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一種完全利用木質(zhì)纖維素生產(chǎn)富馬酸的方法

文檔序號(hào):563431閱讀:344來源:國(guó)知局

專利名稱::一種完全利用木質(zhì)纖維素生產(chǎn)富馬酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明屬于生物工程
技術(shù)領(lǐng)域
,尤其是利用木質(zhì)纖維素資源的微生物發(fā)酵產(chǎn)有機(jī)酸的方法,具體涉及將木質(zhì)纖維素完全利用于微生物發(fā)酵生產(chǎn)富馬酸的方法。
背景技術(shù)
:富馬酸(FumaricAcid),是一種重要的有機(jī)基本化工原料和精細(xì)化工產(chǎn)品,主要用于合成不飽和聚酯樹脂等,廣泛用于涂料、樹脂、醫(yī)藥、增塑劑等領(lǐng)域,并可作為添加劑用于食品飼料工業(yè)以及醫(yī)藥領(lǐng)域。同時(shí)作為一種重要的四碳平臺(tái)化合物,富馬酸還可以通過酶催化轉(zhuǎn)化等工藝生產(chǎn)L-天冬氨酸、蘋果酸、琥珀酸等其他四碳化合物。當(dāng)前富馬酸生產(chǎn)的主流技術(shù)是順酐異構(gòu)法,其原料苯的毒性嚴(yán)重限制了富馬酸在食品及醫(yī)藥等方面的應(yīng)用。近年來隨著石油價(jià)格的不斷上漲,富馬酸的生產(chǎn)成本也不斷提高,研究利用可再生的生物質(zhì)資源發(fā)酵制備富馬酸成為大勢(shì)所趨。發(fā)酵法制備富馬酸的常用菌種為根霉菌(i/^o;w),如米根霉(/.W7加e)、少根根霉(兄arWzi^)以及黑根霉(i.m'gn'cara)等,使用的原料有葡萄糖、木糖、淀粉等,在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的主要副產(chǎn)物為蘋果酸、乳酸等雜酸。美國(guó)專利US4877731公開了一種通過分階段溶氧控制策略發(fā)酵i.an^/zws利用葡萄糖生產(chǎn)有機(jī)酸的方法,富馬酸占發(fā)酵產(chǎn)總酸的比例約為78%,同時(shí)發(fā)酵液中含有琥珀酸、蘋果酸、a-酮戊二酸等多種有機(jī)酸。本發(fā)明人公開了一種富馬酸產(chǎn)生菌及其誘變篩選方法和利用該菌抹發(fā)酵葡萄糖生產(chǎn)富馬酸的方法,經(jīng)液體深層發(fā)酵富馬酸濃度達(dá)到90120g/L,富馬酸產(chǎn)量占總酸產(chǎn)量的90%95%。除了使用葡萄糖為原料,HelenaKautola等利用木糖為原料,固定化發(fā)酵i.wr/n'zw,10.25天后得到富馬酸最大產(chǎn)量為16.4g/L(ApplMicrobiolBiotechnol,1989,31:448452);CartaF.S等利用根霉菌發(fā)酵富含淀粉的木質(zhì)纖維素木薯甘蔗渣酶解液得到富馬酸產(chǎn)量為21.28g/L(BioresourceTechnology,1999,68:2328)。到目前為止,主要研究集中于根霉菌發(fā)酵葡萄糖生產(chǎn)富馬酸,而以木糖等其他生物質(zhì)資源作為發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源,富馬酸產(chǎn)量低,生產(chǎn)速率差,糖酸轉(zhuǎn)化率低,制約了發(fā)酵產(chǎn)富馬酸的工業(yè)化。木質(zhì)纖維素來源于農(nóng)作物廢棄物,它包括玉米秸稈、玉米芯、甘蔗渣、廢木屑等工農(nóng)業(yè)廢棄物,含35%50%的纖維素,20%35%的半纖維素和10%15%的木質(zhì)素,其降解產(chǎn)物中富含大量的糖類,主要有纖維素降解產(chǎn)物葡萄糖以及半纖維素降解產(chǎn)物木糖等。因此,木質(zhì)纖維素是一筆巨大的潛在資源,若利用得當(dāng),就可以化廢為利,兼收經(jīng)濟(jì)、環(huán)境和社會(huì)效益。對(duì)于我國(guó)這樣一個(gè)人口眾多,人均資源貧乏的農(nóng)業(yè)大國(guó),研究與推廣木質(zhì)纖維素的資源化對(duì)保護(hù)環(huán)境,發(fā)展經(jīng)濟(jì)具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。目前對(duì)微生物如何有效利用木質(zhì)纖維素這一方法的研究主要集中于將木質(zhì)纖維素降解得到的混合糖液用于發(fā)酵產(chǎn)乙醇的方面,但是由于葡萄糖對(duì)乙醇發(fā)酵有很強(qiáng)的抑制作用,以及混和糖利用在乙醇發(fā)酵上有困難等問題,在這類產(chǎn)品的生產(chǎn)方法的開發(fā)改進(jìn)問題還有待解決。而其他研究也限于諸如將降解得到的糖液分別分離提純后,再利用純木糖轉(zhuǎn)化為木糖醇等方面,然而木糖的轉(zhuǎn)化率低、代謝效率差是解決木質(zhì)纖維素有效利用的一個(gè)關(guān)鍵問題,木質(zhì)纖維素的完全利用還需要在生產(chǎn)方法上進(jìn)一步改良。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種能將木質(zhì)纖維素的降解液完全利用于微生物發(fā)酵生產(chǎn)富馬酸的方法,主要在于可以將降解半纖維素得到的木糖和降解纖維素得到的葡萄糖幾乎完全利用于發(fā)酵生產(chǎn)富馬酸,實(shí)現(xiàn)木質(zhì)纖維素的高效利用,有效降低富馬酸生產(chǎn)的成本。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的,本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下以兩步法降解木質(zhì)纖維素得到的兩步降解液為原料,將其分別用于^f艮霉菌的種子培養(yǎng)步驟以及發(fā)酵產(chǎn)富馬酸步驟。將降解半纖維素得到的木糖溶液配制成種子培養(yǎng)基用于種子培養(yǎng)的同時(shí),再將降解纖維素的產(chǎn)物葡萄糖溶液配制成發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基用于發(fā)酵產(chǎn)富馬酸,實(shí)現(xiàn)完全利用木質(zhì)纖維素發(fā)酵生產(chǎn)富馬酸的技術(shù)目的。具體的步驟如下1、對(duì)木質(zhì)纖維素進(jìn)行降解本發(fā)明所述的對(duì)木質(zhì)纖維素的降解主要是兩步降解法,即首先降解木質(zhì)纖維素中的半纖維素得到木糖以供種子培養(yǎng)步驟,再降解木質(zhì)纖維素中的纖維素得到葡萄糖以供發(fā)酵產(chǎn)富馬酸步驟。1)降解半纖維素木質(zhì)纖維素原料經(jīng)過除雜粉碎、稀酸浸泡預(yù)處理后,使用3%的稀硫酸,20(TC處理120分鐘,過濾后將濾液收集得到半纖維素降解液。在此過程中,半纖維素非常容易被降解得到以木糖為主的五碳糖降解液;利用Ca(0H)2調(diào)節(jié)該降解液pH至10,再用酸溶液調(diào)節(jié)到7,過濾CaS04沉淀以及不溶物,得到的主要含有木糖的降解液供種子培養(yǎng)用;2)降解纖維素重新加酸降解殘留的纖維素(主要為微晶纖維素)。降解完半纖維素后剩余的固體殘?jiān)?50°C,3%硫酸處理5分鐘,將剩余纖維素的75。/。可轉(zhuǎn)化為葡萄糖,該降解液再經(jīng)過蒸發(fā)濃縮脫毒,得到纖維素降解液供發(fā)酵產(chǎn)酸用得到可發(fā)酵的降解產(chǎn)物葡萄糖降解液以備用于發(fā)酵產(chǎn)富馬酸步驟。2、半纖維素降解液用于種子培養(yǎng)1)配制種子培養(yǎng)基稱量一定量的半纖維素降解液稀釋或濃縮成濃度為1040g/L的木糖溶液,加入種子培養(yǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),配制成種子培養(yǎng)基,將種子培養(yǎng)基在11512rC的高溫下滅菌1530分鐘,冷卻;種子培養(yǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為(NH4)2S041.53g/L,酵母膏04g/L,玉米漿05mL/L,KH2P040.11g/L,MgS04.7H200,1g/L,ZnS04'7H200.010.1g/L,FeS04.7H20O.O卜O,lg/L,瓊脂03g/L,添加中和劑控制pH為46.5;其中,添加的中和劑為H2S04或HCI;2)種子培養(yǎng)按照1%5%的接種量接入配制好的霉菌孢子懸浮液,置于溫度為3035°C,培養(yǎng)1842小時(shí)后的種子液備用以發(fā)酵產(chǎn)富馬酸。3、纖維素降解液用于發(fā)酵富馬酸1)制備發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基將降解纖維素后得到的葡萄糖降解液濃縮至80120g/L,加入發(fā)酵產(chǎn)酸必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),配制成發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基,將發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基在11512rC的高溫下滅菌1530分鐘,冷卻;發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為(NH4)2S0403g/L,酵母膏01g/L,KH2PO40.11.0g/L,MgS04'7H200.11.0g/L,ZnS04-7H200.010.1g/L,F(xiàn)eS04'7H200.010.1g/L,通過向培養(yǎng)基中添加中和劑控制pH為3.06.0;其中,添加的中和劑為CaC03、Ca(OH)2、NaOH或NaHC03;2)接種種子液發(fā)酵產(chǎn)富馬酸量取種子培養(yǎng)得到的種子液,按照10%30%的接種量接入發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)中,置于溫度為3035。C,發(fā)酵培養(yǎng)6096小時(shí),得到富馬酸。本發(fā)明的有益效果在于將木質(zhì)纖維素資源通過工藝成熟的兩步法處理d旦得到的降解糖液不合并,將主要含有木糖的半纖維素降解液和主要為葡萄糖的纖維素降解液分別用于種子培養(yǎng)以及發(fā)酵,利用霉菌發(fā)酵高產(chǎn)富馬酸,所用原料為木質(zhì)纖維素類物質(zhì),來源更加廣泛,且不經(jīng)過分離提純,有效降低了生產(chǎn)成本,具備優(yōu)異的工業(yè)化生產(chǎn)前景。且本發(fā)明的整個(gè)技術(shù)方案不僅充分利用了木質(zhì)纖維素中的木糖,避免了木糖直接用于發(fā)酵產(chǎn)酸的效率低的問題,而且充分利用了木質(zhì)纖維素資源,降低了生產(chǎn)成本。圖1完全利用木質(zhì)纖維素類兩步降解糖液生產(chǎn)富馬酸的工藝流程圖具體實(shí)施方式實(shí)施例1本實(shí)施例說明了兩步法降解木質(zhì)纖維素得到兩種糖液的步驟。(1)木質(zhì)纖維素原料除雜,粉碎到粒徑50目備用;(2)用1。/。的稀酸浸泡過夜處理后過濾;(3)加入3%的稀硫酸,200。C處理120分鐘;(4)過濾后將濾液收集得到半纖維素降解液,半纖維素轉(zhuǎn)化率為70%90%,經(jīng)過Ca(0H)2調(diào)節(jié)pH至10,再^^用酸溶液調(diào)節(jié)到pH為7,過濾;琉酸4丐沉淀以及不溶物,得到的主要含有木糖的半纖維素降解液供種子培養(yǎng)用;(5)將上述剩余的固體殘?jiān)?50°C,3%硫酸處理25分鐘,將剩余纖維素中約50%80%轉(zhuǎn)化為葡萄糖,經(jīng)過蒸發(fā)濃縮脫毒,得到纖維素降解液供發(fā)酵產(chǎn)酸用。不同種木質(zhì)纖維素降解得到的兩種糖液指標(biāo)如表1:表1不同木質(zhì)纖維素降解得到的兩種糖液含量木質(zhì)纖維素種類半纖維素降解液木糖(g/L)半纖維素轉(zhuǎn)化率(%)纖維素降解液葡萄糖(g/L)纖維素轉(zhuǎn)化率(%)玉米秸稈19.99018.472玉米芯17.98020.476甘庶渣23.3卯21.968廢木屑15.57516.373實(shí)施例2本實(shí)施例說明完全利用木質(zhì)纖維素降解液生產(chǎn)富馬酸的步驟。菌種霉菌(孢子懸浮液,濃度為1(^個(gè)/mL)(1)配制培養(yǎng)基a.種子培養(yǎng)基將實(shí)施例1中降解半纖維素得到的木糖降解液濃縮得到濃度為29.5g/L的木糖溶液,加入霉菌種子培養(yǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(NH4)2S042.5g/L,酵母膏2.4g/L,玉米漿2mL/L,KH2PO40.4g/L,MgS04'7H200.4g/L,ZnS04-7H200.05g/L,F(xiàn)eS04-7H200.01g/L,瓊脂2g/L,力。H2S04調(diào)節(jié)pH為4.5。b.發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基將實(shí)施例1中纖維素降解液蒸發(fā)濃縮脫毒并適當(dāng)濃縮或稀釋得到濃度為80g/L的葡萄糖溶液,加入霉菌發(fā)酵產(chǎn)酸必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(NH4)2S041.8g/L,酵母膏0.4g/L,KH2P040.4g/L,MgS04.7H200.4g/L,ZnS04.7H200.05g/L,FeS04'7H200.01g/L,加入過量CaC0380g/L,解除產(chǎn)物抑制作用并保持發(fā)酵液pH5.5。a和b中碳源、氮源分開滅菌,115。C滅菌15分鐘,CaC03干熱滅菌,冷卻后混合后備用;(2)種子培養(yǎng)將孢子懸浮液按照4%的接種量接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的250mL凹槽搖瓶中,置于溫度為34。C、轉(zhuǎn)速為180rpm的搖床上培養(yǎng)種子液,42小時(shí)結(jié)束。(3)發(fā)酵產(chǎn)酸步驟(2)中孢子懸浮液按照10。/。的接種量接入裝有50mL發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基的250mL凹槽搖瓶中,置于溫度為34。C、轉(zhuǎn)速為160卬m的搖床上,培養(yǎng)60小時(shí)結(jié)束。(4)結(jié)果對(duì)不同霉菌的種子培養(yǎng)結(jié)果見表2。表2數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果菌種42h后殘余木糖菌體干重木糖轉(zhuǎn)化率富馬酸產(chǎn)量糖酸轉(zhuǎn)化率(g/L)(%)(g/L)(g/g葡萄糖)少根根審ME-F216.14.479.328.60.42米根霉ME-Fll7.53.974.628.10.41實(shí)施例3本實(shí)施例與實(shí)施例2方法相同,條件改變。菌種根霉(孢子懸浮液,濃度為1(^個(gè)/mL)(1)配制培養(yǎng)基a.種子培養(yǎng)基將實(shí)施例1中降解半纖維素得到的木糖降解液稀釋得到濃度為10g/L的木糖溶液,加入霉菌種子培養(yǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(NH4)2S041.5g/L,KH2P040.1g/L,MgS04'7H200.1g/L,ZnS04'7H200.01g/L,F(xiàn)eS04'7H200.01g/L,力口HC1調(diào)節(jié)pH為4。b.發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基將實(shí)施例1中纖維素降解液蒸發(fā)濃縮脫毒并適當(dāng)濃縮或稀釋得到濃度為100g/L的葡萄糖溶液,加入霉菌發(fā)酵產(chǎn)酸必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)KH2P040.1g/L,MgS04.7H200.1g/L,ZnS04'7H200,01g/L,FeS04.7H200.01g/L,加入過量Ca(OH)80g/L,解除產(chǎn)物抑制作用并保持發(fā)酵液pH3.0。a和b中碳源、氮源分開滅菌,115。C滅菌30分鐘,CaC03干熱滅菌,冷卻后混合后備用;(2)種子培養(yǎng)將孢子懸浮液按照1%的接種量接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的250mL凹槽搖瓶中,置于溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為100rpm的搖床上培養(yǎng)種子液,18小時(shí)結(jié)束。(3)發(fā)酵產(chǎn)酸步驟(2)中孢子懸浮液按照20%的接種量接入裝有50mL發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基的250mL凹槽搖瓶中,置于溫度為3CTC、轉(zhuǎn)速為120rpm的搖床上,培養(yǎng)80小時(shí)結(jié)束。(4)結(jié)果對(duì)不同霉菌的種子培養(yǎng)結(jié)果見表3。表3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例4本實(shí)施例與實(shí)施例2方法相同,條件改變。菌種根霉(孢子懸浮液,濃度為1(^個(gè)/mL)(1)配制培養(yǎng)基a.種子培養(yǎng)基將實(shí)施例1中降解半纖維素得到的木糖降解液適當(dāng)濃縮或稀釋得到濃度為40g/L的木糖溶液,加入霉菌種子培養(yǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(NH4)2S043g/L,酵母膏4g/L,玉米漿5mL/L,KH2P041g/L,MgS04'7H201g/L,ZnS04.7H200.1g/L,F(xiàn)eS04'7H200.1g/L,瓊脂3g/L,加H2S04調(diào)節(jié)pH為6.5。b.發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基將實(shí)施例1中纖維素降解液蒸發(fā)濃縮脫毒并適當(dāng)濃縮或稀釋得到濃度為120g/L的葡萄糖溶液,加入霉菌發(fā)酵產(chǎn)酸必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(NH4)2S043g/L,酵母膏1g/L,KH2P041g/L,MgS04'7H201g/L,ZnS04'7H200.1g/L,FeS04.7H200.1g/L,加入過量NaHC0380g/L,解除產(chǎn)物抑制作用并保持發(fā)酵液pH6.0。a和b中碳源、氮源分開滅菌,m。C滅菌15分鐘,CaC03干熱滅菌,冷卻后混合后備用;(2)種子培養(yǎng)將孢子懸浮液按照5%的接種量接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的250mL凹槽搖瓶中,置于溫度為35。C、轉(zhuǎn)速為220rpm的搖床上培養(yǎng)種子液,24小時(shí)結(jié)束。(3)發(fā)酵產(chǎn)酸步驟(2)中孢子懸浮液按照30。/。的接種量接入裝有50mL發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基的250mL凹槽搖瓶中,置于溫度為35。C、轉(zhuǎn)速為220rpm的搖床上,培養(yǎng)96小時(shí)結(jié)束。(3)結(jié)果對(duì)不同霉菌的種子培養(yǎng)結(jié)果見表4。表4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1、一種將木質(zhì)纖維素的降解液完全利用于微生物發(fā)酵生產(chǎn)富馬酸的方法,其特征在于以兩步法降解木質(zhì)纖維素步驟得到的兩步降解液為原料,將降解半纖維素得到的木糖溶液配制成種子培養(yǎng)基用于種子培養(yǎng)步驟的同時(shí),再將降解纖維素的產(chǎn)物葡萄糖溶液配制成發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基用于發(fā)酵產(chǎn)富馬酸步驟,實(shí)現(xiàn)完全利用木質(zhì)纖維素發(fā)酵生產(chǎn)富馬酸的目的。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的兩步法降解木質(zhì)纖維素的方法,其特征在于首先降解木質(zhì)纖維素中的半纖維素得到木糖以供種子培養(yǎng)步驟,再降解木質(zhì)纖維素中的纖維素得到葡萄糖以供發(fā)酵產(chǎn)富馬酸步驟。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的配制種子培養(yǎng)基的步驟,其特征在于稱量一定量的半纖維素降解液稀釋或濃縮成濃度為1040g/L的木糖溶液,加入種子培養(yǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),配制成種子培養(yǎng)基,將種子培養(yǎng)基在115121。C的高溫下滅菌1530分鐘,冷卻。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的配制種子培養(yǎng)基的步驟,其特征在于加入的種子培養(yǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為(NH4)2S041.53g/L,酵母膏04g/L,玉米漿05mL/L,KH2P040.1lg/L,MgSO4'7H2O0.1lg/L,ZnS04.7H200.010.1g/L,FeS04.7H200.010.1g/L,瓊脂03g/L,添加中和劑控制pH為46.5。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的配制種子培養(yǎng)基的步驟,其特征在于所添加的中和劑為恥04或HC1。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的種子培養(yǎng)步驟,其特征在于按照1%5%的接種量接入配置好的霉菌孢子懸浮液,置于溫度為3035°C,培養(yǎng)1842小時(shí)后的種子液備用以發(fā)酵產(chǎn)富馬酸。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的配制發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基的步驟,其特征在于將降解纖維素后得到的葡萄糖降解液濃縮至80120g/L,加入霉菌種子液發(fā)酵產(chǎn)酸必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),配制成發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基,將發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基在11512rC的高溫下滅菌1530分鐘,冷卻。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的配制發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基的步驟,其特征在于加入的發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為(NH4)2SO403g/L,酵母膏0lg/L,KH2P040.11.0g/L,MgSO4'7H2O0.11.0g/L,ZnS04'7H200.010.1g/L,FeS04'7H20O.O卜O.lg/L,通過向培養(yǎng)基中添加中和劑控制pH為3.06.0。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的配制發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基的步驟,其特征在于所添加的中和劑為CaC03、Ca(OH)2、NaOH或NaHC03。10、根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵產(chǎn)富馬酸的步驟,其特征在于量取種子培養(yǎng)得到的種子液,按照10%30%的接種量接入發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)中,置于溫度為3035°C,發(fā)酵培養(yǎng)6096小時(shí),得到富馬酸。全文摘要本發(fā)明公開了一種完全利用木質(zhì)纖維素資源發(fā)酵制備富馬酸的方法。該工藝涉及通過兩步法降解木質(zhì)纖維素,將主要含有木糖的半纖維素降解液添加適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)物質(zhì),用于產(chǎn)富馬酸霉菌種子培養(yǎng)18~42小時(shí),第二步將主要含有葡萄糖的纖維素降解液添加適量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),作為發(fā)酵產(chǎn)酸培養(yǎng)基接種,接種上述種子液后培養(yǎng)60~96小時(shí),高產(chǎn)富馬酸,其產(chǎn)量為28~56g/L,轉(zhuǎn)化率為41%~52%。本發(fā)明充分利用了原料木質(zhì)纖維素類物質(zhì),來源更加廣泛,且不經(jīng)過分離提純,有效降低了生產(chǎn)成本,具備優(yōu)異的工業(yè)化應(yīng)用前景。文檔編號(hào)C12P7/46GK101225412SQ20081001877公開日2008年7月23日申請(qǐng)日期2008年1月23日優(yōu)先權(quán)日2008年1月23日發(fā)明者皓何,寧劉,霜李,振高,和黃申請(qǐng)人:南京工業(yè)大學(xué)
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