專利名稱：皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種谷物芽及其用途，尤其是一種制作工藝簡單、成本低，可 用于酶解皂苷或甙類，以制備活性更高的低糖基次生皂苷、甙或甙元的皂苷或 甙糖苷酶活性高的谷物芽。
背景技術(shù)：
中草藥的主要有效成分一皂苷(皂甙，Saponin)、甙(苷、Glycoside)類 結(jié)構(gòu)并不是活性最佳的結(jié)構(gòu)。中草藥口服后需經(jīng)消化系統(tǒng)的酶和腸道微生物的 作用，使皂苷、甙改變成高活性的低糖基成分，被腸道吸收、進(jìn)入血液，繼而 起藥效(MIshihara:YakugakuZasshi, 122(9)， 695-701, 2002)。但是皂苷、甙在
體內(nèi)的這種變化是很微弱的，因此將中草藥組分、皂苷和甙在體外就轉(zhuǎn)化成高 活性成分，對(duì)中草藥以及相關(guān)保健食品、功能化妝品等意義很大。
目前，已有用微生物來源的特種酶分別處理人參、白頭翁、薯蕷、黃芪等 皂苷，處理淫羊藿甙、大豆異黃酮甙、蘆丁等甙，以制備高活性人參、白頭翁、 薯蕷、黃芪等低糖基的次生皂苷或制備高活性淫羊藿、大豆異黃酮、蘆丁等次 生甙技術(shù)。但是制備微生物來源的特種酶工藝復(fù)雜、成本高。
谷物芽(麥芽、高粱芽、玉米芽和小麥芽)主要含淀粉酶系、纖維素酶、 蛋白酶、果膠酶和普魯蘭酶，對(duì)谷物的分解能力強(qiáng)，成本低、經(jīng)濟(jì)實(shí)用、應(yīng)用 范圍廣；其中麥芽不僅用于啤酒生產(chǎn)，也可用于醫(yī)藥上的消化劑，同時(shí)還可用 于食品生產(chǎn)中的淀粉類水解酶制劑來源以及制作飴糖等(管敦儀編啤酒工業(yè)
手冊，中國輕工業(yè)出版社，1998; p41-138);高粱芽、玉米芽和小麥芽也可用 于啤酒生產(chǎn)、飴糖的生產(chǎn)。但是，現(xiàn)有谷物芽的酶對(duì)中草藥的主要活性成分一 皂苷和甙糖基的水解能力低。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述問題，提供一種制作工藝簡單、 成本低，可用于酶解皂苷或甙類，以制備活性更高的低糖基次生皂苷、甙或甙 元的皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是 一種皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽，其特征
在于是由如下步驟制備在谷物芽制備過程中加入赤霉素并分別加入人參皂苷 或白頭翁皂苷或薯蕷皂苷或黃貧皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙，使 谷物發(fā)芽、干燥，得到相應(yīng)皂苷或甙(苷)糖苷酶活性高的谷物芽。
所述赤霉素的用量為每公斤谷物0.1~3 ppm，所述人參皂苷或白頭翁皂苷 或薯蕷皂苷或黃離皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙的用量為每公斤谷 物1 200毫克；13 2(TC發(fā)芽12~16小時(shí)，加入赤霉素并加入人參皂苷或白頭 翁皂苷或薯蕷皂苷或黃芪皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙(苷)，繼 續(xù)發(fā)芽4 5天，干燥，即得相應(yīng)皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽。
一種皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽的用途，其特征在于用于酶解人參皂 苷或白頭翁皂苷或薯蕷皂苷或黃芪皂苷或者淫羊藿甙或者大豆異黃酮甙或蘆丁 甙，得到活性高的低糖基皂苷和苷元或低糖基甙和甙元。
本發(fā)明所提供的皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽，制作工藝簡單、成本低， 對(duì)中草藥的主要活性成分一皂苷和甙糖基的水解能力強(qiáng)，可用于水解人參皂苷 或白頭翁皂苷或薯蕷皂苷或黃芪皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙，以 制備相應(yīng)的高活性的低糖基次生皂苷或甙。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l:
將1公斤大麥水洗干凈，在16'C發(fā)芽水中浸4~8小時(shí)，發(fā)芽12~16小時(shí)小 時(shí)后，用50毫升含0.5ppm的市場上購買的赤霉酸和15毫克人參總皂苷的水 溶液或緩沖液(醋酸緩沖液、磷酸緩沖或tris緩沖液)噴射混勻，16"C下繼續(xù) 發(fā)芽4 5天，干燥(干燥方法，管敦儀編啤酒工業(yè)手冊，中國輕工業(yè)出版社， 1998; p99-120)，即制成人參皂苷糖苷酶活性高的麥芽。
將500克上述麥芽(干重計(jì)算)搗碎、加入3000毫升0.02摩爾、pH5.0醋酸 緩沖液浸泡一小時(shí)，離心除雜，上清液加入飽和度為66%的硫酸銨，離心收集 沉淀，用0.02摩爾、pH5.0醋酸緩沖液透析除鹽，再用其緩沖液定溶為500毫升， 離心除雜，即得酶液。
(1)用上述100毫升麥芽酶液和含2克人參皂苷Rbl的50毫升緩沖液(醋酸 緩沖液、磷酸緩沖或tris緩沖液)混合，在40 50。C攪拌反應(yīng)10 24小時(shí)；其反應(yīng) 液流進(jìn)50毫升的D-101大孔樹脂上吸附，用400毫升的水洗雜質(zhì)，再用200毫升 85%乙醇洗皂苷，蒸干得到1.2克的反應(yīng)產(chǎn)物；其反應(yīng)產(chǎn)物用薄層層析(TLC) 和高效液相色譜法(王鐵生主編中國人參，遼寧科學(xué)技術(shù)出版社2001年，
p736-739)測定結(jié)果；90。/。的人參皂苷Rbl轉(zhuǎn)化成F2、 Rg3、 C-K、 Rh2等人參皂苷。
(2) 用上述100毫升麥芽酶液和含2.5克市場上購買的人參總皂苷(主要含 Rbl、 Rb2、 Rc、 Rd、 Re、 Rgl皂苷)的50毫升緩沖液(醋酸緩沖液、磷酸緩沖 或tris緩沖液)混合，在40 5(TC攪拌反應(yīng)10 24小時(shí)；其反應(yīng)液流進(jìn)50毫升的 D-101大孔樹脂上吸附，用400毫升的水洗雜質(zhì)，再用200毫升85%乙醇洗皂苷， 蒸干得到l.l克的反應(yīng)產(chǎn)物；其反應(yīng)產(chǎn)物用薄層層析(TLC)和高效液相色譜法
(王鐵生主編中國人參，遼寧科學(xué)技術(shù)出版社2001年，p736-739)測定結(jié)果； 90。/。的人參皂苷Rbl、 Rb2、 Rc、 Rd、 Re、 Rgl皂苷轉(zhuǎn)化成F2、 Rg3、 C-K、 Rh2、 Rg2、 Rhl等人參皂苷和甙元。
(3) 用上述10毫升麥芽酶液和7克市場上購買的人參粉(主要含Rbl、 Rb2、 Rc、 Rd、 Re、 Rgl皂苷)混合，在40 5(TC反應(yīng)20 32小時(shí)，干燥，得到新型人 參制品，其制品用薄層層析(TLC)和高效液相色譜法(王鐵生主編中國人 參，遼寧科學(xué)技術(shù)出版社2001年，p736-739)測定結(jié)果；人參皂苷F2、 Rg3、 C-K、 Rh2、 Rg2、 Rhl含量提亭數(shù)十倍。
上述酶反應(yīng)產(chǎn)物人參皂苷，可用硅膠柱方法(楊其蕰天然藥物化學(xué)，中 國醫(yī)藥科技出版社1996年，pl52-155)分離得到反應(yīng)產(chǎn)物F2、 Rg3、 C-K、 Rh2、 Rg2、 Rhl單體人參皂苷。
實(shí)施例2:
將1公斤大麥水洗干凈，在16"C發(fā)芽水中浸4~8小時(shí)，發(fā)芽12~16小時(shí)后， 用50毫升含0.8ppm市場上購買的赤霉酸和8毫克白頭翁皂苷(按照文獻(xiàn)"劉 琳等，大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，23 (1)， 18-21， 2000"方法提取的)的水溶液或 緩沖液(醋酸緩沖液、磷酸緩沖或tris緩沖液)溶液噴射混勻，16。C繼續(xù)發(fā)芽 4~5天，干燥(干燥方法，管敦儀編啤酒工業(yè)手冊，中國輕工業(yè)出版社，1998; p99-120)，即制成白頭翁皂苷糖苷酶活性高的麥芽。
按實(shí)施例l方法提取酶并處理白頭翁皂苷；其反應(yīng)物用薄層層析(TLC)和 高效液相色譜法(王偉大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，24 (1)， 4-7， 2005)測定結(jié)果; 80%的帶5個(gè)糖基的白頭翁皂苷降解成1~3個(gè)糖基的白頭翁皂苷。
上述麥芽制備過程所加入的白頭翁皂苷換成柴胡或者薯蕷或者黃芪皂苷； 其麥芽酶可以水解相應(yīng)的柴胡或者薯蕷或者黃芪皂苷糖基，可制備低糖基的相 應(yīng)皂苷(數(shù)據(jù)略)。
實(shí)施例3:
將1公斤大麥水洗干凈，在16t:發(fā)芽水中浸4 8小時(shí)發(fā)芽12 16小時(shí)后， 用50毫升含0.8ppm的市場上的赤霉酸和20毫克蘆丁的水溶液或緩沖液(醋 酸緩沖液、磷酸緩沖或tris緩沖液)噴射混勻，16"C繼續(xù)發(fā)芽4 5天，干燥(干 燥方法，管敦儀編啤酒工業(yè)手冊，中國輕工業(yè)出版社，1998; p99-120)，即 制成蘆丁糖苷酶活性高的麥芽。
按實(shí)施例l、 2方法提取酶并處理蘆??；其反應(yīng)物用薄層層析(TLC)和高 效液相色譜法(魏勝華大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，22 (2)， 114-116， 2003)測定 結(jié)果；85%的帶2個(gè)糖基的蘆丁降解成1個(gè)糖基的異槲皮素和槲皮素。
上述麥芽制備過程中所加的蘆丁換成淫羊藿或大豆異黃酮甙(苷)制備麥 芽，用所制備的麥芽酶解淫羊藿或大豆異黃酮苷，分別變成低糖基淫羊藿甙和 甙員或大豆異黃酮苷甙元(數(shù)據(jù)略)。
實(shí)施例4:
將1公斤高粱水洗干凈，在16"C發(fā)芽水中浸4~8小時(shí)發(fā)芽12~16小時(shí)后， 用50毫升含0.5ppm的市場上的赤霉酸和15毫克人參總皂苷的水溶液或緩沖 液(醋酸緩沖液、磷酸緩沖或tris緩沖液)噴射混勻，16"繼續(xù)發(fā)芽4 5天， 干燥(干燥方法，管敦儀編啤酒工業(yè)手冊，中國輕工業(yè)出版社，1998;p99-120)， 即制成人參皂苷糖苷酶活性高的高梁芽。
上述500克高粱芽(干重計(jì)算)搗碎、加入3000毫升0.02摩爾、pH5.0醋酸 緩沖液浸泡一小時(shí)，離心除雜，上清液加入3倍體積的酒精，離心收集沉淀，再 用其緩沖液定溶為250毫升，離心除雜，即得酶液。
用上述100毫升高粱芽酶液和含3克的人參皂苷Rbl的50毫升溶液混合，在 40 50。C攪拌反應(yīng)10 24小時(shí)；其反應(yīng)液流進(jìn)50毫升的D-101大孔樹脂上吸附， 用400毫升的水洗雜質(zhì)，再用200毫升85%乙醇洗皂苷，蒸干得到1.2克的反應(yīng)產(chǎn) 物；其反應(yīng)產(chǎn)物用薄層層析(TLC)和高效液相色譜法(王鐵生主編中國人 參，遼寧科學(xué)技術(shù)出版社2001年，p736-739)測定結(jié)果；80。/c的人參皂苷Rbl 轉(zhuǎn)化成F2、 Rg3、 C-K、 Rh2等人參皂苷。
上述高粱發(fā)芽過程中，人參總皂苷換成黃芪皂苷，可得到能水解黃芪皂苷 糖的高粱芽；其酶液可將多糖基的黃芪皂苷轉(zhuǎn)化為低糖基的黃芪甲苷；人參總 皂苷改變成柴胡或者薯蕷皂苷，分別得到能水解柴胡或者薯蕷皂苷的高粱芽。
實(shí)施例5: 將1公斤玉米或小麥水洗干凈，在16'C發(fā)芽水中浸4 8小時(shí)發(fā)芽14小時(shí) 后，用50毫升含0.5ppm的市場上的赤霉酸和13毫克白頭翁皂苷(按照文獻(xiàn): "劉琳等，大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，23 (1)， 18-21， 2000"方法提取的)的水溶 液或緩沖液(醋酸緩沖液、磷酸緩沖或tris緩沖液)噴射在混勻，16"C繼續(xù)發(fā) 芽4 5天，干燥(干燥方法，管敦儀編啤酒工業(yè)手冊，中國輕工業(yè)出版社， 1998; p99-120)，即制成白頭翁皂苷糖苷酶活性高的玉米或小麥芽。
按實(shí)施例1或2、 3、 4方法提取酶，處理白頭翁皂苷反應(yīng)；其反應(yīng)物用用薄 層層析(TLC)和高效液相色譜法(王偉大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，24 (1)， 4-7， 2005)測定結(jié)果；80%的帶5個(gè)糖基的白頭翁皂苷降解成1-3個(gè)糖基的白頭翁皂 苷。
玉米芽或者小麥芽生產(chǎn)過程中，所加的白頭翁皂苷改變成人參皂苷、柴胡 皂苷、薯蕷皂苷、淫羊藿苷或者其提取物；可生產(chǎn)相應(yīng)皂苷酶活力高的玉米芽 或者小麥芽。
實(shí)施例1 5中所用原料，除白頭翁皂苷之外，均為市場上所銷售的商品。
權(quán)利要求
1. 一種皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽，其特征在于是由如下步驟制備在谷物芽制備過程中加入赤霉素并加入人參皂苷或白頭翁皂苷或薯蕷皂苷或黃芪皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙(苷)，使谷物發(fā)芽、干燥，分別得到相應(yīng)的人參皂苷或白頭翁皂苷或薯蕷皂苷或黃芪皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙糖苷酶活力高的谷物芽。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽，其特征在于所述赤霉素的用量為每公斤谷物0.1~3 ppm，所述人參皂苷或白頭翁皂苷或薯蕷皂苷或黃芪皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙的用量為每公斤谷物1~200毫克；13 20。C溫度發(fā)芽12~16小時(shí)，加入赤霉素并加入人參皂苷或白頭 翁皂苷或薯蕷皂苷或黃苦皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙(苷)，繼 續(xù)發(fā)芽4 5天，干燥，即得相應(yīng)皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽。
3. —種如權(quán)利要求l所述皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽的用途，其特征 在于分別用于酶解人參皂苷或白頭翁皂苷或薯蕷皂苷或黃芪皂苷或者淫羊藿甙 或者大豆異黃酮甙或蘆丁甙，得到活性高的低糖基皂苷和苷元或低糖基甙和甙 元。
全文摘要
本發(fā)明公開一種皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽及其用途，皂苷或甙糖苷酶活性高的谷物芽是用如下方法制備在谷物芽——包括大麥、高粱、玉米、小麥芽制備過程中加入赤霉素并加入人參皂苷或白頭翁皂苷或薯蕷皂苷或黃芪皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙，使其發(fā)芽、干燥，分別得到相應(yīng)皂苷或甙(苷)糖苷酶活力高的谷物芽。制作工藝簡單、成本低，對(duì)中草藥的主要活性成分—皂苷和甙糖基的水解能力強(qiáng)，可用于水解人參皂苷或白頭翁皂苷或薯蕷皂苷或黃芪皂苷或淫羊藿甙或大豆異黃酮甙或蘆丁甙，以制備相應(yīng)的高活性的低糖基次生皂苷或甙。
文檔編號(hào)A23L1/30GK101385519SQ200710012789
公開日2009年3月18日 申請(qǐng)日期2007年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月11日
發(fā)明者金鳳燮, 魚紅閃 申請(qǐng)人:金鳳燮