專利名稱：：一種肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)藥敏試劑盒及檢測方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于體外診斷
技術領域：
，具體涉及一種肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)藥敏試劑盒，本發(fā)明還涉及利用該試劑盒進行檢測的方法。
背景技術：
：肺炎支原體(M尸"e柳o"/")是一種特殊的微生物，是人類支原體肺炎的病原體。肺炎支原體既不是病毒，也不是細菌，而是介于病毒與細菌之間的一種微生物。支原體肺炎的病理改變以間質性肺炎為主，有時并發(fā)支氣管肺炎，稱為原發(fā)性非典型性肺炎。主要經(jīng)飛沫傳染，潛伏期23周，發(fā)病率以青少年最高。臨床癥狀較輕，甚至根本無癥狀，若有也只是頭痛、咽痛、發(fā)熱、咳嗽等一般的呼吸道癥狀，但也有個別死亡報道。一年四季均可發(fā)生，多在秋冬時節(jié)。除呼吸道感染外，MP還可引起腦炎、腎炎、心肌炎、免疫性溶血性貧血等多種肺外疾病，對兒童健康有很大^害性。由于肺炎支原體對一般藥物耐藥，所以及時輛診可特效治療，縮短療程，減少并發(fā)癥。目前，國內支原體肺炎的診斷主要依靠血清學檢測。血清學檢測特異性高，但在發(fā)病714天后才可檢測到特異性抗體，故對早期診斷價值不大。若要明確診斷，需要進行病原體的檢測。比較常見的傳統(tǒng)診斷方法是，通過平板培養(yǎng)大約7天后，觀察菌落形態(tài)，通過鏡鑒和生化反應確定是否為肺炎支原體，再用紙片法分析其耐藥性，前后完成診斷大約需要30天的時間。對操作人員有較高要求，而且費時'費力，不適合臨陣快速診斷的要求，對臨床診斷的意義不大。'
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一種肺爽支原體快速鑒定if養(yǎng)藥敏試劑盒，解決了現(xiàn)有的診斷方法存在的費時費力問題。本發(fā)明的另一目的是提供利用該藥敏試劑盒進行檢測的方法。本發(fā)明所采用的技術方案是，一種肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)藥敏試劑盒，包括試劑盒和藥敏板，試劑盒包括盒體，盒體內放置有超純水試劑、石蠟油試劑、生理鹽水試劑和肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基，藥敏板包括板體和板蓋，板體上設置有陰性檢測孔和陽性檢測孔，對應于陰性檢測孔和陽性檢測孔設置有若干個藥性對比孔，和te性檢測孔對應的藥性對比孔內裝有檢測藥物。'本發(fā)明所采用的另一技術方案是，利用該藥敏試劑盒進行檢測的方法，按以下步驟進行，步驟l:取超純水試劑和肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基，把超純水試劑加入到肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基中，完全溶解后，得到培養(yǎng)液；步驟2.:取上步得到的培養(yǎng)液50100^1,加入到板體上的陰性檢測孔中；'.步驟3:取一支生理鹽水試劑，用棉拭子吸附生理鹽水，在病變部位捻轉數(shù)次，取出棉拭子，立即置于步驟l得到的培養(yǎng)液內，攪動棉拭子提取其中液體，用加樣器吹打或用震蕩器震蕩混合得到混合后的培養(yǎng)液；步驟4:取上步得到的混合后的培養(yǎng)液，分別加入到板體上的陽性檢測孔和藥性對比孔中，每個孔中加50100pl;步驟5;取石蠟油試劑，在板體上的每個孔內滴加5(^1石蠟油，蓋上板蓋，把藥敏板置于3537。C孵箱地養(yǎng)；.步驟6:624小時內觀察讀取結果，檢測標準如下若陰性檢測孔不變色，陽性檢測孔不變色，則表明無肺炎支原體生長，余下孔不做判斷；若陰性檢測孔變色，則表明污染，試驗無效；若陰性檢測孔不變色，陽性檢測孔變色，表明樣品中有肺炎支原體，判斷余下各孔結果；a:和陰性檢測孔對應的藥性對比孔不變色，和陽性檢測孔對應的藥性對比孔不變色，表示對該藥性對比孔對應的藥物敏感；b:和陰性檢測孔對應的藥性對比孔不變色，和陽性檢測孔對應的藥性對比孔變色，表示對該藥性對比孔對應的藥物中等敏感；c:和陰性檢測孔對應的藥性對比孔變色，和陽性檢測孔對應的藥性對比孔變色，表示對該藥性對比孔對應的藥物不敏感。本發(fā)明的有益效果是，(1)改進肺炎支原體培養(yǎng)基，在其中添加快速增長因子，使得肺炎支原體的培養(yǎng)突破了傳統(tǒng)培養(yǎng)法的大約7天的時間限制，在624小時內即可完成肺炎支原體的培養(yǎng)，其成分主要包括蛋白胨、葡萄糖、酵母抽提物、指示劑、快速增長因子等。另外，.將培養(yǎng)基加工為干粉狀態(tài)，有利于產(chǎn)品的長期保存，用配套的超純水溶解后即可使用。同時配套有超純水，既為了方便使用，也為了避免不同地區(qū)水質的不同而導致的不可預期的結果，在最大限度上保證了本實用新型的產(chǎn)品穩(wěn)定性。還配備有無菌生理鹽水，用于在采集樣本時濕潤棉拭子，可保證采集到的樣本短時間內的不會因為環(huán)境的改變而死亡，保證樣本培養(yǎng)結果的準確性。(2)藥敏檢測板所采用的方法原理，是在國際標準的NCCLS的微量液體稀釋法原理的基礎上改進而成。常規(guī)的微量液體稀釋法是將經(jīng)過鏡鑒篩選的菌落進行擴大培養(yǎng)，再將培養(yǎng)好的培養(yǎng)液加入到事先稀釋好的抗生素的濃度梯度中，培養(yǎng)觀察結果。由于該.法操作步驟較多，完成一個病例的藥敏試驗大約需要78天左右的時間，并且培養(yǎng)成功率較低，且需要專門實驗人員進行操作。本發(fā)明藥敏板包括藥敏板體和板蓋，在藥敏板的左側第一列設有對照孔，包括陽性和陰性對照反應孔，從第二列開始的每列反應孔均對應于一種目前常用的抗生素藥物，包括羅紅霉素、紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、乙酰螺旋霉素、克林霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星、交沙霉素、麥迪霉素、麥白霉素、泰利霉素、莫昔沙星。且每種抗生素在藥敏板上都有對應的高低兩個濃度反應L.,所有抗生素均采用熱包被法預先包被進藥敏板反應孔中。每個藥敏板體都有一個藥敏板蓋對應，可以防止外界的灰塵或其它雜物落入藥敏孔或者劃傷藥敏反應孔，影響藥敏試驗的準確性。同時配備了滅菌后的石蠟油，用于在藥敏試驗過程中，封閉藥敏反應孔，最大限度防止液體的揮發(fā)，影響結果的判斷。圖1是本發(fā)明藥敏試劑盒中試劑盒的結構示意圖；圖2是本發(fā)明藥敏試劑盒中藥.敏板的結構示意圖；圖3是本發(fā)明藥敏試劑盒中板蓋的結構示意圖。'圖中，l.盒體，2.超純水試劑，3.石蠟油試劑，4.生理鹽水試劑，5.肺炎支原體快速鑒定干粉培養(yǎng)基，6.陰性檢測孔，7.陽性檢測孔，8.藥性對比孔，9.板體，IO.板蓋。具體實施例方式下面結合附圖和具體實施方式對本發(fā)明進行詳細說明。本發(fā)明肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)藥敏試劑盒包括試劑盒部分和藥敏板部分，試劑盒的結構如圖1所示，包括盒體1，盒體1內放置有兩個超純水試劑2、一個石蠟油試劑3、一個生理鹽水試劑4和一個肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基5，藥敏板的結構如圖2及圖3所示，包括板體9和板蓋10，板體9上設置有陰性檢測孔6和陽性檢測孔7，對應于陰性檢測孔6和陽性檢測孔7設置有兩行藥性對比孔8，和陽性檢測孔7對應的一行藥性對比孔8內裝有檢測藥物。利用本發(fā)明藥敏試劑盒進行檢測的方法，具體按照以下步驟實施步驟l:取一支超純水試劑2和一支肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基5，把超純水加入到肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基5中，完全溶解后，得到培養(yǎng)液；步驟2:取上步得到的培養(yǎng)液.5010(Hd,加入到藥敏板上的陰性檢測孔6中；步驟3:取一支生理鹽水試劑4,用棉拭子吸附生理鹽水，在病變部位捻轉數(shù)次，取出棉拭子，立即置于步驟1得到的培養(yǎng)液內，攪動棉拭子數(shù)次，提取棉拭子，對著瓶壁盡量擠壓出其中液體，取出棉拭子，用加樣器吹打數(shù)次或用震蕩器震蕩混勻，得到混合后的培養(yǎng)液；步驟4:取上步得到的混合后的培養(yǎng)液50100jil，分別加入到藥敏板上的陽性檢測孔7和藥性對比孔8-中；步驟5:取石蠟油試劑3，在藥敏板上的每個孔內滴加50pil石蠟油，蓋上板蓋IO，把藥敏板置于3537'C孵箱培養(yǎng)；步驟6:624小時內觀察讀取結果，檢測標準如下(1)若陰性檢測孔6不變色，陽性檢測孔7不變色，則表明無肺炎支原體生長，余下孔不做判斷；(2)若陰性檢測孔6變色，則表明污染，試驗無效；(3)若陰性檢測孔6不變色，陽性檢測孔7變色，表明樣品中有肺炎支原體，判斷余下各孔結果；a:和陰性檢測孔6對應的藥性對比孔8不變色，和陽性檢測孔7對應的藥性對比孔8不變色，表示對該列對應的藥物敏感；b:和陰性檢測孔6對應的藥性對比孔8不變色，和陽性檢測孔7對應的藥性對比孔8變色，表示對該列對應的藥物中等敏感；c:和陰性檢測孔6對應的藥性對比孔8變色，和陽性檢測孔7對應的藥性對比孔8變色，表示對該列對應的藥物不敏感。實施例取一支超純水試劑2和一支肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基5，把1.5ml超純水加入到肺炎支原體快速鑒定培'養(yǎng)基5中，完全溶解后，得到培養(yǎng)液；取上步得到的培養(yǎng)液5(HU，加入到藥敏板上的陰性檢測孔6中；取一支生理鹽水試劑4，用棉拭子吸附生理鹽水，在病變部位捻轉數(shù)次，取出棉拭子，立即置于步驟l得到的培養(yǎng)液內，攪動棉拭子數(shù)次，提取棉拭子，對著瓶壁盡量擠壓出其中液體，取出棉拭子，用加樣器吹打數(shù)次或用震蕩器震蕩混勻，得到混合后的培養(yǎng)液；取上步得到的混合后的培養(yǎng)液50^11,分別加入到藥敏板上的陽性檢測孔7和藥性對比孔8中；取石蠟油試劑3，在藥敏板上的每個孔內滴加50Kil石蠟油，蓋上板蓋IO,把藥敏板置于3537'C孵箱培養(yǎng)；6-24小時內觀察讀取結果，'其中藥敏板藥物英文縮寫及中文對照<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>檢測結果如下-陰性檢測孔6為紅色或草綠色，陽性檢測孔為7黃色，表明樣品中有肺炎支原體，判斷余下各孔結果ERY藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對ERY藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ERY藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ERY藥物不敏感；ROX藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表，該肺炎支原體對ROX藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ROX藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ROX藥物不敏感；CLA藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對CLA藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對CLA藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對CLA藥物不敏感；AZI藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對AZI藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對AZI藥物中等敏感;藥物對，比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對AZI藥物不敏感；ACE藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對ACE藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ACE藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ACE藥物不敏感；CLI藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對CLI藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對CLI藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對CLI藥物不敏感；LEV藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對LEV藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對LEV藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對LEV藥物不敏感；SPA藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對SPA藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對SPA藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對SPA藥物不敏感；GAT藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對GAT藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對GAT藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對GAT藥物不敏感；JOS藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表辨該肺炎支原體對JOS藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對JOS藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對JOS藥物不敏感；MID藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對MID藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MID藥物中等熟感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MID藥物不敏感；MEL藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對MEL藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MEL藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，.表明該肺炎支原體對MEL藥物不敏感；TEL藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對TEL藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對TEL藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對TEL藥物不敏感；MOX藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對MOX藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MOX藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MOX藥物不敏感。本發(fā)明肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)藥敏試劑盒及檢測方法，操作簡單且檢測周期短。權利要求1.一種肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)藥敏試劑盒，其特征在于，包括試劑盒和藥敏板，所述試劑盒包括盒體(1)，盒體(1)內放置有超純水試劑(2)、石蠟油試劑(3)、生理鹽水試劑(4)和肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基(5)，所述藥敏板包括板體(9)和板蓋(10)，板體(9)上設置有陰性檢測孔(6)和陽性檢測孔(7)，對應于陰性檢測孔(6)和陽性檢測孔(7)設置有若干個藥性對比孔(8)，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)內裝有檢測藥物。2.—種利用權利要求1所述的肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)藥敏試劑盒進行檢測的方法，其特征在于，包括試劑盒初藥敏板，所述試劑盒包括盒體(l)，盒體(1)內放置有超純水試劑(2)、石蠟油試劑(3)、生理鹽水試劑(4)和肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基(5)，所述藥敏板包括板體(9)和板蓋(10)，板體(9)上設置有陰性檢測孔(6.)和陽性檢測孔(7)，對應于陰性檢測孔(6)和陽性檢測孔(7)設置有若干個藥性對比孔(.8)，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)內裝有檢測藥物，具體按照以下步驟實施，步驟1:取超純水試劑(2)和肺炎i原體快速鑒定培養(yǎng)基(5)，把超純水試劑(2)加入到肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基(5)中，完全溶解后，得到培養(yǎng)液；步驟2:取上步得到的培養(yǎng)液.50100nl，加入到板體(9)上的陰性檢測孔(6)中；步驟3:取一支生理鹽水試劑(4)，用棉拭子吸附生理鹽水，在病變部位捻轉數(shù)次，取出棉拭子，立即置于步驟l得到的培養(yǎng)液內，攪動棉拭子提取其中液體，用加樣器吹打或用震蕩器震蕩混合得到混合后的培養(yǎng)液；步驟4:取上步得到的混合后的培養(yǎng)液，分別加入到板體(9)上的陽性檢測孔(7)和藥性對比孔(8)中，每個孔中加50100pl;步驟5:取石蠟油試劑(3)，在板#(9)上的每個孔內滴加50^1石蠟油，蓋上板蓋(10)，把藥敏板置于3537"C孵箱培養(yǎng)；步驟6:624小時內觀察讀取結果，檢測標準如下若陰性檢測孔(6)不變色，陽性檢測孔(7)不變色，則表明無肺炎支原體生長，余下孔不做判斷;.'若陰性檢測孔(6)變色，則表明污染，試驗無效；若陰性檢測孔(6)不變色，陽性檢測孔(7)變色，表明樣品中有肺炎支原體，判斷余下各孔結果；'a:和陰性檢測孔(6)對應的藥性對比孔(8)不變色，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)不變色，表示對該藥性對比孔(8)對應的藥物敏感；.b:和陰性檢測孔(6)對應的藥性對比孔(8)'不變色，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)變色，表示對該藥性對比孔(8)對應的藥物中等敏感；c:和陰性檢測孔(6)對應的藥性對比孔(8)變色，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)變色，表示對該藥性對比孔(8)對應的藥物不敏感。全文摘要本發(fā)明公開了一種肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)藥敏試劑盒，包括試劑盒和藥敏板，試劑盒包括盒體，盒體內放置有超純水試劑、石蠟油試劑、生理鹽水試劑和肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基，藥敏板包括板體和板蓋，板體上設置有陰性檢測孔和陽性檢測孔，對應于陰性檢測孔和陽性檢測孔設置有若干個藥性對比孔，和陽性檢測孔對應的藥性對比孔內裝有檢測藥物。本發(fā)明還公開了一種檢測方法，首先制備培養(yǎng)液，將培養(yǎng)液加入陰性檢測孔中，提取病變溶液加入到培養(yǎng)液中制得混合溶液，將混合溶液加入到陽性檢測孔和藥性對比孔中進行培養(yǎng)，后讀取結果。本發(fā)明肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)藥敏試劑盒及檢測方法，操作簡單且檢測周期短。文檔編號C12R1/35GK101555517SQ20091002255公開日2009年10月14日申請日期2009年5月15日優(yōu)先權日2009年5月15日發(fā)明者敏王,錢葉林申請人:錢葉林;王敏