcaac犯ceiggcgcggCggC服C3gcttcttcgat60cctttttctcttgatgtttgggatccgttcaaggactttccatcatcttcttcgttttca120cggg卿actccgcgattgtg咖gcgcgtgtggactggsggg卿ctcctgacgcgcac180gtgttc卿gcggacttgcctggscttaag卿gsgg卿tg犯ggtgga240gac柳gtgccgg聊g柳cacgtgg卿g犯cgacacg300tggcaccgcgttgagsgatcg3gCgggC3gttcacgagg￡iagtttaggcttcctga犯at360gtg3卿tggatC3ggtg肌柳tgcgatggag咖ggtgtgctgactgtgacggtgcct420犯ggccg卿ccaagaagcctgstgtteagtctatccagatctctggctg犯472<210>2<211>153<212>PRT<213>油菜<400>2MetSerLeulieProSerPhePheGlyAsnAsnArgArgGlySerAsnSerPhePheAsp5101520ProPheSerLeuAspValTrpAspProLeuArgGluPheSerSerLeuSerArgAspAan25SerAlalieValAsnAla45AlaAspLeuProGlyLeu65LeuLyslieSerGlyGlu85ValGluArgSerSerGly105AspGinValLysAlaAla125ThrLysLysAlaAspVal1453035ArgValAspTrpArgGluThrProGlu5055LysLysGluGluValLysValGlulie7075ArgHisValGluLysGluAspLysAsn9095GinPheThrArgLysPheArgLeuPro110115MetGluAsnGlyValLeuThrValThr130135LysSerlieGlulieSerGly15040AlaHisValPheLys60GluGluAspSerVal80AspThrTrpHisArg100GluAsnValLysMet120ValProLysAlaGlu140權利要求1、一種油菜熱激蛋白基因HSP17.8，其堿基序列為SEQIDNO1所示的核苷酸序列。2、一種分離的蛋白質(zhì)，其序列為SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。3、權利要求1所述的一種油菜熱激蛋白基因HSP17.8在提高擬南芥耐熱性中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種油菜熱激蛋白基因HSP17.8及其應用。本發(fā)明提供了這個基因的核苷酸序列和氨基酸序列，也包括其它作物中與SEQIDNO1所示的DNA序列至少有70％同源性的基因序列；還包括在添加、取代、插入或缺失一個或多個核苷酸而產(chǎn)生的突變體等位基因或衍生物。同時本發(fā)明還借助于模式植物擬南芥，通過轉(zhuǎn)基因技術證實此熱激蛋白基因的過量表達增強了擬南芥在高溫下的耐熱性，并提高了高溫下種子的收獲量，改善了高溫逆境中擬南芥的產(chǎn)量，因此本發(fā)明在作物抗熱育種中有很好的應用前景。文檔編號C12N15/82GK101544983SQ200910061810公開日2009年9月30日申請日期2009年4月24日優(yōu)先權日2009年4月24日發(fā)明者靜劉,劉貴華,瑋華,慶楊,王新發(fā),王漢中申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院油料作物研究所