專利名稱：：用cad-樣基因的rna干擾控制線蟲(chóng)的組合物和方法用CAD-樣基因的RNA干擾控制線蟲(chóng)的組合物和方法對(duì)相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用最近，已提出用RNA干擾(RNAi)(也稱作基因沉默)作為控制線蟲(chóng)的方法。當(dāng)與乾基因或mRNA的序列基本上相關(guān)的雙鏈RNA(dsRNA)引入細(xì)胞中時(shí)，耙基因的表達(dá)會(huì)被抑制(參見(jiàn)例如美國(guó)專利號(hào)6,506,559)。美國(guó)專利號(hào)6,506,559證明了RNAi抗秀麗隱桿線蟲(chóng)廣Oiewo/^i6W船e/"ff";y)中已知基因的有效性，但沒(méi)有披露RNAi用于控制植物寄生的線蟲(chóng)的用途。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)新的植物耙基因一一肉桂醇脫氫酶樣(CAD-樣)基因(也以登記號(hào)49676534表示)，在SCN對(duì)大豆根感染誘導(dǎo)的合胞體中it^達(dá)。發(fā)明人進(jìn)一步證明，當(dāng)49676534基因在大豆根部模型系統(tǒng)中的表達(dá)得到抑制時(shí)，線蟲(chóng)感染這些大豆根的能力會(huì)降低。所以，在第一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了雙鏈RNA(dsRNA)分子，該分子包含a)第一鏈，包含與CAD-樣基因的一部分基本上相同的序列；和b)第二鏈，包含與第一鏈基本上互補(bǔ)的序列。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含與CAD樣基因的一部分基本上相同的核酸的表達(dá)盒和表達(dá)載體。此處植物的"CAD樣基因"定義為與包含SEQIDNO:l限定的基因49676534的序列的多核苷酸有至少50%序列同一性的基因。根據(jù)本發(fā)明，CAD樣基因包括具有諸如SEQIDNOs:2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24和26中限定的那些序列的基因，其與SEQIDNO:l的CAD樣基因同源。此處限定的CAD樣基因編碼與具有SEQIDNO:7中所限定序列的49676534多肽有至少45%序列同一性的多肽。這樣的多肽包括具有SEQIDNOs:4、9、11、13、15、17、19、21、23和25中限定的序列的CAD樣多肽。適宜的CAD樣耙基因與包含SEQIDNO:1、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中所限定序列的多核苷酸的序列同一性為至少約50-60%、至少約60-70%或至少約70-75%、75畫(huà)80%、80-85%、85-90%或卯-95%，也可以是至少約96%、97%、98%、99%或更高。或者，適宜的CAD樣耙基因包含在嚴(yán)緊條件下與包含SEQIDNO:1、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中所限定序列的多核苷酸雜交的多核苷酸。如此處所用的術(shù)語(yǔ)"控制"當(dāng)用于感染的上下文中時(shí)指感染的降低或預(yù)防。減低或預(yù)防線蟲(chóng)的感染會(huì)使植物具有對(duì)線蟲(chóng)增加的抗性；但是，這種增加的抗性并不意味著植物必須100%地抗線蟲(chóng)感染。在優(yōu)選實(shí)施方案中，在抗性植物中對(duì)線蟲(chóng)感染的抗性比對(duì)線蟲(chóng)無(wú)抗性的野生型植物高10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、卯％或95%。因型，但是不包含針對(duì)耙基因的雙鏈RNA的植物。植物對(duì)線蟲(chóng)感染的抗性可以是由于當(dāng)線蟲(chóng)暴露于含有雙鏈RNA的植物時(shí)，線蟲(chóng)的死亡、不育、停止發(fā)育或移動(dòng)性受損造成的，所述雙鏈RNA特異性針對(duì)對(duì)于功能性采食部位、合胞體或巨大細(xì)胞的發(fā)育或維持必須的基因。此處使用的術(shù)語(yǔ)"對(duì)線蟲(chóng)感染的抗性，，或"具有線蟲(chóng)抗性的植物"指與野生型植物相比，植物避免線蟲(chóng)感染、殺死線蟲(chóng)或阻止、減少或停止線蟲(chóng)的發(fā)育、生長(zhǎng)或增殖的能力。這可以通過(guò)主動(dòng)過(guò)程達(dá)到，例如通過(guò)產(chǎn)生對(duì)線蟲(chóng)有害的物質(zhì)，或通過(guò)^f皮動(dòng)過(guò)程達(dá)到，例如含有降低的線蟲(chóng)所需的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值或不形成由線蟲(chóng)采食部位誘導(dǎo)的結(jié)構(gòu)例如合胞體或巨大細(xì)胞。植物的線蟲(chóng)抗性水平可以以多種方法檢測(cè)，例如，計(jì)數(shù)能夠在植物上建立寄生的線蟲(chóng)數(shù)量，或測(cè)量線蟲(chóng)發(fā)育時(shí)間、雌雄線蟲(chóng)的比例，或?qū)τ诎麌熬€蟲(chóng)計(jì)數(shù)在感染的植物的根部或植物分析系統(tǒng)中產(chǎn)生的胞囊數(shù)量或線蟲(chóng)卵的數(shù)量。才艮據(jù)本發(fā)明，用編碼雙鏈RNA的核酸轉(zhuǎn)化植物，該雙鏈RNA特異性抑制CAD樣基因在植物中的表達(dá)，該基因?qū)τ诓墒巢课?、合胞體或巨大細(xì)胞的發(fā)育和維持是必需的，最后影響線蟲(chóng)的存活、變態(tài)或繁殖。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述雙鏈RNA由已經(jīng)轉(zhuǎn)化入所感染的植物的祖林中的載體編碼。優(yōu)選表達(dá)所述靶向CAD樣基因的雙鏈RNA的核酸在根;轉(zhuǎn)錄控制下。，，，'，、，_植物基因的表達(dá)應(yīng)該有效地連接至適當(dāng)啟動(dòng)子，該啟動(dòng)子以時(shí)間優(yōu)先、空間優(yōu)先、細(xì)胞類型優(yōu)先和/或組織優(yōu)先方式使該基因表達(dá)。用于本發(fā)明表達(dá)盒的啟動(dòng)子包括能夠在存在于植物根部的植物細(xì)胞中起始轉(zhuǎn)錄的任何啟動(dòng)子。這類啟動(dòng)子包括但不限于，那些能夠從植物、植物病毒和含有在植物中表達(dá)的基因的細(xì)菌(如農(nóng)桿菌和根瘤菌)中得到的啟動(dòng)子。優(yōu)選本發(fā)明的表達(dá)盒包括根特異性啟動(dòng)子、病原體可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子或線蟲(chóng)可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子。更優(yōu)選該線蟲(chóng)可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子是寄生線蟲(chóng)采食部位特異性啟動(dòng)子。寄生線蟲(chóng)采食部位特異性啟動(dòng)子可以對(duì)合胞體細(xì)胞或巨大細(xì)胞具有特異性或?qū)@兩種細(xì)胞都具有特異性。如果一個(gè)啟動(dòng)子在其誘導(dǎo)狀態(tài)下的活性(通過(guò)其控制下產(chǎn)生的RNA量來(lái)測(cè)定)比未誘導(dǎo)狀態(tài)下的活性高至少30%、40%、50%,優(yōu)選至少60%、70%、80%、90%,更優(yōu)選至少100%、200%、300%,那么這個(gè)啟動(dòng)子是可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子。如果一個(gè)啟動(dòng)子的活性(通過(guò)其控制下產(chǎn)生的RNA量來(lái)測(cè)定)在特定的細(xì)胞類型、組織或器官中比在同一個(gè)植物的其他細(xì)胞類型、組織中要高至少30%、40%、50%,優(yōu)選至少60%、70%、80%、卯％，更優(yōu)選至少100%、200%、300%，那么這種啟動(dòng)子是細(xì)胞、組織或器官特異性啟動(dòng)子，優(yōu)選所述其他的細(xì)胞類型或組織是相同植物器官(例如根)的細(xì)胞類型或組織。在器官特異性啟動(dòng)子的情況中，啟動(dòng)子活性應(yīng)該與其他植物器官中的啟動(dòng)子活性比較，例如葉、莖、花或種子。[第57段啟動(dòng)子可以是組成型的、可誘導(dǎo)的、發(fā)育階段優(yōu)先的、細(xì)胞類型優(yōu)先的、組織優(yōu)先的或器官優(yōu)先的。組成型啟動(dòng)子在大多數(shù)情況下都有活性。組成型啟動(dòng)子的非限制實(shí)例包括CaMV19S和35S啟動(dòng)子(Odell等人，1985，Nature313:810-812)、sXCaMV35S啟動(dòng)子(Kay等人，1987，Science236:1299-1302)、Sepl啟動(dòng)子、稻肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子(McElroy等人，1990，PlantCell2:163-171)、擬南芥肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、泛素啟動(dòng)子(Christensen等人,1989，PlantMolec.Biol.18:675-689)、pEmu(Last等人，1991，Theor.Appl.Genet.81:581-588)、玄參花斑病病毒35S啟動(dòng)子、Smas啟動(dòng)子(Velten等人，1984,EMBOJ.3:2723-2730)、GRP1-8啟動(dòng)子、肉桂醇脫氫酶啟動(dòng)子(美國(guó)專利5,683,439)、來(lái)自農(nóng)桿菌屬T-DNA的啟動(dòng)子，例如甘露堿合成酶、胭脂堿合成酶和章魚(yú)堿合成酶、核酮糖磷酸氫鹽羧化酶(ssuRUBISCO)啟動(dòng)子的小亞基等。優(yōu)選在接觸寄生線蟲(chóng)的細(xì)胞中表達(dá)雙鏈RNA的啟動(dòng)子?；蛘?，所述啟動(dòng)子可以驅(qū)動(dòng)雙鏈RNA在遠(yuǎn)離接觸線蟲(chóng)的部位的植物組織中表達(dá)，然后該雙鏈RNA可以由植物轉(zhuǎn)運(yùn)至接觸寄生線蟲(chóng)的細(xì)胞中，在線蟲(chóng)采食部位的特定細(xì)胞中或接近線蟲(chóng)采食部位的細(xì)胞中，例如合胞體細(xì)胞或巨大細(xì)胞。[第58段可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子在特定環(huán)境條件下是有活性的，例如存在或缺乏營(yíng)養(yǎng)素或代謝產(chǎn)物、熱或冷、光照、病原體攻擊、缺氧條件等。例如，已經(jīng)表明啟動(dòng)子TobRB7、AtRPE、AtPyk10、Geminil9和AtHMGl可以由線蟲(chóng)誘導(dǎo)(對(duì)于線蟲(chóng)可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子的綜述，請(qǐng)參見(jiàn)Ann.Rev.Phytopathol.(2002)40:191-219;還參見(jiàn)U.S.Pat.No.6,593,513)。分離可以由線蟲(chóng)誘導(dǎo)的其他啟動(dòng)子的方法在美國(guó)專利5,589,622和5，824，876中列出。其他可以誘導(dǎo)的啟動(dòng)子包括蕓苔屬的hsp80啟動(dòng)子，其可由熱休克誘導(dǎo)；PPDK啟動(dòng)子，其由光誘導(dǎo)；煙草、擬南芥和玉蜀黍的PR-1啟動(dòng)子，其可以由病原體感染誘導(dǎo)；和Adhl啟動(dòng)子，其由缺氧和冷脅迫誘導(dǎo)。植物基因表達(dá)也可由可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子促進(jìn)(關(guān)于綜述參見(jiàn)Gatz，1997，Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMol.Biol.48:89-108)。如果需要時(shí)間特異性基因表達(dá)，可化學(xué)誘導(dǎo)的啟動(dòng)子特別適用。這種啟動(dòng)子的非限制性實(shí)例是可7jC楊酸誘導(dǎo)的啟動(dòng)子(PCT申請(qǐng)No.WO95/19443)、可四環(huán)素i秀導(dǎo)的啟動(dòng)子(Gatz等人，1992，PlantJ.2:397-404)和可乙醇誘導(dǎo)的啟動(dòng)子(PCT申請(qǐng)No.WO93/21334).[第外段發(fā)育階段優(yōu)先的啟動(dòng)子在發(fā)育的特定階段優(yōu)先表達(dá)。組織和器官優(yōu)先的啟動(dòng)子包括那些在特定組織和器官優(yōu)先表達(dá)的啟動(dòng)子，例如葉、根、種子或木質(zhì)部。組織優(yōu)先或器官優(yōu)先啟動(dòng)子的實(shí)例包括但不限于果實(shí)優(yōu)先、胚珠優(yōu)先、雄性組織優(yōu)先、種子優(yōu)先、珠被優(yōu)先、塊莖優(yōu)先、柄優(yōu)先、果皮優(yōu)先和葉子優(yōu)先、柱頭優(yōu)先、花粉優(yōu)先、花藥優(yōu)先、花瓣優(yōu)先、萼片優(yōu)先、花梗優(yōu)先、長(zhǎng)角果優(yōu)先、根優(yōu)先、莖優(yōu)先等等。種子優(yōu)先的啟動(dòng)子在種子發(fā)育和/或萌發(fā)時(shí)優(yōu)先表達(dá)。例如，種子優(yōu)先啟動(dòng)子可以是胚優(yōu)先、胚乳優(yōu)先和種皮優(yōu)先的。見(jiàn)Thompson等人，1989，BioEssays10:108。種子優(yōu)先的啟動(dòng)子包括但不限于纖維素合酶(celA)、Ciml、，玉米醇溶蛋白、球蛋白-1、玉蜀黍19kD玉米醇溶蛋白(cZ19Bl)等。[第60段其他適宜的組織優(yōu)先或器官優(yōu)先啟動(dòng)子包括但不限于，油菜的油菜籽蛋白基因啟動(dòng)子(美國(guó)專利號(hào)5,608,152)、蠶豆(K/c//a^)USP-啟動(dòng)子(Baeumlein等人，1991，MolGenGenet.225(3):459-67)、擬南芥油質(zhì)蛋白啟動(dòng)子(PCT申請(qǐng)No.WO98/45461)、菜豆(尸/^s^/附v"/^w&)菜豆素啟動(dòng)子(美國(guó)專利號(hào)5,504,200)、蕓苔屬Bce4-啟動(dòng)子(PCT申請(qǐng)No.WO91/13980)、或豆球蛋白B4啟動(dòng)子(LeB4;Baeumlein等人，1992，PlantJournal,2(2):233-9),以;S^像玉蜀黍、大麥、小麥、黑麥、稻等單子葉植物中賦予種子特異性表達(dá)的啟動(dòng)子。要關(guān)注的適宜啟動(dòng)子是大麥的lpt2或lptl-基因啟動(dòng)子(PCT申請(qǐng)No.WO95/15389和PCT申請(qǐng)No.WO95/23230)，或在PCT申請(qǐng)No.WO99/168卯中描述的那些啟動(dòng)子(大麥醇溶蛋白基因、稻的谷蛋白基因、稻的水稻素基因、稻的醇溶谷蛋白基因、小麥的麥膠蛋白基因、小麥的谷蛋白基因、燕麥的谷蛋白基因、高粱的kasirin基因和黑麥的黑麥絲因)。[第61段用于本發(fā)明的表達(dá)盒的其他啟動(dòng)子包括但不限于，主要葉綠素a/b結(jié)合蛋白啟動(dòng)子、組蛋白啟動(dòng)子、Ap3啟動(dòng)子、p-conglycin啟動(dòng)25子、油菜籽蛋白啟動(dòng)子、大豆凝集素啟動(dòng)子、玉蜀黍15kD玉米醇溶蛋白啟動(dòng)子、22kD玉米醇溶蛋白啟動(dòng)子、27kD玉米醇溶蛋白啟動(dòng)子、g-玉米醇溶蛋白啟動(dòng)子、蠟質(zhì)基因(waxy)啟動(dòng)子、超甜基因(shrunken)1啟動(dòng)子、超甜基因2啟動(dòng)子和bronze基因啟動(dòng)子、Zml3啟動(dòng)子、(美國(guó)專利號(hào)5,086,169)、玉蜀黍多聚半乳糖醛酸酶啟動(dòng)子(PG)(美國(guó)專利號(hào)5，412,085和5,545，546)和SGB6啟動(dòng)子(美國(guó)專利號(hào)5,470,359)，以及合成的或其他天然啟動(dòng)子。[第62段根據(jù)本發(fā)明，所述表達(dá)盒包括與核苷酸序列有效連接的表達(dá)控制序列，該核苷酸序列是所述雙鏈RNA的一條或兩條鏈的模板。該雙鏈RNA模板包括(a)第一鏈，具有與SEQIDNO:1、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26的大約19500個(gè)或至多全長(zhǎng)的連續(xù)核苷脧基本上相同的序列；和(b)第二鏈，具有與第一鏈基本上互補(bǔ)的序列。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，啟動(dòng)子位于所述模板核苷酸序列任一端的側(cè)翼，其中所述啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)各個(gè)單獨(dú)的DNA鏈的表達(dá)，進(jìn)而產(chǎn)生兩條互補(bǔ)的RNA，這兩條互補(bǔ)的RNA雜交并形成所述雙鏈RNA。在備選的實(shí)施方案中，核苷酸序列被轉(zhuǎn)錄成在一個(gè)轉(zhuǎn)錄單元上的雙鏈RNA的兩條鏈，其中，正義鏈從轉(zhuǎn)錄單元的5，端轉(zhuǎn)錄，而反義鏈從3，端轉(zhuǎn)錄，其中這兩條鏈隔開(kāi)大約3500個(gè)#對(duì)，并且轉(zhuǎn)錄之后，該RNA轉(zhuǎn)錄物自身折疊形成發(fā)夾。[第63段在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述載體含有雙向啟動(dòng)子，驅(qū)動(dòng)兩個(gè)核酸分子的表達(dá)，由此一個(gè)核酸分子編碼與CAD樣基因的一部分基本上相同的序列，而另一個(gè)核酸分子編碼與第一鏈基本上互補(bǔ)的第二序列，并且當(dāng)兩個(gè)序列都轉(zhuǎn)錄時(shí)能夠形成雙鏈RNA。雙向啟動(dòng)子是能夠在兩個(gè)方向介導(dǎo)表達(dá)的啟動(dòng)子。[第64段在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述載體含有兩種啟動(dòng)子，一個(gè)介導(dǎo)與CAD樣基因的一部分基本上相同的序列的轉(zhuǎn)錄，另一個(gè)啟動(dòng)子介導(dǎo)與第一鏈基本上互補(bǔ)的第二序列的轉(zhuǎn)錄，并且當(dāng)兩個(gè)序列都轉(zhuǎn)錄時(shí)能夠形成雙鏈RNA。第二啟動(dòng)子可以是不同的啟動(dòng)子。[第65段1不同啟動(dòng)子指就細(xì)胞或組織特異性來(lái)說(shuō)具有不同活性，或?qū)χT如病原體、非生物脅迫或化學(xué)品等不同的誘導(dǎo)物呈現(xiàn)表達(dá)的啟動(dòng)子。例如，一個(gè)啟動(dòng)子可以是組成型的或組織特異性的，而另一個(gè)則可能是組織特異性或可被病原體誘導(dǎo)的。在一個(gè)實(shí)施方案中，一個(gè)啟動(dòng)子介導(dǎo)與過(guò)表達(dá)CAD樣基因相適應(yīng)的核酸分子的轉(zhuǎn)錄，而另一個(gè)啟動(dòng)子介導(dǎo)互補(bǔ)核酸的組織或細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄或病原體誘導(dǎo)的表達(dá)。[第66段本發(fā)明還涉及能表達(dá)本發(fā)明的雙鏈RNA、進(jìn)而抑制例如根部、采食部位、合胞體和/或巨大細(xì)胞中的CAD樣基因的轉(zhuǎn)基因植物。所述植物或轉(zhuǎn)基因植物可以是諸如但不限于樹(shù)、切花(cutflowers)、觀賞植物、蔬菜或農(nóng)作物植物的任何植物。上述植物可來(lái)自選自由苜蓿屬(Medicago)、番癡屬(Lycopersicon)、蕓苔屬(Brassica)、香瓜屬(Cucumis)、癡屬(Solanum)、核杉&屬(Juglans)、棉屬(Gossypium)、蘋果屬(Malus)、葡萄屬(Vitis)、金魚(yú)草屬(Antirrhinum)、楊屬(Populus)、草莓屬(Fragaria)、擬南芥屬(Arabidopsis)、云杉屬(Picea)、辣椒屬(Capsicum)、藜屬(Chenopodium)、菊屬(Dendranthema)、牽牛屬(Pharbitis)、松屬(Pinus)、豌豆屬(Pisum)、稻屬(Oryza)、玉蜀黍?qū)?Zea)、小麥屬(Triti面)、黑小麥屬(Triticale)、黑麥屬(Secale)、黑麥草屬(Lolium)、大麥屬(Hordeum)、大豆屬(Glycine)、黃杉屬(Pseudotsuga)、伽藍(lán)菜屬(Kalanchoe)、甜菜屬(Beta)、向日葵屬(Helianthus)、煙草屬(Nicotiana)、南瓜屬(Cucurbita)、薔薇屬(Rosa)、草莓屬、百脈根屬(Lotus)、苜蓿屬、驢食草屬(Onobrychis)、車軸草屬(trifolium)、胡盧巴屬(Trigonella)、豇豆屬(Vigna)、橘屬(Citrus)、亞麻屬(Linum)、老鸛草屬(Geranium)、木薯屬(Manihot)、胡蘿卜屬(Daucus)、蘿卜屬(Raphanus)、白芥屬(Sinapis)、顛茄屬(Atropa)、曼陀羅屬(Datura)、天仙子屬(Hyoscyamus)、煙草屬、碧冬茄屬(Petimia)、毛地黃屬(Digitalis)、Majorana、菊苣屬(Ciahorium)、萵苣屬(Lactuca)、雀麥屬(Bromus)、天門冬屬(Asparagus)、金魚(yú)草屬、萱草屬(Heterocallis)、水仙屬(Nemesis)、天竺葵屬(Pelargonium)、黍?qū)?Panicum)、^/C草屬(Pennisetum)、毛茛(Ranunculus)、千里光屬(Senecio)、喇叭舌屬(Salpiglossis)、藍(lán)英花屬(Browaalia)、菜豆屬(Phaseolus)、燕麥屬(Avena)和蔥屬(Allium)組成的組中的屬。所述植物可以來(lái)自選自下列屬的屬擬南芥屬、苜蓿屬、番茄屬、蕓苔屬、香瓜屬、茄屬、核桃屬、棉屬、蘋果屬、葡萄屬、金魚(yú)草屬、Brachipodium、楊屬、草莓屬、擬南芥屬、云杉屬、辣椒屬、藜屬、菊屬、牽牛屬、術(shù)>屬、豌豆屬、稻屬、玉蜀黍?qū)佟⑿←湆?、黑小麥屬、黑麥屬、黑麥草屬、大麥屬、大豆屬、黃杉屬、伽藍(lán)菜屬、甜菜屬、向日葵屬、煙草屬、南瓜屬、薔薇屬、草莓屬、百樂(lè)M艮屬、苜蓿屬、驢食草屬、車軸草屬、胡盧巴屬、紅豆屬、橘屬、亞麻屬、老鸛草屬、木薯屬、胡蘿卜屬、蘿卜屬、白芥屬、顛茄屬、曼陀羅屬、天仙子屬、煙草屬、碧冬茄屬、毛地黃屬、Majorana、菊苣屬、萵苣屬、雀麥屬、天門冬屬、金魚(yú)草屬、萱草屬、水仙屬、天竺葵屬、黍?qū)?、狼尾草屬、毛萊屬、千里光屬、游A舌屬、藍(lán)英花屬、菜豆屬、燕麥屬和蔥屬組成的組中的屬。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述植物是單子葉植物或雙子葉植物。[第67段優(yōu)選所述植物是農(nóng)作物植物。農(nóng)作物植物是用于農(nóng)業(yè)的所有植物。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述植物是單子葉植物，優(yōu)選禾本科(Poaceae)、芭蕉科(Musaceae)、百合科(Liliaceae)或鳳梨科(Bromeliaceae)植物，優(yōu)選是禾本科植物。因此，在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述植物是禾本科玉蜀黍?qū)佟⑿←湆?、稻屬、大麥屬、黑麥屬、燕麥屬、甘蔗?Saccharum)、高粱屬(Sorghum)、狼尾草屬、狗尾草屬(Setaria)、黍?qū)?、糝屬(Eleusine)、芒屬(Miscanthus)、短柄草屬(Brachypodium)、羊茅屬(Festuca)或黑麥草屬植物。當(dāng)植物是玉蜀黍?qū)贂r(shí)，優(yōu)選物種是玉米(Zea附fl")。當(dāng)該植物是小麥屬時(shí)，優(yōu)選物種是普通小麥(7Wft'cw附mWvw)、斯佩爾特小麥(7Wft'cm附印e/toe)或圓柱小麥(7W,/c"柳i/"/ww)。當(dāng)所述植物是稻屬時(shí)，優(yōu)選物種是稻(as^i'w)。當(dāng)所述植物是大麥屬植物時(shí)，優(yōu)選物種是大麥(/Z^y/e"/wv"&fl^)。當(dāng)所述植物是黑麥屬植物時(shí)，優(yōu)選物種是黑麥(&oj/ecemi/e)。當(dāng)所述植物是燕麥屬植物時(shí)，優(yōu)選物種是燕麥C4ve朋s她Vfl)。當(dāng)所述植物是甘蔗屬植物時(shí)，優(yōu)選物種是甘蔗CSaccAar"woj^ciViflrww)。當(dāng)所述植物是28高粱屬植物時(shí)，優(yōu)選物種是高粱(&i^/^wvw^i/t)、高粱CSwgA"附Wco/w)或蘇丹草Oyorg/^附^^flMe附e)。當(dāng)所述植物是狼尾草屬植物時(shí)，優(yōu)選物種是御谷(Z^""/W似Wg/""CMW)。當(dāng)所述植物是狗尾草屬植物時(shí)，優(yōu)選物種是粱(&似r/fl/to//cfl)。當(dāng)所述植物是黍?qū)僦参飼r(shí)，優(yōu)選物種是野生稷(尸flw/ew附zm7/fl"w附)或杉卩4支稷(戶flw/e"附v/fgWw附)0當(dāng)戶斤述植物是糝屬(Eleusine)植物時(shí)，優(yōu)選物種是糝子(五/e"wVieamc""0。當(dāng)所述植物是芒屬植物時(shí)，優(yōu)選物種是芒(Afeom^附^Vie附/力。當(dāng)所述植物是羊茅屬(Festuca)tfe物時(shí)，Wi^物^f7《/^5^mc"tf尸MAiflf/wa/"/"、紫^"茅(^Fes/wai或草甸草(i^s似ca/mfe附/s)。當(dāng)所述植物是黑麥草屬植物時(shí)，優(yōu)選物種是黑麥草(丄<//"附/7e"""e)或多花黑麥草(丄<//"附附"/^/7ww附)?；蛘?，所述植物是黑小麥(7Wi"/c仍ecfl/e)。[第68段作為備選方案，在一個(gè)實(shí)施方案中，植物為雙子葉植物，優(yōu)選豆科(Fabaceae)、茶科(Solanaceae)、十字花科(Brassicaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、菊科(Asteraceae)、錦葵科(Malvaceae)、亞麻科(Linaeea)、大戟科(Euphorbiaceae)、旋花科(Convolvulaceae)、薔薇科(Rosaceae)、葫蘆科(Cucurbitaceae)、山茶科(Theaceae)、茜草科(Rubiaceae)、梧桐科(Sterculiaceae)或才計(jì)桔科(Citrus)植物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述植物是豆科、茄科或十字花科植物。所以，在一個(gè)實(shí)施方案中，所述植物是豆科植物，優(yōu)選的屬是大豆屬、豌豆屬、落花生屬(Arachis)、鷹嘴豆屬(Cicer)、蠶豆屬(Vicia)、菜豆屬(Phaseolus)、羽扇豆屬(Lupinus)、苜蓿屬(Medicago)或兵豆屬(Lens)。豆科的優(yōu)選物種是蒺藜苜蓿(M.fm"c幽/fl)、紫花苜蓿(Mstfrtv")、大豆、豌豆、落花生(v4./f，gaefl)、鷹嘴豆(C"r/Cmi附)、蠶豆(K./fl6")、菜豆(戶.vw/gflr/s)、白羽扇豆(丄M/7,Vi"s"幼—、黃羽扇豆(l"/7/""s/wte"s)、狹葉羽扇豆(Z甲Vi"sflrwg""^^/"*苜蓿(3/.sfl,iVfl)或兵豆(Z^附cw//wflr&)。更優(yōu)選是大豆、落花生和紫花苜蓿。最優(yōu)選的物種是大豆。當(dāng)所述植物是茄科時(shí)，優(yōu)選的屬是茄屬、番;55屬、煙草屬或辣椒屬。茄科的優(yōu)選物種是馬鈴薯(S.似6e/Y^"w)、番癡(丄.esc"/ew似附)、煙草(7V;似A"ccw/w)或黃燈籠辣椒(Cc/i/"e"se)。更優(yōu)選的是馬鈴薯。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，所述植物是十字花科，優(yōu)選屬是蕓苔屬或蘿卜屬。十字花科的優(yōu)選物種是歐洲油菜(及w"/;ws)、甘藍(lán)(5.0/micefl)、芥CB.yM""")或蕪青CB.m/m)。更優(yōu)選的物種是歐洲油菜。當(dāng)所述植物是藜科植物時(shí)，優(yōu)選屬是甜菜屬植物。且優(yōu)選物種是甜菜(5.v"/gA)。當(dāng)所述植物是菊科植物時(shí)，優(yōu)選屬是向日葵屬，優(yōu)選物種是向日葵(好.《"""船)。當(dāng)所述植物是錦葵科植物時(shí)，優(yōu)選屬是棉屬或秋葵屬。當(dāng)所述屬是棉屬時(shí)，優(yōu)選物種是陸地棉(G.A/rs"mw)或海島棉(G1.6fl/^wfe附e)。最優(yōu)選的是陸地棉。秋葵屬的優(yōu)選物種是咖啡黃葵(Aesci^"似s)。當(dāng)所述植物是亞麻科時(shí)，優(yōu)選屬是亞麻屬，優(yōu)選物種是亞麻(￡.附/似//^/附《附)。當(dāng)所述植物是大戟科植物時(shí)，優(yōu)選的屬木薯屬、麻風(fēng)樹(shù)屬(Jatropa)、或蓖麻屬(Rhizinus)植物。優(yōu)選物種是木箸(Af.escw/ew似)、麻風(fēng)樹(shù)(/cwiras)或蓖麻(及.co附w""的。當(dāng)所述植物是旋花科植物時(shí)，優(yōu)選屬是番薯屬，優(yōu)選物種是甘薯(l.kto似s)。當(dāng)所述植物是薔薇科時(shí)，優(yōu)選屬是薔薇屬、蘋果屬、梨屬、李屬、懸鉤子屬(Rubus)、茶簾子屬(Ribes)、越橘屬(Vaccinium)或草莓屬植物。優(yōu)選物種是雜交草莓(Fragariaxananassa)。當(dāng)所述植物是葫,科植物時(shí)，優(yōu)選是香瓜屬、西瓜屬(CitruIlus)或南瓜屬(Cucurbita)植物。優(yōu)選物種是黃瓜(C"c"附/sSfl&V"s)、西瓜(Om〃"s/fffm似s)或西葫蘆(OiCM由',fl/;e/w)。當(dāng)所述植物是山茶科時(shí)，優(yōu)選屬是山茶屬，優(yōu)選物種是山茶(C.s/we朋&)。當(dāng)所述植物是茜草科植物時(shí)，優(yōu)選屬是咖啡屬，優(yōu)選物種是小果咖啡(C.amA/c")或中果咖啡(Caiw印^ni)。當(dāng)所述植物是梧桐科時(shí)，優(yōu)選屬是可可屬(Theobroma)，優(yōu)選物種是可可樹(shù)(r.)。當(dāng)所述植物是柑桔屬時(shí)，優(yōu)選物種是甜橙(C.wVie附/s)、檸檬(C.//附o")、桔(C.尸Wc"/flto)、柚(C.woa;/附")，和柑桔屬物種的雜交品種，等等。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述植物是大豆、馬鈴薯或谷物植物。第69段轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染包括植物細(xì)胞的宿主細(xì)胞的適當(dāng)方法在植物生物生物
技術(shù)領(lǐng)域：
內(nèi)已知。任何方法都可以用于將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入植物細(xì)胞中以獲得本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物。轉(zhuǎn)化雙子葉植物的一般方法公開(kāi)于例如美國(guó)專利號(hào)4,940,838和5,464,763等中。轉(zhuǎn)化具體雙子葉植物(例如棉花)的方法在美國(guó)專利號(hào)5,004,863、5，159，135和5，846，797中列出。大豆轉(zhuǎn)化方法于美國(guó)專利號(hào)4,992,375、5,416,011、5,569,834、5，824，877和6,384,301中列出，也可以使用EP0301749B1中的方法。轉(zhuǎn)化方法可包括直接或間接轉(zhuǎn)化法。適當(dāng)?shù)闹苯臃òň垡叶颊T導(dǎo)的DNA才聶取、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化(US4,536,475)、用基因槍的生物發(fā)射技術(shù)(FrommME等人，Bio/Technology.8(9):833-9,1990;Gordon-Kamm等人PlantCell2:603，1990)、電穿孔、在含DNA的溶液中孵育干胚的方法和微注入法。在直接轉(zhuǎn)化法的情況下，所用質(zhì)粒不需要滿足任何特殊要求?？梢允褂煤?jiǎn)單的質(zhì)粒，例如pUC系列的質(zhì)粒、pBR322、M13mp系列和pACYC184等等。如果要從轉(zhuǎn)化的細(xì)胞再生完整的植物，優(yōu)選在質(zhì)粒中有一個(gè)附加的選擇性標(biāo)記基因。直接轉(zhuǎn)化技術(shù)對(duì)雙子葉和單子葉植物都同等適用。[第70段還可以通過(guò)利用農(nóng)桿菌(例如EP0ll6718)的細(xì)菌感染、利用病毒栽體(EP0067553、US4，407，956、WO95/34668、WO93/03161)的病毒感染來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)化或借助花粉轉(zhuǎn)化(EP0270356;WO85/01856;US4,684,611)。農(nóng)桿菌類轉(zhuǎn)化技術(shù)(尤其是對(duì)于雙子葉植物)為本領(lǐng)域公知的技術(shù)。農(nóng)桿菌菌林(例如根癌農(nóng)桿菌或發(fā)根農(nóng)桿菌(爿gr^"cten'M/w/"A/w^"^))包括質(zhì)粒(Ti或Ri質(zhì)粒)和用農(nóng)桿菌感染之后轉(zhuǎn)移入植物的T-DNA元件。該T-DNA(轉(zhuǎn)移DNA)被整合到植物細(xì)胞的基因組中。T-DNA可定位在Ri-或Ti-質(zhì)粒上，或者分開(kāi)包括在所謂的雙元載體中。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法記栽于例如HorschRB等人(1985)Science225:1229中。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化最適用于雙子葉植物，也已經(jīng)適用于單子葉植物。用農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化記載于下列文獻(xiàn)中，例如WhiteFF，VectorsforGeneTransferinHigherPlants,TransgenicPlants,第1巻，EngineeringandUtilization,S.D.Kung和R.Wu編著，AcademicPress,1993，第15-38頁(yè)、JenesB等人TechniquesforGeneTransfer,TransgenicPlants,第1巻，EngineeringandUtilization,S.D.Kung和R.Wu編著，AcademicPress,1993，第128-143頁(yè)和Potrykus(1991)AnnuRevPlantPhysiolPlantMolecBiol42:205-225中，多種組織適用于作為農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)換過(guò)程的起始材料(外植體)，31這些組織包括但不限于愈傷組織(US5,591,616;EP-A1604662)、不成熟胚(EP-A1672752)、花粉(US54,929,300)、苗端(US5，164，310)或適用于植物轉(zhuǎn)化(US5,994,624)。實(shí)際上此處所描述的方法和材料可以與所有本領(lǐng)域已知的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法結(jié)合使用。利用植物育種中的已知方法，本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物可以與相似的轉(zhuǎn)基因植物雜交，或與缺少本發(fā)明核酸的轉(zhuǎn)基因植物雜交，或與非轉(zhuǎn)基因植物雜交，來(lái)產(chǎn)生種子。此外，本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物可包括、和/或與另一種含有一種或多種核酸的轉(zhuǎn)基因植物雜交，從而在該植物和/或其后代中形成轉(zhuǎn)基因的"垛疊"。然后種植種子來(lái)得到雜交的能育的含有本發(fā)明核酸的轉(zhuǎn)基因植物。該雜交能育的轉(zhuǎn)基因植物可以具有特定的通過(guò)母本或通過(guò)父本遺傳的表達(dá)盒。第二代植物可以是近交植物。雜交的能育轉(zhuǎn)基因植物可以是雜交種。本發(fā)明還包括任何這些雜交能育轉(zhuǎn)基因植物的種子。本發(fā)明種子可從能育轉(zhuǎn)基因植物收獲，并用于生長(zhǎng)包括含有所述DNA構(gòu)建體的雜交植物系的本發(fā)明轉(zhuǎn)化植物的后代。[第71段"基因垛疊"也可以用植物轉(zhuǎn)化通過(guò)將兩個(gè)或多個(gè)基因轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核中來(lái)實(shí)現(xiàn)。在轉(zhuǎn)化過(guò)程中多個(gè)基因可以引入細(xì)胞核中，無(wú)論是依次引入還是一次引入。利用針對(duì)多個(gè)連鎖的部分目的序列的單次轉(zhuǎn)基因，可以通過(guò)基因沉默機(jī)制特別是RNAi下調(diào)植物中或目的病原體物種中的多個(gè)基因。在單獨(dú)啟動(dòng)子控制下的垛疊的多個(gè)基因也可以過(guò)表達(dá)，來(lái)得到所需的單個(gè)或多個(gè)表型。含有既包括*達(dá)基因又包括沉默耙基因的基因垛疊的構(gòu)建體也可以引入植物中，獲得單個(gè)或多個(gè)農(nóng)藝學(xué)重要表型。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的核酸序列可以與任何目的多核普酸序列的組合垛疊，以形成所需的表型。這些組合可以產(chǎn)生具有多種性狀組合的植物，這些性狀包括但不限于，疾病抗性、除草劑耐受、產(chǎn)量升高、耐冷和抗旱。這些垛疊組合可以通過(guò)包括但不限于常規(guī)方法或遺傳轉(zhuǎn)化方法雜交育種植物的任何方法形成。如果通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化法垛疊所述性狀，目的多核苷酸可以以任何順序依次組合或同時(shí)組合。例如，如果要引入兩個(gè)基因，這兩個(gè)序列可以包含在分別的轉(zhuǎn)化盒中，或在同一個(gè)轉(zhuǎn)化盒中。這些序列的表達(dá)可以;故同一個(gè)啟動(dòng)子或不同啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)。〖第72段根據(jù)本實(shí)施方案，本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物用包括如下步驟的方法生產(chǎn)制備具有與選擇的CAD樣基因的一部分基本上相同的第一區(qū)和與第一區(qū)互補(bǔ)的第二區(qū)的表達(dá)盒；將該表達(dá)盒轉(zhuǎn)化入植物中；選擇表達(dá)本發(fā)明雙鏈RNA構(gòu)建體的經(jīng)轉(zhuǎn)化植物的子代。[第73段對(duì)線蟲(chóng)感染的增加的抗性是希望能夠遺傳至廣泛的植物中的一般性狀。本發(fā)明可用于減少任何植物寄生線蟲(chóng)造成的農(nóng)作物破壞。優(yōu)選所述寄生線蟲(chóng)屬于誘導(dǎo)巨大細(xì)胞或合胞體細(xì)胞的線蟲(chóng)科。誘導(dǎo)巨大細(xì)胞或合胞體細(xì)胞的線蟲(chóng)發(fā)現(xiàn)于長(zhǎng)針線蟲(chóng)科(Longidoridae)、毛刺線蟲(chóng)科(Trichodoridae)、異皮線蟲(chóng)考牛(Heteroderidae)、才艮結(jié)線蟲(chóng)科(Meloidogynidae)、短體線蟲(chóng)科(Pratylenchidae)或小墊刃科(Tylenchulidae)中。優(yōu)選地，發(fā)現(xiàn)于異皮線蟲(chóng)科或根結(jié)線蟲(chóng)科中。[第74段所以，本發(fā)明所針對(duì)的寄生線蟲(chóng)屬于選自下列組的一個(gè)或多個(gè)屬Naccobus、棘皮線蟲(chóng)屬(Cactodera)、長(zhǎng)形胞嚢線蟲(chóng)屬(Dolichodera)、球胞嚢線蟲(chóng)屬(Globodera)、胞嚢線蟲(chóng)屬(Heterodera)、斑皮線蟲(chóng)屬(Punctodera)、長(zhǎng)4十線蟲(chóng)屬(Longidorus)或才艮結(jié)線蟲(chóng)屬(Meloidogyne)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，寄生線蟲(chóng)屬于選自下組的一個(gè)或多個(gè)屬Naccobus、棘皮線蟲(chóng)屬、長(zhǎng)形胞嚢線蟲(chóng)屬、球胞嚢線蟲(chóng)屬、胞嚢線蟲(chóng)屬、斑皮線蟲(chóng)屬或根結(jié)線蟲(chóng)屬。在更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，寄生線蟲(chóng)屬于選自下組中的一個(gè)或多個(gè)屬球胞嚢線蟲(chóng)屬、胞嚢線蟲(chóng)屬或根結(jié)線蟲(chóng)屬。在進(jìn)一步更優(yōu)選的實(shí)施方案中，寄生線蟲(chóng)屬于選自球胞嚢線蟲(chóng)屬或胞嚢線蟲(chóng)屬中的一個(gè)或兩個(gè)屬。在另一個(gè)實(shí)施方案中，寄生線蟲(chóng)屬于根結(jié)線蟲(chóng)屬。第75段當(dāng)寄生線蟲(chóng)屬于球胞嚢線蟲(chóng)屬時(shí)，其物種優(yōu)選選自蓍草球胞嚢線蟲(chóng)(G."c/^7/e^)、蒿球胞嚢線蟲(chóng)(G."We附/wVie)、枸杞球胞嚢線蟲(chóng)(G.歐蓍草球胞嚢線蟲(chóng)(G.)、喬巴特棘皮線蟲(chóng)(G./1|//)、馬鈴薯白線蟲(chóng)(6!./^///</)、馬鈴薯金線蟲(chóng)(6|.mstod^附&)、煙草球胞嚢線蟲(chóng)(G.似6flcw附)和弗吉亞球胞嚢線蟲(chóng)(G7o幻rfem在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，寄生的球胞嚢線蟲(chóng)屬線蟲(chóng)包括物種馬鈴薯白線蟲(chóng)、煙草球胞嚢線蟲(chóng)或馬鈴薯金線蟲(chóng)中的至少一個(gè)。當(dāng)所述寄生線蟲(chóng)屬于胞嚢線蟲(chóng)屬時(shí)，所述物種優(yōu)選選自由燕麥胞嚢線蟲(chóng)(漢flVe"M)、胡蘿卜胞嚢線蟲(chóng)(7/.omtoe)、鷹嘴豆胞嚢線蟲(chóng)(//.c/cer/)、十字花科胞嚢線蟲(chóng)(漢c尸""/eme)、龍爪視胞嚢線蟲(chóng)(J^flfe/v//)、褐藻胞嚢線蟲(chóng)(好.e/flcA/Wa)、菲氏胞囊線蟲(chóng)(好./7/,^v/)、岡比亞胞嚢線蟲(chóng)(好.gflwWe"w's)、大豆胞嚢線蟲(chóng)(好.、豌豆胞嚢線蟲(chóng)(好.goC/"g/"mi)、蕎麥胞嚢線蟲(chóng)(Mgnw/"wi)、嘩酒花胞嚢(//.A"m"http://)、大麥胞嚢線蟲(chóng)(好./^n/ecii//》、麥類胞嚢線蟲(chóng)(/T./flr^o附)、燕麥胞嚢線蟲(chóng)(//./wayor)、苜蓿胞嚢線蟲(chóng)(//.附^Z/c"g/"/s)、水稻同居胞嚢線蟲(chóng)(K<o;z/c0/")、巴基斯坦胞嚢線蟲(chóng)(妖/mAi^me附/力、玫瑰胞嚢線蟲(chóng)(Mr仍//)、甘蔗胞嚢線蟲(chóng)(〃sflcc/^r/)、甜菜胞嚢線蟲(chóng)(MM^rc/^//)、蜀黍胞嚢線蟲(chóng)(KswgA/)、三葉草胞嚢線蟲(chóng)(//:加/o/iV)、蕁麻胞嚢線蟲(chóng)(好."w/c"e)、木豆胞嚢線蟲(chóng)(好Wgw/)和玉米胞嚢線蟲(chóng)(漢w"e)組成的組中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，寄生胞囊線蟲(chóng)屬線蟲(chóng)包括物種大豆胞嚢線蟲(chóng)、燕麥胞嚢線蟲(chóng)、木豆胞嚢線蟲(chóng)(i/.ca/Vm/)、豌豆胞嚢線蟲(chóng)、三葉草胞嚢線蟲(chóng)、玉米胞嚢線蟲(chóng)或甜菜胞嚢線蟲(chóng)中的至少一個(gè)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，寄生線蟲(chóng)包括大豆胞嚢線蟲(chóng)或甜菜胞嚢線蟲(chóng)的至少一個(gè)物種。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述寄生線蟲(chóng)是大豆胞嚢線蟲(chóng)。第76段當(dāng)所述寄生線蟲(chóng)是根結(jié)線蟲(chóng)屬線蟲(chóng)時(shí)，所述寄生線蟲(chóng)可選自由高粱根結(jié)線蟲(chóng)(A/;flc/wi^1)、小果咖啡線蟲(chóng)(M"m6/cfl)、花生根結(jié)線蟲(chóng)(Af.wemw7Vz)、甘藍(lán)才艮結(jié)線蟲(chóng)aW/e///a)、短尾根結(jié)線蟲(chóng)(Af.6"v/c"M甴)、山茶根結(jié)線蟲(chóng)(iV/.Cfl/MC///fle)、奇氏根結(jié)線蟲(chóng)(M.￡^lVHW7<//)、咖啡根結(jié)線蟲(chóng)(A/:co/e/co/")、短小根結(jié)線蟲(chóng)(A/:a/g"fl)、禾草根結(jié)線蟲(chóng)(2w;gm/Mim'co/fl)、北方才艮結(jié)線蟲(chóng)(M:A"http://a)、南方才艮結(jié)線蟲(chóng)(Af.iViog"/to)、印度才艮結(jié)線蟲(chóng)(Af./m//oi)、海濱根結(jié)線蟲(chóng)(Af./"ormito)、爪哇才艮結(jié)線蟲(chóng)(M;y"v朋/c")、林氏根結(jié)線蟲(chóng)(M//"/)、蘋果根結(jié)線蟲(chóng)(M附"http://)、小頭根結(jié)線蟲(chóng)(3/.w/ciY"/7Afl/fl)、小突才艮結(jié)線蟲(chóng)附/CT0l^/fl)、納西才艮結(jié)線蟲(chóng)(7W;Wfl"W)、薩拉斯根結(jié)線蟲(chóng)(M.s"/"s/)和花生根結(jié)線蟲(chóng)(ikf.f/ifl附es/)組成的組中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述寄生線蟲(chóng)包括以下物種至少之一爪哇根結(jié)線蟲(chóng)、南方根結(jié)線蟲(chóng)、北方根結(jié)線蟲(chóng)、花生根結(jié)線蟲(chóng)或奇氏根結(jié)線蟲(chóng)。3第77段下列實(shí)施例并不意味著限制本發(fā)明要求保護(hù)的范圍，而意在作為某些實(shí)施方案的示例性描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員所想到的對(duì)這些示例性方法的任何改變都應(yīng)落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)施例1:從大豆克隆基因49676534[第78段大豆栽培種威廉姆斯82(G(^/"e附oxcv.Williams82)在瓊脂板上萌發(fā)生長(zhǎng)3天，然后轉(zhuǎn)移至萌發(fā)袋中。一天后，將每個(gè)幼苗與大豆胞嚢線蟲(chóng)第3小種第二階段幼體(J2)—起孵育。孵育后6天，將新生的根組織切成lcm長(zhǎng)的段，固定，在cryomold中包埋，并用已知的方法切片。在PALM顯樣i鏡(P.A丄.M.MicrolaserTechnologiesGmbH，Bernried，德國(guó))下通過(guò)其特有形態(tài)鑒定合胞體細(xì)胞增大的細(xì)胞大小、增厚的細(xì)胞壁和稠密的細(xì)胞質(zhì)，并將其分離出來(lái)^RNA抽提緩沖液中。用已知方法抽提總細(xì)胞RNA、擴(kuò)增并熒光標(biāo)記。從"非合胞體，，和未處理的對(duì)照根分離總RNA作為對(duì)照，進(jìn)行同樣的RNA擴(kuò)增過(guò)程。擴(kuò)增后的RNA與專利大豆cDNA陣列雜交。[第79段1如表1所示，在SCN感染的大豆根部合胞體中，大豆cDNA克隆49676534,皮鑒定為上調(diào)。大豆cDNA克隆49676534(SEQIDNO:l)的^J^酸序列記載于SEQIDNO:4中。根據(jù)SEQIDNO:4與同源的全長(zhǎng)蛋白質(zhì)序列的比對(duì)，測(cè)得49676534cDNA序列(SEQIDNO:l)不是全長(zhǎng)。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>實(shí)施例2。用于大豆轉(zhuǎn)化的雙元栽體構(gòu)建[第80段此示例性方法使用了含有49676534乾基因(SEQIDNO:26)的雙元載體。該載體由49676534耙基因的反義片段(SEQIDNO:2)、間隔區(qū)、該耙基因的正義片段和載體骨架組成。對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l的核苷酸677876的耙基因片段(SEQIDNO:2)用來(lái)構(gòu)建雙元載體RCB584。在這些載體中，用于49676534耙基因的雙鏈RNA在RCB584中的合胞體或根優(yōu)先的MtN3-樣啟動(dòng)子(SEQIDNO:3)控制下表達(dá)。這些啟動(dòng)子優(yōu)先在根和/或合胞體或巨大細(xì)胞中驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。這些轉(zhuǎn)化的選擇性標(biāo)記是來(lái)自擬南芥的突變乙酰羥酸合酶(AHAS)基因，其賦予了對(duì)除草劑ARSENAL的抗性(咪唑煙酸，BASFCorporation,MountOlive,NJ)。突變AHAS的表達(dá)由荷蘭芽的泛素啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)(WO03/102198)。實(shí)施例3.生才艮外植體(rootedexplant)的檢測(cè)[第81段用生根外植體檢測(cè)來(lái)說(shuō)明雙鏈RNA表達(dá)和得到的線蟲(chóng)抗性。該檢測(cè)方法可見(jiàn)共同未決的申請(qǐng)USSN12/001,234，其內(nèi)容通過(guò)引用合并于此。[第82段將來(lái)自大豆栽培種的干凈大豆種子表面滅菌并使其萌發(fā)。[第83段接種前三天，開(kāi)始卸甲的(disarmed)農(nóng)桿菌培養(yǎng)物的過(guò)夜液體培養(yǎng)，例如，含有雙元載體RCB584的卸甲的發(fā)根農(nóng)桿菌林K599。第二天，將培養(yǎng)物涂敷到含有卡那霉素作為選擇劑的LB瓊脂板上。將這些瓊脂板在28。C培養(yǎng)兩天。每50個(gè)要接種的外植體一個(gè)板。含有與苗連接的近端的子葉用作轉(zhuǎn)化的外植體。去除子葉之后，用解剖刀圍繞切除部位刮擦表面。切下并刮過(guò)的子夜是農(nóng)桿菌接種的目標(biāo)物。將制得的外植體浸入如上制備的卸甲的濃發(fā)根農(nóng)桿菌菌落中，以使該菌落能在該切過(guò)并刮過(guò)的表面上可見(jiàn)。然后將外植體放到培一的l。/。瓊脂上，光下共培養(yǎng)6-8天。在轉(zhuǎn)化和共培養(yǎng)后，將大豆外植體轉(zhuǎn)入含有選擇劑的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，例如用于突變的乙酰羥酸合酶(AHAS)基因的S-B5-708(Sathasivan等入PlantPhys.97:1044-50，1991)。在與共培養(yǎng)步驟中同樣的條件下保持培養(yǎng)物。S-B5-708培養(yǎng)基包含0.5xB5鹽、3mMMES、2%蔗糖、lx維生素B5、400jig/ml特美汀、0.8。/。諾布爾瓊脂和lnM咪唑煙酸(用于AHAS基因的選擇劑)(BASFCorporation,FlorhamPark,NJ)，pH為5.8。選擇和才艮部誘導(dǎo)后2到3周，在外植體的切開(kāi)的末端上形成轉(zhuǎn)化的根。將外植體轉(zhuǎn)移至36相同的選擇培養(yǎng)基(S-B5-708培養(yǎng)基)中進(jìn)一步選擇。在該培養(yǎng)基中，一周內(nèi)轉(zhuǎn)基因根良好增殖并適合進(jìn)行繼代培養(yǎng)。將強(qiáng)壯的白色大豆根從生根的外植體切離，并培養(yǎng)于六孔板中的補(bǔ)充有200mg/l特美汀的根生長(zhǎng)培養(yǎng)基(S-MS-606培養(yǎng)基)中。暗處室溫保持培養(yǎng)物。S-MS-606培養(yǎng)基包括0.2xMS鹽和維生素B5，2。/。的蔗糖和200mg/l特美汀，pH為5.8。[第84段繼代培養(yǎng)一至五天后，在多孔板中用表面消毒的線蟲(chóng)幼體接種上述根，用于目的基因或啟動(dòng)子構(gòu)建體檢測(cè)。使用大豆栽培種威廉姆斯82對(duì)照載體和Jack對(duì)照載體根作為對(duì)照。占據(jù)至少半個(gè)孔的每糾艮培養(yǎng)物用表面凈化的大豆胞嚢線蟲(chóng)(SCN)第三小種的第二階段幼體(J2)以500J2/孔的水平接種。然后密封這些板，并放回到25。C下黑暗中的培養(yǎng)箱中。A^每個(gè)雙元栽體轉(zhuǎn)化產(chǎn)生幾個(gè)獨(dú)立的才沐，這些才沐用來(lái)進(jìn)行生物檢定。接種線蟲(chóng)后四周，計(jì)數(shù)每個(gè)孔中的胞嚢。構(gòu)建體RCB584在多個(gè)株中呈現(xiàn)減少的胞嚢數(shù)量的生物檢定數(shù)據(jù)表明了在檢測(cè)的許多林中都有胞嚢數(shù)量減少的普遍趨勢(shì)。[第85段實(shí)施例4.RACE以測(cè)定49676534(SEQIDNO:l)的4^轉(zhuǎn)錄序列[第86段按照說(shuō)明書(shū)的指導(dǎo)，用Invitrogen的GeneRacer試劑盒(L1502-01)擴(kuò)增對(duì)應(yīng)于49676534(SEQIDNO:l)的cDNA序列的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄序列。才艮據(jù)Invitrogen的GeneRacer試劑盒說(shuō)明書(shū)制備SCN感染后6天收獲的大豆根部的總RNA，以根據(jù)說(shuō)明書(shū)指導(dǎo)產(chǎn)生連接到GeneRacerRNAOligo的去磷酸化和脫帽的RNA。制備的RNA根據(jù)GeneRacer試劑盒說(shuō)明書(shū)反轉(zhuǎn)錄，并用作用于PCR的RACE文庫(kù)模板，以根據(jù)GeneRacer試劑盒說(shuō)明書(shū)用首次和第二(巢氏)PCR反應(yīng)分離5，cDNA末端。[第87段在含有溴化乙錠的瓊脂糖凝膠中通過(guò)皿電泳分離第二次PCR反應(yīng)的產(chǎn)物?？捎^察到為清楚條帶的特定產(chǎn)物，將其從皿上切下。根據(jù)說(shuō)明書(shū)從瓊脂糖凝膠中純化片段并克隆到pCR4-TOPO載體(Invitrogen)中，然后才艮據(jù)說(shuō)明書(shū)指導(dǎo)轉(zhuǎn)化至TOP10OneShot細(xì)胞(Invitrogen)中。小量制備得到的克隆并測(cè)序。記為SEQIDNO:5的一個(gè)測(cè)序片段與SEQIDNO:l的49676534cDNA序列比對(duì)。SEQIDNO:5和SEQIDNO:l的比對(duì)示于圖3中?；谠摫葘?duì)結(jié)果，分離出推定的全長(zhǎng)毗連群序列，記為SEQIDNO:6。在SEQIDNO:6田比連群序列的>^34~1107部分有一個(gè)開(kāi)放閱讀框。該開(kāi)放閱讀框序列記為SEQIDNO:26。SEQIDNO:6的堿基34~1107部分的開(kāi)放閱讀框的^J^酸序列記為SEQIDNO:7。實(shí)施例5.同源物的描述[第88段如實(shí)施例3中所述，構(gòu)建體RCB584導(dǎo)致雙鏈RNA分子的表達(dá)，該雙鏈RNA分子靶向SEQIDNO:l并在與線蟲(chóng)可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子有效地連接且在大豆根部表達(dá)時(shí)會(huì)導(dǎo)致胞嚢數(shù)量減少。如實(shí)施例4中所述，對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l的基因的推定全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄序列含有具有SEQIDNO:7中所述的^J^酸序列的開(kāi)放閱讀框。對(duì)SEQIDNO:7中所述^L&酸序列的基因同源物的鑒定可鑒別其它序列，其可以能夠調(diào)節(jié)SEQIDNO:l轉(zhuǎn)錄物導(dǎo)致降低的線蟲(chóng)數(shù)量。為了研究該可能性，用SEQIDNO:7所述的氨基酸序列鑒定同源基因。有可能表達(dá)特異性針對(duì)同源基因DNA的雙鏈RNA也會(huì)導(dǎo)致如下結(jié)果當(dāng)在^f艮中表達(dá)時(shí)，通過(guò)靶向SEQIDNO:l和SEQIDNO:6所述的轉(zhuǎn)錄物而使得胞嚢數(shù)量減少。鑒定出具有與SEQIDNO:7和SEQIDNO:26分別同源的氨基酸和DNA序列的基因樣本，記為SEQIDNO:8-25，并示于圖1中。所述同源物代表SEQIDNO:7所述基因的一定范圍內(nèi)的同源性。鑒定出的SEQIDNO:7的截短了的同源物的U酸比對(duì)示于圖4中。表示鑒定出的同源物與SEQIDNO:7相互之間的氛基酸同一性百分比的矩陣表示于圖5中。表示鑒定出的同源物和SEQIDNO:26相互之間的DNA序列同一性百分比的矩陣表示于圖6中。[第89段本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)知曉，或僅僅通過(guò)常規(guī)的實(shí)驗(yàn)就能夠確定此處描述的本發(fā)明具體實(shí)施方式的許多等同物。所附權(quán)利要求書(shū)意在涵蓋這些等同物。權(quán)利要求1、一種雙鏈RNA分子，包含i)第一鏈，包含與CAD-樣基因的一部分基本上相同的序列；和ii)第二鏈，包含與第一鏈基本上互補(bǔ)的序列，其中所述CAD-樣基因的一部分是選自下組的多核苷酸的一部分a)包含SEQIDNO1、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO1、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸有至少70％序列同一性的多核苷酸；d)編碼與具有SEQIDNO7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽有至少70％序列同一性的多肽的多核苷酸；e)包括具有SEQIDNO1、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中所限定序列的多核苷酸的至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少50個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少100個(gè)連續(xù)核苷酸或至少200個(gè)連續(xù)核苷酸片段的多核苷酸；f)包含片段的多核苷酸，所述片段編碼具有SEQIDNO7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽的生物活性部分；g)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括具有SEQIDNO1、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中所限定序列的多核苷酸的至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少50個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少100個(gè)連續(xù)核苷酸或至少200個(gè)連續(xù)核苷酸；和h)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括編碼具有SEQIDNO7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽的多核苷酸至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少50個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少100個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少200個(gè)連續(xù)核苷酸。2、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA,其中所述多核普酸包含SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26限定的序列。3、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核苷酸與具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸有至少70%序列同一性。4、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核苷酸編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽。5、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核苷酸編碼與具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽有至少70%序列同一性的多肽。6、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核苷酸在嚴(yán)緊^下與包含SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸雜交。7、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核苷酸包含編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽的生物活性部分的片段。8、一種雙鏈RNA分子庫(kù)，包括多種RNA分子，每種RNA分子包含長(zhǎng)度為約19-24個(gè)核苷酸的雙鏈區(qū)，其中所述雙鏈RNA分子衍生自選自下組的多核苷酸的一部分a)包含SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸有至少卯％序列同一性的多核苷酸；和d)編碼與具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽有至少90%序列同一性的多肽的多核苷酸。9、如權(quán)利要求8所述的雙鏈RNA庫(kù)，其中所述多核普酸包含SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列。10、如權(quán)利要求8所述的雙鏈RNA庫(kù)，其中所述多核苷酸與具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸有至少卯％序列同一性。11、如權(quán)利要求8所述的雙鏈RNA庫(kù)，其中所述多核苷酸編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽。12、如權(quán)利要求8所述的雙鏈RNA庫(kù)，其中所述多核苷酸編碼與具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽有至少90%序列同一性的多肽。13、一種轉(zhuǎn)基因植物，能夠表達(dá)與CAD樣基因的一部分基本上相同的雙鏈RNA，其中所述CAD樣基因的一部分來(lái)自選自下組的多核苷酸a)包含SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸有至少70%序列同一性的多核苷酸；d)編碼與具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽有至少70%序列同一性的多肽的多核苷酸；e)包括具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中所限定序列的多核普酸的至少19個(gè)連續(xù)核香酸、或至少50個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少100個(gè)連續(xù)核苷酸或至少200個(gè)連續(xù)核苷酸片段的多核苦酸；i)包含片段的多核苷酸，所述片段編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽的生物活性部分；g)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中所限定序列的多核苷酸的至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少50個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少100個(gè)連續(xù)核苷酸或至少200個(gè)連續(xù)核苷酸；和h)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽的多核苷酸至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少50個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少100個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少200個(gè)連續(xù)核苷酸。14、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述雙鏈RNA包括多種RNA分子，每種RNA分子包含長(zhǎng)度為約1924個(gè)核苷酸的雙鏈區(qū)，其中所述RNA分子衍生自選自下組的多核苷酸的一部分a)包含SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸有至少90%序列同一性的多核苷酸；和d)編碼與具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽有至少卯％序列同一性的多肽的多核苷酸。15、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述植物選自玉蜀黍、小麥、大麥、高粱、黑麥、黑小麥、稻、甘蔗、柑桔樹(shù)、菠蘿、椰子、香蕉、咖啡、茶、煙草、向日葵、豌豆、苜蓿、大豆、胡蘿卜、芽菜、番茄、馬鈴薯、棉花、煙草、茄子、胡椒、油菜、蕓苔、甜菜、巻心菜、花椰菜、嫩莖花椰菜、萵苣、百脈才艮屬物種、蒺藜苜蓿、prerennialgrass、黑麥草和擬南芥。16、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述植物是大豆。17、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述多核苷酸包含SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列。18、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述多核苷酸與具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸有至少70%序列同一性。19、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述多核苷酸編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽。20、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述多核苷酸編碼與具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽有至少70%序列同一性的多肽。21、一種制備能夠表ii^植物中抑制CAD樣耙基因表達(dá)的雙鏈RNA的轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述方法包括下列步驟i)制備具有與CAD樣基因的一部分基本上相同的區(qū)域的核酸，其中所述核酸一旦在所述植物中表達(dá)，能夠形成雙鏈轉(zhuǎn)錄物；ii)用所述核酸轉(zhuǎn)化受體植物；iii)生成所述受體植物的一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)基因子代；和iv)選擇表達(dá)所述轉(zhuǎn)錄物的子代，其中所述靼基因的一部分是選自下組中的多核苷酸的19-500個(gè)核苷酸a)包含SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸有至少70%序列同一性的多核苷酸；d)編碼與具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽有至少70%序列同一性的多肽的多核苷酸；e)包括具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中所限定序列的多核苷酸的至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少50個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少100個(gè)連續(xù)核苷酸或至少200個(gè)連續(xù)核苷酸片段的多核苷酸；f)包含片段的多核苷酸，所述片段編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽的生物活性部分；g)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸的至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少50個(gè)連續(xù)核*酸、或至少100個(gè)連續(xù)核苷酸或至少200個(gè)連續(xù)核苷酸；和h)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽的多核苷酸的至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少50個(gè)連續(xù)核苷酸、或至少100個(gè)連續(xù)核普酸、或至少200個(gè)連續(xù)核苷酸。22、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述雙鏈RNA包括多種RNA分子，每種RNA分子包含長(zhǎng)度為約19~24個(gè)核苷酸的雙鏈區(qū)，其中所述RNA分子衍生自選自下組的多核苷酸a)包含SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26中限定的序列的多核苦酸有至少卯％序列同一性的多核苷酸；和d)編碼與具有SEQIDNO:7、9、11、13、15、17、19、21、23或25中所限定序列的多肽有至少卯％序列同一性的多肽的多核普酸。23、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述植物選自大豆、馬鈴薯、番茄、花生、棉花、木薯、咖啡、椰子、菠蘿、柑桔樹(shù)、香蕉、玉米、油菜、甜菜、向日葵、高粱、小麥、燕麥、黑麥、大麥、稻、嫩莢菜豆、利馬豆、豌豆和煙草。24、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述植物是大豆。25、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述雙鏈RNA在植物根部或線蟲(chóng)采食位點(diǎn)表達(dá)。全文摘要本發(fā)明涉及能夠在植物中抑制對(duì)于建立或維持線蟲(chóng)感染必需的基因表達(dá)的雙鏈RNA組合物和轉(zhuǎn)基因植物，和其相關(guān)方法。具體而言，本發(fā)明涉及RNA干擾抑制目的CAD樣植物基因表達(dá)的用途，還涉及產(chǎn)生具有提高的寄生線蟲(chóng)抗性的植物。文檔編號(hào)C12N15/11GK101605895SQ200880004337公開(kāi)日2009年12月16日申請(qǐng)日期2008年2月5日優(yōu)先權(quán)日2007年2月8日發(fā)明者A·威格申請(qǐng)人:巴斯福植物科學(xué)有限公司