專利名稱：紫芝種菌株或子實體特異性分子標記及其獲得方法與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬靈芝菌株鑒別領域，特別是涉及一種紫芝種菌株或子實體特異性分子標 記及其獲得方法與應用。
背景技術：
據《神農本草經》和《本草綱目》記載，甘溫無毒，主治耳聾，利關節(jié)、益精氣、堅 筋骨，好顏色、療虛勞、治痔。近代研究發(fā)現靈芝不但對人類三大死因的癌癥、腦溢血和 心臟病有療效，還對胃腸、肝臟、腎臟、白血病、神經衰弱、慢性支氣管炎、哮喘、過敏 等疾病有顯著療效。
《中國藥典》2000年版記載赤芝(G. /wc/^w)和紫芝(G.W"e"M)可作為藥用；衛(wèi) 生部發(fā)布可用于保健食品的真菌菌種名單目錄中，公布了靈芝3個種，即赤芝(G./"c/c^w)、 紫芝(G. 和松杉靈芝(G. "wgae)。
隨著對靈芝的生物學功效的不斷了解，以其為原料開發(fā)的產品越來越多，銷售量也越 來越大，靈芝原料的質量越來越受到重視。近年來，隨著靈芝各種產品的商品化，大大帶 動了中國靈芝栽培生產的迅速發(fā)展，同時靈芝的種質資源也在不斷擴大，但是由于我國食 藥用菌品種登記制度尚未完善，因此靈芝的生產用菌種比較混亂，同種異名和異名同種的 現象在栽培生產上非常普遍，這不僅給菌種的管理帶來了難度，也給以靈芝為原料的保健 品及藥品等的相關產業(yè)造成了一定的經濟損失?，F在因為菌種問題常常造成我國靈芝產品 質量難以穩(wěn)定的局面，也嚴重地制約了我國靈芝產品走出國門，走向國際市場的步伐。
傳統(tǒng)的分類鑒定主要依據子實體的形態(tài)學特征來進行，包括擔孢子的大小和子實體真 皮菌絲的形態(tài)特征，但是子實體的許多形態(tài)學特征往往隨著生長條件的不同而發(fā)生變化， 而且許多鑒別性特征經常是幾個種所共有的，這給傳統(tǒng)的分類學帶來了很大的困難，僅僅 依據形態(tài)學特征進行菌種鑒定不是很可靠。因此，尋找可靠的鑒定手段，對靈芝產業(yè)的進 一步發(fā)展尤為重要。
近年來，國內對栽培靈芝菌株的分類研究也越來越多，主要是集中在應用拮抗實驗、 RAPD (Random amplified polymorphic DNA，隨機擴增的多態(tài)性DNA)分析及同工酶分析 技術方面。
張松等(1995)通過對4株靈芝菌株的酯酶同工酶酶譜的分析發(fā)現，供試的四個菌株 存在5條相同的酶帶，說明它們具有靈芝的某些共同的遺傳特征，在其代謝過程中具有某 些相似的生理活動，但各菌株在酶帶數目、Rf值及含量百分比上存在差異，均具有自己的特征酶帶，同時發(fā)現子實體形態(tài)學特征相似的，酯酶同工酶酶譜也相似，親緣關系比較近， 這些說酯酶同工酶分析對于靈芝的分類鑒定有一定的價值。
趙明文等(2003)利用RAPD技術對生產中常用的靈芝屬8個菌株的親緣關系進行了 分析。根據UPGMA構建的樹狀圖將8個菌株在較低的相似水平上分成3個明顯不同的組: 第1組包括黑芝(Gawo血rwa a〖rww)、松杉靈芝(Gawocfewza "wgwe)、圓芝(Gawotfewjfl rart/wi^w附)、靈芝0770 (Gw70cfer附tf /wc/tfww 0770)禾口韓國靈芝(G^wocferwa; /wczV^/附HG); 第2組包括密紋靈芝(Gawofiferwa cre6rasfn'fl^ww)禾口紫芝();第3組為 樹舌靈芝(G""oArwfl^^/^^/ww)。這一結果與經典分類結果基本相符，表明RAPD技術 可以用來區(qū)分生產中一些常用的靈芝種，同時說明靈芝生產用種之間遺傳差異較大，可能 是造成靈芝產品研究比較混亂的重要原因。
1999年我國簽署了《國際植物新品種保護法》，這不僅要求我們尊重其它國家的品種 知識產權，同時也要加強保護我們國家自己的品種知識產權，為了建立食用菌新品種登記 制度來真正保護我國的品種產權，必須首先建立成熟的品種鑒定技術，為新品種登記奠定
基礎o
隨著分子生物學技術的快速發(fā)展，特別是分于標記和基因標記技術的建立與成熟，為 發(fā)展簡便、快速、準確的鑒定技術提供了有效手段。SCAR(Sequence Characterized Amplified Region)標記是一種十分穩(wěn)定的分子標記，在應用上具有迅速、簡便、低成本的特點，本 發(fā)明建立了紫芝種的SCAR分子標記，能對紫芝種進行快速鑒定。
發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種紫芝種菌株或子實體特異性分子標記及其 獲得方法與應用，通過該分子標記能簡便、快速、準確的鑒定和檢測紫芝菌種。
本發(fā)明的紫芝種菌株或子實體的特異性分子標記，是一種基因SCAR分子標記， 是PCR擴增后為470bp的特異DNA片斷，其PCR擴增引物對序列為 5'acggactgtggagcgggctctg 3'禾口 5'gtcataagctttgtctccatac 3'。
本發(fā)明的紫芝種菌株或子實體的特異分子標記的獲得方法，包括如下步驟
I.菌株或子實體基因組DNA的提取 (1)菌株基因組DNA的提取
將4-6。C的紫芝菌種轉接到PDA斜面上，26-28。C培養(yǎng)活化，5-7天后轉接到馬鈴薯葡萄 糖瓊脂培養(yǎng)液中，26-28'C振蕩培養(yǎng)10-14天，收集菌絲，用LETS法提取基因組DNA;(2)子實體基因組DNA的提取
將子實體l-2g剪碎，用體積比為1:2-3的95% (V/V)酒精和0.5 mol/L EDTA Na2 混合物浸泡處理20-30小時，過濾，水沖洗，研磨粉碎后，加入800-1 OOOjxLpH 8.0 CNETS 溶液分裝于2ml離心管中，60-7(TC保溫1-3小時，10000-12000g離心2-5min后，取上清， 按照酚/氯仿法提取子實體基因組DNA，其中的CNETS溶液組成是l%(m/V)CTAB、 1 mol/L NaCl、 10mmol/LEDTA、 20 m mol/L Tris-Cl、 l%(m/V)SDS;
II. 紫芝種菌株或子實體特異DNA片段的獲得
用ITS-PCR法，其中ITS引物對為ITS1F: 5，-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3，； ITS4: 5 '-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3',得紫芝種及靈芝屬其他種的菌株或子實 體ITS片段；然后測序并比對各個靈芝屬種的代表性的序列。
III. 特異性PCR引物的獲得
根據ITS序列的比對結果，找到紫芝的ITS序列上特異性的結合位點(見下面序列的 紅色加粗部分)，并設計出特異性PCR引物對為5'acggactgtggagcgggctctg 3'和 5'gtcataagctttgtctccatac 3';
IV. 用特異PCR擴增引物對對密紋薄芝種菌株或子實體的基因組DNA進行PCR擴 增
V. 瓊脂糖凝膠電泳檢測。
上述PCR擴增產物6-8pL，與0.5nL加樣緩沖液混勻，點樣于1.2-1.5%的瓊脂糖凝膠上， 于1.0XTAE緩沖液中，5V/cm電壓下電泳，電泳結束后，用溴化乙錠溶液染色5-10min，凝 膠成像儀上照相。
所述步驟I (l)中所述的LETS提取法
① 將凍干的菌絲大約20-30mg置于預冷的無菌研缽中迅速研磨成細粉，后迅速向研缽中加 入1000ml已配置好的LETS緩沖液，分裝于2個1.5ml的離心管中；
② 向每個管中加入600-800^iL的苯酚:氯仿異:戊醇(縮寫為PCI)(比例為25:24:1)上下 顛倒，充分混勻，4陽10。C 16000g離心8-15分鐘;
③ 輕輕吸取上清于新的離心管中，加入500pL的PCI， 4°C 16000g離心8-15分鐘；
④ 重復步驟(D，直到兩相的界面沒有雜質為止；
⑤ 取上清，向上清液中加入2倍體積的已-2(TC預冷的無水乙醇或95^乙醇，輕輕混勻， 置于-20'C冰箱中靜置5-10分鐘； '
⑥ 取出，4。C16000g離心10-15分鐘；⑦ 倒去上清，再向管中加入50(^L預冷的70。/。 (V/V)乙醇，用指頭輕輕敲打沉淀使其溶 解，靜置一會兒，4'Cl6000g離心IO分鐘；
⑧ 重復步驟⑦1次；
(D倒去上清，待管中酒精揮發(fā)后，加入適量體積的TE緩沖液(pH8.0)，按100mlTE緩沖液 加入2pL lmg/ml的DNase-free RNase; 37。C溫浴1-2個小時；
⑩將獲得的基因組DNA經過ITS-PCR擴增后再通過1.0。/。瓊脂糖凝膠電泳、檢測，以確定 其質量是否滿足試驗需要。
所述步驟I (2)中所述的酚/氯仿提取法，步驟包括
① 將己經預處理過得子實體置于預冷的無菌研缽中迅速研磨成細粉，后迅速向研缽中加 入1000ml已配制定好的CNETS緩沖液，分裝于2個2.0 ml的離心管中；
② 向每個離心管中加入600-800pL飽和苯酚混勻，12000-14000g離心10-15 min;
③ 取上清，重復重復步驟②1-2次；
④ 取上清，加入600-800)iL 1:1 (V/V)苯酚氯仿混合物混勻，12000-14000g離心10-15 min;
⑤ 取上清，加入500-600pL49:l (V/V)氯仿異戊醇混勻，12000-14000g離心10-15 min;
⑥ 去上清，向沉淀中加入70% (V/V)的酒精，振蕩；10000-12000g離心5-15min;
⑦ 倒去上清，待管中酒精揮發(fā)后，加入20-30pL的TE緩沖液(pH8.0)，按100mlTE緩沖液 加入2pL lmg/ml的DNase-free RNase; 37。C溫浴1-2個小時；
⑧ 將獲得的基因組DNA經過ITS-PCR擴增后再通過1.0。/。瓊脂糖凝膠電泳、檢領U，以確定 其質量是否滿足試驗需要。
所述步驟II中，ITS-PCR擴增反應體系(25u 1): 10 XPCR buffer (Promega) 2.5ul， 25咖ol/LMgC12(Promega) 2. 0u 1， 10mmol/L dNTPs 0. L，引物ITS1F/ITS4(10 p mol/L) 各lul， Taq酶(5U/ul) (Promega) 0. 25ul， DNA模板(10 ng/u L) 1 u L，加無菌雙蒸 水補足，PCR反應條件為94°C 2 min; 94°C 15s， 62。C30s， 72°C 1 min， 28個循環(huán)； 72°C 5min，紫芝種菌株或子實體ITS序列其序列大小為632bACCTTTTGACCTCAAACAAGGTAGAATAACCGGT 。
所述步驟IV中，PCR擴增的反應體系總體積為25pL: 10XPCR buffer 2.5pL，25mmol/LMgCl22.0nL， 10 mmoI/L dNTP 0.5pL， 1Opmol/L特異引物對各l|aL， 5U/[iLTaq酶0.30nL， 10-20ng/pLDNA模板lpL，無菌雙蒸水補足25pL; PCR反應條件為94°C 2min; 94°C 15s， 65°C 30s， 72°C 1 min， 30個循環(huán);72°C 5min。
所述步驟V中，瓊脂糖凝膠電泳檢測的條件是PCR擴增產物6-8pL，與0.5^L加樣緩沖液混勻，點樣于1.2-1.5%的瓊脂糖凝膠上，于1.0XTAE緩沖液中，5V/cm電壓下電泳，電泳結束后，用溴化乙錠溶液染色5-10min，凝膠成像儀上照相。
本發(fā)明的紫芝種菌株或子實體的特異分子標記應用于快速鑒定和檢測紫芝種菌株及市售靈芝類產品的真?zhèn)?。本發(fā)明的有益效果
(1) 只有紫芝種能PCR擴增出分子量為470bp的專一擴增條帶，而靈芝屬的其它菌種均未出現該特異性片斷；
(2) 采用這種特異性分子標記進行檢測，與常規(guī)形態(tài)學檢測、拮抗試驗、出燕試驗相比，具有檢測時間短，準確性高的優(yōu)點，該檢測所需時間只需要2-3天，而常規(guī)的拮抗試驗所需時間至少需要兩周時間，出菇試驗則需要5-6個月的時間。
圖1是ITS-PCR擴增產物電泳圖譜；
圖2是紫芝特異引物對PCR擴增產物電泳圖譜。
其中，生產用種(136支):1-27， 29， 30， 32-38， 40-42， 44-49， 52， 54， 59， 60， 62，63， 65-86， 88-101， 103， 104， 106-109， 111-113， 115-117， 120, 146， 149-154， 157-189;來自ATCC (24支)121-126， 128-145;
標號中間有斷開的，這是因為在菌種保藏過程中失去活力了，但并未因此改變其他菌株的編號。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一歩闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
實施例1
菌種收集到來自國內的140支靈芝屬生產用菌種以及來自ATCC24支共計164支菌株，它們分屬于赤芝、紫芝、樹舌、松杉靈芝、樹舌、密紋薄芝、紫光靈芝、近擬鹿角靈芝、黃靈芝以及無柄靈芝等IO余個種。對它們的基因組DNA和紫芝子實體基因組(編號190) DNA共計165個樣品進行PCR擴增。
一、 基因組DNA的提取
1. 菌絲培養(yǎng)和基因組DNA的提取
將4-6'C的紫芝菌種轉接到PDA斜面上，26-28'C培養(yǎng)活化，5-7天后轉接到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)液中，26-28'C振蕩培養(yǎng)10-14天，收集菌絲，用LETS法提取基因組DNA，DNA稀釋至10-20 ng/VL ， -20。C保存；
2. 子實體基因組DNA的提取
① 將子實體l-2g剪碎，用體積比為1:2-3的95% (V/V)酒精和0.5 mol/L EDTANa;t混合物浸泡處理20-30小時，過濾；
② 過濾后用滅過菌的雙蒸水沖洗，放在滅過菌的研缽中用液氮處理并進行研磨；
③ 向每個離心管中加入600-800jaL飽和苯酚混勻，12000-14000g離心10-15 min; 取上清，重復重復步驟②1-2次
⑤ 取上清，加入600-80(^iL 1:1 (V/V)苯酚氯仿混合物混勻，12000-14000g離心10-15 min;
⑥ 取上清，加入500-600pL49:l (V/V)氯仿異戊醇混勻，12000-14000g離心10-15 min;
⑦ 去上清，向沉淀中加入70% (V/V)的酒精，振蕩；10000-12000g離心5-15min;
⑧ 倒去上清，待管中酒精揮發(fā)后，加入20-30pL的TE緩沖液(pH8.0)，按100mlTE緩沖液加入2pL lmg/ml的DNase-free RNase; 37'C溫浴1-2個小時；
⑨ DNA稀釋至10-20 ng/^iL， -20"保存。
二、 特異性PCR擴增
擴增的反應體系總體積為25pL: 10XPCRbuffer 2.5^L， MgCl2 (25mmol/L ) 2.0nL，dNTP (10 mmol/L) 0.5pL， lOpmol/L特異引物對(5'acggactgtggagcgggctctg 3'禾口5'gtcataagctttgtctccatac 3')各lpL, Taq酶(5U4iL)0.30^iL， DNA模板(5-20ng4iL) lpL，無菌雙蒸水補足25pL。
PCR反應條件為94°C 2min;94。C 15s，65。C 30s， 72°C 1 min， 30個循環(huán)；72°C 5min。三、瓊脂糖凝膠電泳檢測
取特異性PCR擴增產物6-8^L，與0.5pL加樣緩沖液混勻，點樣于1.2-1.5%的瓊脂糖凝膠上，于l.OXTAE緩沖液中，5V/cm電壓下電泳，電泳結束后，用溴化乙錠溶液染色5-10min，自來水沖洗后在凝膠成像儀上照相。
結果發(fā)現，在這些樣品中只有紫芝種能擴增出分子量為470bp的專一擴增條帶，而靈芝屬的其它菌種均未出現該特異性片斷。
權利要求
1.一種紫芝種菌株或子實體的特異性分子標記，其特征在于該標記是一種基因SCAR分子標記，是PCR擴增后為470bp的特異DNA片斷，其PCR擴增引物對序列為5′acggactgtggagcgggctctg 3′和5′gtcataagctttgtctccatac 3′。
2. 紫芝種菌株或子實體的特異分子標記的獲得方法，包括步驟I.菌株或子實體基因組DNA的提取(1) 菌株基因組DNA的提取將4-6'C的紫芝菌種轉接到PDA斜面上，26-28'C培養(yǎng)活化，5-7天后轉接到馬鈴薯葡萄 糖培養(yǎng)液中，26-28振蕩培養(yǎng)10-14天，收集菌絲，用LETS法提取基因組DNA;(2) 子實體基因組DNA的提取將子實體l-2g剪碎，用體積比為1:2-3的95%V/V酒精和0.5 mol/L EDTA Na2混合物浸 泡處理20-30小時，過濾，水沖洗，研磨粉碎后，加入800-1 OOOpL pH 8.0 CNETS溶液分 裝于2ml離心管中，60-7(TC保溫1-3小時，10000-12000g離心2-5min后，取上清，按照 酚/氯仿法提取子實體基因組DNA，其中的CNETS溶液組成是1% m/V CTAB、 1 mol/L NaCl、 10mmol/LEDTA、 20 m mol/L Tris-Cl、 l%m/VSDS;II. 紫芝種及靈芝屬其他種的菌株或子實體ITS片段的獲得、測序及序列比對用ITS-PCR法，其中ITS引物對為ITS1F: 5，-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3，； ITS4: 5 '-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'，得紫芝種及靈芝屬其他種的菌株或子實 體ITS片段；然后測序并比對各個靈芝屬種的代表性的序列。III. 特異性PCR引物的獲得根據ITS序列的比對結果，找到紫芝的ITS序列上特異性的結合位點，利用Primer Premier5.0 設計出特異性 PCR 引物對為 5'acggactgtggagcgggctctg 3'和 5'gtcataagctttgtctccatac 3';IV. 用特異PCR擴增弓I物對對紫芝種菌株或子實體的基因組DNA進行PCR擴增V. 瓊脂糖凝膠電泳檢測。
3.根據權利要求2所述的紫芝種菌株或子實體的特異分子標記的獲得方法，其特征在 于所述步驟I (l)中所述的LETS提取法① 將凍干的菌絲大約20-30mg置于預冷的無菌研缽中迅速研磨成細粉，后迅速向研缽中加 入1000ml已配置好的LETS緩沖液，分裝于2個1.5ml的離心管中；② 向每個管中加入600-800pL的苯酚:氯仿異:戊醇PCI比例為25:24:1上下 顛倒，充分混勻，4-10°C 16000g離心8-15分鐘；③ 輕輕吸取上清于新的離心管中，加入500pL的PCI， 4°C 16000g離心8-15分鐘；④ 重復步驟③，直到兩相的界面沒有雜質為止；⑤ 取上清，向上清液中加入2倍體積的已-2(TC預冷的無水乙醇或95%乙醇，輕輕混勻， 置于-2(TC冰箱中靜置5-10分鐘；⑥ 取出，4'C16000g離心10-15分鐘；⑦ 倒去上清，再向管中加入50(^L預冷的70y。V/V乙醇，用指頭輕輕敲打沉淀使其溶 解，靜置一會兒，4'C16000g離心10分鐘；⑧ 重復步驟⑦1次；⑨ 倒去上清，待管中酒精揮發(fā)后，加入適量體積的TE緩沖液pH8.0，按100mlTE緩沖液 加入2pL lmg/ml的DNase-free RNase; 37。C溫浴1-2個小時；⑩ 將獲得的基因組DNA經過ITS-PCR擴增后再通過1.0。/。瓊脂糖凝膠電泳、檢測，以確定 其質量是否滿足試驗需要。
4. 根據權利要求2所述的紫芝種菌株或子實體的特異分子標記的獲得方法，其特征在 于所述步驟I (2)中所述的酚/氯仿提取法，步驟包括① 將已經預處理過得子實體置于預冷的無菌研缽中迅速研磨成細粉，后迅速向研缽中加 入1000ml已配制定好的CNETS緩沖液，分裝于2個2.0 ml的離心管中；② 向每個離心管中加入600-800nL飽和苯酚混勻，12000-14000g離心10-15 min;③ 取上清，重復重復步驟②1-2次； 取上清，加入600-800|iL 1:1 V/V苯酚氯仿混合物混勻，12000-14000g離心10-15 min;⑤ 取上清，加入500-600jxL 49:1 V/V氯仿異戊醇混勻，12000-14000g離心10-15 min;⑥ 去上清，向沉淀中加入70。/。V/V的酒精，振蕩；10000-12000g離心5-15min;⑦ 倒去上清，待管中酒精揮發(fā)后，加入20-30nL的TE緩沖液(pH8.0),按100mlTE緩沖液 加入2pL lmg/ml的DNase-free RNase; 37。C溫浴1-2個小時；⑧ 將獲得的基因組DNA經過ITS-PCR擴增后再通過1.0。/。瓊脂糖凝膠電泳、檢領!l，以確定其質量是否滿足試驗需要。
5. 根據權利要求2所述的紫芝種菌株或子實體的特異性分子標記的獲得方法，其特 征在于所述步驟II中，ITS-PCR擴增反應體系25u 1: 10XPCRbufferPromega2.5"l， 25腸l/LMgC12 Promega 2.0yl， 10畫1/L dNTPs 0.5uL，引物ITS1F/ITS4 10踐ol/L 各lul， Taq酶5U/iil Promega 0.25ul， DNA模板10 ng/uL 1 u L，加無菌雙蒸水補 足，PCR反應條件為:94°C 2min; 94°C 15s， 62。C30s， 72°C 1 min， 28個循環(huán);72°C 5min，紫芝種菌株或子實體ITS序列，大小為632bp:ACCTTTTGACCTCAAACAAGGTAGAA丁AACCGGT 。
6. 根據權利要求2所述的紫芝種菌株或子實體的特異分子標記的獲得方法，其特征在 于所述步驟IV中，PCR擴增的反應體系總體積為25pL: 10XPCR buffer 2.5pL， 25mmoI/L MgCl22.0nL， 10mmol/LdNTP0.5pL， 10pmol/L特異引物對各lpL， 5U/pLTaq酶0.30pL， 10-20ng4iLDNA模板lpL，無菌雙蒸水補足25^L;PCR反應條件為94°C 2min;94。C 15s， 65°C 30s， 72°C 1 min， 30個循環(huán)；72°C 5min。
7. 根據權利要求2所述的紫芝種菌株或子實體的特異分子標記的獲得方法，其特征在于 所述步驟V中，瓊脂糖凝膠電泳檢測的條件是PCR擴增產物6-8pL，與0.5pL加樣緩沖液混 勻，點樣于1.2-1.5%的瓊脂糖凝膠上，于1.0XTAE緩沖液中，5V/cm電壓下電泳，電泳結 束后，用溴化乙錠溶液染色5-10min，凝膠成像儀上照相。
8. —種紫芝種菌株或子實體的特異分子標記應用于快速鑒定和檢測紫芝種菌株及市售 靈芝類產品的真?zhèn)巍?br>
全文摘要
本發(fā)明涉及一種紫芝菌株或子實體的特異性分子標記及其獲得方法與應用，該標記是PCR擴增后為470bp的特異DNA片斷，其PCR擴增引物對序列為5′acggactgtggagcgggctctg 3′和5′gtcataagctttgtctccatac 3′；獲得方法1)菌株或子實體基因組DNA的提取；2)獲得特異DNA片段；3)獲得特異PCR擴增引物；4)用特異PCR擴增引物對對紫芝種菌株或子實體的基因組DNA進行擴增；5)瓊脂糖凝膠電泳檢測；應用用于快速鑒定和檢測紫芝種菌株及市售靈芝類產品的真?zhèn)?。本發(fā)明的方法常規(guī)形態(tài)學檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短，準確性高的優(yōu)點。
文檔編號C12Q1/68GK101514363SQ200810204549
公開日2009年8月26日 申請日期2008年12月12日 優(yōu)先權日2008年12月12日
發(fā)明者娜 馮, 方 劉, 劉艷芳, 帥 周, 唐傳紅, 唐慶九, 張勁松, 焱 楊, 蘇春麗, 薇 賈, 郝瑞霞 申請人:上海市農業(yè)科學院