專利名稱：從鹽藻渣中制備水解低聚糖和短肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于鹽藻利用技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及從脫除;5—胡蘿卜素的鹽藻渣中制備鹽藻糖和 短肽的方法。
二背景技術(shù)：
鹽藻又稱鹽藻，是綠色單細(xì)胞藻，形態(tài)微小，具有糖蛋白形成的包被。主要分布在近海
水域，對鹽度的適應(yīng)范圍為0.2 3.5%，具有繁殖快、生存力強(qiáng)、適于養(yǎng)殖等特點(diǎn)。我國海 岸線長，加之有大量適合鹽藻生存的內(nèi)陸鹽湖，因此鹽藻分布廣，資源豐富。鹽藻含有豐富 的油脂、yS—胡蘿卜素、蛋白質(zhì)、多糖類化合物和Ca、 P、 Zn等微量礦物質(zhì)，包括人類必需 的8種氨基酸等系列可利用的物質(zhì)。目前內(nèi)蒙古吉蘭泰公司已經(jīng)實(shí)現(xiàn)從鹽藻中提取甘油和yS 一胡蘿卜素已形成產(chǎn)業(yè)化，有大量的鹽藻渣資源。在提取^一胡蘿卜素的鹽藻渣中，還有超 過10%的多糖類、超過30%的蛋白質(zhì)及礦質(zhì)等營養(yǎng)成分。
近年來的研究發(fā)現(xiàn)，糖類在人體免疫系統(tǒng)中起十分關(guān)鍵的作用，在人體對抗病毒及細(xì)菌 侵襲的防御過程中尤其如此。例如，鹽藻中的硫酸化多糖可抑制敗血癥病毒(VHSV)和非洲豬 熱病毒(AFSV)的復(fù)制?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)鹽藻多糖復(fù)合物具有較強(qiáng)的藥物生物活性，能有效調(diào)節(jié)機(jī)體 免疫功能，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，明顯抑制60%以上實(shí)體瘤S180的生長。
短肽是由二到卜幾個(gè)氨基酸組成的具有生物活性的肽類，又稱功能性短肽。功能性短肽 屬于生物活性肽，具有多種生物學(xué)功能，如激素作用、抗血栓、抗高血壓、抗氧化、免疫調(diào) 節(jié)、降膽固醇、抑制細(xì)菌、促進(jìn)生長、調(diào)節(jié)食品風(fēng)味及硬度等。現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，蛋 白質(zhì)經(jīng)消化道中酶的作用后分解成游離氨基酸和短鈦，機(jī)體吸收蛋白質(zhì)營養(yǎng)一部分以游離氨 基酸的形式吸收，另一部分則以短肽形式吸收，且機(jī)體對短肽的吸收速度大于游離氨基酸。 此外，短肽無異味，滲透壓低，因此，其生物效價(jià)和營養(yǎng)價(jià)值更高，用短肽開發(fā)保健食品和 保健用品的前景更好。所以，功能性短肽的制備已成為近年來的研究熱點(diǎn)。
現(xiàn)有制備鹽藻糖和短肽的方法，如《中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)》2005年11月第35巻第六期的 "鹽藻多糖提取工藝的研究"一文，公開的方法是，以提取過胡蘿卜素的鹽藻渣粉為原料，先 按固液比為1:16，用NaOH調(diào)節(jié)pH為9的弱堿水，在溫度為IOO'C的條件下，提取10小時(shí)，' 醇沉分離，制得多糖粗品(及蛋白多糖)，后用酶解法，即先加多種水解酶(中性蛋白酶和木瓜 蛋白酶及胰蛋白酶)，后滅酶，.然后醇沉分離，制得糖含量為29.01%的混合多糖。該方法提 取時(shí)間高達(dá)10小時(shí)，會導(dǎo)致多糖及蛋白質(zhì)大量水解，雖然將鹽藻多糖和鹽藻蛋白質(zhì)用醇沉淀 的方式從提取液中提出并用多種酶水解，但是，并未對蛋白質(zhì)的酶水解物進(jìn)行有效深加工及 利用，即同時(shí)制備出短肽，資源利用率低。此外，也未對脫y8—胡蘿卜素的鹽藻渣中存在的 大量礦質(zhì)營養(yǎng)進(jìn)行利用。又如公開號為CN101129324A的"一種鹽藻二次提取液產(chǎn)品及其在皮 膚保健用日用化工產(chǎn)品中的應(yīng)用"專利，公開的方法是，以除去脂溶性物質(zhì)的鹽藻粉為原料， 先用60 70%的乙醇為提取液，在75 100'C下，提取3 4個(gè)小時(shí)，后進(jìn)行減壓蒸餾回收乙醇，再調(diào)整濃縮液的pH值為5 10，然后用蒸餾水稀釋至畫體含量為3 10%，加入防腐劑 制得成品。該方法只是提取出鹽藻渣中的小分子營養(yǎng)物質(zhì)，例如礦質(zhì)、氨基酸等，未對鹽藻 多糖及蛋白質(zhì)進(jìn)行利用，資源利用率極低。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有制備鹽藻糖和短肽方法的不足之處，提供一種從鹽藻渣中制備 水解低聚糖和短肽的方法。具有從脫y^—胡蘿卜素的鹽藻渣中同時(shí)制備水解低聚糖、水解鹽 藻多糖、短肽及皮膚能量激活液等多種產(chǎn)品，資源綜合利用率高的特點(diǎn)，制備工藝無"三廢" 污染，屬于綠色生產(chǎn)；其產(chǎn)品既可用于閂化行業(yè)，也可用于保健、食品及飼料等行業(yè)。
本發(fā)明的機(jī)理脫y6—胡蘿卜素鹽藻殘?jiān)屑s含10%鹽藻多糖，鹽藻多糖是以半乳糖、 阿拉伯糖、木糖、葡萄糖等單糖聚合成的高分子，單糖之間主要是以/ 一l， 2、 ^一1， 3、 一l， 4糖苷鍵連接，溶解于熱堿性水溶液，不溶于冷水或高濃度的低溫醇溶液。因此，采用 弱堿性水溶液，先從鹽藻渣屮提取出鹽藻多糖，經(jīng)過超濾分離礦質(zhì)離子及小分子有機(jī)物，再 用葡聚糖酶(水解P—1， 3—糖苷鍵)、纖維素酶(水解-一l， 4糖苷鍵)等水解，獲得分子量小 于3000Da的水解鹽藻低聚糖液，再經(jīng)過超濾截留、寘空濃縮、冷凍干燥，獲得水解鹽藻低 聚糖凍干粉。鹽藻多糖為含蛋白的復(fù)合物，分子量最高達(dá)數(shù)十萬Da，用蛋白酶水解其肽鍵， 制備出小分子短肽。將水解超濾截留液調(diào)節(jié)pH值，用中性蛋A酶和風(fēng)味蛋白酶水解，獲得 平均分子量為600Da的短肽溶液，水解經(jīng)過超濾、濃縮和凍干，獲得鹽藻短肽凍干粉。此外， 脫P(yáng) —胡蘿卜素的鹽藻殘?jiān)鞍壮^30%，鹽藻蛋白質(zhì)是氨基酸以肽鍵聚合而成的高分子， 溶解于堿性溶液。分子量高的蛋白質(zhì)水溶性、穩(wěn)定性均差，大量的羧基，氨基及側(cè)鏈基團(tuán)被 壓縮或掩蔽，抗氧化、抗衰老活性低，因此必須進(jìn)行水解，降低其分子量，使大量側(cè)鏈功能 基團(tuán)暴露，方可提升其功能性質(zhì)。蛋白酶是專門水解肽鍵的生物催化劑，不同種類的蛋白酶 可水解不同氨基酸組成的肽鍵。因此用數(shù)種酶聯(lián)合水解鹽藻蛋白質(zhì)，可獲得不同分子量的水 解鹽藻肽。將水解鹽藻肽進(jìn)行納濾分級分離，再進(jìn)行濃縮和凍干，即獲得平均分子量為5KDa 的水解鹽藻肽和平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的 一種從鹽藻渣中制備水解低聚糖和短肽的方法，以脫除y — 胡蘿卜素的鹽藻渣為原料，先經(jīng)多次分離及酶水解，后經(jīng)濃縮、千燥，制得多種產(chǎn)品，具體 的方法歩驟如下
(l)對鹽藻渣進(jìn)行分離
以提取/9一胡蘿卜素的鹽藻渣粉為原料，按鹽藻渣粉的重量(克)去離子水的體積(升) 比為1:5 10的比例，先在容器中加入去離子水，再放入鹽藻渣粉，攪拌至鹽藻渣粉分散均 勻后，接著用超盧波處理30 60分鐘，然后用10000 13000轉(zhuǎn)/分的速度，離心5 20 分鐘，分別收集下層沉淀和上層清液。收集的下層沉淀用于制備水解鹽藻肽，收集的上層清 液用截留分子量為5KDa的超濾器進(jìn)行超濾分離，再分別收集超濾濾過液和截留濃縮液，濾 過液中含有小分子量無機(jī)鹽、氨基酸、三磷酸腺苷(ATP)、維生素等，截留濃縮液中含有大分 子量的多糖類化合物、蛋白質(zhì)等。(2) 制備皮膚能量激活液
第(l)步完成后，將第(l)歩收集的超濾濾過液置于真空濃縮器中，先用氫氧化鉀(KOH)溶 液調(diào)節(jié)其pH值為5.5 6.0，后在溫度為80 90°C、真空度為0.06 0.08Mpa的條件下，進(jìn) 行真空濃縮至可溶性固形物濃度為10 12%，就制備出K離子濃度為40 60mg/mL、氨基 酸濃度為18 25mg/mL及磷酸鹽濃度為13 16mg/mL的皮膚能量激活液，其收得率為脫— 胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的8 12%。
(3) 對截留濃縮液進(jìn)行分離
第P)歩完成以后，對第(l)歩收集的截留濃縮液，按截留濃縮液蒸餾水的體積比為1:5 IO的比例，先在截留濃縮液中加入蒸餾水并攪拌均勻后，再轉(zhuǎn)移至提取罐中，用稀氫氧化鈉 (NaOH)溶液調(diào)節(jié)其pH值為9 10，加熱升溫至80 90°C，在攪拌下保溫提取5 10小時(shí)。 提取完成后，用換熱器降溫至40 5(TC，再泵入管式離心機(jī)，以10000 14000轉(zhuǎn)/分的速 度，進(jìn)行離心分離，分別收集下層沉淀和上層清液。將收集的下層沉淀稱重，然后加入其5 IO倍重量的、pH值為9 10的蒸餾水，進(jìn)行洗滌。再以10000 14000轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行離心 分離，再分別收集下層沉淀和上層清液。如此重復(fù)洗滌和分離1 2次。最后，分別將各次收 集的下層沉淀和上層清液合并。
(4) 制備水解鹽藻低聚糖和多糖凍干粉
① 制備水解鹽藻多糖溶液
第P)歩完成以后，對第(3)歩最后合并的各次上層清液，先用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)其pH值為 5 6，再加入脫除^一胡蘿卜素鹽藻質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2 4%的葡萄聚糖酶和1 3%的纖維素 酶，在溫度為50 6(TC條件下，攪拌酶水解3 6小時(shí)，就制備出水解鹽藻多糖溶液。
② 超濾分離
第(4)-①步完成以后，對第(4)-①步制備出的水解鹽藻多糖溶液，用截留分子量為3KDa 的超濾器，在壓力為0.1 0.25Mpa下，進(jìn)行超濾分離，將水解鹽藻多糖溶液分離為分子量小 于3KDa的水解鹽藻低聚糖溶液(即過濾液)和分子量大于3KDa的水解鹽藻多糖溶液(即截留 液)。分別收集超濾濾過液和超濾截留液。
③ 制備水解鹽藻低聚糖凍干粉
第(4)-②歩完成后，先將(4)-②歩收集的分子量小于3KDa水解鹽藻低聚糖過濾液，置于抽 濾機(jī)中，用截留分子量為300Da的納濾膜，進(jìn)行濃縮，濃縮至截留液中可溶性固形物的質(zhì)量 濃度為10 15%為止，就制備出水解鹽藻低聚糖濃縮液。然后，將水解鹽藻低聚糖濃縮液 置于冷凍干燥機(jī)中，在真空度為20 60Pa、溫度為一50 一6(TC下，進(jìn)行真空干燥36 40 小時(shí)，就制備出分子量小于3KDa的水解鹽藻低聚糖凍干粉，其收得率為脫除一胡蘿卜素鹽 藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的5 7%。
④ 制備水解鹽藻多糖凍干粉
第(4)-②歩完成后，先將第(4)-②步收集的分子量大于3KDa水解鹽藻多糖截留液置于低 溫冰箱中，預(yù)凍1 3小時(shí)，然后在真空度為20 60Pa、溫度為一50^^ — 6CTC條件下，進(jìn)行冷凍干燥24 30小時(shí)，就制備出平均分子量為12KDa的水解鹽藻多糖凍干粉，其收得率為脫-一胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的1.5 2.5%。 (5)制備水解鹽藻短肽凍干粉
① 制備水解鹽藻蛋內(nèi)液
第(4)歩完成后，將第(3)歩最后合并的下層沉淀，置于水解釜中，先按沉淀質(zhì)量:純凈水 體積比為1:5 S的比例，向水解釜中加入純凈水，再攪拌至沉淀均勻分散于純凈水中。接著 用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為8 9，再加熱升溫至50 6(TC后，加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為 2% 5%的堿性蛋0酶或胰蛋白酶，保溫?cái)嚢杳杆?0 60分鐘后，再次加入沉淀質(zhì)量百分 數(shù)1 2%的肽酶(如風(fēng)味蛋白酶或木瓜蛋白酶等)，在攪拌下繼續(xù)酶水解1.5 3.5小時(shí)。最后 加熱升溫至80 90°C ，并恒溫保持15 20分鐘，就制備出酶水解鹽藻蛋白液。
② 離心分離
第(5) —①歩完成后，將第(5) —①步制備出的水解鹽藻蛋白液泵入管式離心機(jī)屮，以 12000 14000轉(zhuǎn)/分的速度，進(jìn)行離心分離10 20分鐘，分別收集沉淀和上層清液。對收集 的沉淀，保留備用，作制備微生物肥料的發(fā)酵基料。將收集的清液稱重并置于脫色裝置中， 升溫至80 9(TC后，加入其重量3 5%的木質(zhì)活性炭，攪拌脫色10 20分鐘。脫色完成后， 棄活性炭，收集脫色液。將收集的脫色液放入真空過濾器中進(jìn)行真空抽濾，收集過濾液。然 后將收集的過濾液泵入截留分子量為800Da的納濾器中，在壓力為0.1 0.3Mpa下，進(jìn)行納 濾濃縮，直至納濾截留液中的可溶性固形物的質(zhì)量濃度為10 15%為止，就制備出平均分子 量為5KDa的水解鹽藻肽截留濃縮液；收集納濾濾過液，并在壓力為0.3 0.6Mpa下，進(jìn)行 反滲透濃縮，.直至反滲透濃縮液中的口I溶性固形物的質(zhì)量濃度為10 15%為止，就制備出平 均分子量為600Da的水解鹽藻短肽濃縮液。'
③ 制備水解鹽藻短肽凍干粉
第(5)—②歩完成以后，將第(5)—②歩制備出的平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽濃縮液置 于低溫冰箱中，預(yù)凍1~3小時(shí)，然后置于冷凍干燥機(jī)中，在壓力為25 50Pa、溫度為一50 一6(TC條件下，進(jìn)行冷凍干燥24 30小時(shí)，就制備出總氮含量為12.5 15%、平均分子量 為600Da的水解鹽藻短肽凍干粉，總收得率為脫yS—胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的16 18 %。
④ 制備水解鹽藻肽凍干粉
第(5)—③歩完成后，將(5)—②步制備出的平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽截留濃縮液 置于低溫冰箱中，預(yù)凍1 3小時(shí)，再置于冷凍干燥機(jī)中，在壓力為25 50Pa、溫度為一50 一6(TC下，進(jìn)行冷凍干燥20~24小時(shí)，就制備出總氮量為12.0~14.5%的平均分子量為5KDa 的水解鹽藻肽凍干粉，總收得率為脫/S —胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的8 12%。
本發(fā)明采用上述技術(shù)方案后，主要有以下效果
(l)綜合利用鹽藻渣制備出多種產(chǎn)品。本發(fā)明方法能綜合利用脫p—胡蘿卜素鹽藻渣，同 時(shí)制備出皮膚能量激活液、水解鹽藻低聚糖和多糖和短肽等日化、醫(yī)藥及保健多種產(chǎn)品，生
11產(chǎn)過程中產(chǎn)生的水解鹽藻蛋白沉淀殘?jiān)急Ａ舨粭?，留作制備微生物肥料的發(fā)酵基料。充 分利用鹽藻資源，降低各產(chǎn)品的能耗及生產(chǎn)成本。
(2)生產(chǎn)T藝簡單。生產(chǎn)過稃無"三廢"排放。本發(fā)明方法多次采用膜分離、真^濃縮、冷 凍干燥新技術(shù)，這不但原料利用率高，且生產(chǎn)過程中無"三廢"排放，是節(jié)能、綠色環(huán)保的制 備方法，有利于推廣應(yīng)用。
采用本發(fā)明方法制備出的產(chǎn)品，可廣泛應(yīng)用于閂化護(hù)膚、保濕、營養(yǎng)、抗氧化、抗衰老 等產(chǎn)品中；也可用于保健品，提高人體免疫機(jī)能，抗腫瘤的產(chǎn)品中；還可作為單細(xì)胞蛋白食 品，補(bǔ)充氮素營養(yǎng)、抗輻射的產(chǎn)品中；其殘?jiān)€可用于制備微生物發(fā)酵肥料。具體實(shí)施例方式
結(jié)合具體實(shí)施方式
，進(jìn)一歩說明本發(fā)明。
實(shí)施例1
一種從鹽藻中制備水解低聚糖和短肽方法的具體歩驟如下
(l)對鹽藻渣進(jìn)行分離
以提取;3—胡蘿卜素的鹽藻渣粉為原料，按鹽藻渣粉的重量(克)去離子水的體積(升) 比為1:5的比例，先在容器中加入去離子水，再放入鹽藻渣粉，攪拌至鹽藻渣粉分散均勻后， 接著用超聲波處理30分鐘，然用后10000轉(zhuǎn)/分的速度，離心5分鐘，分別收集下層沉淀和 上層清液。收集的下層沉淀用于制備水解鹽藻肽，收集的上層清液用截留分子量為5KDa的 超濾器進(jìn)行超濾分離，再分別收集超濾濾過液和截留濃縮液，濾過液中含有小分子量無機(jī)鹽、 氨基酸、三磷酸腺苷(ATP)、維生素等，截留濃縮液中含有大分子量的多糖類化合物、蛋白質(zhì) 等。
②制備皮膚能量激活液
第(D歩完成后，將第(l)步收集的超濾濾過液置于真空濃縮器中，先用氫氧化鉀(KOH) 溶液調(diào)節(jié)其pH值為5.5，后在溫度為8(TC、真空度為0.06Mpa的條件下，進(jìn)行真空濃縮至可 溶性固形物沐度為10%，就制備出K離子濃度為40mg/mL，氨基酸濃度為18mg/mL及磷酸 鹽濃度為13mg/mL的皮膚能量激活液，其收得率為脫;S —胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的8%。
(3) 對截留濃縮液進(jìn)行分離
第(2)歩完成以后，對第(l)步收集的截留濃縮液，按截留濃縮液蒸餾水的體積比為1:5 的比例，先在截留濃縮液中加入蒸餾水并攪拌均勻后，再轉(zhuǎn)移至提取罐中，ffl稀氫氧化鈉 (NaOH)溶液調(diào)節(jié)其pH值為9，加熱升溫至80°C，在攪拌下保溫提取5小時(shí)。提取完成后， 用換熱器降溫至4(TC，再泵入管式離心機(jī)，以10000轉(zhuǎn)/分的速度，進(jìn)行離心分離，分別收集 下層沉淀和上層清液。將收集的下層沉淀稱重，然后加入其5倍重量的、pH值為9的蒸餾水， 進(jìn)行洗滌。再以10000轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行離心分離，再分別收集下層沉淀和上層清液。如此重 復(fù)洗滌和分離2次。最后，分別將各次收集的下層沉淀和上層清液合并。
(4) 制備水解鹽藻低聚糖和多糖凍干粉
12① 制備水解鹽藻多糖溶液
第(3)歩完成以后，對第(3)歩最后合并的各次上層清液，先用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)其pH值為 5，再加入脫除^一胡蘿卜素鹽藻質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2%的葡萄聚糖酶和1%的纖維素酶，在溫度 為5(TC條件下，攪拌酶水解3小時(shí)，就制備出水解鹽藻多糖溶液。
② 超濾分離
第(4)-①歩完成以后，對第(4)-①歩制備出的水解鹽藻多糖溶液，用截留分子量為3KDa 的超濾器，在壓力為O.lMpa下，進(jìn)行超濾分離，將水解鹽藻多糖溶液分離為分子量小于3KDa 的水解鹽藻低聚糖溶液(即過濾液)和分子暈大于3KDa的水解鹽藻多糖溶液(即截留液)。分別 收集超濾濾過液和超濾截留液。
③ 制備水解鹽藻低聚糖凍干粉 ， 第(4)-②步完成后，先將(4)-②步收集的分子量小于3KDa水解鹽藻低聚糖過濾液，置于
抽濾機(jī)中，用截留分子量為300Da的納濾膜，進(jìn)行濃縮，濃縮至截留液中可溶性固形物的質(zhì) 量濃度為10%為止，就制備出水解鹽藻低聚糖濃縮液。然后，將水解鹽藻低聚糖濃縮液置于 冷凍干燥機(jī)中，在真空度為20Pa，溫度為一50'C下，進(jìn)行真空干燥36小時(shí)，就制備出分子 量小T 3KDa的水解鹽藻低聚糖凍干粉，其收得率為脫除一胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的5 %。
④ 制備水解鹽藻多糖凍干粉
第(4)-②歩完成后，先將第(4)-②歩收集的分子量大于3KDa水解鹽藻多糖截留液置于低 溫冰箱中，預(yù)凍1小時(shí)，然后在真空度為20Pa，溫度為一5(TC條件下，進(jìn)行冷凍干燥24小 時(shí)，就制備出平均分子量為12KDa的水解鹽藻多糖凍干粉，其收得率為脫^一胡蘿卜素鹽藻 渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的1.5%。
(5)制備水解鹽藻短肽凍干粉
① 制備水解鹽藻蛋白液
第(4)步完成后，將第(3)歩最后合并的下層沉淀，置于水解釜中，先按沉淀質(zhì)量純凈水 體積比為1:5的比例，向水解釜中加入純凈水，再攪拌至沉淀均勻分散于純凈水中。接著用 稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為8，冉加熱升溫至50'C后，加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2%的堿性 蛋白酶，保溫?cái)嚢杳杆?0分鐘后，再次加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)1%的肽酶(如風(fēng)味蛋白酶;)， 在攪拌下繼續(xù)酶水解1.5小時(shí)。最后加熱升溫至80"C，并恒溫保持15分鐘，就制備出酶水解 鹽藻蛋白液。
② 離心分離
第(5)—①步完成后，將第(5;i —①步制備出的水解鹽藻蛋白液泵入管式離心機(jī)中，以12000 轉(zhuǎn)/分的速度，進(jìn)行離心分離10分鐘，分別收集沉淀和上層清液。對收集的沉淀，保留備用，
作制備微生物肥料的發(fā)酵基料。將收集的清液稱重并置于脫色裝置中，升溫至8crc后，加入
其重量3%的木質(zhì)活性炭，攪拌脫色10分鐘。脫色完成后，棄活性炭，收集脫色液。將收集 的脫色液放入真空過濾器中進(jìn)行真空抽濾，收集過濾液，然后將收集的過濾液泵入截留分子量為800Da的納濾器中，在壓力為0.1Mpa下，進(jìn)行納濾濃縮，直至納濾截留液中的可溶性固 形物的質(zhì)量濃度為10%為止，就制備出平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽截留濃縮液；收集 納濾濾過液，并在爪力為0.3Mpa卞，進(jìn)行反滲透濃縮，直罕反滲透濃縮液中的可溶件固形物 的質(zhì)量濃度為10%為止，就制備出平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽濃縮液。
③ 制備水解鹽藻短肽凍干粉
第(5)—②歩完成以后，將第(5)—②歩制備出的平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽濃縮液置 于低溫冰箱中，預(yù)凍1小時(shí)，然后置于冷凍干燥機(jī)中，在壓力為25Pa，溫度為一5(TC條件下， 進(jìn)行冷凍干燥24小時(shí)，就制備出總氮含量為12.5%、平均分于量為600Da的水解鹽藻短肽 凍干粉，總收得率為脫/ 一胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的16%。
④ 制備水解鹽藻肽凍干粉
第(5)—③歩完成后，將(5)—②歩制各.出的平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽截留濃縮液 置于低溫冰箱中，預(yù)凍1小時(shí)，再置于冷凍干燥機(jī)中，在壓力為25Pa、溫度為一5(TC下，進(jìn) 行冷凍十燥20小時(shí)，就制備出總氮量為12.0%的平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽凍干粉， 總收得率為脫;3 —胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的8%。
實(shí)施例2 '
一種從鹽藻中制備水解低聚糖和短肽方法的具體步驟如下
(1) 對鹽藻渣進(jìn)行分離
同實(shí)施例l。其特征為鹽藻渣粉的重量(克)去離子水的體積(升)比為1:8，超聲波 處理45分鐘，離心速度為12000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為10分鐘。
(2) 制備皮膚能量激活液
同實(shí)施例]。其特征為用氫氧化鉀(KOH)溶液調(diào)節(jié)pH值為5.8，在溫度為85'C、真空 度為0.07Mpa的條件下，進(jìn)行真空濃縮至可溶性固形物濃度為11%，制備出K離子濃度為 50mg/mL、氨基酸濃度為22mg/mL及磷酸鹽濃度為15mg/mL的皮膚能量^[活液，其收得率 為脫/6 —胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的10% 。
C3)對截留濃縮液進(jìn)行分離 同實(shí)施例l。其特征為截留濃縮液:蒸餾水的體積比為1:8，用稀氫氧化鈉(NaOH) 溶液調(diào)節(jié)其pH值為9.5，加熱升溫至85'C，保溫提取8小時(shí)。提取完成后，降溫至45°C， 離心速度為12000轉(zhuǎn)/分，加入收集的下層沉淀8倍重量的、pH值為9.5的蒸餾水進(jìn)行洗滌， 再以12000轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行離心分離，如此重復(fù)洗滌和分離1次。
(4)制備水解鹽藻低聚糖和多糖凍干粉 '
① 制備水解鹽藻多糖溶液
同實(shí)施例l。其特征為用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為5.5，加入脫除yS—胡蘿卜素鹽藻質(zhì) 量百分?jǐn)?shù)為3%的葡萄聚糖酶和2%的纖維素酶，在溫度為55"C條件下，攪拌酶水解3.5小時(shí)。
② 超濾分離
同實(shí)施例l。其特征為在壓力為0.2Mpa下進(jìn)行超濾分離。同實(shí)施例l。其特征為濃縮至截留液中可溶性固形物的質(zhì)量濃度為12%為止，將水解
鹽藻低聚糖濃縮液在真空度為40Pa、溫度為一55。C下進(jìn)行真空干燥38小時(shí)，制備出的水解 鹽藻低聚糖凍干粉的收得率為脫除一胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的6%。
制各水解鹽藻多糖凍干粉
同實(shí)施例l。其特征為預(yù)凍2小時(shí)，在真空度為40Pa、溫度為一55'C條件下進(jìn)行冷凍 干燥26小時(shí)，制備出的水解鹽藻多糖凍干粉的收得率為脫^ 一胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù) 的2.0%。
(5)制備水解鹽藻短肽凍下粉
① 制備水解鹽藻蛋白液
同實(shí)施例1。其特征為沉淀質(zhì)量:純凈水體積比為1:6.5，用稀氫氧化鈉(NaOH)溶液 調(diào)節(jié)pH值為8.5，升溫至55'C后，加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)3.5%的堿性蛋白酶，保溫?cái)嚢杳杆?解50分鐘，再加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)1.5%的肽酶(如風(fēng)味蛋白酶)，酶水解2.5小時(shí)，升溫至 85"C并恒溫保持18分鐘。
② 離心分離
同實(shí)施例l。其特征為離心速度為13000轉(zhuǎn)/分，離心分離15分鐘，將收集的清液升溫 至85'C后，加入其重量4X的木質(zhì)活性炭，攪拌脫色15分鐘，將收集的過濾液在壓力為0.2Mpa 下進(jìn)行納濾濃縮，直至納濾截留液中的可溶性固形物的質(zhì)量濃度為13%為止，將收集的納濾 濾過液在壓力為0.5Mpa下進(jìn)行反滲透濃縮，直至反滲透濃縮液中的可溶性固形物的質(zhì)量濃度 為12.5 %為止。
③ 制備水解鹽藻短肽凍干粉
同實(shí)施例l。其特征為預(yù)凍2小時(shí)，在壓力為35Pa、溫度為一55"C條件下冷凍千燥26 小時(shí)，制備出總氮含量為14%的水解鹽藻短肽凍干粉，總收得率為脫y5—胡蘿卜素鹽藻渣粉 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的17%。
④ 制備水解鹽藻肽凍干粉
同實(shí)施例1。其特征為預(yù)凍2小時(shí)，在壓力為35Pa、溫度為一55'C下冷凍十燥26小時(shí)， 制備出總氮量為13%的水解鹽藻肽凍干粉，總收得率為脫^一胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù) 的10%。
實(shí)施例3
一種從鹽藻中制備水解低聚糖和短肽方法的具體步驟如下-
(1) 對鹽藻渣進(jìn)行分離
同實(shí)施例l。其特征為鹽藻渣粉的重量(克)去離子水的體積(升)比為1:10，超 聲波處理60分鐘，離心速度為13000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為20分鐘。
(2) 制備皮膚能量激活液
問實(shí)施例l。其特征為用氫氧化鉀(KOH)溶液調(diào)節(jié)pH值為6.0，在溫度為90'C、真空
15度為0.08Mpa的條件下，進(jìn)行真空濃縮至可溶性固形物濃度為12%，制備出K離子濃度為 60mg/mL、氨基酸濃度為25mg/mL及磷酸鹽濃度為16mg/mL的皮膚能量激活液，其收得率 為脫y6 —胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的12%。 C3)對截留濃縮液進(jìn)行分離 同實(shí)施例l。其特征為截留濃縮液:蒸餾水的體積比為1:10，用稀氫氧化鈉(NaOH) 溶液調(diào)節(jié)其pH值為10，加熱升溫至90。C，保溫提取10小時(shí)，提取完成后降溫至50。C，離 心速度為14000轉(zhuǎn)/分，加入收集的下層沉淀10倍重量的、pH值為10的蒸餾水進(jìn)行洗錄， 再以14000轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行離心分離，如此重復(fù)洗滌和分離2次。
(4) 制備水解鹽藻低聚糖和多糖凍干粉
① 制備水解鹽藻多糖溶液
同實(shí)施例1。其特征為用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為6，加入脫除;8—胡蘿卜素鹽藻質(zhì) 量百分?jǐn)?shù)為4%的葡萄聚糖酶和3%的纖維素酶，在溫度為6(TC條件下，攪拌酶水解6小時(shí)。
② 超濾分離
同實(shí)施例l。其特征為在壓力為0.25Mpa下進(jìn)行超濾分離。
③ 制備水解鹽藻低聚糖凍干粉
同實(shí)施例l。其特征為濃縮至截留液中可溶性固形物的質(zhì)量濃度為15%為止，將水解 鹽藻低聚糖濃縮液在真空度為60Pa、溫度為一60'C下進(jìn)行真空干燥40小時(shí)，制備出的水解 鹽藻低聚糖凍干粉的收得率為脫除一胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的7%。
④ 制備水解鹽藻多糖凍干粉
同實(shí)施例l。其特征為預(yù)凍3小時(shí)，在真空度為60Pa、溫度為一6(TC條件下進(jìn)行冷凍 干燥30小時(shí)，制備出的水解鹽藻多糖凍千粉的收得率為脫/ 一胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù) 的2.5%。
(5) 制備水解鹽藻短肽凍干粉
① 制備水解鹽藻蛋白液
同實(shí)施例1。其特征為沉淀質(zhì)量:純凈水體積比為1:8，用稀氫氧化鈉(NaOH)溶液 調(diào)節(jié)pH值為'9，升溫節(jié)6(TC，加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的胰蛋白酶，保溫?cái)嚢杳杆?0分 鐘，加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)2%的肽酶(如木瓜蛋白酶)，酶水解3.5小時(shí)，升溫至90。C并恒溫保 持20分鐘。
② 離心分離
同實(shí)施例l。其特征為離心速度為14000轉(zhuǎn)/分，離心分離20分鐘，將收集的清液升溫 至9CTC后，加入其重量5%的木質(zhì)活性炭，攪拌脫色20分鐘，將收集的過濾液在壓力為0.3Mpa 下進(jìn)行納濾濃縮，直至納濾截留液中的可溶性固形物的質(zhì)量濃度為15%為止，將收集的納濾 濾過液在壓力為0.6Mpa下進(jìn)行反滲透濃縮，直至反滲透濃縮液中的可溶性固形物的質(zhì)量濃度 為15%為止。
③ 制備水解鹽藻短肽凍干粉同實(shí)施例l。其特征為預(yù)凍3小時(shí)，在壓力為50Pa、溫度為一6(TC條件下冷凍干燥30 小時(shí)，制備出總氮含量為15%的水解鹽藻短肽凍干粉，總收得率為脫j8—胡蘿卜素鹽藻渣粉 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的18%。
④制備水解鹽藻肽凍干粉
同實(shí)施例l。其特征為將水解鹽藻肽截留濃縮液預(yù)凍3小時(shí)，在壓力為50Pa、溫度為 一60'C下冷凍干燥24小時(shí)，制備出總氮量為14.5%的水解鹽藻肽凍干粉，總收得率為脫^一 胡蘿卜素鹽藻渣粉質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的12%。
權(quán)利要求
1. 一種從鹽藻渣中制備水解低聚糖和短肽的方法，其特征在于具體的方法步驟如下(1)對鹽藻渣進(jìn)行分離以提取β—胡蘿卜素的鹽藻渣粉為原料，按鹽藻渣粉的重量去離子水的體積比為1∶5～10的比例，先在容器中加入去離子水，再放入鹽藻渣粉，攪拌至鹽藻渣粉分散均勻后，接著用超聲波處理30～60分鐘，然后用10000～13000轉(zhuǎn)/分的速度，離心5～20分鐘，分別收集下層沉淀和上層清液，收集的上層清液用截留分子量為5KDa的超濾器進(jìn)行超濾分離，再分別收集超濾濾過液和截留濃縮液；(2)制備皮肽能量激活液第(1)步完成后，將第(1)步收集的超濾濾過液置于真空濃縮器中，先用氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)其pH值為5.5～6.0，后在溫度為80～90℃、真空度為0.06～0.08Mpa的條件下，進(jìn)行真空濃縮至可溶性固形物濃度為10～12％，就制備出K離子濃度為40～60mg/mL、氨基酸濃度為18～25mg/mL及磷酸鹽濃度為13～16mg/mL的皮膚能量激活液；(3)對截留濃縮液進(jìn)行分離第(2)步完成以后，對第(1)步收集的截留濃縮液，按截留濃縮液蒸餾水的體積比為1∶5～10的比例，先在截留濃縮液中加入蒸餾水并攪拌均勻后，再轉(zhuǎn)移至提取罐中，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為9～10，加熱升溫至80～90℃，在攪拌下保溫提取5～10小時(shí)，提取完成后，用換熱器降溫至40～50℃，再泵入管式離心機(jī)，以10000～14000轉(zhuǎn)/分的速度，進(jìn)行離心分離，分別收集下層沉淀和上層清液，將收集的下層沉淀稱重，然后加入其5～10倍重量的、pH值為9～10的蒸餾水，進(jìn)行洗滌，再以10000～14000轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行離心分離，再分別收集下層沉淀和上層清液，如此重復(fù)洗滌和分離1～2次，最后，分別將各次收集的下層沉淀和上層清液合并；(4)制備水解鹽藻低聚糖和多糖凍干粉①制備水解鹽藻多糖溶液第(3)步完成以后，對第(3)步最后合并的各次上層清液，先用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)其pH值為5～6，再加入脫除β—胡蘿卜素鹽藻質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2～4％的葡萄聚糖酶和1～3％的纖維素酶，在溫度為50～60℃條件下，攪拌酶水解3～6小時(shí)；②超濾分離第(4)-①步完成以后，對第(4)-①步制備出的水解鹽藻多糖溶液，用截留分子量為3KDa的超濾器，在壓力為0.1～0.25Mpa下，進(jìn)行超濾分離，分別收集超濾濾過液和超濾截留液；③制備水解鹽藻低聚糖凍干粉第(4)-②步完成后，先將(4)-②步收集的分子量小于3KDa水解鹽藻低聚糖過濾液，置于抽濾機(jī)中，用截留分了量為300Da的納濾膜，進(jìn)行濃縮，濃縮至截留液中可溶性固形物的質(zhì)量濃度為10～15％為止，就制備出水解鹽藻低聚糖濃縮液，然后，將水解鹽藻低聚糖濃縮液置于冷凍干燥機(jī)中，在真空度為20～60Pa、溫度為—50～—60℃下，進(jìn)行真空干燥36～40小時(shí)，就制備出分子量小于3KDa的水解鹽藻低聚糖凍干粉；④制備水解鹽藻多糖凍干粉第(4)-②步完成后，先將第(4)-②步收集的分子量大于3KDa水解鹽藻多糖截留液置于低溫冰箱中，預(yù)凍1～3小時(shí)，然后在真空度為20～60Pa、溫度為—50～—60℃條件下，進(jìn)行冷凍干燥24～30小時(shí)，就制備出平均分子量為12KDa的水解鹽藻多糖凍干粉；(5)制備水解鹽藻短肽凍干粉①制備水解鹽藻蛋白液第(4)步完成后，將第(3)步最后合并的下層沉淀，置于水解釜中，先按沉淀質(zhì)量純凈水體積比為1∶5～8的比例，向水解釜中加入純凈水，再攪拌至沉淀均勻分散于純凈水中，接著用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為8～9，再加熱升溫至50～60℃后，加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2％～5％的堿性蛋白酶或胰蛋白酶，保溫?cái)嚢杳杆?0～60分鐘后，再次加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)1～2％的肽酶，即風(fēng)味蛋白酶或木瓜蛋白酶，在攪拌下繼續(xù)酶水解1.5～3.5小時(shí)，最后加熱升溫至80～90℃，并恒溫保持15～20分鐘；②離心分離第(5)—①步完成后，將第(5)—①步制備出的水解鹽藻蛋白液泵入管式離心機(jī)中，以12000～14000轉(zhuǎn)/分的速度，進(jìn)行離心分離10～20分鐘，分別收集沉淀和上層清液，將收集的清液稱重并置于脫色裝置中，升溫至80～90℃后，加入其重量3～5％的木質(zhì)活性炭，攪拌脫色10～20分鐘，脫色完成后，棄活性炭，收集脫色液，將收集的脫色液放入真空過濾器中進(jìn)行真空抽濾，收集過濾液，然后將收集的過濾液泵入截留分子量為800Da的納濾器中，在壓力為0.1～0.3Mpa下，進(jìn)行納濾濃縮，直至納濾截留液中的可溶性固形物的質(zhì)量濃度為10～15％為止，就制備出平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽截留濃縮液；收集納濾濾過液，并在壓力為0.3～0.6Mpa下，進(jìn)行反滲透濃縮，直至反滲透濃縮液中的可溶性固形物的質(zhì)量濃度為10～15％為止，就制備出平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽濃縮液；③制備水解鹽藻短肽凍干粉第(5)—②步完成以后，將第(5)—②步制備出的平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽濃縮液置于低溫冰箱中，預(yù)凍1～3小時(shí)，然后置于冷凍干燥機(jī)中，在壓力為25～50Pa、溫度為—50～—60℃條件下，進(jìn)行冷凍干燥24～30小時(shí)，就制備出總氮含量為12.5～15％、平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽凍干粉；④制備水解鹽藻肽凍干粉第(5)—③步完成后，將(5)—②步制備出的平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽截留濃縮液置于低溫冰箱中，預(yù)凍1～3小時(shí)，再置于冷凍干燥機(jī)中，在壓力為25～50Pa、溫度為—50～—60℃下，進(jìn)行冷凍干燥20～24小時(shí)，就制備出總氮量為12.0～14.5％的平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽凍干粉。
2.按權(quán)利要求1所述的從鹽藻渣中制備水解低聚糖和短肽的方法，其特征在于具體的方法步驟如下Cl)對鹽藻渣進(jìn)行分離同權(quán)利要求l，其特征為鹽藻渣粉的重量去離子水的體積比為1:5，超聲波處理30分 鐘，離心速度為10000轉(zhuǎn)/分，離心吋間為5分鐘；(2) 制備皮膚能量激活液同權(quán)利要求l，其特征為用氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值為5.5，在溫度為8(TC、真空度 為0.06Mpa的條件下，進(jìn)行真空濃縮至可溶性固形物濃度為10%，制備出K離子濃度為 40mg/mL、氨基酸濃度為18mg/mL及磷酸鹽濃度為13mg/mL的皮膚能量激活液；(3) 對截留濃縮液進(jìn)行分離同權(quán)利要求l，其特征為截留濃縮液蒸餾水的體積比為1:5，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) 其pH值為9，加熱升溫至8(TC，保溫提取5小時(shí)，提取完成后，降溫至4(TC，離心速度為 10000轉(zhuǎn)/分，加入收集的下層沉淀5倍重量的、pH值為9的蒸餾水進(jìn)行洗滌，再以10000轉(zhuǎn) /分的速度進(jìn)行離心分離，如此重復(fù)洗滌和分離2次；(4) 制備水解鹽藻低聚糖和多糖凍十粉① 制備水解鹽藻多糖溶液 .同權(quán)利要求1，其特征為用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為5，加入脫除P—胡蘿卜素鹽藻 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2%的葡萄聚糖酶和1%的纖維素酶，在溫度為50'C條件下，攪拌酶水解3小 時(shí)；② 超濾分離同權(quán)利要求l，其特征為在壓力為0.1Mpa下進(jìn)行超濾分離；③ 制備水解鹽藻低聚糖凍干粉同權(quán)利耍求l，其特征為濃縮至截留液中可溶性固形物的質(zhì)量濃度為10%為止，將水解鹽藻低聚糖濃縮液在真空度為20Pa、溫度為一5(TC下進(jìn)行真空干燥36小時(shí)；④ 制備水解鹽藻多糖凍干粉同權(quán)利要求l，其特征為預(yù)凍1小時(shí)，在真空度為20Pa、溫度為一5(TC條件下進(jìn)行冷 凍千燥24小時(shí)； '(5) 制備水解鹽藻短肽凍干粉① 制備水解鹽藻蛋白液同權(quán)利要求1，其特征為沉淀質(zhì)量純凈水體積比為1:5，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 值為8，升溫至50"C后，加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)2%的堿性蛋白酶，保溫?cái)嚢杳杆?0分鐘， 再加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)1%的肽酶，即風(fēng)味蛋白酶，酶水解2.5小時(shí)，升溫至80。C并恒溫保 持15分鐘；② 離心分離同權(quán)利要求l，其特征為離心速度為12000轉(zhuǎn)/分，離心分離10分鐘，將收集的清液升 溫至8(TC后，加入其重量3%的木質(zhì)活性炭，攪拌脫色I(xiàn)O分鐘，將收集的過濾液在壓力為、0.1Mpa下進(jìn)行納濾濃縮，直至納濾截留液屮的可溶性固形物的質(zhì)量濃度為10%為止，將收集 的納濾濾過液在壓力為0.3Mpa下進(jìn)行反滲透濃縮，直至反滲透濃縮液中的可溶性固形物的質(zhì) 量濃度為10%為止；③ 制備水解鹽藻短肽凍干粉同權(quán)利要求l，其特征為預(yù)凍1小時(shí)，在壓力為25Pa、溫度為一50'C條件下冷凍干燥 24小時(shí)，制備出總氮含量為12.5%的水解鹽藻短肽凍干粉；④ 制備水解鹽藻肽凍干粉同權(quán)利要求1，其特征為預(yù)凍1小時(shí)，在壓力為25Pa、溫度為一5(TC卜'冷凍十燥20 小時(shí)，制備出總氮量為12.0%的水解鹽藻肽凍干粉。
3.按權(quán)利要求1所述的從鹽藻渣中制備水解低聚糖和短肽的方法，其特征在于具體的方 法歩驟如下(1)對鹽藻渣進(jìn)行分離同權(quán)利要求l，其特征為鹽藻渣粉的重量去離子水的體積比為1:8，超聲波處理45分 鐘，離心速度為12000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為10分鐘； P)制備皮膚能量激活液同權(quán)利要求l，其特征為用氫氧化鐘溶液調(diào)節(jié)pH值為5.8，在溫度為85'C、真空度為 0.07Mpa的條件下，進(jìn)行真空濃縮至可溶性固形物濃度為11%，制備出K離子濃度為 50mg/mL、氨基酸濃度為22mg/mL及磷酸鹽濃度為15mg/mL的皮膚能量激活液；(3) 對截留濃縮液進(jìn)行分離同權(quán)利要求1，其特征為截留濃縮液:蒸餾水的體積比為1:8，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) 其pH值為9.5，加熱升溫至85'C，保溫提取8小時(shí)，提取完成后，降溫至45'C，離心速度 為12000轉(zhuǎn)/分，加入收集的下層沉淀8倍重量的、pH值為9.5的蒸餾水進(jìn)行洗滌，再以12000 轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行離心分離，如此重復(fù)洗滌和分離1次；(4) 制備水解鹽藻低聚糖和多糖凍干粉① 制備水解鹽藻多糖溶液同權(quán)利要求l，其特征為用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為5.5，加入脫除戶一胡蘿卜素鹽藻 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3%的葡萄聚糖酶和2%的纖維素酶，在溫度為55'C條件下，攪拌酶水解3.5小 時(shí)；② 超濾分離同權(quán)利要求l，其特征為在壓力為0.2Mpa下進(jìn)行超濾分離；③ 制備水解鹽藻低聚糖凍干粉同權(quán)利要求l，其特征為濃縮至截留液中可溶性固形物的質(zhì)量濃度為12%為止，將水 解鹽藻低聚糖濃縮液在真空度為40Pa、溫度為一55'C下進(jìn)行真空干燥38小時(shí)； 制備水解鹽藻多糖凍干粉同權(quán)利要求l，其特征為預(yù)凍2小時(shí)，在真空度為40Pa、溫度為一55'C條件下進(jìn)行冷 凍干燥26小時(shí)；(5)制備水解鹽藻短肽凍干粉① 制備水解鹽藻蛋白液同權(quán)利要求l，其特征為沉淀質(zhì)量純凈水體積比為1:6.5，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 值為8.5，升溫至55'C后，加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)3.5%的堿性蛋白酶，保溫?cái)嚢杳杆?0分 鐘，再加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)1.5%的肽酶，即風(fēng)味蛋白酶，酶水解2.5小時(shí)，升溫至85"C并恒 溫保持18分鐘；② 離心分離同權(quán)利要求l，其特征為離心速度為13000轉(zhuǎn)/分，離心分離15分鐘，將收集的清液升 溫至85'C后，加入其重量4%的木質(zhì)活性炭，攪拌脫色15分鐘，將收集的過濾液在壓力為 0.2Mpa下進(jìn)行納濾濃縮，直至納濾截留液中的可溶性固形物的質(zhì)量濃度為13%為止，將收集 的納濾濾過液在壓力為0.5Mpa下進(jìn)行反滲透濃縮，直至反滲透濃縮液中的可溶性固形物的質(zhì) 量濃度為12.5 %為止；③ 制備水解鹽藻短肽凍丁粉同權(quán)利要求l，其特征為預(yù)凍2小時(shí)，在壓力為35Pa、溫度為一55'C條件下冷凍干燥 26小時(shí)，制備出總氮含量為14%的水解鹽藻短肽凍干粉；④ 制備水解鹽藻肽凍干粉同權(quán)利要求1，其特征為預(yù)凍2小時(shí)，在壓力為35Pa、溫度為一55t:下冷凍千燥26 小時(shí)，制備出總氮量為13%的水解鹽藻肽凍干粉。
4.按權(quán)利要求1所述的從鹽藻渣中制備水解低聚糖和短肽的方法，其特征在于具體的方 法歩驟如下(1) 對鹽藻渣進(jìn)行分離同權(quán)利要求l，其特征為鹽藻渣粉的重量去離子水的體積比為1:10，超聲波處理60 分鐘，離心速度為13000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為20分鐘；(2) 制備皮膚能量激活液 ' 同權(quán)利要求l，其特征為用氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值為6.0，在溫度為90"C、真空度為0.08Mpa的條件下，進(jìn)行真空濃縮至可溶性固形物濃度為12%，制各出K離子濃度為 60mg/mL、氨基酸濃度為25mg/mL及磷酸鹽濃度為16mg/mL的皮膚能量激活液；(3) 對截留濃縮液進(jìn)行分離同權(quán)利要求l，其特征為截留濃縮液:蒸餾水的體積比為1:10，用稀氫氧化鈉溶液調(diào) 節(jié)其pH值為10，加熱升溫至9(TC，保溫提取10小吋，提取完成后降溫至5(TC，離心速度 為14000轉(zhuǎn)/分，加入收集的下層沉淀10倍重量的、pH值為10的蒸餾水進(jìn)行洗滌，再以14000 轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行離心分離，如此重復(fù)洗滌和分離2次；(4) 制備水解鹽藻低聚糖和多糖凍干粉① 制備水解鹽藻多糖溶液同權(quán)利要求1，其特征為用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為6，加入脫除;8—胡蘿卜素鹽藻 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為4%的葡萄聚糖酶和3%的纖維素酶，在溫度為6(TC條件下，攪拌酶水解6小 時(shí)；② 超濾分離同權(quán)利要求l，其特征為在壓力為0.25Mpa下進(jìn)行超濾分離；③ 制備水解鹽藻低聚糖凍干粉同權(quán)利要求l，其特征為濃縮至截留液中可溶性固形物的質(zhì)量濃度為15%為1匕將水解鹽藻低聚糖濃縮液在真空度為60Pa、溫度為一6(TC下進(jìn)行真空干燥40小時(shí)； 制備水解鹽藻多糖凍干粉同權(quán)利要求l，其特征為預(yù)凍3小時(shí)，在真空度為60Pa、溫度為一60'C條件下進(jìn)行冷 凍干燥30小時(shí)；(5) 制備水解鹽藻短肽凍干粉① 制備水解鹽藻蛋白液同權(quán)利要求1，其特征為沉淀質(zhì)量純凈水體積比為1:8，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 值為9，升溫至6(TC，加入沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的胰蛋白酶，保溫?cái)嚢杳杆?0分鐘，加入 沉淀質(zhì)量百分?jǐn)?shù)2%的肽酶，即木瓜蛋白酶，酶水解3.5小時(shí)，升溫至90"C并恒溫保持20分 鐘；② 離心分離同權(quán)利要求l，其特征為離心速度為14000轉(zhuǎn)/分，離心分離20分鐘，將收集的清液升 溫至90'C后，加入其重量5%的木質(zhì)活性炭，攪拌脫色20分鐘，將收集的過濾液在壓力為 0.3Mpa下進(jìn)行納濾濃縮，直至納濾截留液中的可溶性固形物的質(zhì)量濃度為15%為止，將收集 的納濾濾過液在壓力為0.6Mpa下進(jìn)行反滲透濃縮，直至反滲透濃縮液中的可溶性固形物的質(zhì) 量濃度為15%為止；③ 制備水解鹽藻短肽凍十粉同權(quán)利要求l，其特征為預(yù)凍3小時(shí)，在壓力為50Pa、溫度為一6(TC條件下冷凍干燥 30小時(shí)，制備出總氮含量為15%的水解鹽藻短肽凍干粉；④ 制備水解鹽藻肽凍干粉同權(quán)利要求l，其特征為將水解鹽藻肽截留濃縮液預(yù)凍3小時(shí)，在壓力為50Pa、溫度 為一60'C下冷凍干燥24小時(shí)，制備出總氮量為14.5%的水解鹽藻肽凍干粉。
全文摘要
一種從鹽藻渣中制備水解低聚糖和短肽的方法，屬于鹽藻利用技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以脫除β-胡蘿卜素的鹽藻渣為原料，先經(jīng)多次分離及酶水解，后經(jīng)濃縮、干燥，制得多種產(chǎn)品。本發(fā)明綜合利用鹽藻渣制得皮膚能量激活液、水解鹽藻低聚糖和多糖及短肽等日化、醫(yī)藥、保健多種產(chǎn)品，且生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的水解鹽藻蛋白質(zhì)沉淀殘?jiān)急Ａ舨粭?，用作制備微生物肥料的發(fā)酵基料；且有生產(chǎn)工藝簡單、能耗低、成本低，生產(chǎn)過程中無“三廢”排放等特點(diǎn)。采用本發(fā)明方法制備出的產(chǎn)品，可廣泛用于護(hù)膚、保濕、營養(yǎng)、抗氧化、抗衰老產(chǎn)品中，也可用于保健品、抗腫瘤的產(chǎn)品中，還可作為單細(xì)胞蛋白質(zhì)食品補(bǔ)充氮素營養(yǎng)、抗輻射產(chǎn)品中。
文檔編號C12P19/14GK101445819SQ20081023719
公開日2009年6月3日 申請日期2008年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月22日 公開號200810237196.0
發(fā)明者周小華, 廖妙飛, 蘇霞利, 趙成霞, 挺 金, 林 陳, 魏順安 申請人:重慶大學(xué)