專利名稱：蘭屬地生蘭種子無菌播種育苗方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種蘭屬地生蘭種子無菌播種育苗的方法。
技術背景根據劉仲健、陳心啟等編著的《中國蘭屬植物》 一書記載，全世界約有蘭屬(OwZ)W/wm)植物68種，依生活習性分為地生、附生、腐生三類。 其中腐生種類研究不多，國內外對碧玉蘭、虎頭蘭、大雪蘭、黃蟬蘭等附 生種類的組織培養(yǎng)技術研究較早，無菌播種育苗技術也比較成熟。蓮瓣蘭、 豆瓣蘭、春蘭、春劍等地生種類使用常規(guī)蘭屬附生蘭種子無菌播種技術， 播種后種子幾乎不能萌發(fā)，國內外研究者對蘭屬地生蘭種子無菌播種技術 進行了一些改良，包括對種子進行超聲波震蕩、NaOH或KOH浸泡、剪破 種皮等處理后接種，改進培養(yǎng)基配方，優(yōu)化培養(yǎng)條件等，但種子萌發(fā)率也 常不足1%甚至更低。 發(fā)明內容本發(fā)明的目的是解決目前蘭屬地生蘭種子無菌播種萌發(fā)率低的問題，提 供一種提高蘭屬地生蘭種子無菌播種萌發(fā)率的方法。本發(fā)明是這樣實現的在常規(guī)蘭屬地生蘭種子無菌播種育苗的過程中， 包括無菌播種、無菌實生苗培養(yǎng)、煉苗步驟，在種子無菌播種后增加低溫 黑暗預培養(yǎng)步驟，目的在于模仿蘭屬地生蘭原生地環(huán)境，利用低溫黑暗讓 蘭屬地生蘭種子完成后熟過程以促迸萌發(fā)。本發(fā)明的具體內容為(1)無菌播種采取6 9成熟(根據各個種從授粉到蒴果成熟開裂的 時間確定)且尚未開裂的蒴果，切去殘留花被、合蕊柱及過長果柄，表面 用75%酒精擦拭干凈，轉入超凈工作臺上，以0.1% HgCl2中浸泡消毒15~20 分鐘，無菌水清洗4 5次，然后剖開蒴果取出種子，撒播于播種培養(yǎng)基上， 培養(yǎng)基配方為1/4MS (大量、微量元素均改為MS培養(yǎng)基的1/4，其余成分
不變，下同)+6-BA0.1~l mg.L" +NAA 1 5 mg,L"+活性炭2 g.L"+椰乳100 mL丄"；(2)預培養(yǎng)播種后將種子連同培養(yǎng)容器置于低溫黑暗條件下進行預培養(yǎng)，預培養(yǎng)溫度為0 10°C ，時間為2~6個月；(3)無菌實生苗培養(yǎng)完成預培養(yǎng)后，將種子連同培養(yǎng)容器移入光照培養(yǎng)室培養(yǎng)，待種子萌發(fā)形成根狀莖后，轉接入增殖培養(yǎng)基，使根狀莖快速增殖，培養(yǎng)基配方為1/4MS+6-BA 0.1 0.5 mg丄"+NAA 0.5~2 mg丄"+活性 炭2g，L"，分批挑選生長健壯的根狀莖轉入分化培養(yǎng)基，使芽大量分化， 培養(yǎng)基配方為l/4MS+6-BA2~5 mg.I/1 +NAA0.5~1 mg丄-1，然后將分化出的 小苗轉入生根壯苗培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方為1/4MS+6-BA 0.1 0.5 mg-L" +NAAl~4mg'L''+香蕉泥50~150g L '，所有培養(yǎng)基pH為5.4~5.8，光照培 養(yǎng)室溫度為22土3。C，光照強度25 30pmohm《s"，光照時間14h'd";(4)煉苗將生長良好的無菌實生苗轉移到15 25 "C的煉苗棚中培 養(yǎng)15天后，逐漸揭開瓶蓋，過渡2~3天，然后取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基， 以水苔包裹根部，10 15株為一叢，合栽于9cmX9cm(口徑X高)營養(yǎng)缽中，初期注意遮光保溫保濕，5個月后即可移栽到普通蘭花栽培基質中。本發(fā)明所提供的方法使蘭屬地生蘭種子無菌播種平均萌發(fā)率比現有技 術提高10倍以上，大幅度提高了蘭屬地生蘭播種育苗的效率，找到了一種 實生苗培育的有效方法，具有操作簡單、育苗周期短、實用性強、利于規(guī) ?；a等優(yōu)點，并為蘭屬地生蘭雜交選育新品種打下堅實基礎。
具體實施方式
實施例l:(1)播種采取7個月果齡的蓮瓣蘭蒴果，切去殘留花被、合蕊柱及過長果柄，表面用75%酒精擦拭干凈，轉入超凈工作臺上，以0.P/。HgCl2 中浸泡消毒15分鐘，無菌水清洗5次，然后剖開蒴果取出種子，撒播于播 種培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方為1/4MS (大量、微量元素均改為MS培養(yǎng)基的 1/4，其余成分不變，下同)+6-BA0.1 mg丄"+NAA 3 mg七"+活性炭2g.L"+椰乳lOOmL.U1;(2) 預培養(yǎng)播種后將種子連同培養(yǎng)容器置于4'C恒溫黑暗條件下預 培養(yǎng)3個月；(3) 無菌實生苗培養(yǎng)完成預培養(yǎng)后，再將種子連同培養(yǎng)容器移入光 照培養(yǎng)室培養(yǎng)，3個月后種子陸續(xù)萌發(fā)，待種子萌發(fā)形成根狀莖后轉接入增殖培養(yǎng)基，使根狀莖快速增殖，培養(yǎng)基配方為1/4MS+6-BA 0.25 mg-L—1 +NAA 2 mg，L"+活性炭2 g丄人分批挑選生長健壯的根狀莖轉入分化培養(yǎng) 基，使芽大量分化，培養(yǎng)基配方為1/4MS+6-BA4 mg七"+NAA 1 mgl/1， 然后將分化出的小苗轉入生根壯苗培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方為1/4MS+6-BA0.1 mg.L—1 +NAA 1 mg.L"+香蕉泥150 g七"，所有培養(yǎng)基pH為5.4 5.8，光照 培養(yǎng)室溫度為22±3°C，光照強度25 30 |imol'nf2*s"，光照時間14 1vd"， 播種1年后抽樣統(tǒng)計種子萌發(fā)率為12.7%;(4) 出瓶煉苗將生長良好的無菌實生苗轉移到20 25 "C的煉苗棚 中培養(yǎng)15天后，逐漸揭開瓶蓋，過渡2 3天，然后取出組培苗，洗凈培 養(yǎng)基，以水苔包裹根部，10 15株為一叢，合栽于9 cmX9 cm(口徑X高) 營養(yǎng)缽中，初期注意遮光保溫保濕，5個月后即可移栽到普通蘭花栽培基 質中，煉苗成活率為95%。實施例2:采取6個月果齡的豆瓣蘭蒴果，種子無菌播種后置2 8°C自然變溫黑 暗條件下培養(yǎng)5個月，其它步驟按實施例1的方法進行，抽樣統(tǒng)計種子萌 發(fā)率為25.5%。實施例3:采取6.5個月果齡的春蘭X春劍雜交蒴果，種子播種后置7'C恒溫黑暗 條件下培養(yǎng)4個月，其它步驟按實施例1的方法進行，抽樣統(tǒng)計種子萌發(fā) 率為21.4%。
權利要求
1、一種蘭屬地生蘭種子無菌播種育苗的方法，包括無菌播種、無菌實生苗培養(yǎng)、煉苗步驟，其特征在于種子無菌播種后增加低溫黑暗預培養(yǎng)步驟。
2、 根據權利要求1中所述蘭屬地生蘭種子無菌播種育苗的方法，其特 征在于采用發(fā)育到6 9成熟的蒴果內種子進行無菌播種。
3、 根據權利要求1中所述蘭屬地生蘭種子無菌播種育苗的方法，其特 征在于低溫黑暗條件下預培養(yǎng)溫度為0~10°C ，時間為2~6個月。
4、 根據權利要求1中所述蘭屬地生蘭種子無菌播種育苗的方法，其特 征在于無菌播種、無菌實生苗培養(yǎng)階段使用的基本培養(yǎng)基為1/4MS。
5、 根據權利要求1中所述蘭屬地生蘭種子無菌播種育苗的方法，其特 征在于蘭屬地生蘭的種類為蓮瓣蘭、豆瓣蘭、春蘭、春劍。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種蘭屬地生蘭種子無菌播種育苗的方法，包括無菌播種、無菌實生苗培養(yǎng)、煉苗步驟，其特征在于種子無菌播種后增加低溫黑暗預培養(yǎng)步驟。目的是通過模仿蘭屬地生蘭原生地環(huán)境，利用低溫黑暗讓蘭屬地生蘭種子完成后熟過程以促進萌發(fā)。本發(fā)明使蘭屬地生蘭種子無菌播種平均萌發(fā)率比現有技術提高10倍以上，具有簡單實用、育苗周期短、利于規(guī)?；a等優(yōu)點，并為蘭屬地生蘭雜交選育新品種打下堅實基礎。
文檔編號C12N5/04GK101124892SQ200710066230
公開日2008年2月20日 申請日期2007年9月25日 優(yōu)先權日2007年9月25日
發(fā)明者和加衛(wèi), 和壽星, 燕 李, 李兆光, 澤 楊, 楊少華, 薛潤光 申請人:云南省農業(yè)科學院高山經濟植物研究所