前列腺癌相關(guān)基因和多肽的制作方法

專利名稱：：前列腺癌相關(guān)基因和多肽的制作方法前列腺癌相關(guān)基因和多肽相關(guān)申請本申請要求2005年7月27日提交的、流水號為60/703，107的美國臨時申請的權(quán)益，將其內(nèi)容完整收入本文作為參考。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及生物學(xué)領(lǐng)域，更具體的說就是癌癥治療和診斷領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及由新基因ELOVL7編碼的新多肽及ELOVL7與前列腺癌(PRC)之間的相關(guān)性。此外，本發(fā)明涉及ELOVL7基因。本發(fā)明的基因和多肽可用于例如PRC的診斷、作為研發(fā)針對該病的藥物的靶分子、及用于削弱PRC的細胞生長。發(fā)明背景PRC是男性中最常見的惡性腫瘤，而且是美國和歐洲癌癥相關(guān)死亡第二位原因(GronbergH,Lancet361:859-64(2003))。PRC的發(fā)病率在大多凄t發(fā)達國家顯著日益增長，大概是由于流行的西方飲食和老齡人口的爆發(fā)(GronbergH,Lancet361:859-64(2003);HsingAWandDevesaSS,EpidemiolRev23:3-13(2001))。手術(shù)和放療對局部疾病有效，但幾乎30。/。接受治療的PRC患者仍然受到疾病復(fù)發(fā)的困擾(FeldmanBJandFeldmanD,NatRevCancer1:34-45(2001);HanMetal.,JUrol166:416-9(2001);IsaacsWetal.,CancerCell2:113-6(2002))。大多數(shù)患有復(fù)發(fā)或晚期疾病的患者對雄激素消融療法響應(yīng)良好，因為PRC在較早階段通常是雄激素依賴性的。然而，他們常常獲得雄激素不依賴性表型且顯示出對雄激素消融療法沒有響應(yīng)或響應(yīng)很差。目前沒有有效的抗癌藥物或療法可用于晚期或復(fù)發(fā)的雄激素不依賴性PRC。因此，急切且迫切需要根據(jù)前列腺癌發(fā)生或激素不應(yīng)性的分子機制來開發(fā)新療法。我們先前通過LMM(激光微光束顯微切割)對純化自臨床癌組織的PRC細胞進行了全基因組范圍cDNA微陣列分析，鑒定出其表達水平在PRC細胞和/或其前體PIN中與正常前列腺上皮細胞相比明顯升高的數(shù)十種基因(AshidaSetal"CancerRes64:5963-72(2004》。在反式激活的基因中,我們在此報導(dǎo)新基因ELOVL7(Genebank編號NM—024930,SEQIDNO:14，編碼SEQIDNO:15)的表征，它很有可能在長鏈脂肪酸合成中發(fā)揮重要作用。ELOVL(很長鏈脂肪酸的延長)家族是酵母ELO的人類同系物，催化長鏈脂肪酸的延長反應(yīng)(LeonardAEetal.，ProgLipidRes43:36-54(2004);WangYetal.，JLipidRes46:706-15(2005))。負責向脂肪酸鏈的羧基末端添加兩個碳單元的延長系統(tǒng)由四種酶構(gòu)成縮合酶(延長酶、(3-酮?；鵆oA合酶)、P-酮?；鵆oA還原酶、P-羥?；鵆oA脫水酶、和反式-2,3-烯酰基-CoA還原酶(LeonardAEetal.,ProgLipidRes43:36-54(2004)),而且脂肪酸延長速率由延長酶的活性決定(WangYetal.，JLipidRes46:706-15(2005))。迄今為止才艮導(dǎo)了哺乳動物中的六種不同脂肪酸延長酶亞型(ELOVLl-6),而且認為這些延長酶特異性的作用于不同鏈長度的飽和或不飽和脂肪酸(LeonardAEetal.,ProgLipidRes43:36-54(2004);WangYetal,,JLipidRes46:706-15(2005);SunejaSKetal.,BiochimBiophysActa1042:81-5(1990))。長鏈脂肪酸的代謝途徑在維持膜脂組成和生成某些細胞信號分子前體諸如類花生酸(eicosanoid)方面發(fā)揮重要作用(LeonardAEetal.,ProgLipidRes43:36-54(2004);WangYetal.,JLipidRes46:706-15(2005))。如此，預(yù)計這些代謝途徑牽涉癌細胞的有些基本活性。cDNA微陣列技術(shù)提供了正常細胞和惡性細胞中基因表達的全面序型(comprehensiveprofile),及比較惡性細胞與相應(yīng)正常細胞中的基因表達的能力(Okabeetal.,CancerRes61:2129-37(2001);Kitaharaetal.,CancerRes61:3544-9(2001);Linetal.，Oncogene21:4120-8(2002);Hasegawaetal"CancerRes62:7012-7(2002))。這種方法促進了對癌細胞復(fù)雜性質(zhì)的理解，有助于闡明癌發(fā)生的機理。鑒定出腫瘤中下調(diào)的基因能夠更加精確和準確的診斷個體癌癥，并可開發(fā)新的治療靶(BienzandClevers，Cell103:311-20(2000))。為了從整個基因組的角度揭示腫瘤的機理，并且找出用于診斷和開發(fā)新治療性藥物的耙分子，本發(fā)明人使用23,040個基因的cDNA微陣列分析了腫瘤細胞的表達序型(Okabeetal"CancerRes61:2129-37(2001);Kitahametal.,CancerRes61:3544-9(2001);Linetal.，Oncogene21:4120-8(2002);Hasegawaetal"CancerRes62:7012-7(2002))。設(shè)計用于揭示癌發(fā)生機制的研究促進了抗腫瘤劑的分子靶的鑒定。例如，起初被開發(fā)用于抑制與Ras有關(guān)的生長-信號傳導(dǎo)途徑、其活化依賴于翻譯后法尼基化的法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(FTI)能在動物模型中有效治療Ras依賴性腫瘤(SunJetal.,Oncogene16:1467-73(1998))。使用抗癌藥物與抗HER2單克隆抗體trastuzumab的組合對人進行的、以拮抗原癌基因受體HER2/neu為目的的臨床試驗對乳腺癌患者獲得了改善的臨床響應(yīng)和整體存活(MolinaMAetal.,CancerRes61:4744-4749(2001))。最終，已開發(fā)出能選擇性滅活bcr-abl融合蛋白的酪氨酸激酶抑制劑STI-571來治療慢性髓性白血病，在該病中，bcr-abl酪氨酸激酶的組成性活化在白細胞轉(zhuǎn)化中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。此類藥劑被設(shè)計用于抑制特定基因產(chǎn)物的致癌活性(O，DwyerMEandDrukerBJ，CurrOpinOncol12:594-7(2000))。因此，在癌性細胞中一般上調(diào)的基因產(chǎn)物可充當潛在的靶，用于開發(fā)新的抗癌藥。事實上，靶向引起腫瘤生長和進展的異常表達分子的新藥物已經(jīng)證明對某些類型的癌癥有效。此類藥物包括用于乳腺癌的Herceptin、用于CML的Glivec(STI571)和用于非小細胞性肺癌的Iressa(ZD1839)。已知數(shù)種分子在PRC中過表達，并被鑒定為PRC的治療靶或標志物(Xuetal.，CancerRes60:6568-72(2000);Luoetal.,CancerRes62:2220-6(2002))。然而，它們中的大多數(shù)在其它主要器官中也高度表達。如此，靶向這些分子的藥劑可能對癌細胞有毒，但對其它器官的正常生長細胞可能也有不利影響。已證明CD8+細胞毒性T淋巴細胞(CTL)識別MHCI類分子上呈遞的腫瘤相關(guān)抗原(TAA)所衍生的表位肽并裂解腫瘤細胞。第一例TAA是MAGE家族，由于這一發(fā)現(xiàn)，使用免疫學(xué)方法已發(fā)現(xiàn)了許多其它TAA(Boon,IntJCancer54:177-80(1993》BoonandvanderBruggen,JExpMed183:725-9(19%);vanderBmggenetal.,Science254:1643-7(1991);Brichardetal.,JExpMed178:489-95(1993);Kawakamietal.，JExpMed180:347-52(1994》。有些已發(fā)現(xiàn)的TAA現(xiàn)在處在免疫療法靶的臨床開發(fā)階段。迄今為止所發(fā)現(xiàn)的TAA包括MAGE(vanderBruggenetal.,Science254:1643-7(1991))、gplOO(Kawakamietal.，JExpMed180:347-52(1994))、SART(Shichijoetal.,JExpMed187:277-88(1998))和NY-ESO-l(Chenetal.,ProcNatlAcadSciUSA94:1914-8(1997》。另一方面，已證明在腫瘤細胞中特異性過表達的基因產(chǎn)物已顯示出作為誘導(dǎo)細胞免疫應(yīng)答的靶受到識別。此類基因產(chǎn)物包括p53(Umanoetal.,BritJCancer84:1052-7(2001))、HER2/neu(Tanakaetal.，BritJCancer84:94-9(2001))、CEA(Nukayaetal.,IntJCancer80:92-7(1999》等。盡管已在與丁AA有關(guān)的基礎(chǔ)和臨床研究中取得了顯著進步(Rosenbergetal.,NatureMed4:321-7(1998);Mukherjietal.，ProcNatlAcadSciUSA92:8078-82(1995);Huetal.,CancerRes56:2479-83(1996))，目前可用于治療腺癌，包括結(jié)腸直腸癌的候選TAA的數(shù)目仍然很有限。在癌細胞中豐富表達且同時該表達局限于癌細胞的TAA可能是免疫療法靶的理想候選物。此外，能誘導(dǎo)有力且特異性的抗胂瘤免疫應(yīng)答的新TAA的鑒定預(yù)計會促進肽接種策略在多種類型癌癥中的臨床使用(BoonandvanderBruggen,JExpMed183:725-9(1996);雨derBruggenetal.,Science254:1643-7(1991);Brichardetal.,JExpMed178:489-95(1993);Kawakamietal"JExpMed180:347-52(1994);Shichijoetal.,JExpMed187:277-88(1998);Cheneta.，ProcNatlAcadSciUSA94:1914-8(1997);Harris,JNatlCancerInst88:1442-5(1996》Butterfieldetal"CancerRes59:3134-42(1999);Vissersetal.,CancerRes59:5554-9(1999);■derBurgetal.,JImmunol156:3308-14(1996);Tanakaetal.，CancerRes57:4465-8(1997);Fujieetal.，IntJCancer80:169-72(1999);Kikuchietal.，IntJCancer81:459-66(1999);Oisoetal"IntJCancer81:387-94(1999》。據(jù)反復(fù)報道，來自某些健康供體的經(jīng)肽刺激的外周血單個核細胞(PBMC)應(yīng)答肽而產(chǎn)生顯著水平的IFN-a或y,但在"Cr-釋放測定法中很少以局限于HLA-A24或-A0201的方式對腫瘤細胞發(fā)揮細胞毒性(Kawanoetal.,CancerRes60:3550-8(2000);Nishizakaetal.，CancerRes60:4830-7(2000);Tamuraetal"JpnJCancerRes92:762-7(2001))。然而，HLA-A24和HLA-A0201二者是日本人和高加索人中常見HLA等位基因之一(Dateetal.，TissueAntigens47:93-101(1996);Kondoetal.,JImmunol155:4307-12(1995);Kuboetal.,JImmunol152:3913-24(1994);Imanishietal.,ProceedingoftheeleventhInternationalHistocompatibilityWorkshopandConferenceOxfordUniversityPress,Oxford,1065(1992);Williamsetal.，TissueAntigen49:129(1997))。如此，由這些HLA呈遞的癌癥抗原性肽對于治療日本人和高加索人中的癌癥可能是特別有用的。另外，已知使用高濃度的肽通常在體外誘導(dǎo)低親和力的CTL,在抗原呈遞細胞(APC)上產(chǎn)生高水平的特定肽/MHC復(fù)合物，該復(fù)合物會有效激活這些CTL(Alexander-Milleretal.,ProcNatlAcadSciUSA93:4102-7(1996》。發(fā)明概述為了披露PRC的機制及鑒定用于治療這些腫瘤的新診斷標志物和/或藥物靶，本發(fā)明人使用全基因組范圍cDNA微陣列(genome-widecDNAmicroa^■ay)聯(lián)合;^敫光孩i光束顯樣t+刀吝,j(lasermicrobeammicrodissection),分葉斤了PRC中的基因表達序型。在先前的研究中，通過聯(lián)合激光微光束與全基因組范圍cDNA微陣列進行了PRC細胞(PRC)和非侵入性前體細胞(PIN)的精確表達序型分析。通過比較侵入性PRC與正常前列腺上皮或非侵入性前體PIN的表達序型，本發(fā)明人鑒定出在侵入性PRC和前體PIN二者中都找到了的88種上調(diào)的基因和207種下調(diào)的基因。在本發(fā)明中，本發(fā)明人聚焦于在PRC細胞中過表達的新基因，ELOVL7。使用多克隆抗ELOVL7抗體進行的免疫組織化學(xué)分析證實了PRC細胞中與正常前列腺上皮相比升高的ELOVL7表達，ELOVL7是有可能牽涉長鏈脂肪酸延長的281個氨基酸的蛋白質(zhì)。脂肪酸延長酶(elongase)的新成員ELOVL7鑒定為在PRC細胞中特異性過表達的基因。本發(fā)明人顯示了siRNA對ELOVL7表達的抑制導(dǎo)致PRC細胞生長的顯著削弱，從而證明了ELOVL7表達對于PRC細胞的細胞生長或生存力是至關(guān)重要的。許多流行病學(xué)或?qū)嶒炇已芯可婕跋嚓P(guān)長鏈脂肪酸代謝有可能在前列腺癌發(fā)生和PRC發(fā)展中發(fā)揮一些重要作用。通過體內(nèi)脂肪酸分析和體外脂肪酸延長測定法，我們驗證了ELOVL7具有作為脂肪酸延長酶的實際活性，而且優(yōu)先參與動物肉類膳食中非常豐富的飽和長鏈脂肪酸(SLFA)的延長。這些發(fā)現(xiàn)說明，ELOVL7大概是通過長鏈脂肪酸及其衍生物的代謝而牽涉PRC細胞的生長和存活，而且該分子是研發(fā)PRC的治療或預(yù)防新策略的有用耙物。ELOVL7編碼281個氨基酸的蛋白質(zhì)。根據(jù)Northem印跡分析，ELOVL7的表達顯示出局限于前列腺、腎和其它數(shù)種組織。本發(fā)明提供了由該基因編碼的多肽，及其生產(chǎn)和使用。更具體的說，本發(fā)明提供了在PRC細胞中表達升高的新的人類多肽ELOVL7或其功能性等同物。在一個優(yōu)選的實施方案中，ELOVL7多肽包括由可讀框SEQIDNO:14編碼的281個氨基酸的蛋白質(zhì)。ELOVL7多肽優(yōu)選包含SEQIDNO:15所示氨基酸序列(Genebank編號NMJ)24930即SEQIDNO:14編碼SEQIDNO:15)。本申請還提供了由ELOVL7多核苷酸序列的至少一部分或者與SEQIDNO:14所示序列至少80°/。且更優(yōu)選至少90%相同的多核苷酸序列所編碼的分離的蛋白質(zhì)。本發(fā)明進一步提供了在大多數(shù)PRC中與相應(yīng)非癌性前列腺導(dǎo)管上皮相比表達顯著升高的新的人類基因ELOVL7。分離的ELOVL7基因包含SEQIDNO:14所示多核苷酸序列。具體而言，ELOVL7cDNA包含3815個核苦酸，其中包含846個核苷酸的可讀框(SEQIDNO:14)。本發(fā)明進一步涵蓋能與SEQIDNO:14所示多核苷酸序列發(fā)生雜交并且與SEQIDNO:14所示多核苷酸序列至少15%且更優(yōu)選至少25%互補的多核苷酸，其程度使得它們編碼ELOVL7蛋白或其功能性等同物。此類多核苷酸的例子有序列SEQIDNO:14所編碼的ELOVL7的簡并物和等位基因突變體。在用于本文時，分離的基因指結(jié)構(gòu)與任何天然存在多核苷酸或與跨越超術(shù)語因此包括例如(a)具有生物體基因組中天然存在基因組DNA分子的部分方式被摻入載體或者原核或真核基因組DNA的多核苷酸；(c)不同分子諸如cDNA、基因組片段、通過聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)產(chǎn)生的片段、或限制性片段；和(d)作為雜合基因即編碼融合多肽的基因一部分的重組核苷酸序列。從而，一方面，本發(fā)明提供了編碼本文所述多肽或其片段的分離的多核苷酸。優(yōu)選的是，分離的多核苷酸包含與SEQIDNO:M所示核苷酸序列至少60%相同的核苷酸序列。更優(yōu)選的是，分離的核酸分子與SEQIDNO:14所示核苷酸序列至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大程度相同。在分離的多核苷酸的長度比參比序列例如SEQIDNO:14長或相當(equivalent)的情況中，比4支是對參比序列的全長進行的。若分離的多核苷酸比參比序列例如SEQIDNO:l4任何環(huán))。本發(fā)明還提供了通過用編碼ELOVL7蛋白的多核苷酸序列轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化宿主細胞并表達該多核苷酉l/f列來生產(chǎn)蛋白質(zhì)的方法。另外，本發(fā)明提供了包含編碼ELOVL7蛋白的核芬酸序列的載體，及包含編碼ELOVL7蛋白的多核苷酸的宿主細胞。此類載體和宿主細胞可用于生產(chǎn)ELOVL7蛋白。本申請還提供了特異性識別ELOVL7蛋白的結(jié)合劑。例如，結(jié)合劑可以是針對ELOVL7蛋白生成的抗體?；蛘?，結(jié)合劑可以是對該蛋白質(zhì)特異的配體或特異性結(jié)合該蛋白質(zhì)的合成多肽(參見例如WO2004044011)。還提供了ELOVL7基因的反義多核苷酸(例如反義DNA)、核酶和siRNA(小千擾RNA)。本發(fā)明進一步提供了用于診斷PRC的方法，其包括測定該基因在來自受試者的生物學(xué)樣品中的表達水平、將ELOVL7基因的表達水平與正常樣品進行比較、并規(guī)定樣品中ELOVL7基因的高表達水平表明受試者患有或有風(fēng)險發(fā)生PRC的步驟。本發(fā)明進一步提供了篩選用于治療或預(yù)防PRC的化合物的方法。該方法包括使ELOVL7多肽接觸測試化合物，并選4奪能結(jié)合ELOVL7多肽或改變ELOVL7多肽生物學(xué)活性的測試化合物。在有些實施方案中，該篩選方法可通過檢測ELOVL7的脂肪酸延長活性來進行。在這些實施方案中，脂肪酸延長活性可使用本文所述體外脂肪酸延長測定法來測定。本發(fā)明進一步提供了篩選用于治療或預(yù)防PRC的化合物的方法，該方法包括使測試化合物接觸表達ELOVL7多肽或?qū)肓嗽趫髮?dǎo)基因上游包含ELOVL7轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的載體的細胞，并選擇能抑制ELOVL7多肽表達水平的測試化合物。本發(fā)明還提供了用于治療或預(yù)防PRC的藥物組合物。藥物組合物可以是例如抗癌劑。藥物組合物可以分別包含針對SEQIDNO:14所示ELOVL7多核普酸序列的反義S-寡核苦酸、siRNA分子或核酶的至少一部分。合適的siRNA靶向序列SEQIDNO:7。如此，本發(fā)明的siRNA包含來自SEQIDNO:7的核苷酸序列。它可以優(yōu)選被選擇作為依照本發(fā)明治療或預(yù)防PRC的靶物。藥物組合物還可以是那些包含通過本發(fā)明篩選用于治療或預(yù)防細胞增殖性疾病諸如PRC的化合物的方法選擇出的化合物的藥物組合物。希望藥物組合物的作用過程(courseofaction)抑制癌細胞諸如PRC細胞的生長。藥物組合物可應(yīng)用于哺乳動物，包括人類和馴養(yǎng)的哺乳動物。本發(fā)明進一步提供了使用本發(fā)明所提供的藥物組合物來治療或預(yù)防PRC的方法。另外，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防癌癥的方法，該方法包括施用ELOVL7多肽的步驟。預(yù)期通過施用ELOVL7多肽誘導(dǎo)了抗腫瘤免疫力。如此，本發(fā)明還提供了用于誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力的方法，該方法包括施用ELOVL7多肽，以及藥物組合物來治療或預(yù)防包含ELOVL7多肽的癌癥的步驟。應(yīng)當了解，前述發(fā)明概述和后述發(fā)明詳述二者都是優(yōu)選的實施方案，而非對本發(fā)明或本發(fā)明其它備選實施方案的限制。附圖簡述圖l顯示了PRC細胞中的ELOVL7mRNA表達水平和ELOVL7mRNA的組織分布。圖l(A)的照片顯示了從12份前列腺癌組織顯微解剖得到的癌細胞(T)和正常上皮細胞(N)中的ELOVL7半定量RT-PCR分析。12條水平線表示臨床N/T成對案例。使用(32-MG來對每一份的cDNA含量進行定量。圖1(B)的照片顯示了多種組織Northem印跡分析，證明了ELOVL7在前列腺、胰腺和腎中表達，而且主要ELOVL7轉(zhuǎn)錄物的長度為大約4.0kb。P.B.白細J包表示外周血白細胞。圖1(C)的照片顯示了通過R丁-PCR進行的、PRC細胞與正常腎和前列腺中ELOVL7表達的比較，證明了PRC細胞中的ELOVL7表達明顯高于正常腎或前列腺。使用p2-MG來對每一份的cDNA含量進行定量。圖2顯示了用抗ELOVL7抗體進行的PRC組織免疫組織化學(xué)分析。在所檢查的PRC組織中觀察到與抗ELOVL7抗體的免疫反應(yīng)性，PRC細胞(A)的細胞質(zhì)中展現(xiàn)出強烈的陽性免疫染色，而在PRC的PIN前體(B)和非癌性前列腺上皮(C)中觀察到非常微弱的細胞質(zhì)免疫陽性。顯示了來自12份PRC標本的免疫組織化學(xué)研究的代表性數(shù)據(jù)。圖3顯示了LNCaP和22Rvl細胞中由siRNA引起的ELOVL7表達敲減？1起了PRC細胞生長和細胞活力的削弱。圖3(A)的照片顯示了siRNA對LNCaP前列腺細胞系中ELOVL7的敲減效應(yīng)。使用經(jīng)過針對ELOVL7的siRNA表達載體(si存5)以及陰性對照載體(s正GFP)轉(zhuǎn)染的細胞進行了半定量RT-PCR。使用P2-MG來對RNA進行定量。圖3(B)的照片顯示了經(jīng)過所示針對ELOVL7的siRNA表達載體(si存5)和陰性對照載體(siEGFP)轉(zhuǎn)染的LNCaP細胞的集落形成測定結(jié)果。與遺傳霉素一起溫育14天后通過0.1。/。結(jié)晶紫染色來顯現(xiàn)細胞。圖3(C)的條形圖顯示了經(jīng)過所示針對ELOVL7的siRNA表達載體(si弁5)和陰性對照載體(siEGFP)轉(zhuǎn)染的LNCaP細胞的MTT測定結(jié)果。繪制了與遺傳霉素一起溫育14天后的平均值及表示SD(標準偏差)的誤差范圍線。Y軸上的ABS表示用微量板讀數(shù)儀測量得到的490nm吸光度，以630nm為參比。這些實驗以一式三份進行。"表示p值小于0.01(Students氏t檢驗)。圖3(D)的照片顯示了siRNA對22Rvl前列腺細胞系中ELOVL7的敲減效應(yīng)。使用經(jīng)過針對ELOVL7的siRNA表達載體(si弁5)以及陰性對照載體(s正GFP)轉(zhuǎn)染的細胞進行了半定量RT-PCR。使用(32-MG來對RNA進行定量。圖3(E)的照片顯示了經(jīng)過所示針對ELOVL7的siRNA表達載體(si弁5)和陰性對照載體(s正GFP)轉(zhuǎn)染的22Rvl細胞的集落形成測定結(jié)果。與遺傳霉素一起溫育14天后通過0.1%結(jié)晶紫染色來顯現(xiàn)細胞。圖3(F)的條形圖顯示了經(jīng)過所示針對ELOVL7的siRNA表達載體(si弁5)和陰性對照載體(siEGFP)轉(zhuǎn)染的22Rvl細胞的MTT測定結(jié)果。繪制了與遺傳霉素一起溫育14天后的平均值及表示SD(標準偏差)的誤差范圍線。Y軸上的ABS(吸收值)表示用微量板讀數(shù)儀測量得到的490nm吸光度，以630nm為參比。這些實驗以一式三份進行。"表示p值小于0.01(Students氏t檢驗)。圖4顯示了由ELOVL7敲減引起的脂肪酸級分變化。將ELOVL7-si5或?qū)φ誷iRNA轉(zhuǎn)染入LNCaP細胞后第7天，從所述細胞提取脂質(zhì)并通過氣相層析進行脂肪酸級分分析。ELOVL7-si5轉(zhuǎn)染顯示出長鏈飽和脂肪酸水平(C20:0p=0.002，C22:0p=0.008，C24:0p二0.003)與siEGFP轉(zhuǎn)染相比的顯著降低(20-30%)，而ELOVL7-si5轉(zhuǎn)染對PC細胞中的單不飽和脂肪酸(n-9)和多不飽和脂肪酸(n-6和n-3)的水平?jīng)]有影響。圖5顯示了人重組ELOVL7蛋白的表達及其體外脂肪酸延長酶活性。(A)將30嗎來自受感染或未感染的昆蟲細胞的微粒體蛋白加載到15%SDS-PAGE凝膠上，使用l:1000稀釋的抗His抗體進行的Westem印跡分析在受感染昆蟲細胞的微粒體中檢測出30kDa重組人ELOVL7。(B)使用50嗎來自受感染昆蟲細胞的微粒體測得的體外脂肪酸延長活性。顯示了每種脂肪酸水平在5分鐘反應(yīng)前后的增量，來自受感染細胞的微粒體顯著生成C22:0和C24:0，而對照微粒體生成C20:0但根本不生成C22:0和C24:0。對照德t粒體的C20:0生成很可能是由于Sf21昆蟲細胞的內(nèi)源脂肪酸延長活性，而且在包含人ELOVL7蛋白的微粒體中，C20:0變成C22:0、C24:0或更長脂肪酸的延長反應(yīng)可活躍進行，導(dǎo)致C20:0的產(chǎn)量更低。(C)脂肪酸鏈延長活性依賴于作為酶來源的受感染細胞微粒體的量。反應(yīng)混合物在0.45ml反應(yīng)總體積中包含10-200叱微粒體。反應(yīng)成分為0.1MTris-Cl(pH7.4)、3mM花生四烯酰基(Arachidoyl)-CoA、7.5mM丙二酸單?；?Malonyl)-CoA、20mMNADPH、和0.6mM不含脂肪酸的BSA。三個獨立實驗得到同樣的結(jié)果。發(fā)明詳述詞語"一個"、"一種"、"所述"和"該"在用于本文時指"至少一個/種"，除非另有明確說明。為了披露PRC的機制及鑒定用于治療和/或預(yù)防這些腫瘤的新診斷標志和/或藥物靶，本發(fā)明人使用全基因組范圍cDNA微陣列聯(lián)合激光微光束顯微切割，分析了PRC中的基因表達序型。結(jié)果是，鑒定出在PRC細胞中特異性過表達的EL0VL7。此外，用小千擾RNA(siRNA)抑制ELOVL7基因的表達導(dǎo)致對癌性細胞的顯著生長抑制。這些發(fā)現(xiàn)說明，ELOVL7給予癌細胞以致癌活性，而且抑制這些蛋白質(zhì)的活性可能是治療和預(yù)防增殖性疾病諸如PRC的理想策略。ELOVL7本申請鑒定了新的人類基因ELOVL7，其在PRC細胞中的表達與正常前列腺上皮相比顯著升高。ELOVL7cDNA由3815個核苷酸組成，包含SEQIDNO:14所示846個核普酸的可讀框。該可讀框編碼推定的281個氨基酸的蛋白質(zhì)。如此，本發(fā)明提供了由此基因編碼的基本上純的多肽，包括包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽及其功能性等同物，其程度使得它們編碼ELOVL7蛋白。與SEQIDNO:15在功能上等同的多肽的例子包括例如與人ELOVL7蛋白對應(yīng)的、其它生物體的同源蛋白，以及人ELOVL7蛋白的突變體。在本發(fā)明中，術(shù)語"功能上等同的，，指受試多肽具有脂肪酸延長活性，或者具有像ELOVL7蛋白一樣促進細胞增殖和賦予癌細胞以致癌活性的活性。受試多肽是否具有細胞增殖活性可以如下判斷，將編碼受試多肽的DNA導(dǎo)入細胞，表達相應(yīng)多肽并檢測對細胞增殖的促進作用或集落形成活性的提高。此類細胞包括例如NIH3T3、COS7和HEK293。用于檢測功能上等同的多肽的便利手段是測量多肽的脂肪酸延長活性。如此，例如，可以測試變異多肽(例如與SEQIDNO:15具有至少約80%序列同一性的多肽或由能在嚴格條件下與SEQIDNO:14發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽)以測定脂肪酸延長活性。用于檢測脂肪酸延長活性的方法披露于下文。典型的，這些方法牽涉使測試多肽接觸用于實施測定的適宜試劑。此類試劑可以包括例如脂肪酸底物(例如花生四烯?；?CoA)、丙二酸單?；?CoA、NADPH、及用于纟全測延長產(chǎn)物的試劑。這些方法進一步包括檢測脂肪酸底物的脂肪酸延長水平并通過將脂肪酸延長水平與脂肪酸延長活性聯(lián)系起來來測量脂肪酸延長活性。用于制備與給定蛋白質(zhì)在功能上等同的多肽的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，包括將突變導(dǎo)入蛋白質(zhì)的已知方法。例如，通過定點誘變將適宜突變導(dǎo)入這些蛋白質(zhì)的氨基酸序列，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以制備與人ELOVL7蛋白在功能上等同的多肽(Hashimoto-Gotohetal.,Gene152:271-5(1995);ZollerandSmith,MethodsEnzymo100:468-500(1983);Krameretal.,NucleicAcidsRes12:9441-9456(1984);KramerandFritz,MethodsEnzymol154:350-67(1987);Kunkel,ProcNatlAcadSciUSA82:488-92(1985);Kunkel，MethodsEnzymol85:2763-6(1988))。氨基酸突變也可以天然存在。本發(fā)明的多肽包括那些具有人ELOVL7蛋白的氨基酸序列，其中一個或多個氨基酸突變的蛋白質(zhì)，只要所得突變多肽與人ELOVL7蛋白在功能上等同。這樣的突變體中突變氨基酸的數(shù)目一般是10個氨基酸或更少，優(yōu)選6個氨基酸或更少，更優(yōu)選3個氨基酸或更少。經(jīng)過突變或修飾的蛋白質(zhì)，即具有通過在某個氨基酸序列中替代、刪除、插入和/或添加一個或多個氨基酸殘基而得到的氨基Sl/f列的蛋白質(zhì)，已知保留了原始的生物學(xué)活性(Marketal.，ProcNatlAcadSciUSA81:5662-6(1984);ZollerandSmith,NucleicAcidsRes10:6487-500(1982);Dalbadie-McFarlandetal.，ProcNatlAcadSciUSA79:6409-13(1982))。待突變的氨基酸殘基優(yōu)選突變成氨基酸側(cè)鏈特性保守的不同氨基酸(稱為保守氨基酸替代的過程)。氨基酸側(cè)鏈特性的例子有疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V)、親7K性氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T)、和具有如下共同官能團或特征的側(cè)鏈脂肪族側(cè)鏈(G、A、V、L、I、P);含羥基側(cè)鏈(S、T、Y);含硫原子側(cè)鏈(C、M);含羧酸和酰胺側(cè)鏈(D、N、E、Q);含堿側(cè)鏈(R、K、H);和含芳香族側(cè)鏈(H、F、Y、W)。注意，括號中的字母表示氨基酸單字母代碼。在人ELOVL7蛋白的氨基酸序列中添加一個或多個氨基酸殘基的多肽的例子有包含人ELOVL7蛋白的融合蛋白。本發(fā)明包括融合蛋白，即人ELOVL7蛋白與其它肽或蛋白質(zhì)的融合物。融合蛋白可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的技術(shù)來生成，諸如通過連接編碼本發(fā)明人ELOVL7蛋白的DNA與編碼其它肽或蛋白質(zhì)的DNA并使得讀碼框匹配，將融合DNA插入表達載體并在宿主中進行表達。對與本發(fā)明蛋白質(zhì)融合的肽或蛋白質(zhì)沒有限制?？捎米髋c本發(fā)明蛋白質(zhì)融合的肽的已知肽包括例如FLAG(Hoppetal.，Biotechnology6:1204-10(1988))、含六個His(組氨酸)殘基的6xHis、10xHis、流感凝集素(HA)、人c-myc片段、VSP-GP片段、pl8HIV片段、T7標簽、HSV標簽、E標簽、SV40T抗原片段、lck標簽、a-微管蛋白片段、B標簽、蛋白C片段、等等?？梢耘c本發(fā)明蛋白質(zhì)融合的蛋白質(zhì)的例子包括GST(谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶)、流感凝集素(HA)、免疫球蛋白恒定區(qū)、P-半乳糖普酶、MBP(麥芽糖結(jié)合蛋白)、等等。通過將編碼上述融合肽或蛋白質(zhì)的市售DNA與編碼本發(fā)明多肽的DNA融合，并表達所制備的融合DNA，即可制備出融合蛋白。本領(lǐng)域已知的、用于分離功能性等同多肽的一種備選方法是例如使用雜交才支術(shù)的方法(Sambrooketal.,MolecularCloning2nded.9.47-9.58,ColdSpringHarborLab.Press(1989))。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易的分離與編碼人ELOVL7蛋白的DNA序列(即SEQIDNO:14)的整個或部分具有高度同源性的DNA，并由分離的DNA分離與人ELOVL7蛋白在功能上等同的多肽。本發(fā)明的多肽包括那些由能與編碼人ELOVL7蛋白的DNA序列的整個或部分發(fā)生雜交的DNA編碼且與人ELOVL7蛋白在功能上等同的多肽。這些多肽包括對應(yīng)于衍生自人的蛋白質(zhì)的哺乳動物同系物(例如由猴、大鼠、兔和?；蚓幋a的多肽)。在從動物中分離與編碼人ELOVL7蛋白的DNA高度同源的cDNA時，特別優(yōu)選使用來自前列腺的組織。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以常規(guī)選擇用于分離編碼與人ELOVL7蛋白在功能上等同的多肽的DNA的雜交條件。例如，雜交可如下進行使用快速雜交緩沖液("Rapid-hybbuffer",AmershamLIFESCIENCE)于68。C預(yù)雜交30分鐘或更長時間，加入經(jīng)過標記的探針，并于68。C溫育H、時或更長時間。其后的洗滌步驟可以在例如低嚴格條件下進行。低嚴格條件為例如42。C、2XSSC、0.1%SDS，或優(yōu)選50。C、2XSSC、0.1%SDS。更優(yōu)選使用高嚴4各條件。高嚴格條件為例如于室溫用2XSSC、0.01%SDS洗滌3次、每次20分鐘，然后于37。C用1XSSC、0.1%SDS洗滌3次、每次20分鐘，再于50。C用IXSSC、0.1。/。SDS洗滌2次、每次20分鐘。然而，數(shù)種因素，諸如溫度和鹽濃度會影響雜交的嚴格性，而且本領(lǐng)域技術(shù)人員可適當選擇這些因素以獲得所需嚴格性。使用基于編碼蛋白質(zhì)的DNA的序列信息(SEQIDNO:14)合成的引物，可以利用基因擴增方法，例如聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)法代替雜交來分離編碼與人ELOVL7蛋白在功能上等同的多肽的DNA。由通過上述雜交技術(shù)或基因擴增技術(shù)分離出的DNA所編碼的、與人ELOVL7蛋白在功能上等同的多肽一般與人ELOVL7蛋白的氨基酸序列具有高度同源性。"高度同源性"通常指多肽序列或多核苷酸序列與其參照序列之間的同源性為40%或更高，優(yōu)選60%或更高，更優(yōu)選80%或更高，甚至更優(yōu)選85%、90%、93%、95%、98%、99%或更高。百分比同源性(也稱為百分比同一性)通常在兩個最佳比對的序列之間測定。為了比較而比對序列的方法是本
技術(shù)領(lǐng)域：
眾所周知的。序列的最佳比對和比較可例如使用WilburandLipman，ProcNatlAcadSciUSA80:726-30(1983)中的算法進行。本發(fā)明的多肽在氨基酸序列、分子量、等電點、存在或不存在糖鏈、或形式方面可以有差異，這:f又決于用于生產(chǎn)所述多肽的細胞或宿主或者所釆用的純化方法。無論如何，只要多肽具有與本發(fā)明的人ELOVL7蛋白等同的功能，它就在本發(fā)明的范圍內(nèi)。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法，可以以重組蛋白或天然蛋白的形式來制備本發(fā)明的多肽。重組蛋白可以如下制備將編碼本發(fā)明多肽的DNA(例如包含核香酸序列SEQIDNO:14的DNA)插入適宜的表達載體，將該載體導(dǎo)入適宜的宿主細胞，獲取提取物，并對提取物進行層析以純化多肽，所述層析例如離子交換層析、反相層析、凝膠過濾或利用固定有針對本發(fā)明蛋白質(zhì)的抗體的柱子的親和層析，或者多于一種上述柱子的組合。同樣，在宿主細胞(例如動物細胞和大腸桿菌)中以與谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶蛋白的融合蛋白的形式或者以添加了多個組氨酸的重組蛋白的形式表達本發(fā)明的多肽時，可以使用谷胱甘肽柱或鎳柱來純化所表達的重組蛋白?；蛘撸谝杂胏-myc、多個組氨酸或FLAG標記的蛋白質(zhì)的形式表達本發(fā)明的多肽時，可以分別使用針對c-myc、His或FLAG的抗體來檢測和純化。純化融合蛋白之后，還可能根據(jù)需要用凝血酶或Xa因子進行切割來除去目的多肽之外的區(qū)域。可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來分離天然蛋白，例如使結(jié)合有下文所述能與ELOVL7蛋白結(jié)合的抗體的親和柱與表達本發(fā)明多肽的組織或細胞的提取物接觸。所述抗體可以是多克隆抗體或單克隆抗體。本發(fā)明還涵蓋本發(fā)明多肽的部分肽。部分肽具有本發(fā)明多肽所特有的氨基酸序列，而且由至少7個氨基酸、優(yōu)選8個氨基酸或更多、更優(yōu)選9個氨基酸或更多組成。部分肽可用于例如制備針對本發(fā)明多肽的抗體、篩選能與本發(fā)明多肽結(jié)合的化合物、及篩選本發(fā)明多肽的抑制劑。通過遺傳工程、已知的肽合成法或用適當?shù)碾拿赶景l(fā)明的多肽，均可以生產(chǎn)本發(fā)明的部分肽。對于肽合成，可以使用例如固相合成或液相合成。本發(fā)明進一步提供了編碼上文所述此類ELOVL7多肽的多核苷酸。本發(fā)明的多核苷酸可用于在體內(nèi)或在體外生成上文所述本發(fā)明多肽，或者可用于由編碼本發(fā)明蛋白質(zhì)的基因的基因異常所致疾病的基因療法?？梢允褂帽景l(fā)明多核苦酸的任何形式，只要它編碼本發(fā)明的多肽，包括mRNA、RNA、cDNA、基因組DNA和化學(xué)合成的多核苷酸。本發(fā)明的多核苷酸包括包含給定核苷酸序列或其簡并序列的DNA，只要所得DNA編碼本發(fā)明的多肽?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備本發(fā)明的多核苷酸。例如，可以如下制備本發(fā)明的多核苷酸由表達本發(fā)明多肽的細胞制備cDNA文庫，并使用本發(fā)明DNA(例如SEQIDNO:14)的部分序列作為4笨針來進行雜交?？梢酝ㄟ^Sambrooketal.,MolecularCloning,ColdSpringHarborLaboratoryPress(1989)中記載的方法來制備cDNA文庫；或者，可以使用市售cDNA文庫。也可以如下制備cDNA文庫從表達本發(fā)明多肽的細胞中提取RNA，基于本發(fā)明DNA的序列(例如SEQIDNO:14)合成寡聚DNA，使用該寡聚DNA作為引物來進行PCR,并擴增編碼本發(fā)明蛋白質(zhì)的cDNA。另外，通過對所得cDNA的核苷酸進行測序，可以常規(guī)確定由該cDNA編碼的翻譯區(qū)，并且可以容易的獲得本發(fā)明多肽的氨基酸序列。而且，通過使用所得cDNA或其部分作為探針來篩選基因組DNA文庫，可以分離出基因組DNA。更具體的說，可以首先從表達本發(fā)明對象多肽的細胞、組織、器官(例如前列腺)中制備mRNA?？梢允褂靡阎椒▉矸蛛xmRNA;例如，可以通過胍超速離心(Chirgwinetal,,Biochemistry18:5294-9(1979))或AGPC法(ChomczynskiandSacchi,AnalBiochem162:156-9(1987))來制備總RNA。另外，可以使用mRNA純化試劑盒(Pharmacia)等從總RNA中純化出mRNA。或者，可以使用QuickPrepmRNA純化試劑盒(Pharmacia)直接純化mRNA。將所得mRNA用于使用逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA?？梢允褂檬惺墼噭┖兄T如AMV逆轉(zhuǎn)錄酶cDNA第一鏈合成試劑盒(SeikagakuKogyo)來合成cDNA?；蛘?，可以使用本文所述引物等、5，-AmpliFINDERRACE試劑盒(Clontech)和聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)，遵循5，-RACE法(Frohmanetal.，ProcNatlAcadSciUSA85:8998-卯02(1988);Belyavskyetal,,NucleicAcidsRes17:2919-32(1989))來合成和擴增cDNA。由PCR產(chǎn)物制備所需DNA片段，并與載體DNA連接。使用重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌等，并由選出的菌落制備所需重組載體?？梢酝ㄟ^常規(guī)方法諸如雙脫氧核苷酸鏈終止法來驗證所需DNA的核苷酸序列?？紤]到待用于表達的宿主中密碼子使用的頻率，本發(fā)明多核苷酸的核苷酸序列可以-沒計成能更高效的表達(Granthametal.,NucleicAcidsRes9:43-74(1981))?？梢允褂檬惺墼噭┖谢虺Ｒ?guī)方法來改變本發(fā)明多核苷酸的序列。例如，可以通過限制酶消化、插入合成寡核苷酸或適當?shù)亩嗪塑账崞?、添加接頭、或插入起始密碼子(ATG)和/或終止密碼子(TAA、TGA或TAG)來改變序列。具體的說，本發(fā)明的多核苷酸涵蓋包含核苷酸序列SEQIDNO:14的DNA。此外，本發(fā)明提供了能在嚴格條件下與具有核苷酸序列SEQIDNO:14的多核苷酸發(fā)生雜交且編碼與上文所述本發(fā)明ELOVL7蛋白在功能上等同的多肽的多核苷酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以恰當?shù)倪x擇嚴格條件。例如，可以使用低嚴格條件。更優(yōu)選的是，可以使用高嚴格條件。這些條件與上文所述相同。上文雜交DNA優(yōu)選為cDNA或染色體DNA。本發(fā)明還提供了與編碼人ELOVL7蛋白的多核苷酸(SEQIDNO:14)或其互補鏈互補且包含至少15個核苷酸的多核苷酸。本發(fā)明的多核苷酸優(yōu)選是能與編碼本發(fā)明ELOVL7多肽的DNA發(fā)生特異性雜交的多核苷酸。術(shù)語"特異性雜交，，在用于本文時指在常用的雜交條件下、優(yōu)選在嚴格雜交條件下不會與編碼其它蛋白質(zhì)的DNA發(fā)生顯著的交叉雜交。此類多核苷酸包括能與編碼本發(fā)明多肽的DNA或其互補鏈發(fā)生特異性雜交的探針、引物、核苷酸和核苷酸衍生物(例如反義寡核芬酸和核酶)。此外，此類多核香酸可用于制備DNA芯片。載體和宿主細胞本發(fā)明還提供了導(dǎo)入有本發(fā)明多核苷酸的載體和宿主細胞。本發(fā)明的載體可用于在宿主細胞中維持本發(fā)明的多核苷酸、尤其是DNA,用于表達本發(fā)明的多肽，或者用于施用本發(fā)明的多核苷酸以用于基因療法。當宿主細胞為大腸桿菌且在大腸桿菌(例如JM109、DH5oc、HB101或XLlBlue)中大量擴增和生成載體時，載體應(yīng)具有能在大腸桿菌中擴增的"(復(fù)制)起點"和用于選擇經(jīng)過轉(zhuǎn)化的大腸桿菌的標志基因(例如通過藥物諸如氨千青霉素、四環(huán)素、卡那霉素、氯霉素等進行選擇的藥物抗性基因)。例如，可以使用M13系列載體、pUC系列載體、pBR322、pBluescript、pCR-Script等。另外，與上述載體相同，pGEM-T、pDIRECT和pT7也可以用于亞克隆和提取cDNA。當使用載體來生成本發(fā)明的蛋白質(zhì)時，表達載體是特別有用的。例如，在大腸桿菌中表達的表達載體應(yīng)具備上述在大腸桿菌中擴增的特征。當使用大腸桿菌諸如JM109、DH5ot、HB101或XLlBlue作為宿主細胞時，載體應(yīng)具有能在大腸桿菌中高效表達所需基因的啟動子，例如lacZ啟動子(Wardetal.，Nature341:544-546(1989);FASEBJ6:2422-2427(1992))、araB啟動子(Betteretal.,Science240:1041-1043(1988))、T7啟動子等。在這方面，可以使用例如pGEX-5X-l(Pharmacia)、"QIAexpress系統(tǒng)"(Qiagen)、pEGFP和pET(此時，宿主優(yōu)選為表達T7RNA聚合酶的BL21)來替代上述載體。另夕卜，載體還可以包含用于多肽分泌的信號序列。指導(dǎo)多肽分泌至大腸桿菌周質(zhì)的例示性信號序列有pe舊信號序列(Leietal.,JBacteriol169:4379(1987))。用于將載體導(dǎo)入靶宿主細胞的方法包括例如氯化鈣法和電穿孔法。在大腸桿菌外，可以-使用例如衍生自哺乳動物的表達載體(例如pcDNA3(Invitrogen)和pEGF-BOS(MizushimaandNagata,NucleicAcidsRes18(17):5322(1990))、pEF、pCDM8)、衍生自昆蟲細胞的表達載體(例如"Bac-to-BAC桿狀病毒表達系統(tǒng)，，(GIBCOBRL)、pBacPAK8)、衍生自植物的表達載體(例如pMH1、pMH2)、衍生自動物病毒的表達載體(例如pHSV、pMV、pAdexLcw)、衍生自逆轉(zhuǎn)錄病毒的表達載體(例如pZIpneo)、衍生自酵母的表達載體(例如"畢赤酵母表達試劑盒"(Invitrogen)、pNVll、SP-Q01)及衍生自枯草芽孢桿菌的表達載體(例如pPL608、pKTH50)來生成本發(fā)明的多肽。為了在動物細胞諸如CHO、COS或NIH3T3細胞中表達載體，載體應(yīng)具有在所述細胞中進行表達所必需的啟動子，例如SV40啟動子(Mulliganetal.,Nature277:108(1979))、MMLV-LTR啟動子、EFla啟動子(Mizushimaetal.，NucleicAcidsRes18:5322(1990))、CMV啟動子、等等，及優(yōu)選用于選擇轉(zhuǎn)化子的標志基因(例如通過藥物(例如新霉素、G418)進行選擇的藥物抗性基因)。具有這些特征的已知栽體的例子包括例如pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV和pOP13。多肽的生成另外，本發(fā)明提供了用于生成本發(fā)明多肽的方法?？赏ㄟ^培養(yǎng)攜帶表達載體的宿主細胞來制備多肽，其中所述表達載體包含編碼所述多肽的基因。根據(jù)需要，可以采用方法來穩(wěn)定的表達基因，同時，擴增基因在細胞中的拷貝數(shù)。例如，可以將包含補償性(complementary)DHFR基因的載體(例如pCHOI)導(dǎo)入核酸合成途徑被刪除的CHO細胞，然后利用甲氨蝶呤(MTX)進行擴增。另外，在瞬時表達基因時，可以使用如下方法將包含SV40復(fù)制起點的載體(pcD等)轉(zhuǎn)化入染色體上包含SV40T抗原表達基因的COS細胞。如上所述獲得的本發(fā)明多肽可以從宿主細胞的內(nèi)部或外部(諸如培養(yǎng)基)分離，并純化成基本上純的同質(zhì)多肽。術(shù)語"基本上純的"在本文中用于給定多肽時指多肽基本上不含其它生物學(xué)大分子?；旧霞兊亩嚯闹敢愿芍赜嫊r至少75°/。(例如至少80%、85%、95%或99%)的純度?？赏ㄟ^任何適宜的標準方法來測量純度，例如通過柱層析、聚丙烯酰胺凝膠電泳或HPLC分析。用于分離和純化多肽的方法并不局限于任何特定方法，實際上可以使用任何標準方法。例如，可以適當選擇和組合柱層析、過濾、超濾、鹽沉淀、溶劑沉淀、溶劑提取、蒸餾、免疫沉淀、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電點電泳、透析和重結(jié)晶方法來分離和純化多肽。層析的例子包括例如親和層析、離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾、反相層析、吸附層析、等等(StrategiesforProteinPurificationandCharacterization:ALaboratoryCourseManual.Ed.DanielR.Marshaketal.,ColdSpringHarborLaboratoryPress(1996))。這些層析可通過液相層析來進行，諸如HPLC和FPLC。如此，本發(fā)明提供了通過上述方法制備的高度純化的多肽。在純化前或純化后，通過用適宜的蛋白質(zhì)^f奮飾酶進行處理，可以對本發(fā)明的多肽進行任意修飾或部分刪除。有用的蛋白質(zhì)修飾酶包括但不限于胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、賴氨酰內(nèi)肽酶、蛋白激酶、葡糖芬酶、等等?？贵w本發(fā)明提供了能與本發(fā)明的多肽結(jié)合的抗體。本發(fā)明的抗體可以以任何形式使用，諸如單克隆或多克隆抗體，而且包括通過用本發(fā)明的多肽免疫動物諸如兔而獲得的抗血清、所有種類的多克隆和單克隆抗體、及通過遺傳重組生成的人抗體和人源化抗體。作為抗原用于獲得抗體的本發(fā)明多肽可衍生自任何動物物種，但優(yōu)選衍生自哺乳動物，諸如人、小鼠或大鼠，更優(yōu)選衍生自人。人衍生的多肽可以由本文所公開的核苷酸或氨基酸序列獲得。根據(jù)本發(fā)明，用作免疫抗原的多肽可以是完整的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)的部分肽。部分肽可以包含例如本發(fā)明多肽的氨基(N)末端或羧基(C)末端片段。在本文中，抗體定義為能與本發(fā)明多肽的全長或片段起反應(yīng)的蛋白質(zhì)。可以將編碼本發(fā)明多肽或其片段的基因插入已知的表達載體，然后用該載體轉(zhuǎn)化本文所述宿主細胞?？梢酝ㄟ^任何標準方法從宿主細力包外部或內(nèi)部回收所需多肽或其片段，然后可將其用作抗原?；蛘撸磉_多肽的完整細胞或其裂解物或者化學(xué)合成的多肽也可用作抗原?？梢杂每乖庖呷魏尾溉閯游?，但優(yōu)選考慮與用于細胞融合的親本細胞的相容性。通常使用嚙齒目(Rodentia)、兔形目(Lagomorpha)或靈長目(Primate)的動物。嚙齒目動物包括例如小鼠、大鼠和倉鼠。兔形目動物包括例如家兔。靈長目動物包括例如狹鼻猿(Catarrhini)(東半球猴(oldworldmonkey))諸如食蟹浙美(Macacafascicularis)、i亙河浙吳(rhesusmonkey)、3弗3弗(sacredbaboon)牙口黑猩猩(chimpanzee)。用抗原免疫動物的方法是本領(lǐng)域已知的。腹膜內(nèi)注射或皮下注射抗原是免疫哺乳動物的標準方法。更具體的說，可以在適量的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、生理鹽水等中稀釋和懸浮抗原。如果需要，將抗原懸浮液與適量的標準佐劑諸如弗氏(Freund)完全佐劑混合，制成乳狀液，然后施用于哺乳動物。優(yōu)選的是，其后每4-21天施用數(shù)次與適量弗氏不完全佐劑混合的抗原。還可使用適宜的載體進行免疫。如上所述進行免疫后，通過標準方法^r驗血清中所需抗體的量的增加?？梢匀缦轮苽溽槍Ρ景l(fā)明多肽的多克隆抗體從經(jīng)過免疫的哺乳動物(該哺乳動物經(jīng)檢驗其血清中所需抗體增加)收集血液，并通過任何常規(guī)方法從血液中分離血清。多克隆抗體包括含有多克隆抗體的血清，并且可以A/v所述血清中分離含有該多克隆抗體的級分。可以使用例如偶聯(lián)有本發(fā)明多肽的親和柱從僅識別本發(fā)明多肽的級分中制備免疫球蛋白G或M，并進一步使用蛋白A或蛋白G柱純化該級分。為了制備單克隆抗體，從經(jīng)過抗原免疫并如上所述檢查出血清中所需抗體水平升高的哺乳動物收集免疫細胞，并進行細胞融合。用于細胞融合的免疫細胞優(yōu)選獲自脾。其它待與上述免疫細胞融合的優(yōu)選親本細胞包括例如哺乳動物骨髓瘤細胞，更優(yōu)選具有為了用藥物選擇融合細胞而獲得的特性的骨髓瘤細胞。才艮氺居已頭口的方法，例長口Milstein等(GalfreandMilstein,MethodsEnzymol73:3-46(1981))的方法，可與將上述免疫細胞與骨髓瘤細胞進行融合。通過在標準選擇培養(yǎng)基諸如HAT培養(yǎng)基(含次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷的培養(yǎng)基)中進行培養(yǎng)，可以選擇出由細胞融合得到的雜交瘤。通常，細胞培養(yǎng)在HAT培養(yǎng)基中連續(xù)進行數(shù)天至數(shù)周，這段時間足以使除了所需雜交瘤之外的所有其它細胞(非融合的細胞)死亡。然后，進行標準有限稀釋(standardlimitingdilution)來篩選和克隆生成所需抗體的雜交瘤細胞。在上述用抗原免疫非人動物來制備雜交瘤的方法外，還可以在體外用多肽、表達多肽的細胞或其裂解物免疫人淋巴細胞，諸如那些感染了EB病毒的人淋巴細胞。然后，使經(jīng)過免疫的淋巴細胞與能夠無限分裂的人衍生骨髓瘤細胞諸如U266融合，以產(chǎn)生生成所需人抗體(它能夠與所述多肽結(jié)合)的雜交瘤(已公開但未審查的日本專利申請(JP-A)特開昭63-17688)。隨后將所得雜交瘤移植入小鼠腹腔，并抽取腹水。所得單克隆抗體可通過例如石克S吏銨沉淀、蛋白A或蛋白G柱、DEAE離子交換層析或偶聯(lián)有本發(fā)明多肽的親和柱進行純化。本發(fā)明的抗體不僅可用于純化和檢測本發(fā)明的多肽，還可以用作本發(fā)明多肽的拮抗劑的候選物。此外，該抗體可用于與本發(fā)明多肽有關(guān)的疾病的抗體治療。在將所得抗體施用于人體時(抗體治療)，優(yōu)選使用人抗體或人源化抗體以降低免疫原性。例如，可以用選自多肽、表達多肽的細胞或其裂解物的抗原免疫具有人抗體基因庫(repertory)的轉(zhuǎn)基因動物。然后，從該動物收集生成抗體的細胞，并將其與骨髓瘤細胞融合以獲得雜交瘤，從該雜交瘤可制備針對所述多肽的人抗體(參見WO92-03918、W093-2227、WO94-02602、W094-25585、W096-33735和W096陽34096)?；蛘?，可以通過癌基因使生成抗體的免疫細胞，諸如經(jīng)過免疫的淋巴細胞永生化，并用于制備單克隆抗體。如此荻得的單克隆抗體也可以使用遺傳工程技術(shù)來重組制備(參見例如BorrebaeckandLarrick,TherapeuticMonoclonalAntibodies,publishedintheUnitedKingdombyMacMillanPublishersLTD(1990))。例如，可以從免疫細胞，諸如生成抗體的雜交瘤或經(jīng)過免疫的淋巴細胞克隆編碼抗體的DNA,將該DNA插入合適的載體，并導(dǎo)入宿主細胞以制備重組抗體。本發(fā)明還提供了如上所述制備的重組抗體。此外，本發(fā)明的抗體可以是抗體片段或經(jīng)過修飾的抗體，只要它能結(jié)合一種或多種本發(fā)明的多肽。例如，抗體片段可以是Fab、F(ab，)2、Fv或?qū)碜訦鏈和L鏈的Fv片段通過合適的接頭連接而成的單鏈Fv(scFv)(Hustonetal.,ProcNatlAcadSciUSA85:5879-83(1988))。更具體的說，可以通過用酶諸如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶處理抗體來生成抗體片段?；蛘?，可以構(gòu)建編碼抗體片段的基因，將其插入合適的表達載體，并在合適的宿主細胞中表達(參見例如Coetal"JImmunol152:2968-76(1994);BetterandHorwitz，MethodsEnzymol178:476-96(1989);PluckthunandSkerra，MethodsEnzymol178:497-515(1989);Lamoyi,MethodsEnzymol121:652-63(1986);Rousseauxetal.,MethodsEnzymol121:663-9(1986);BirdandWalker,TrendsBiotechnol9:132-7(1991》。抗體可以通過與多種分子諸如聚乙二醇(PEG)偶聯(lián)來修飾。本發(fā)明提供了經(jīng)過這樣修飾的抗體?？赏ㄟ^化學(xué)修飾抗體來獲得經(jīng)過修飾的抗體。這些修飾方法是本領(lǐng)域常規(guī)的。或者，可以以衍生自非人抗體的可變區(qū)與衍生自人抗體的恒定區(qū)之間的架區(qū)(FR)及恒定區(qū)的人源化抗體的形式來獲得本發(fā)明的抗體。此類抗體可依照已知技術(shù)來制備。人源化可通過用嚙齒類的CDR或CDR序列替換人抗體的相應(yīng)序列來進行(參見例如Verhoeyenetal.,Science239:1534-1536(1988))。因而，此類人源化抗體是嵌合抗體，其中基本上小于整個人可變域已被來自非人物種的相應(yīng)序列所替換。也可以使用在人框架區(qū)和恒定區(qū)外還包含人可變區(qū)的完全人的抗體。此類抗體可使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)來制備。例如，體外方法牽涉使用展示在噬菌體上的人抗體片段的重組文庫(例如Hoogenboom&Winter,J.Mol.Biol.227:381(1992))。類似的，可通過將人免疫球蛋白基因座導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因動物，例如內(nèi)源免疫球蛋白基因部分或完全滅活的小鼠，來生成人抗體。該方法記載于例如美國專利Nos.6,150,584;5，545，807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5，633,425;5,661,016?？梢詫⑷缟汐@得的抗體純化至同質(zhì)。例如，可依照用于一般蛋白質(zhì)的分離和純化方法進行抗體的分離和純化。例如，可以通過適當選擇和組合使用柱層析諸如親和層析、過濾、超濾、鹽析、透析、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳和等電聚焦來分離抗體(Antibodies:ALaboratoryManual.EdHarlowandDavidLane,ColdSpringHarborLaboratory(1988》，但并不局限于此。蛋白A柱和蛋白G柱可以用作親和柱。例示性的可使用的蛋白A柱包括例如HyperD、POROS和SepharoseRF.(Pharmacia)。除親和層析外的例示性層析包括例如離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾-、反4目層4斤、吸附層4斤、等等(StrategiesforProteinPurificationandCharacterization:ALaboratoryCourseManual.EdDanielR.Marshaketal.,ColdSpringHarborLaboratoryPress(1996))?？梢酝ㄟ^液相層析來進行層析規(guī)程，諸如HPLC和FPLC。例如，可以通過吸光度測量、酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)、酶免疫測定法(EIA)、放射免疫測定法(RIA)和/或免疫熒光來測量本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合活性。在ELISA中，將本發(fā)明的抗體固定在板上，將本發(fā)明的多肽施加到該板上，再施加含有所需抗體的樣品，諸如生成抗體的細胞的培養(yǎng)物上清液或純化的抗體。然后施加用酶(諸如堿性磷酸酶)標記的、識別第一抗體的第二抗體，并將板溫育。接著，在洗滌后，向板中加入酶底物，諸如磷酸對硝基苯酯，并測量吸光度以評估樣品的抗原結(jié)合活性?？梢允褂枚嚯牡钠危T如C-末端或N-末端片段作為抗原來評估抗體的結(jié)合活性?？梢允褂肂IAcore(Pharmacia)來評估本發(fā)明抗體的活性。通過將本發(fā)明的抗體暴露于假定含有本發(fā)明多肽的樣品，并檢測或測量由抗體與多肽形成的免疫復(fù)合物，上述方法允許檢測或測量本發(fā)明的多肽。因為本發(fā)明多肽的檢測或測量方法可特異性的檢測或測量多肽，所以該方法可用于使用多肽的各種實驗。反義多核苷酸、小干擾RNA和核酶本發(fā)明包括能與核苷酸序列SEQIDNO:14內(nèi)的任何位點發(fā)生雜交的反義寡核苷酸。這種反義寡核苷酸優(yōu)選針對核苷酸序列SEQIDNO:14的至少約15個連續(xù)核芬酸。上述反義寡核苷酸更優(yōu)選在上述至少15個連續(xù)核苷酸中包含起始密碼子。反義寡核苦酸的衍生物或修飾產(chǎn)物也可用作反義寡核苷酸。所述修飾產(chǎn)物的例子包括低級烷基膦酸酯(loweralkylphosphonate)修飾(諸如曱基膦酸面旨型(methyl-phosphonatetype)或乙基膦酸酯型(ethyl-phosphonate-type))、石危4戈石粦酉吏面旨(phosphorothioate"l^乍禾口石粦酰胺(phosphoroamidate"l^年。術(shù)語"反義寡核香酸，，在用于本文時不僅指那些核苷酸與構(gòu)成DNA或mRNA特定區(qū)域的相應(yīng)核芬酸完全互補的寡核香酸，還指那些具有一個或多個核苷酸錯配的寡核苷酸，只要DNA或mRNA和反義寡核苷酸能與核苷S臾序列SEQIDNO:14發(fā)生雜交。本發(fā)明包括下述多核苷酸，它們在"至少約15個連續(xù)核苷酸的序列區(qū)域"內(nèi)具有至少70%或更高、優(yōu)選至少約80%或更高、更優(yōu)選約90%或更高、甚至更優(yōu)選約95%或更高同源性?？墒褂帽疚乃鏊惴▉泶_定同源性?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知算法來確定同源性。此外，反義寡核苷酸的衍生物或修飾產(chǎn)物也可用作本發(fā)明中的反義寡核苷酸。所述修飾產(chǎn)物的例子包括低級烷基膦酸酯修飾諸如曱基膦酸酯型或乙基膦酸酯型、硫代磷酸酯修飾和磷酰胺修飾。此類反義多核苦酸可作為探針用于分離或檢測編碼本發(fā)明多肽的DNA,或者作為用于擴增的引物。本發(fā)明的反義寡核苷酸衍生物如下作用于生成本發(fā)明多肽的細胞與編碼所述多肽的DNA或mRNA結(jié)合，抑制其轉(zhuǎn)錄或翻譯，促進mRNA降解并抑制本發(fā)明多肽的表達，由此導(dǎo)致對多肽功能的抑制。本發(fā)明還包括包含核苷酸序列SEQIDNO:14有義鏈核酸與反義鏈核酸之組合的小干擾RNA(siRNA)。更具體的說，用于抑制ELOVL7表達的此類siRNA包括那些輩巴向核苦酸序列SEQIDNO:7的siRNA。術(shù)語"siRNA"指能阻止靶mRNA翻譯的雙鏈RNA分子。使用標準技術(shù)將siRNA導(dǎo)入細胞，包括那些其中使用DNA作為轉(zhuǎn)錄RNA的模板的。siRNA包含編碼人ELOVL7蛋白的多核苷酸(SEQIDNO:14)的有義核酸序列及反義核酸序列。構(gòu)建siRNA使其單一轉(zhuǎn)錄物(雙鏈RNA)具有來自扭基因的互補的有義序列及反義序列二者，例如為發(fā)夾結(jié)構(gòu)。量降低。寡核苷酸的長度為至少10個核苷酸，而且可以與天然存在的轉(zhuǎn)錄物等長。優(yōu)選的是，寡核苷酸的長度小于約75個、約50個、約25個核苷酸。最優(yōu)選的是，寡核苷酸的長度為約19-約25個核苷酸。能抑制癌細胞生長的ELOVL7siRNA寡核苷酸的例子包括包含SEQIDNO:7的靶序列。此外，為了增強siRNA的抑制活性，可以將核香酸"u"添加到靶序列反義鏈的3，端。待添加的"u"的數(shù)目為至少約2個，一般為約2個-約10個，優(yōu)選為約2個-約5個。所添加的'V，在siRNA反義鏈的3，端形成單鏈。將ELOVL7siRNA以能夠與mRNA轉(zhuǎn)錄物結(jié)合的形式直接導(dǎo)入細胞。在這些實施方案中，本發(fā)明的siRNA分子通常如上文關(guān)于反義分子所述進行修飾。其它修飾也是可能的，例如偶聯(lián)有膽固醇的siRNA顯示出改善的藥理學(xué)特性(Songetal.NatureMed9:347-51(2003))。或者，編碼ELOVL7siRNA的DNA位于載體中。如下生成載體，例如通過將ELOVL7靶序列克隆入表達載體，其中所述表達載體具有可操作連接的、以兩條鏈均能表達(通過DNA分子的轉(zhuǎn)錄)的方式位于該ELOVL7序列側(cè)翼的調(diào)控序列(Lee,N.S.，etal.，(2002)NatureBiotechnology20:500-505)。其為ELOVL7mRNA的反義鏈的RNA分子由第一啟動子(例如所克隆DNA3，端的啟動子序歹'J)轉(zhuǎn)錄，其為ELOVL7mRNA的有義鏈的RNA分子由第二啟動子(例如所克隆DNA5，端的啟動子序歹'j)轉(zhuǎn)錄。所述有義鏈與反義鏈在體內(nèi)雜交，從而產(chǎn)生用于沉默ELOVL7基因的siRNA構(gòu)建物。或者，利用兩個構(gòu)建物來制備siRNA構(gòu)建物的有義鏈和反義鏈。所克隆的ELOVL7可編碼具有二級結(jié)構(gòu)例如發(fā)夾的構(gòu)建物，其中單一轉(zhuǎn)錄物具有來自靶基因的互補的有義序列及反義序列二者。另外，為了形成發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)，可以在有義序列與反義序列之間放置由任意核苷酸序列組成的環(huán)序列。如此，本發(fā)明還提供了具有通式5'-[A]-[B]-[A，]-3，的siRNA,其中[A]為核糖核苷酸序列，其對應(yīng)于能與來自ELOVL7基因的mRNA或cDNA發(fā)生特異性雜交的序列。在優(yōu)選的實施方案中，[A]為對應(yīng)于SEQIDNO:14的核苷酸3531-3549的序列(SEQIDNO:7)的核糖核苦酸序列，[B]為由約3個-約23個核香酸組成的核糖核苦酸序列，且[A，]為由[A]的互補序列組成的核糖核芬酸序列。環(huán)序列可以由長度優(yōu)選為3-23個核芬酸的任意序列組成。環(huán)序列可以選自例如如下序列(http:〃www,ambion.com/techlib/tb/tb—506.html)。在本發(fā)明的siRNA中，為了增強siRNA的抑制活性，可以將核苷酸"u"添加到[A，]的3，端。待添加的"u，，的數(shù)目為至少約2個，一般為約2個-約10個，優(yōu)選為約2個-約5個。此外，由23個核苦酸組成的環(huán)序列也提供活性siRNA(JacqueJMetal.,Nature418:435-438(2002))。CCC、CCACC或CCACACC:Jacque,J,M.，etal.,Nature418:435-438(2002);UUCG:Lee,N.S.，etal.,NatureBiotechnology20:500-505(2002);Fruscoloni，P.etal.,ProcNatlAcadSciUSA100(4):1639-1644(2003);和UUCAAGAGA:Dykxhoom,D.M.etal"NatureReviewsMolecularCellBiology4:457-467(2002)。例如，具有本發(fā)明發(fā)夾結(jié)構(gòu)的優(yōu)選siRNA如下所示。在下面的結(jié)構(gòu)中，環(huán)序列可以選自CCC、UUCG、CCACC、CCACACC禾口UUCAAGAGA。<尤選的環(huán)結(jié)構(gòu)是UUCAAGAGA(DNA中為"ttcaagaga")。caagcaacaacaacaacaa-[B]-uuguuguuguuguugcuug(SEQIDNO:7的輩巴序歹寸)ELOVL7序列側(cè)翼的調(diào)控序列可以是相同的或不同的，使得可以獨立的、或者以時間性或空間性方式調(diào)控它們的表達。如下在細胞外轉(zhuǎn)錄siRNA，通過將ELOVL7基因模板克隆入包含例如來自小核RNA(snRNA)U6的RNA聚合酶III轉(zhuǎn)錄單元或人H1RNA啟動子的載體。為了將載體導(dǎo)入細胞，可以使用轉(zhuǎn)染增強齊'J。FuGENE(Rochediagnostices)、Lipofectamin2000(Invitrogen),Oligofectamine(Invitrogen)禾口Nucleofector(WakopureChemical)可以用作轉(zhuǎn)染增強劑。siRNA的核苷酸序列可使用從Ambion網(wǎng)站(http:〃www.ambion.com/techlib/misc/siRNA—finder.html)可4尋^lj的siRNAi史i十計算機程序來設(shè)計。所述計算機程序基于如下方案選擇siRNA的核苦酸序列siRNA把位點的選擇1.從對象轉(zhuǎn)錄物的AUG起始密碼子開始向下游掃描，尋找AA二核苷酸序列。記錄每個AA的出現(xiàn)及其3，側(cè)鄰近的19個核芬酸作為潛在的siRNA耙位點。Tuschletal.,GenesDev13(24):3191-7(1999)不推薦針對5，和3，非翻譯區(qū)(UTR)和鄰近起始密碼子的區(qū)域(75個堿基之內(nèi))設(shè)計siRNA，因為上迷區(qū)域可能富含調(diào)控蛋白結(jié)合位點。UTR結(jié)合蛋白和/或翻譯起始復(fù)合物可干擾siRNA內(nèi)切核酸酶復(fù)合物的結(jié)合。2.將所述潛在靶位點與人基因組數(shù)據(jù)庫進行比較，不考慮與其它編碼序列有顯著同源性的任何靶序列?？墒褂每稍贜CBI服務(wù)器www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/上找到的BLAST(AltschulSF，etal,NucleicAcidsRes25(17):3389-402(1997);AltschulSF，etal,JMolBiol215(3):403-10(19卯))來進行同源性搜索。3.選擇合格的靶序列用于合成。在Ambion，可優(yōu)選沿待評估基因的長度選擇數(shù)個靶序列。依照標準方法，在體外對ELOVL7mRNA多個部分的寡核苷酸和與這些部分互補的寡核香酸測試它們降低胂瘤細胞中(例如使用PC3、LNCaP、22Rvl或DU145PRC細胞系)ELOVL7產(chǎn)量的能力。使用ELOVL7特異性抗體或其它檢測策略來檢測與不存在候選組合物的條件下培養(yǎng)的細胞相比，與候選siRNA組合物接觸的細胞中ELOVL7基因產(chǎn)物的減少。然后對在體外基于細胞的測定法或無細胞測定法中降低ELOVL7產(chǎn)量的序列測試其對細胞生長的抑制作用。對在體外基于細胞的測定法或無細胞測定法中抑制細胞生長的序列在大鼠或小鼠中進行體內(nèi)測試，以驗證攜帶惡性贅生物的動物中ELOVL7產(chǎn)量的降低和肺瘤細胞生長的降低。本發(fā)明還包括包含靶序列的核酸序列的雙鏈分子，所述靶序列例如SEQIDNO:14的核香酸3531-3549(SEQIDNO:7)。在本發(fā)明中，雙鏈分子包含有義鏈及反義鏈，其中所述有義鏈包含對應(yīng)于SEQIDNO:7的核糖核苷酸序列，而所述反義鏈包含與所述有義鏈互補的核糖核苷S1^列，其中所述有義鏈與所述反義鏈相互雜交而形成所述雙鏈分子，所述雙鏈分子在導(dǎo)入表達ELOVL7基因的細胞后能抑制所述基因的表達。在本發(fā)明中，當分離的核酸為RNA或其衍生物時，核苷酸序列中的堿基"t，，應(yīng)替換為"U"。在用于本文時，術(shù)語"互補的"指核酸分子的核苦酸單位之間的Watson-Crick或Hoogsteen堿基配對，而術(shù)語"結(jié)合，，指兩個核酸或化合物、或者相關(guān)核酸或化合物、或者其組合之間的物理或化學(xué)相互作用?；パa的核酸序列能在適宜條件下發(fā)生雜交而形成幾乎不含或不含錯配的穩(wěn)定雙鏈體。此外，本發(fā)明的分離的核香酸的有義鏈和反義鏈可以通過雜交而形成雙鏈核苷酸或發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)。在一個優(yōu)選的實施方案中，此類雙鏈體的每10個配對中出現(xiàn)的錯配不超過1個。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，雙鏈體的鏈完全互補，即此類雙鏈體不含錯配。核酸分子的長度少于3815個核苷酸(對于SEQIDNO:14)。例如，核酸分子的長度少于500個、200個、75個核苷酸。本發(fā)明還包括包含一個或多個本文所述核酸的載體，以及包含該載體的細胞。本發(fā)明的分離的核酸可用于針對ELOVL7的siRNA或編碼這些siRNA的DNA。在將這些核酸用于siRNA或編碼siRNA的DNA時，有義鏈優(yōu)選長于約19個核苦酸，更優(yōu)選長于約21個核苷酸。本發(fā)明的反義寡核苷酸或siRNA能抑制本發(fā)明多肽的表達，因而可用于抑制本發(fā)明多肽的生物學(xué)活性。同樣，包含本發(fā)明反義寡核苷酸或siRNA的表達抑制劑是有用的，因為它們能抑制本發(fā)明多肽的生物學(xué)活性。因此，包含本發(fā)明反義寡核苷酸或siRNA的組合物可用于治療PRC。能抑制哺乳動物細月包中表達的ELOVL7siRNA寡核苷酸的例子包括包含SEQIDNO:7的靶序列。此外，為了增強siRNA的抑制活性，可以將核苷酸"u"添加到靶序列反義鏈的3，端。要添加的"u"的數(shù)目為至少約2個，一般為約2個-約10個，優(yōu)選為約2個-約5個。所添加的"u，，在siRNA反義鏈的3，端形成單鏈。同樣，包含本發(fā)明反義寡核苷酸或siRNA的表達抑制劑是有用的，因為它們能抑制本發(fā)明多肽的生物活性。因此，包含本發(fā)明反義寡核苷酸或siRNA的組合物可用于治療細胞增殖性疾病，諸如PRC。此外，本發(fā)明提供了能抑制本發(fā)明ELOVL7多肽表達的核酶。通常，核酶分為大核酶和小核酶。大核酶已知是切割核酸的磷酸酯鍵的酶。在與大核酶反應(yīng)后，反應(yīng)位點由5，-磷酸根和3，-羥基組成。大核酶進一步分為(l)催化鳥苷在5，-剪接位點的酯基轉(zhuǎn)移作用(transesterification)的I組內(nèi)含子RNA;(2)催化經(jīng)由套索(lariat)結(jié)構(gòu)經(jīng)過兩步反應(yīng)自我剪接的II組內(nèi)含子RNA;和(3)通過水解在5，位點切割tRNA前體的核糖核酸酶P的RNA組件。另一方面，小核酶與大核酶相比更小(約40bp)，并且小核酶切割RNA產(chǎn)生5，-羥基和2,-3，環(huán)狀磷酸酯。錘頭型核酶(Koizumietal.，F(xiàn)EBSLett228:225(1988))和發(fā)夾型核酶(Buzayan,Nature323:349-53(1986);KikuchiandSasaki,NucleicAcidsRes19:6751(1992))都包括在小核酶中。用于設(shè)計和構(gòu)建核酶的方法是本領(lǐng)域已知的(參見Koizumietal.,FEBSLett228:225(1988);Koizumietal.,NucleicAcidsRes17:7059(1989》KikuchiandSasaki,NucleicAcidsRes19:6751(1992))。如此，能抑制本發(fā)明多肽表達的核酶也可以才艮據(jù)其序列信息(SEQIDNO:14)和這些常規(guī)方法來構(gòu)建。針對ELOVL7基因的核酶能抑制過表達的ELOVL7蛋白的表達，因而可用于抑制該蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性。因此，核酶可用于治療或預(yù)防PRC。前列腺癌的診斷而且，本發(fā)明提供了使用本發(fā)明基因的表達水平或本發(fā)明多肽的活性水平為診斷標志，診斷細胞增殖性疾病諸如PRC的方法。在有些實施方案中，該診斷方法包括如下步驟(a)檢測本發(fā)明ELOVL7基因的表達水平；并(b)將表達水平的升高與PRC聯(lián)系起來。通過對對應(yīng)于ELOVL7基因的mRNA或由ELOVL7基因編碼的蛋白質(zhì)定量，可以評估生物學(xué)樣品中ELOVL7基因的表達水平。mRNA的定量方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。例如，可以通過Northem印跡或RT-PCR來評估對應(yīng)于ELOVL7基因的mRNA的水平。既然ELOVL7基因的全長核苷酸序列示于SEQIDNO:14，任何本領(lǐng)域技術(shù)人員都可設(shè)計出用于對ELOVL7基因定量的探針或引物的核苷酸序列。還可以基于由ELOVL7基因編碼的蛋白質(zhì)的數(shù)量來分析該基因的表達水平。用于測定ELOVL7蛋白的數(shù)量的方法顯示如下。例如，免疫測定法可用于測定生物學(xué)材料中的蛋白質(zhì)。只要標志基因(ELOVL7基因)在PRC患者的樣品中表達，可以將任何生物學(xué)材料用作測定蛋白質(zhì)或其活性的生物學(xué)樣品。例如，前列腺導(dǎo)管上皮可作為這樣的生物學(xué)樣品。然而，體液，諸如血液和尿'液也可用于分4斤。對生物學(xué)樣品中ELOVL7基因的表達水平或ELOVL7多肽的蛋白質(zhì)水平進行評估，并與正常樣品(例如衍生自非患病受試者的樣品)中的水平進行比較。當這樣的比較顯示靶基因的表達水平或蛋白質(zhì)水平比正常樣品中的水平高時，則判定該受試者患有PRC?？梢酝瑫r測定來自正常受試者和待"珍斷受試者的生物學(xué)樣品中ELOVL7基因的表達水平。或者，可以通過統(tǒng)計學(xué)方法，基于通過分析從對照組預(yù)先采集的樣品中基因表達水平獲得的結(jié)果，確定出表達水平或蛋白質(zhì)水平的正常范圍。將受試者樣品獲得的結(jié)果與正常范圍進行比較，當該結(jié)果未落入正常范圍時，則判定受試者患有或有風(fēng)險發(fā)生PRC。在本發(fā)明中，還提供了用于診斷細胞增殖性疾病，諸如PRC的診斷劑。本發(fā)明的診斷劑包括能與本發(fā)明的多核苷酸或多肽結(jié)合的化合物。優(yōu)選的是，使用能與本發(fā)明的多核苷酸發(fā)生雜交的寡核普酸或能與本發(fā)明的多肽結(jié)合的抗體作為這樣的化合物。診斷PRC的本發(fā)明本方法可用于評估受試者中PRC治療的功效。根據(jù)該方法，由接受PRC治療的受試者獲得生物學(xué)樣品，諸如測試細胞群。用于評估的方法可以依照診斷PRC的常規(guī)方法進行。必要時，在治療前、治療中或治療后的多個時間點由受試者獲取生物學(xué)樣品。然后測定生物學(xué)樣品中ELOVL7基因的表達水平，并與對照水平進行比較，所述對照水平衍生自例如已知包含PRC狀態(tài)(即癌性細胞或非癌性細胞)的細胞的參照細胞群。所述對照水平是在未接受所述治療的生物學(xué)樣品中測定的。若對照水平衍生自不含癌性細胞的生物學(xué)樣品，則書f生自受試者的生物學(xué)樣品中的表達水平與對照水平之間的相似性表明治療是有效的。衍生自受試者的生物學(xué)樣品中ELOVL7基因的表達水平與對照水平之間的差異表明臨床效果或預(yù)后較不理想。術(shù)語"有效的"指治療引起受試者中病理性上調(diào)的基因(ELOVL7基因)的表達降低，或者PRC細胞的大小、流行性或增殖潛力降低。當預(yù)防性施用治療時，術(shù)語"有效的，，表示治療可延遲或防止PRC的發(fā)生。PRC的評估可以使用標準臨床規(guī)程進行。此外，可以采用用于診斷或治療PRC的任何已知方法來確定治療的有效性。此外，通過將衍生自患者的生物學(xué)樣品，諸如測試細胞群中ELOVL7基因的表達水平與對照水平進行比較，診斷PRC的本方法還可用于評估PRC受試者的預(yù)后?；蛘撸梢栽谝幌盗屑膊‰A段(aspectrumofdiseasestage)中測量衍生自患者的生物學(xué)樣品中ELOVL7基因的表達水平，以評估患者的預(yù)后。ELOVL7基因的表達水平與正常對照水平相比的升高表明預(yù)后較不理想。ELOVL7基因的表達水平的降低表明患者的預(yù)后更為理想。化合物的篩選利用ELOVL7基因、由該基因編碼的蛋白質(zhì)、或該基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)，可以篩選能改變該基因的表達或由該基因編碼的多肽的生物學(xué)活性的化合物。此類化合物可作為藥物用于治療或預(yù)防PRC。因此，本發(fā)明提供了使用本發(fā)明的多肽篩選用于治療或預(yù)防PRC的化合物的方法。該篩選方法的一個實施方案包括以下步驟a)使測試化合物與本發(fā)明的多肽接觸；b)檢測本發(fā)明多肽與測試化合物之間的結(jié)合活性；并c)選擇能與本發(fā)明多肽結(jié)合的測試化合物。用于篩選的本發(fā)明多肽可以是重組多肽或者衍生自天然的蛋白質(zhì)或其部分肽。與測試化合物接觸的本發(fā)明多肽可以是例如純化的多肽、可溶性蛋白質(zhì)、與載體結(jié)合的形式、或與其它多肽融合的融合蛋白。作為例如使用本發(fā)明的多肽篩選能與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)的方法，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的許多方法。這樣的篩選可以通過例如免疫沉淀法來進行，具體以下述方式。通過將編碼本發(fā)明多肽的基因插入外來基因表達載體，諸如pSV2neo、pcDNAI、pcDNA3.1、pCAGGS和pCD8，使該基因在宿主(例如動物)細胞等中表達。用于表達的啟動子可以是常用的任何啟動子，包括例如SV40早期啟動子(RigbyinWilliamson(ed.),GeneticEngineering,vol.3.AcademicPress,London,83-141(1982》、EF-a啟動子(Kimetal.，Gene91:217-23(1990))、CAG啟動子(Niwaetal.,Gene108:193-200(1991))、RSVLTR啟動子(Cullen,MethodsinEnzymology152:684-704(1987》、SRa啟動子(Takebeetal.,MolCellBiol8:466(1988))、CMV立即早期啟動子(SeedandAruffo，ProcNatlAcadSdUSA84:3365-9(1987))、SV40晚期啟動子(GheysenandFiers，JMolApplGenet1:385-94(1982))、腺病毒晚期啟動子(KaufmanetaL,MolCellBiol9:946-58(1989))、HSVTK啟動子等。可以依照任何方法將基因?qū)胗磉_外來基因的宿主細胞，例如電穿孔法(Chuetal.,NucleicAcidsRes15:1311-26(1987))、磷酸鉤法(ChenandOkayama,MolCellBiol7:2745-52(1987))、DEAE右旋糖苷法(Lopataetal.，NucleicAcidsRes12:5707-17(1984);SussmanandMilman,MolCellBiol4:1641-3(1984))、脂轉(zhuǎn)染法(DerijardBetal.,Cell76:1025-37(1994);Lambetal.:NatureGenetics5:22-30(1993);Rabindranetal.，Science259:230-4(1993))等。通過將特異性已知的單克隆抗體的表位導(dǎo)入本發(fā)明多肽的N末端或C末端，可以以包含單克隆抗體識別位點(表位)的融合蛋白的形式表達本發(fā)明的多肽。可以使用市售的表位-抗體系統(tǒng)(ExperimentalMedicine13:85-90(1995))。利用其多克隆位點來表達含例如P-半乳糖苷酶、麥芽糖結(jié)合蛋白、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶、綠色熒光蛋白(GFP)等的融合蛋白的載體是可以通過商業(yè)途徑得到的。還報道了通過僅導(dǎo)入由幾個到十幾個氨基酸組成的小表位而制備的融合蛋白，使得本發(fā)明多肽的特性不會因融合而改變。表位，諸如聚組氨酸(His標簽)、流感聚集體HA、人c-myc、FLAG、水泡性口膜炎病毒糖蛋白(VSV-GP)、T7基因10蛋白(T7標簽)、人單純皰滲病毒糖蛋白(HSV標簽)、E標簽(單克隆噬菌體上的表位)等，及識別它們的單克隆抗體都可以作為表位-抗體系統(tǒng)用于篩選能與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)(ExperimentalMedicine13:85-卯(簡))。在免疫沉淀中，通過向使用合適的洗滌劑制備的細胞裂解物中添加這些抗體，形成了免疫復(fù)合物。免疫復(fù)合物由本發(fā)明的多肽、具有與該多肽結(jié)合能力的多肽和抗體組成。在使用針對上述表位的抗體外，還可以使用針對本發(fā)明多肽的抗體來進行免疫沉淀，所述抗體可以如上所述制備。當抗體是小鼠IgG抗體時，可以通過例如蛋白Asepharose或蛋白Gsepharose來沉淀免疫復(fù)合物。如果將本發(fā)明多肽制備成帶有表位諸如GST的融合蛋白，那么可使用與這些表位特異性結(jié)合的物質(zhì)，諸如谷胱甘肽-Sepharose4B,按照與使用針對本發(fā)明多肽的抗體相同的方式形成免疫復(fù)合物。免疫沉淀可以遵循或依照例如文獻(HarlowandLane,Antibodies,511-52,ColdSpringHarborLaboratorypublications,NewYork(1988》中的方法進4亍。通常使用SDS-PAGE對免疫沉淀的蛋白質(zhì)進行分析，可以使用合適濃度的凝膠通過蛋白質(zhì)的分子量來分析所結(jié)合的蛋白質(zhì)。由于與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)難以通過常規(guī)染色法諸如考馬斯染色或銀染色來檢測，因而可以如下改進蛋白質(zhì)檢測靈敏度在含有放射性同位素"S-曱硫氨酸或"S-半胱氨酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞，標記細胞中的蛋白質(zhì)，并檢測該蛋白質(zhì)。在蛋白質(zhì)的分子量已知時，可以從SDS-聚丙烯酰胺凝膠直接純化靶蛋白并測定其序列。作為使用多肽來篩選能與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)的方法，可以使用例如West-Western印跡分析(Skolniketal.,Cell65:83-90(1991))。具體的說?？梢匀缦芦@得能與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)使用噬菌體載體(例如ZAP)由預(yù)計表達能與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)的細胞、組織、器官(例如組織諸如睪丸)或培養(yǎng)的細胞(例如PC3、DU145、LNCaP、22Rvll)制備cDNA文庫，在LB-瓊脂糖上表達該蛋白質(zhì)，將所表達的蛋白質(zhì)固定在濾膜上，使經(jīng)過純化和標記的本發(fā)明多肽與上述濾膜反應(yīng)，并根據(jù)標記物來檢測表達能與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)的噬菌斑?？梢岳蒙锼嘏c親合素之間的結(jié)合，或者利用能與本發(fā)明多肽或本發(fā)明多肽所融合的肽或多肽(例如GST)特異性結(jié)合的抗體，來標記本發(fā)明的多肽。也可以采用使用放射性同位素或焚光等的方法。或者，在本發(fā)明篩選方法的另一個實施方案中，可以使用利用細胞的雙雜交系統(tǒng)("MATCHMAKER雙雜交系統(tǒng)"、"MATCHMAKER哺乳動物雙雜交測定試劑盒"、"MATCHMAKER單雜交系統(tǒng)，，(Clontech);"HybriZAP雙雜交載體系統(tǒng)，，(Stratagene);參見DaltonandTreisman,Cell68:597-612(1992);FieldsandSternglanz,TrendsGenet10:286-92(1994))。在雙雜交系統(tǒng)中，將本發(fā)明的多肽與SRF結(jié)合區(qū)或GAL4結(jié)合區(qū)融合，并在酵母細胞中表達。由預(yù)計表達能與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)的細胞制備cDNA文庫，使得該文庫在表達時與VP16或GAL4轉(zhuǎn)錄激活區(qū)融合。然后將該cDNA文庫導(dǎo)入上述酵母細胞，并從檢測為陽性的克隆分離書f生自該文庫的cDNA(當在酵母細胞中表達能與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)時，兩者的結(jié)合激活報告基因，使得陽性克隆可檢測出)。通過將上述分離的cDNA導(dǎo)入大腸桿菌并表達蛋白質(zhì)，可以制備由該cDNA編碼的蛋白質(zhì)。作為報告基因，在HIS3基因夕卜，可以使用例如Ade2基因、lacZ基因、CAT基因、螢光素酶基因等。還可以使用親和層析來篩選能與本發(fā)明多肽結(jié)合的化合物。例如，可以將本發(fā)明的多肽固定在親和柱的載體上，并將測試化合物施加至該柱，所述測試化合物包含能與本發(fā)明多肽結(jié)合的蛋白質(zhì)。此處的測試化合物可以是例如細胞提取物、細胞裂解物等。在加載測試化合物后，對柱進行洗滌，并可制備出已與本發(fā)明多肽結(jié)合的化合物。當測試化合物是蛋白質(zhì)時，分析所得蛋白質(zhì)的氨基酉拼列，基于該序列合成寡聚DNA,并使用該寡聚DNA作為探針來篩選cDNA文庫以獲得編碼該蛋白質(zhì)的DNA。在本發(fā)明中，可以將使用表面等離子體共振現(xiàn)象的生物傳感器用作對所結(jié)合的化合物進行檢測或定量的手段(mean)。在使用此類生物傳感器(例如BIAcore，Pharmada)時，只使用極少量的多肽且不需標記，可實時觀察表面等離子體共振信號作為本發(fā)明多肽與測試化合物之間的相互作用。因此，可使用BIAcore等生物傳感器來評估本發(fā)明多肽與測試化合物之間的結(jié)合。將固定化的本發(fā)明多肽暴露于合成化學(xué)化合物、天然物質(zhì)庫或隨機噬菌體肽展示文庫后篩選與之結(jié)合的分子的方法，及基于組合化學(xué)技術(shù)使用高通量來分離能與本發(fā)明蛋白質(zhì)結(jié)合的蛋白質(zhì)和化學(xué)化合物(包括激動劑和拮抗劑)的篩選方法(Wrightonetal.,Science273:458-64(1996);Verdine，Nature384:11-13(1996);Hogan,Nature384:17-9(1996))是本領(lǐng)i或才支術(shù)人員眾所周知的。或者，本發(fā)明提供了使用本發(fā)明多肽篩選用于治療或預(yù)防PRC的化合物的方法，其包括以下步驟(a)使測試化合物與本發(fā)明多肽接觸；(b)檢測步驟(a)的多肽的生物學(xué)活性；并(c)選擇與不存在測試化合物的條件下檢測到的生物學(xué)活性相比抑制該多肽生物學(xué)活性的測試化合物。既然本發(fā)明的ELOVL7蛋白具有促進PRC細胞的細胞增殖的活性，因而可以使用該活性為指標，篩選能抑制本發(fā)明該蛋白質(zhì)的該活性的化合物。只要具有ELOVL7蛋白的生物學(xué)活性，任何多肽均可用于篩選。此類生物學(xué)活性包括人ELOVL7蛋白的細胞增殖活性。例如，可以^吏用人ELOVL7蛋白，也可以使用與這些蛋白質(zhì)在功能上等同的多肽。此類多肽可以是細胞內(nèi)源性或外源性表達的?；蛘?，可以通過在存在測試化合物的條件下直接檢測ELOVL7蛋白的脂肪酸延長活性來進行測定。在這些實施方案中，使用本領(lǐng)域已知方法檢測ELOVL7的體外活性。例如，可以通過差速離心從表達本發(fā)明ELOVL7多肽的細胞分離微粒體，一般使用Moon等人描述的規(guī)程(MoonYA，etal.,JBiolChem276:45358-45366(2001))。用于制備微粒體的優(yōu)選方法描述于下。通常，反應(yīng)混合物將包含含有本發(fā)明ELOVL7多肽(例如SEQIDNO:15或與SEQIDNO:15至少約80°/。相同的多肽)的微粒體及用于實施測定的適宜試劑。此類試劑可以包括例如脂肪酸底物(例如花生四烯?；?CoA)、丙二酸單?；?CoA、NADPH、和用于檢測延長產(chǎn)物的試劑。樣品中的每種脂肪酸水平可以使用例如下文所述氣相層析質(zhì)譜來分析。還可以制備包含可用于實施本發(fā)明脂肪酸延長活性測定法的上述試劑的試劑盒。通過這種篩選而分離的化合物是本發(fā)明多肽的激動劑或拮抗劑的候選物。術(shù)語"激動劑"指通過與本發(fā)明多肽結(jié)合而活化其功能的分子。同樣，術(shù)語"拮抗劑"指通過與本發(fā)明多肽結(jié)合而抑制其功能的分子。而且，通過這種篩選作為"拮抗劑"而分離的化合物是抑制本發(fā)明多肽與分子(包括DNA和蛋白質(zhì))在體內(nèi)相互作用的候選化合物。當本發(fā)明方法中所沖企測的生物學(xué)活性為細胞增殖時，可以如實施例所述如下進行檢測制備表達本發(fā)明多肽的細胞，在存在測試化合物的條件下培養(yǎng)該細胞，并測定細胞增殖速度、測量細胞周期等、以及測量集落形成活性。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了篩選用于治療或預(yù)防PRC的化合物的方法。如上詳細描述，通過控制ELOVL7的表達水平，可以控制PRC的發(fā)作和進展。因而，通過以ELOVL7的表達水平為指標進行篩選，可以鑒定可用于治療或預(yù)防PRC的化合物。在本發(fā)明的上下文中，這樣的篩選可包括例如以下步驟(a)使測試化合物與表達ELOVL7的細胞接觸；并(b)選擇與不存在測試化合物時檢測到的表達水平相比降低ELOVI^表達水平的測試化合物。表達至少一種ELOVL7的細胞包括例如由PRC建立的細胞系；這樣的細胞可以用于本發(fā)明的上述篩選(例如PC3、DU145、LNCaP、22Rvl)。表達水平可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法來評估。在篩選方法中，可選擇或者，本發(fā)明的篩選方法可包括以下步驟a)使測試化合物與導(dǎo)入了載體的細胞接觸，其中所述載體包含標志基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)及在該轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的控制下表達的報告基因，其中所述標志基因為ELOVL7;b)測量所述報告基因的表達水平或活性；并c)選擇與對照相比降低所述報告基因表達水平或活性的測試化合物。合適的報告基因和宿主細胞是本領(lǐng)域眾所周知的。使用標志基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)，可以制備篩選所需的報告子構(gòu)建體。當本領(lǐng)域技術(shù)人員已知標志基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)時，可以使用先前的序列信息來制備報告子構(gòu)建體。當標志基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)仍未鑒定時，可以基于標志基因的核苷酸序列信息從基因組文庫中分離包含轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的核苷酸區(qū)段?？捎糜诮Y(jié)合蛋白質(zhì)的支持物的實例包括不溶性多糖，諸如瓊脂糖、纖維素和右旋糖苷；及合成樹脂，諸如聚丙烯酰胺、聚苯乙烯和硅；優(yōu)選由上述材料制備的市售的珠和板(例如多孔板、生物傳感器芯片等)。使用珠子時，可以將其填入柱子。蛋白質(zhì)與支持物的結(jié)合可依照常規(guī)方法進行，諸如化學(xué)鍵合和物理吸附?；蛘?，蛋白質(zhì)可通過特異性識別它的抗體而與支持物結(jié)合。此外，還可以利用親合素與生物素來進行蛋白質(zhì)與支持物的結(jié)合。蛋白質(zhì)之間的結(jié)合在緩沖液中進行，例如但不限于磷酸鹽緩沖液和Tris緩沖液，只要緩沖液不抑制蛋白之間的結(jié)合即可。在本發(fā)明中，利用表面等離子體共振現(xiàn)象的生物傳感器可用作對所結(jié)合蛋白質(zhì)4企測或定量的手4殳。使用這樣的生物傳感器(例如BIAcore,Pharmacia)時，僅使用極少量的多肽且無需標記，即可將蛋白質(zhì)之間的相互作用實時觀察為表面等離子體共振信號。或者，可以標記ELOVL7多肽，所結(jié)合蛋白質(zhì)的標記物可用于^r測或測量所結(jié)合的蛋白質(zhì)。具體的說，對一種蛋白質(zhì)進行預(yù)標記之后，在存在測試化合物的條件下使經(jīng)過標記的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)接觸，然后在洗滌之后根據(jù)標記物來檢測或測量所結(jié)合的蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的方法中，可以使用標記物質(zhì)來標記蛋白質(zhì)，諸如放射性同位素(例如3h、14c、32p、33p、35s、125i、131i)、酶(例如堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶、(3-半乳糖香酶、p-葡糖苷酶)、熒光物質(zhì)(例如異硫氰酸熒光素(FITC)、羅丹明)、和生物素/親合素。在用放射性同位素標記蛋白質(zhì)時，可通過液體閃爍法進行檢測或測量?；蛘?，通過加入酶的底物，用吸收光度計(absorptiometer)檢測底物的酶促變化諸如顏色的產(chǎn)生，可以檢測或測量用酶標記的蛋白質(zhì)。此外，在將熒光物質(zhì)用作標記物的情況中，可使用熒光光度計來檢觀'J或測量所結(jié)合的蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的篩選中使用抗體的情況中，抗體優(yōu)選用上述標記物質(zhì)之一進行標記，并基于標記物質(zhì)進行檢測或測量?；蛘撸部梢詫⑨槍LOVL7多肽或月幾動蛋白的抗體用作第一抗體，使用以標記物質(zhì)標記的第二抗體對其進行檢測。此外，本發(fā)明的篩選中與蛋白質(zhì)結(jié)合的抗體可使用蛋白G或蛋白A柱進行々企測或測量。在本發(fā)明的篩選方法中可以使用任何測試化合物，例如細胞提取物、細胞培養(yǎng)物上清液、微生物發(fā)酵產(chǎn)物、海洋生物提取物、植物提取物、純化或粗制的蛋白質(zhì)、肽、非肽化合物、合成小分子化合物和天然化合物。本發(fā)明的測試化合物還可以使用本領(lǐng)域已知的組合文庫法的多種方法的任一種獲得，包括(l)生物學(xué)文庫，(2)空間定位平行固相或溶液相文庫(spatiallyaddressableparallelsolidphaseorsolutionphaselibraries),(3)需要重疊合法(deconvolution)的合成文庫法，(4)"——玉朱一4匕合物，，(onebeadonecompound)文庫法，和(5)使用親和層析選擇的合成文庫法。使用親和層析選擇的生物學(xué)文庫法限于肽文庫，而其它四種方法適用于肽、非肽寡聚物或小分子化合物文庫(Lam，AnticancerDrugDes12:145(1997))。合成分子文庫的方法的例子可在本領(lǐng)域找到(DeWittetal"ProcNatlAcadSciUSA卯6909(1993);Erbetal.,ProcNatlAcadSciUSA91:11422(1994);Zucke廳nnetal"JMedChem37:2678(1994);Choetal.，Science261:1303(1993);Carelletal.,AngewChemIntEdEngl33:2059(1994);Carelletal.,Angew.ChemIntEdEngl33:2061(1994);Gallopetal.,JMedChem37:1233(1994))。化合物文庫可存在于溶液中(參見Houghten,Bio/Techniques13:412(1992))、珠子上(Lam,Nature354:82(1991))、芯片上(Fodor，Nature364:555(1993》、細菌上(美國專利5，223，409)、孢子上(美國專利5,571，698;5,403,484和5,223,409)、質(zhì)粒上(Culletal"ProcNatlAcadSciUSA89:1865(1992))或噬菌體上(ScottandSmith,Science249:386(1990);Delvin，Science249:404(1990);Cwirlaetal"ProcNatlAcadSciUSA87:6378(1990);Fdici,JMolBiol222:301(1991);美國專利申請20020103360)。通過本發(fā)明篩選方法分離的化合物是抑制本發(fā)明多肽的活性、用于治療或預(yù)防可歸于例如細胞增殖性疾病的疾病、諸如PRC的藥物候選物。通過本發(fā)明篩選方法獲得的化合物的部分結(jié)構(gòu)通過添加、刪除和/或取代而發(fā)生轉(zhuǎn)變用于治療或預(yù)防前列腺癌的藥物組合物本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防前列腺癌的組合物，其包含通過本發(fā)明的篩選方法選擇出的任何化合物?；衔镒鳛樗幬锸┯糜谌嘶蚱渌溉閯游镏T如小鼠、大鼠:豚鼠、兔:貓、、犬、綿羊、豬、牛、猴、狒狒、黑猩猩時，分離的化合物可以直接施用，或者可以使用已知的藥物制備方法配制成劑型。例如，根據(jù)需要，藥物可以作為糖衣片劑、膠嚢劑、酏劑和微膠嚢劑口服施用；或者用水或任何其它制藥學(xué)可接受液體配制成無菌溶液或懸浮液，以注射的形式非口服施用。例如，可以將化合物以普遍接受的藥物實施(implementation)所需的單位劑型與藥理學(xué)可接受載體或介質(zhì)混合，具體為無菌水、生理鹽水、植物油、乳化劑、懸浮劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、調(diào)味劑、賦形劑、媒介物、防腐劑、粘合劑等。這些制劑中有效成分的量是可獲得的指定范圍內(nèi)的合適劑量。可以混合到片劑和膠嚢中的添加劑的例子包括但不限于粘合劑，諸如明膠、玉米淀粉、黃蓍膠和阿拉伯膠；賦形劑，諸如結(jié)晶纖維素；溶脹劑，諸如玉米淀粉、明膠和褐藻酸；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；增甜劑，諸如蔗糖、乳糖或糖精；和芳香劑，諸如薄荷、Gaultheriaadenothrix油和櫻桃。若單位劑量形式為膠嚢劑，則上述成分中還可以包括液體載體，諸如油。注射用無菌組合物可以使用媒介物諸如注射用蒸餾水，遵循正規(guī)藥物實施進行配制。生理鹽水，葡萄糖，及其它等滲液體，包括佐劑，如D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露醇和氯化鈉，可用作注射用水溶液。這些可以與合適的增溶劑組合使用，諸如醇，特別是乙醇；多元醇，諸如丙二醇和聚乙二醇；及非離子表面活性劑，諸如Polysorbate8()tm和HCO-50。芝麻油或大豆油可用作油質(zhì)液體，它們可以與苯曱酸苯曱酯或苯曱醇組合使用作為增溶劑，而且可以與緩沖液，諸如磷酸鹽緩沖液和乙酸鈉緩沖液；止痛藥，諸如鹽酸普魯卡因；穩(wěn)定劑，諸如苯曱醇和酚；及抗氧化劑配制在一起。所制備的注射劑可以裝入合適的安瓿?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法給患者施用本發(fā)明的藥物組合物，例如動脈內(nèi)、靜脈內(nèi)或經(jīng)皮注射及鼻內(nèi)、經(jīng)支氣管、肌肉內(nèi)或口服施用。施用的劑量和方法根據(jù)患者的體重和年齡及施用方法而變化；然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以常規(guī)選擇它們。如果所述化合物可以由DNA編碼，那么可以將該DNA插入基因療法的載體，并施用該載體以進行治療。施用的劑量和方法根據(jù)患者的體重、年齡和癥狀而變化，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以合適的選擇它們。舉例來說，在給正常體重成人(60kg)口服施用時，雖然根據(jù)癥狀存在一些差異，能與本發(fā)明多肽結(jié)合并調(diào)節(jié)其活性的化合物的劑量為約0.1mg到約100mg每天，優(yōu)選為約1.0mg到約50mg每天，更優(yōu)選為約1.0mg到約20mg每天。在以注射形式給正常體重成人(體重60kg)腸胃外施用時，雖然根據(jù)患者、靶器官、癥狀和施用方法存在一些差異，靜脈內(nèi)注射約0.01mg到約30mg每天，優(yōu)選約0.1mg到約20mg每天，更優(yōu)選約0.1mg到約10mg每天的劑量是合適的。而且，在其它動物的情況中，有可能按換算為60kg體重的量施用。此外，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防PRC的藥物組合物，其包含能抑制ELOVL7基因表達的活性成分。此類活性成分包括針對EL0VL7基因的反義多核苷酸、siRNA或核酶或者所述反義多核苷酸、siRNA或核酶的衍生物，諸如表達載體。通過與對衍生物無活性的合適基質(zhì)混合，可以將這些活性成分制成外用制劑，諸如搽劑(liniment)或罨劑(poultice)。而且，根據(jù)需要，通過添加賦形劑、等滲劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、止痛藥等，可以將這些活性成分配制成片劑、粉劑、顆粒劑、膠嚢、脂質(zhì)體膠嚢、注射劑、溶液、滴鼻劑和冷凍干燥劑。這些劑型可以依照常規(guī)方法來制備。通過直接施加到患處上或通過注射到血管中使其到達患處，將活性成分給予患者。也可以使用封固劑(mountingmedium)來提高持久性和膜通透性。封固劑的例子包括脂質(zhì)體、聚-L-賴氨酸、脂質(zhì)、膽固醇、脂轉(zhuǎn)染劑、或它們的4汙生物。本發(fā)明的此類組合物的劑量可以根據(jù)患者的狀況而適當調(diào)整，并以所需量使用。例如，可以施用的劑量范圍為0.1-100mg/kg,優(yōu)選0.1-50mg/kg。本發(fā)明的另一個實施方案是用于治療或預(yù)防PRC的組合物，其包含針對由ELOVL7基因所編碼的多肽的抗體或該抗體的、能與該多肽結(jié)合的片段。在給正常體重成人(60kg)口服施用時，雖然沖艮據(jù)癥狀存在一些差異，抗體或其片^:用于治療或預(yù)防PRC的劑量為約0.1mg到約1OOmg每天，優(yōu)選為約1.Omg到約50mg每天，更優(yōu)選為約1.Omg到約20mg每天。在以注射形式給正常體重成人(體重60kg)腸胃外施用時，雖然因患者狀況、疾病癥狀和施用方法而有差異，但靜脈內(nèi)注射約0.01mg到約30mg每天，優(yōu)選約O.lmg到約20mg每天，更優(yōu)選約0.1mg到約10mg每天的劑量是合適的。而且，在其它動物的情況中，有可能按換算為60kg體重的量施用。用于治療或預(yù)防前列腺癌的方法本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防受試者中的PRC的方法。將治療性化合物預(yù)防性或治療性的施用于患有或有風(fēng)險發(fā)生(或易感)PRC的受試者。使用標預(yù)防性施用在出現(xiàn)疾病的明顯臨床癥狀之前進行，從而阻止疾病或病癥的出現(xiàn)或者延遲其進程。治療方法包括降低ELOVL7基因的表達或功能。在這些方法中，用有效量的化合物來治療受試者，所述有效量的化合物能降低受試者中過表達的基因(ELOVL7基因)。施用可以是全身的或局部的。治療性化合物包括能降低PRC細胞中內(nèi)源存在的此類基因表達水平的化合物(即能下調(diào)過表達的基因的表達的化合物)。施用此類治療性化合物能抵消受試者細胞中異常過表達的基因的效果。此類化合物可通過上文所迷本發(fā)明篩選方法來獲得。ELOVL7基因的表達還可以以本領(lǐng)域已知的數(shù)種方法中的任何一種來抑制，包括給受試者施用能抑制或拮抗基因表達的核酸?？梢詫⑵茐幕虮磉_的反義寡核苷酸、siRNA或核酶用于抑制基因的表達。如上所述，可以用對應(yīng)于ELOVL7基因的核苷S吏序列的反義寡核苷酸來降低ELOVL7基因的表達水平。具體的說，本發(fā)明的反義寡核苷酸可以如下發(fā)揮作用，即與由ELOVL7基因所編碼的多肽或與之對應(yīng)的mRNA結(jié)合，從而抑制基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，促進mRNA的降解和/或抑制基因所編碼的蛋白質(zhì)的表達，并最終抑制ELOVL7蛋白的功能。通過與對衍生物無活性的合適基質(zhì)混合，可以將反義寡核苷酸及其衍生物制成外用制劑，諸如搽劑或罨劑，并用于本發(fā)明治療或預(yù)防PRC的方法。能抑制一種或多種過表達基因的基因產(chǎn)物的核酸還包括小干擾RNA(siRNA)，其包含編碼ELOVL7基因的核苷酸序列的有義鏈核酸與反義鏈核酸的組合。將siRNA導(dǎo)入細胞的標準技術(shù)可用于本發(fā)明的治療或預(yù)防，其包括以DNA為模板轉(zhuǎn)錄RNA的技術(shù)。構(gòu)建siRNA使得單一轉(zhuǎn)錄物具有來自靶基因的互補的有義序列及反義序列二者，例如為發(fā)夾結(jié)構(gòu)。f基因表達。siRNA與靶細胞中ELOVL7基因轉(zhuǎn)錄物的結(jié)合導(dǎo)致細胞產(chǎn)生的ELOVL7蛋白減少?；?的核酶。此外，本發(fā)明提供了使用針對本發(fā)明多肽的抗體來治療或預(yù)防細胞增殖性疾病，諸如PRC的方法。依照該方法，施用藥學(xué)有效量的針對本發(fā)明多肽的抗體。由于ELOVL7蛋白的表達在PRC細胞中上調(diào)且這些蛋白質(zhì)的表達抑制導(dǎo)致細胞增殖活性的降低，預(yù)計細胞增殖性疾病可通過抗體與這些蛋白質(zhì)的結(jié)合來治療或預(yù)防。如此，以足以降低本發(fā)明蛋白質(zhì)活性的劑量施用4十對本發(fā)明多肽的抗體，其范圍為0.1到約250mg/kg每天。成人的劑量范圍一般為約5mg到約17.5g/天，優(yōu)選約5mg到約10g/天，最優(yōu)選約100mg到約3g/天。或者，可使用能與紳瘤細胞所特有的細胞表面標志物結(jié)合的抗體作為藥物投遞工具。例如，以足以破壞腫瘤細胞的劑量施用偶聯(lián)有細胞毒劑的抗體。本發(fā)明還涉及誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力的方法，包括施用ELOVL7蛋白或其免疫學(xué)活性片段、或者編碼該蛋白質(zhì)或其片段的多核苷酸。ELOVL7蛋白或其免疫學(xué)活性片段可用作針對細胞增殖性疾病諸如PRC的疫苗。在有些情況中，可以以結(jié)合于T細胞受體(TCR)或由抗原呈遞細胞(APC)諸如巨噬細胞、樹突細胞(DC)或B細胞呈遞的形式施用蛋白質(zhì)或其片段。由于DC具有強抗原呈遞能力，在APC中使用DC是最優(yōu)選的。在本發(fā)明中，針對細胞增殖性疾病的疫苗指能夠在接種后的動物中誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力的物質(zhì)。一般而言，抗腫瘤免疫力包括諸如以下的免疫應(yīng)答-誘導(dǎo)針對腫瘤的細胞毒性淋巴細胞，-誘導(dǎo)識別腫瘤的抗體，和-誘導(dǎo)抗腫瘤細胞因子的產(chǎn)生。因此，若某種蛋白質(zhì)在接種后的動物中誘導(dǎo)任一種上述免疫應(yīng)答，則確定該蛋白質(zhì)具有抗腫瘤免疫力誘導(dǎo)效果。蛋白質(zhì)對抗腫瘤免疫力的誘導(dǎo)可以通過在體內(nèi)或在體外觀察宿主中的免疫系統(tǒng)針對蛋白質(zhì)的應(yīng)答來檢測。例如，用于檢測細胞毒性T淋巴細胞誘導(dǎo)的方法是眾所周知的。進入活炮和B細胞。以抗毒性T細胞(或細胞毒性T淋巴細胞；CTL)，然后增殖(這稱為T細胞活化)。因此，某種肽的CTL誘導(dǎo)可以通過將該肽經(jīng)由APC呈遞給T細胞并檢測CTL的誘導(dǎo)來評估。此外，八？(3具有激活004+T細胞、CD8+T細胞、巨噬細胞、嗜曙紅細胞和NK細胞的效果。由于CD4十T細胞和CD8十T細胞在抗腫瘤免疫力中也是重要的，可使用這些細胞的活化效果作為指標來評估肽的抗肺瘤免疫力誘導(dǎo)作用。周知的。在APC中，DC是具有最強CTL誘導(dǎo)作用的代表性APC。在該方法中，首先使測試多肽與DC接觸，然后使該DC與T細胞接觸。在與DC接觸后檢測到具有針對目的細胞的細胞毒性效果的T細胞，則表示該測試多肽具有誘導(dǎo)細胞毒性T細胞的活性。針對腫瘤的CTL活性可以使用例如5'Cr標記的腫瘤細胞的溶解作為指標來檢測。或者，使用3H-胸苷攝取活性或LDH(乳糖脫氫酶)釋放作為指標來評估胂瘤細胞破壞程度的方法也是眾所周知的。在DC外，外周血單個核細胞(PBMC)也可用作APC。已凈艮道可通過在存在GM-CSF和IL-4的條件下培養(yǎng)PBMC來增強CTL的誘導(dǎo)。相似的，已顯示通過在存在鑰孔i成血藍蛋白(KLH)和U的條件下培養(yǎng)PBMC來誘導(dǎo)CTL。通過這些方法證實為具有CTL誘導(dǎo)活性的測試多肽就是具有DC活化效應(yīng)和隨后的CTL誘導(dǎo)活性的多肽。因此，誘導(dǎo)針對胂瘤細胞的CTL的多肽可用作針對腫瘤的疫苗。此外，通過與多肽接觸而獲得誘導(dǎo)針對腫瘤的CTL的能力的APC也可用作針對腫瘤的疫苗。此外，通過APC呈遞多肽抗原而獲得細胞毒性的CTL也可用作針對腫瘤的疫苗。利用由APC和CTL引起的抗腫瘤免疫力的這些腫瘤治療方法稱為細胞免疫療法。一般來說，在將多肽用于細胞免疫療法時，已知通過組合多種具有不同結(jié)構(gòu)的多肽并使它們與DC接觸來增加CTL誘導(dǎo)的效率。因此，在用蛋白質(zhì)片段刺激DC時，使用多種類型的片段的混合物是有利的。或者，多肽對抗腫瘤免疫力的誘導(dǎo)可通過觀察針對腫瘤的抗體的產(chǎn)生的誘導(dǎo)來證實。例如，在用多肽免疫的實驗動物中誘導(dǎo)了針對該多肽的抗體時及在這些抗體抑制胂瘤細胞的生長時，可確定該多肽具有誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力的能力。通過施用本發(fā)明的疫苗來誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力，而且該抗腫瘤免疫力的誘導(dǎo)能夠治療和預(yù)防細胞增殖性疾病，諸如PRC。針對癌癥的治療或?qū)Π┌Y發(fā)作的預(yù)防包括任何下述步驟，諸如癌性細胞生長的抑制，癌癥的退化(involution)及癌發(fā)生的抑制。癌癥的治療或預(yù)防效果還包括患有癌癥的個體的死亡率降低、血液中腫瘤標記物的減少、癌癥伴發(fā)的可檢測癥狀的緩解等。此類治療和預(yù)防效果優(yōu)選是統(tǒng)計學(xué)上顯著的。例如，在顯著性水平為5%或更低的觀察結(jié)果中，其中將疫苗針對細胞增殖性疾病的治療或預(yù)防效果與未施用疫苗的對照進行比較。例如，可以將Student氏t檢驗、Mann-WhitneyU檢驗或ANOVA用于統(tǒng)計學(xué)分析。上述具有免疫學(xué)活性的蛋白質(zhì)或編碼該蛋白質(zhì)的載體可以與佐劑組合。佐劑指在與具有免疫學(xué)活性的蛋白質(zhì)一起(或相繼)施用后能增強針對該蛋白質(zhì)的免疫應(yīng)答的化合物。佐劑的例子包括但不限于霍亂毒素、沙門氏菌毒素、明礬等。此外，本發(fā)明的疫苗可適當?shù)呐c可藥用載體組合。此類載體的例子有無菌水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、培養(yǎng)液等。此外，疫苗可以在必要時包含穩(wěn)定劑、懸浮劑、防腐劑、表面活性劑等。疫苗可全身或局部施用。疫苗施用可以通過單次施用進行，或者通過多次施用來強化。在使用APC或CTL作為本發(fā)明的疫苗時，可以通過例如離體方法來治療或預(yù)防腫瘤。更具體的說，收集接受治療或預(yù)防療法的受試者的PBMC，佳_該細胞與多肽在離體條件下接觸，并在誘導(dǎo)APC或CTL后將該細胞施用于受試者。也可通過將編碼多肽的栽體在離體條件下導(dǎo)入PBMC來誘導(dǎo)APC?？梢栽谑┯们翱寺〗?jīng)過體外誘導(dǎo)的APC或CTL。通過克隆和培養(yǎng)具有石皮壞草巴細胞高活性的細胞，可以更有效的實施細胞免疫療法。此外，以該方式分離的APC和CTL不僅可用于針對提供細胞的受試者進行細胞免疫療法，還可以用于針對來自其他個體的相似類型腫瘤進行細胞免疫療法。此外，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防細胞增殖性疾病諸如PRC的藥物組合物，其包含藥學(xué)有效量的ELOVL7多肽。該藥物組合物可用于引發(fā)抗腫瘤免疫力。ELOVL7的正常表達限于前列腺。因此，對該基因的抑制不會對其它器官造成不良影響。如此，ELOVL7多肽優(yōu)選用于治療細胞增殖性疾病，尤其是PRC。而且，由于在癌性細胞中特異性表達的蛋白質(zhì)的肽片段揭示出誘導(dǎo)針對癌癥的免疫應(yīng)答，因此也可以在用于治療或預(yù)防細胞增殖性疾病諸如PRC的藥物組合物中使用ELOVL7的肽片段。在本發(fā)明中，以足以誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力的劑量施用多肽或其片段，其范圍為0.1mg-10mg,優(yōu)選0.3mg-5mg,更優(yōu)選0.8mg-1.5mg。反復(fù)進行施用。例如，為了誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力，可以每2周4次施用lmg肽或其片^爻。此外，可以用編碼ELOVL7或其片段的多核苷酸來引發(fā)抗腫瘤免疫力。可以將此類多核香酸摻入表達載體以在待治療的受試者中表達ELOVL7或其片段。如此，本發(fā)明涵蓋用于誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力的方法，其中給患有或有風(fēng)險發(fā)生細胞增殖性疾病諸如PRC的受試者施用編碼ELOVL7或其片段的多核香酸。本發(fā)明。實施例并非意欲以任何方式限制本發(fā)明的范圍。除非另有限定，本文中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語均與本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員普遍理解的含義相同。盡管與本文所述類似或等同的方法和材料可用于實施或檢驗本發(fā)明，但下文描述了合適的方法和材料。本文中所引用的任何專利、專利申請和出版物均收入作為參考。用于實施本發(fā)明的最佳方式本發(fā)明通過以下實施例詳細例示，〗旦不限于這些實施例。細月包系和組織人PRC細胞系LNCaP、DU-145、22Rvl和PC-3得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC，Rockville，MD)。將所有細月包在補充10%胎牛血清和1%抗生素/抗真菌溶液(Sigma-Aldrich)的以下培養(yǎng)基中培養(yǎng)成單層RPMI1640(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)用于LNCaP和22Rvl;DMEM(Sigma-Aldrich)用于DU畫145;而F-12(Invitrogen,Carlsbad,CA)用于PC-3。在培養(yǎng)箱中在含5%C02的潮濕空氣中于37。C維持細胞。冷凍的或石蠟包埋的PRC組織得自知情同意的、接受根治性前列腺切除術(shù)的PRC患者，如前所述(AshidaSetal.，CancerRes64:5963-72(2004))。半定量RT-PCR使用TRIzol試劑(Invitrogen)依照制造商的說明書自細胞系、顯微解剖的PRC細胞和大塊PRC組織提取總RNA。用DNA酶I(RocheDiagnostic,Mannheim,Germany)處理所提取的總RNA，并用寡聚d(T)12-18引物及Superscript逆轉(zhuǎn)錄酶II(Invitrogen)逆轉(zhuǎn)錄成單鏈cDNA。我們配制了適宜稀釋度的每份單鏈cDNA,接著使用(32-MG作為定量對照，對cDNA含量進行標準化，使用單鏈cDNA作為PCR模板進行PCR^應(yīng)。引物序列如下(32-MG(正向5，-CACCCCCACTGAAAAAGAGA畫3，(SEQIDNO.l)，反向5，-TACCTGTGGAGCAAGGTGC-3，(SEQIDNO,2))和ELOVL7(正向5'-TCTATGAATCCTTGAGGGCCTA-3，(SEQIDN0.3),反向5'-TGACAACATCCACAGAATGTTCC畫3，(SEQIDN0.4))。PCR條件如下初始變性，95。C5min;p2-MG的20個循環(huán)和ELOVL7的30個循環(huán)，每個循環(huán)為變性95。C30sec、退火55。C30sec、及延長72。C30sec,在GeneAmpPCR系統(tǒng)9700(PEAppliedBiosystems，F(xiàn)oster,CA)上進行。Northern印跡分析將人多種組織印跡(BDBioscience,PaloAlto,CA)與32p標記的ELOVL7cDNA雜交20小時，其中ELOVL7cDNA是使用Mega標記試劑盒(Amersham，Piscataway,NJ)標記的。ELOVL7的探針cDNA使用以下引物制備成785bp的PCR產(chǎn)物ELOVL7(正向5'-AGAGCACAGCTAAATGAAACTGC-3，(SEQIDNO.5),反向5'-TGACAACATCCACAGAATGTTCC隱3，(SEQIDN0.6))。預(yù)雜交、雜交、和洗滌依照制造商的說明書進行。將印跡于-80。C放射自顯影7天。ELOVL7抗體的生成和免疫組織化學(xué)分析由MBL(Nagoya,Japan)生成ELOVL7的N末端肽(SDLTSRTVHLYDNWIKDA)(SEQIDNO.16)和C末端肽(CHFWYRAYTKGQRLPKTVK)(SEQIDNO.17)并給兔免疫。自經(jīng)過這些肽免疫的兔純化血清。將石蠟包埋組織切片脫石蠟，在高pH抗原修補液(DAKO,Carpinteria,CA)中用微波以600W處理4次，每次l分鐘，然后用過氧化物酶封閉劑(DAKO)處理，接著用蛋白質(zhì)封閉劑(DAKO)處理。將組織切片與針對ELOVL7的多克隆抗體一起溫育，接著與偶聯(lián)有l(wèi)束才艮過氧化物酶的二抗(DAKO)—起溫育。通過二氨基聯(lián)苯胺(diaminobensidine)(DAKO)染色來顯現(xiàn)抗原，并用蘇木精對切片進行復(fù)染。siRNA表達載體的構(gòu)建和細胞活力測定法為了調(diào)查ELOVL7在PRC細胞中的生物學(xué)功能，我們使用psiU6BX3.O載體來表達針對耙基因的短發(fā)夾RNA,如前所述(AnazawaYetal.，CancerRes65:4578-86(2005))。設(shè)計用于表達siRNA的質(zhì)粒通過將雙《連寡核苷酸克隆入psiU6BX載體來制備。ELOVL7的靶序列的寡核苷酸序列如下si存5的有義鏈序列5，-CAAGCAACAACAACAACAA-3，(SEQIDNO,7)和作為陰性對照的siEGFP的有義鏈序列5'-GAAGCAGCACGACTTCTTC國3，(SEQIDNO.ll)。在10cm培養(yǎng)皿上培養(yǎng)高水平表達ELOVL7的PRC細胞系LNCaP和22Rv1細胞(2xl06個)，使用FuGene6試劑(Roche)依照供應(yīng)商的方案用psiU6-ELOVL7(s說5)或psiU6-siEGFP轉(zhuǎn)染，然后在含800Mg/ml遺傳霉素的適宜培養(yǎng)基中培養(yǎng)2周。將細胞用100%甲醇固定，用0.1。/。結(jié)晶紫-H2O染色，供集落形成測定法之用。在MTT測定法中，在轉(zhuǎn)染后第10天使用細胞計數(shù)試劑盒-8(DOJINDO，Kumamoto，Japan)測量細月包活力。使用樣i量^反讀l"義550(Bio-Rad)測量490nm的吸光度，以630nm為參比。初步的，這些siRNA表達載體對內(nèi)源ELOVL7表達的敲減效應(yīng)在轉(zhuǎn)染后第7天通過使用前述引物的RT-PCR得到了證實。針對ELOVL7的小干擾RNA的寡核芬酸序列顯示于下。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>ELOVL7敲減的細胞中的脂肪酸分析LNCaP細胞用siRNA表達載體(si5或?qū)φ誷正GFP)轉(zhuǎn)染，與遺傳霉素一起溫育7天。初步的，我們證實了對ELOVL7表達的敲減效應(yīng)，而且第7天的細胞活力或活細胞數(shù)不受影響。在第7天，用Folch液(體積比為l:2的曱醇:氯仿)自細胞提^J旨質(zhì)，并在氮氣下蒸發(fā)。用0.5MHC1水合后，用氯仿提取游離脂肪酸，并用0.4K甲醇鹽/曱醇和14。/。三氟化硼和曱醇而曱酯化。對細胞中的每種脂肪酸水平進行氣相層析質(zhì)譜(GC-HA,Shimazu,Kyoto，Japan)。重組蛋白在昆蟲細胞中的表達使用BacPAK桿狀病毒表達系統(tǒng)(Clontech)依照制造商的說明書生成表達ELOVL7的重組桿狀病毒。使用設(shè)計成在氨基末端包含6xHis標簽序列的以下引物PCR擴增全長ELOVL7cDNA(Genbank編號NM—024930)，并克隆入pBacPAK9載體。用于ELOVL7的正向引物為CTTCAGTGATCTTACATCG-3，(SEQIDNO:18)，而用于ELOVL7的反向引物為5，-CCGCTCGAGTCAATTATCTTTGTTTTTGCAAGTTCC-3，(SEQIDNO:19)。在補充有10。/。胎牛血清和50嗎/ml慶大霉素(Sigma-Aldrich)的Grace氏昆蟲培養(yǎng)基(GIBCO)中于27。C培養(yǎng)草地夜蛾0S/oc/o^era/n^je^a)(Sf21)細胞，并用規(guī)定的重組杯狀病毒感染。感染后72小時，收集細胞，并用PBS洗滌一次。使用經(jīng)過修改的Moon等人記載的規(guī)程(MoonYAetal.,JBiolChem276:45358-45366(2001))，通過差速離心分離微粒體。簡言之，將細胞懸浮于0.25M蔗糖、10mMTris-Cl(pH7.4)、lmMEDTA、和0.1%蛋白酶抑制劑混合物III(Calbiochem,SanDiego，CA)，并用Microson超聲細胞破碎儀破碎。將細胞勻漿液于4。C以5,000rpm離心10分鐘，收集上清液并于4。C以15,000rpm離心20分鐘。然后將所得上清液在BeckmanTLA100.2轉(zhuǎn)子中于4。C以55,000rpm離心30分鐘，并將沉淀物重懸于含50mMTris-Cl(pH7.4)、lmMEDTA、20%甘油和上文所述蛋白酶抑制劑混合物III的緩沖液。將微粒體的等分試樣在液氮中快速冷凍后，保存于-80。C,并用于westem印跡分析和體外脂肪酸延長測定法。Western印跡分才斤將微粒體蛋白質(zhì)在SDS樣品緩沖液中于4。C變性過夜以預(yù)防蛋白質(zhì)聚集。將30嗎每種SDS樣品加載到15。/。SDS-PAGE凝膠上，并印到硝酸纖維素膜上。通過化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)(ECL，Amersham)來顯現(xiàn)蛋白質(zhì)條帶。體外脂肪酸延長測定法在自上文所述受到桿狀病毒感染的Sf21細胞制備的微粒體中測量脂肪酸延長活性。反應(yīng)混合物在0.45ml總反應(yīng)體積中含10-200昭微粒體。反應(yīng)組分為0.1MTris-Cl(pH7.4)、3mM花生四烯酰基-CoA、7.5mM丙二酸單酰基-CoA、20mMNADPH、和0,6mM不含脂肪酸的BSA(Sigma-Aldrich)。將玻璃試管中反應(yīng)混合物的氣相用氮氣取代，在冰上維持5分鐘，然后使用注射器將微粒體注射到玻璃試管中。將反應(yīng)體系于37。C溫育5分鐘，并用Folch液(體積比為1:2的曱醇:氯仿)終止反應(yīng)。使用上文所述氣相層析質(zhì)i普分析反應(yīng)樣品中的每一種脂肪酸水平。結(jié)果新基因五i:or丄7的鑒定及其表達樣式我們先前報導(dǎo)了，通過呈現(xiàn)27,000種基因的cDNA微陣列分析聯(lián)合LMM系統(tǒng)，對PRC細胞和純化自臨床PRC組織的PIN的全基因組范圍表達序型(AshidaSetal.，CancerRes64:5963-72(2004))。在顯示出在PRC細胞和/或PIN細胞中與正常前列腺上皮細胞相比反式激活的許多基因中，我們在這份報告中聚焦于EL0VL7。半定量RT-PCR證實了與正常前列腺上皮相比，12份臨床PRC樣品中有8份的PRC細胞中ELOVL7表達升高，如圖1A所示。用于調(diào)查ELOVL7組織分布的Northern印跡分析在前列腺、腎和其它數(shù)種器官中鑒定出大約3.8kb的ELOVL7轉(zhuǎn)錄物(圖1B),但RT-PCR分析(圖1C)證明了PRC細胞中的ELOVL7表達明顯高于正常腎或前列腺，暗示它在PRC細胞中的獨特表達。為了進一步調(diào)查PRC細胞中的ELOVL7蛋白表達，我們用ELOVL7N末端或C末端肽免疫，生成了抗ELOVL7的多克隆抗體，并進行了免疫組織化學(xué)分析。如圖2A所示，在所檢查的所有12份PRC案例中，主要在PRC細胞的細胞質(zhì)中檢測到ELOVL7的強免疫化學(xué)信號，在非癌性前列腺上皮細胞和PIN中觀察到弱信號(圖2B、C)，與多種組織northem印跡分析的結(jié)果一致。我們所檢查的所有12份PRC顯示出針對抗ELOVL7抗體的強免疫反應(yīng)性。ELOVL7表達的敲減削弱了前列腺癌細胞的生長為了檢驗ELOVL7表達在PRC細胞生長中的作用，我們構(gòu)建了數(shù)種設(shè)計用于表達對ELOVL7特異性的siRNA的表達載體，并將它們轉(zhuǎn)染入內(nèi)源表達ELOVL7的PRC細胞系LNCaP和22Rvl。在我們在LNCaP細胞中所測試的5種質(zhì)粒中，ELOVL7-s說5顯示出對內(nèi)源ELOVL7轉(zhuǎn)錄物的顯著敲減效應(yīng)(圖3A),而且此轉(zhuǎn)染導(dǎo)致集落數(shù)的減少(圖3B)，以及通過LNCaP細胞MTT測定法測量的活細胞數(shù)的減少(圖3C),而陰性對照(s正GFP)顯示出對ELOVL7表達的敲減效應(yīng)很小，而且不影響LNCaP的細胞活力。在另一種PRC細胞系22Rvl細胞上得到了同樣的結(jié)果，如圖3D、E和F所示。五丄(9F丄7敲減引起的脂肪酸級分變化接著，我們檢查了ELOVL7表達敲減對脂肪酸合成的影響。我們給LNCaP細胞轉(zhuǎn)染了ELOVL7-si5來證實其對ELOVL7的顯著敲減效應(yīng)，或者轉(zhuǎn)染了s正GFP作為陰性對照。在轉(zhuǎn)染后第7天，在與s正GFP轉(zhuǎn)染細胞相比s正LOVL7轉(zhuǎn)染細胞的ELOVL7表達明顯敲減但細胞活力沒有受到顯著影響時，我們收獲了細胞并通過氣相層析分析了它們的脂肪酸級分。ELOVL7-si5轉(zhuǎn)染顯示出與s正GFP轉(zhuǎn)染相比長鏈和極長鏈飽和脂肪酸水平(C20:0p=0.02，C22:0p=0.008，C24:0p^0.003)的顯著降低(20-30。/。)(圖4),而ELOVL7-si5轉(zhuǎn)染顯示出對單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸水平?jīng)]有影響。這些發(fā)現(xiàn)表明，ELOVL7可優(yōu)先參與單不飽和長鏈脂肪酸的延長活性。體外脂肪酸延長測定法為了更加詳細的檢查ELOVL7作為脂肪酸延長酶的實際活性，使用BacPAK桿狀病毒表達系統(tǒng)生成了重組ELOVL7蛋白。此重組桿狀病毒生成大約30kDa的蛋白質(zhì)，而使用抗His單克隆抗體的western印跡分析揭示了所表達的ELOVL7蛋白存在于細胞的微粒體中(圖5A)。我們使用經(jīng)過ELOVL7表達病毒轉(zhuǎn)染的昆蟲細胞或未經(jīng)轉(zhuǎn)染的細胞的微粒體級分作為體外脂肪酸延長測定法的酶源。測量了5分鐘反應(yīng)前后每一種脂肪酸水平的增量，將其作為延長活性。最初，根據(jù)上文所述siRNA實驗的結(jié)果，憑經(jīng)驗選擇硬脂?；?CoA(C18:0)作為該延長測定法的底物。然而，發(fā)現(xiàn)微粒體中半數(shù)的脂肪酸包含硬脂酸(C18:0)，這掩蓋了脂肪酸級分的差異。因此，使用花生四烯酰基-CoA(C20:0)作為底物。圖5B顯示了5分鐘反應(yīng)前后每一種脂肪酸水平的增量，來自受感染細胞的微粒體產(chǎn)生一些C22:0和C24:0，而對照微粒體產(chǎn)生C20:0但根本不產(chǎn)生C22:0和C24:0。對照微粒體的C20:0生成很有可能是由于Sf21昆蟲細胞的內(nèi)源脂肪酸延長活性所致，而在包含人ELOVL7蛋白的《效粒體中，C20:0變成C22:0、C24:0或更長脂肪酸的延長反應(yīng)可活躍進行，導(dǎo)致C20:0產(chǎn)量較少(圖5B)。此外，此脂肪酸鏈延長活性依賴于酶源即受感染細胞微粒體的量(圖5C)。這些數(shù)據(jù)說明，微粒體中的ELOVL7顯示出脂肪酸延長酶的實際活性，生成C22:0和C24:0。討論在本發(fā)明中，我們聚焦于作為在PRC細胞中反式激活的基因之一的新基因，ELOVL7。Northem印跡分析顯示出，ELOVL7在前列腺和腎中表達，但RT-PCR分析揭示了PRC細胞的ELOVL7表達明顯高于正常腎和其它重要器官?？紤]到分子靶向ELOVL7的新治療方法對重要器官具有最小的副作用，柳分子乾的可能性。我們使用ELOVL7多克隆抗體進行的免疫組織化學(xué)研究也清楚指出了ELOVL7表達在PRC細胞中的上調(diào)。迄今為止報導(dǎo)了哺乳動物中的六個ELOVL家族成員(ELOVU-6)，其中有些顯示出組織特異性表達或使用特定脂肪酸底物。根據(jù)我們的PRC和其它器官全基因組范圍基因表達數(shù)據(jù)(AshidaSetal.,CancerRes64:5963-72(2004))，在7個ELOVL家族成員(ELOVLl-7)中，ELOVL7在前列腺和PRC細胞中以最高水平表達。關(guān)于ELOVL表達樣式的這些發(fā)現(xiàn)可使人想到，ELOVL7很有可能在前列腺和PRC中特異性發(fā)揮功能、且牽涉前列腺中長鏈脂肪酸多種代謝途徑中的有些特定途徑。如此，應(yīng)當進一步調(diào)查以鑒定前列腺或PRC中牽涉ELOVL7的特定底物或途徑。在許多流行病學(xué)研究中，顯然攝取高脂肪飲食與前列腺癌發(fā)生強烈關(guān)聯(lián)(KolonelLNetal.，JNatCancerInst91:414-28(1999);SchulmanCCetal"Urology58:318-34(2001))。在我們先前的微陣列研究中，與脂質(zhì)或膽固醇代謝有關(guān)的數(shù)種基因在前列腺癌及其前體PIN中上調(diào)(AshidaSetal.,CancerRes64:5963-72(2004))，而且有許多證據(jù)表明脂質(zhì)或膽固醇代謝及脂質(zhì)代謝相關(guān)基因有可能通過其代謝途徑或抗凋亡效應(yīng)而在PRC發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮一些重要作用(DeSchrijverEetal.,CancerRes63:3799-804(2003);BaronAetal.,JCellBiochem91:47-53(2004))。其中，脂肪酸合酶(FAS),即負責合成長鏈非必需脂肪酸的前體棕櫚酸(鹽/酉旨)的酶，據(jù)報導(dǎo)在廣泛多種癌中上調(diào)，且已經(jīng)建議用作相關(guān)藥物靶(DeSchrijverEetal.,CancerRes63:3799-804(2003);BaronAetal.,JCellBiochem91:47-53(2004))。此外，膽固醇升高本身可促進PRC細胞增殖，而且有些膽固醇合成抑制劑現(xiàn)在預(yù)計會是用于預(yù)防或治療癌癥的理想藥物(ZhuangLetal.,JClinInvest115:959-68(2005))。與膽固醇類似，高脂肪飲食中豐富的長鏈脂肪酸可通過膜的穩(wěn)定、細胞信號傳導(dǎo)途徑和其它未知功能而牽涉PRC增殖。我們使用針對ELOVL7的siRNA進行的功能分析證明了ELOVL7表達對于PRC增殖或前列腺腫瘤發(fā)生是至關(guān)重要的，而且認為直接耙向PRC中的ELOVL7酶功能或ELOVL7所牽涉的長鏈脂肪酸途徑是針對PRC的治療或預(yù)防新策略的理想方法。我們的體內(nèi)和體外脂肪酸分析說明，在多種脂質(zhì)代謝中，ELOVL7牽涉長鏈或極長鏈飽和脂肪酸(SLFA)的延長或合成，而非已知對癌發(fā)生具有促進或抑制效應(yīng)的多不飽和脂肪酸(DeSchrijverEetal.,CancerRes63:3799-804(2003);BaronAetal,,JCellBiochem91:47-53(2004);DiggleCP,ProgLipidRes41:240-53(2002))。SLFA在動物肉中像膽固醇一樣含量豐富，而且根據(jù)流行病學(xué)或營養(yǎng)研究，還認為它們與發(fā)生前列腺癌的風(fēng)險強烈相關(guān)(KolonelLNetal.,JNatlCancerInst91:414-28(1999);SchulmanCCetal.,Urology58:318-34(2001))。事實上，SLFA在侵入性前列腺癌組織中更加豐富(FreemanVLetal.,JUrol164:2168-72(2000))。然而，仍然不清楚SLFA如何牽涉癌發(fā)生或癌發(fā)展。SLFA像膽固醇一樣構(gòu)成質(zhì)膜的脂筏，多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白可在那里分布和活躍地發(fā)揮功能(ZhuangLetal.，JClinInvest115:959-68(2005);PikeLJ,JLipidRes44:655-67(2003)),而且PRC細胞中由ELOVL7產(chǎn)生的SLFA可提高用于生長或抗凋亡信號傳導(dǎo)的脂筱平臺的質(zhì)和量。我們使用針對ELOVL7的siRNA進行的功能分析證明了ELOVL7表達對于前列腺癌增殖或前列腺腫瘤發(fā)生是至關(guān)重要的，而且認為直接靶向前列腺癌中的ELOVL7酶功能或ELOVL7所牽涉的SLFA途徑是針對前列腺癌的治療或預(yù)防新策略的理想方法。總之，由ELOVL7引起的長鏈飽和脂肪酸代謝在PRC生長或發(fā)生中可以是至關(guān)重要的，只不過ELOVL7所牽涉的詳細途徑或底物仍然未知，而且對工業(yè)應(yīng)用人類基因ELOVL7的表達在PRC中與非癌性前列腺上皮相比顯著升高。因此，該基因可用作PRC的診斷標志物，它們所編碼的蛋白質(zhì)可用于PRC的診斷測定法。本發(fā)明人還顯示了，新蛋白ELOVL7的表達促進細胞生長，而與ELOVL7基因?qū)?yīng)的小干擾RNA抑制細胞生長。這些發(fā)現(xiàn)顯示了，ELOVL7蛋白刺激致癌活性。如此，這種新的癌蛋白可用作開發(fā)抗癌藥的靶物。例如，阻斷ELOVL7表達或阻止其活性的藥劑具有抗癌藥，特別是用于治療PRC的抗癌藥的治療效用。此類藥劑的例子包括針對ELOVL7基因的反義寡核苷酸、小千擾RNA和核酶，及識別ELOVL7的抗體。盡管本發(fā)明已經(jīng)參考具體實施方案進行了詳細描述，對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對本發(fā)明進行多種改變和修飾。權(quán)利要求1.用于診斷前列腺癌的方法，所述方法包括以下步驟(a)檢測編碼氨基酸序列SEQIDNO15的基因在生物學(xué)樣品中的表達水平；并(b)將所述表達水平的升高與所述疾病聯(lián)系起來。2.權(quán)利要求l的方法，其中所述表達水平是通過選自下組的任一種方法來(a)檢測編碼氨基酸序列SEQIDNO:15的mRNA;(b)檢測包含氨基酸序列SEQIDNO:15的蛋白質(zhì)；和(c)檢測包含氨基酸序列SEQIDNO:15的蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性。3.篩選用于治療或預(yù)防前列腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步驟(a)使測試化合物接觸選自下組的多肽(1)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽；(2)包含氨基酸序列SEQIDNO:15或與SEQIDNO:15具有至少80%同源性的序列的多肽；和(3)由能在嚴格條件下與由核苷S吏序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性；(b)斥企測所述多肽與測試化合物之間的結(jié)合活性；并(c)選擇能與所述多肽結(jié)合的測試化合物。4.篩選用于治療或預(yù)防前列腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步驟(a)使測試化合物接觸選自下組的多肽(1)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽；(2)包含氨基酸序列SEQIDNO:15或與SEQIDNO:15具有至少80。/。同源性的序列的多肽；和(3)由能在嚴格條件下與由核苷S吏序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性；(b)檢測步驟(a)的多肽的生物學(xué)活性；并(c)選擇與不存在測試化合物時檢測到的所迷多肽的生物學(xué)活性相比能抑制所述多肽的生物學(xué)活性的測試化合物。5.權(quán)利要求4的方法，其中所述生物學(xué)活性是細胞增殖活性。6.權(quán)利要求4的方法，其中所述生物學(xué)活性是脂肪酸延長活性。7.篩選用于治療或預(yù)防前列腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步驟(a)使測試化合物接觸細胞，所述細胞表達包含核苷酸序列SEQIDNO:14的多核苷酸；并(b)選擇與不存在測試化合物時檢測到的結(jié)果相比能降低包含核苷酸序歹寸SEQIDNO:14的多核芬酸的表達水平或由其編碼的蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性的測試化合物。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述生物學(xué)活性是脂肪酸延長活性。9.權(quán)利要求7的方法，其中所述細胞是前列腺癌細胞。10.篩選用于治療或預(yù)防前列腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步驟(a)使測試化合物接觸細胞，所述細胞導(dǎo)入了載體，所述載體包含標志基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)及在該轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)控制下表達的報導(dǎo)基因，所述標志基因包含由SEQIDNO:14組成的核苷酸序列；(b)測量所述"^艮導(dǎo)基因的表達水平或活性；并(c)選擇與不存在測試化合物時檢測到的結(jié)果相比能降低所述報導(dǎo)基因的表達水平或由其編碼的蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性的測試化合物。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述生物學(xué)活性是脂肪酸延長活性。12.用于治療或預(yù)防前列腺癌的組合物，所述組合物包含藥學(xué)有效量的針對多核香酸的反義多核苷酸或小干擾RNA作為活性成分、并包含可藥用載體，其中所述多核苷酸編碼選自下組的多肽(a)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽；(b)包含氨基酸序列SEQIDNO:15并在其中替代、刪除和/或添加了一個或多個氨基酸的多肽，所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的蛋白質(zhì)相當?shù)纳飳W(xué)活性；和(c)由能在嚴格條件下與由核苷酸序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性。13.權(quán)利要求12的組合物，其中所述小千擾RNA包含核苦酸序列SEQIDNO:7作為靶序列。14.權(quán)利要求13的組合物，其中所述siRNA具有通式5，-[A]-[BHA，]-3，，其中[A]是對應(yīng)于核苷酸序列SEQIDNO:7的核糖核苷酸序列，[B]是由3-23個核苷酸組成的核糖核芬酸序列，且[A，]是由[A]的互補序列組成的核糖核苦酸序列。15.權(quán)利要求12的組合物，其中所述組合物包含轉(zhuǎn)染增強劑。16.用于治療或預(yù)防前列腺癌的組合物，所述組合物包含藥學(xué)有效量的針對選自下組的多肽的抗體作為活性成分、并包含可藥用載體(a)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽；(b)包含氨基酸序列SEQIDNO:15并在其中替代、刪除和/或添加了一個或多個氨基酸的多肽，所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的蛋白質(zhì)相當?shù)纳飳W(xué)活性；和(c)由能在嚴格條件下與由核苷酸序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性。17.用于治療或預(yù)防前列腺癌的組合物，包含藥學(xué)有效量的通過權(quán)利要求3-ll任一項方法選出的化合物作為活性成分，并包含可藥用載體。18.用于治療或預(yù)防前列腺癌的方法，所述方法包括施用藥學(xué)有效量的反義多核苷酸或小干擾RNA的步驟，其中所述反義多核苷酸或小干擾RNA針對編碼選自下組的多肽的多核苦酸(a)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽；(b)包含氨基酸序列SEQIDNO:15并在其中替代、刪除和/或添加了一個或多個氨基酸的多肽，所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的蛋白質(zhì)相當?shù)纳飳W(xué)活性；和(c)由能在嚴格條件下與由核苷酸序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述siRNA包含核苷酸序列SEQIDNO:7作為耙序列。20.權(quán)利要求19的方法，其中所述siRNA具有通式5，-[A]-[B]-[A，]-3'，其中[A〗是對應(yīng)于核苷酸序列SEQIDNO:7的核糖核芬酸序列，[B]是由3-23個核苷酸組成的核糖核苷酸序列，且[A，]是由[A]的互補序列組成的核糖核芬酸序列。21.權(quán)利要求18的方法，其中所述組合物包含轉(zhuǎn)染增強劑。22.用于治療或預(yù)防前列腺癌的方法，所述方法包括施用藥學(xué)有效量的抗體的步驟，其中所述抗體針對選自下組的多肽(a)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽；(b)包含氨基酸序列SEQIDNO:15并在其中替代、刪除和/或添加了一個或多個氨基酸的多肽，所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的蛋白質(zhì)相當?shù)纳飳W(xué)活性；和(c)由能在嚴格條件下與由核苷酸序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性。23.用于治療或預(yù)防前列腺癌的方法，所述方法包括施用藥學(xué)有效量的通過權(quán)利要求3-ll任一項方法選出的化合物的步驟。24.用于治療或預(yù)防前列腺癌的方法，所述方法包括施用藥學(xué)有效量的選自(a)-(c)的多肽或編碼該多肽的多核苷酸的步驟(a)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽或其片段；(b)包含氨基酸序列SEQIDNO:15并在其中替代、刪除和/或添加了一個或多個氨基酸的多肽或其片段，其具有與由氨基酸序列SEQIDNO:5組成的蛋白質(zhì)相當?shù)纳飳W(xué)活性；和(c)由能在嚴格條件下與由核苷酸序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽或其片段，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性。25.用于誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力的方法，所述方法包括使選自(a)-(c)的多肽與抗原呈遞細胞接觸或者將編碼該多肽的多核苷酸或包含該多核苷酸的載體導(dǎo)入抗原呈遞細胞的步驟(a)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽或其片段；(b)包含氨基S交序列SEQIDNO:15并在其中替代、刪除和/或添加了一個或多個氨基酸的多肽或其片段，其具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的蛋白質(zhì)相當?shù)纳飳W(xué)活性；和(c)由能在嚴格條件下與由核苷酸序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽或其片段，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述方法進一步包含對受試者施用所述抗原呈遞細胞的步驟。27.用于治療或預(yù)防前列腺癌的藥物組合物，所述組合物包含藥學(xué)有效量的選自(a)-(c)的多肽或編碼該多肽的多核苷酸作為活性成分、并包含可藥用載體(a)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽或其片段；(b)包含氨基酸序列SEQIDNO:15、并在其中替代、刪除和/或添加了一個或多個氨基酸的多肽或其片段，其具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的蛋白質(zhì)相當?shù)纳飳W(xué)活性；和(c)由能在嚴格條件下與由核苷酸序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽或其片段，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性。28.權(quán)利要求27的藥物組合物，其中所述多核苷酸被摻入在表達載體中。29.診斷劑，其包含能與編碼包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽的多核苷酸發(fā)生雜交的寡核苷酸，或包含能與包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽結(jié)合的抗體。30.包含有義鏈和反義鏈的雙鏈分子，其中所述有義鏈包含對應(yīng)于SEQIDNO:7的核糖核苷酸序列，且其中所述反義鏈包含與所述有義鏈互補的核糖核苷酸序列，其中所述有義鏈和所述反義鏈能彼此發(fā)生雜交以形成能抑制所述基因的表達。31.權(quán)利要求30的雙鏈分子，其中所述有義鏈包含SEQIDNo:14的大約19個至大約25個連續(xù)核苷酸。32.權(quán)利要求30的雙鏈分子，其中所述有義鏈由對應(yīng)于SEQIDNO:7的核糖核芬酸序列組成。33.權(quán)利要求30的雙鏈分子，其中單一核糖核苷酸轉(zhuǎn)錄物包含所述有義鏈和所述反義鏈，所述雙鏈分子進一步包含連接所述有義鏈和所述反義鏈的單鏈核糖核香酸序列。34.編碼權(quán)利要求30的雙鏈分子的載體。35.權(quán)利要求34的載體，其中所述載體編碼具有二級結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄物，其中所述轉(zhuǎn)錄物包含所述有義鏈和所述反義鏈。36.權(quán)利要求34的載體，其中所述轉(zhuǎn)錄物進一步包含連接所述有義鏈和所述反義鏈的單鏈核糖核芬酸序列。37.用于檢測測試化合物調(diào)控脂肪酸延長活性的活性的試劑盒，所述試劑盒包含以下成分(a)選自下組的多肽(1)包含氨基斷列SEQIDNO:15的多肽；(2)包含氨基S拼列SEQIDNO:15或與SEQIDNO:15具有至少80%同源性的序列的多肽；和(3)由能在嚴格條件下與由核苷酸序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性；(b)作為底物的脂肪酸；(c)能夠檢測(b)的延長產(chǎn)物的試劑；(d)丙二酸單?；鵆oA;和(e)NADPH。38.用于測量多肽的脂肪酸延長活性的方法，所述方法包括以下步驟(a)使選自下組的多肽在能夠進行脂肪酸延長的條件下接觸脂肪酸(1)包含氨基酸序列SEQIDNO:15的多肽；(2)包含氨基S殳序列SEQIDNO:15或與SEQIDNO:15具有至少80%同源性的序列的多肽；和(3)由能在嚴格條件下與由核苷S吏序列SEQIDNO:14組成的多核苷酸發(fā)生雜交的多核苷酸編碼的多肽，其中所述多肽具有與由氨基酸序列SEQIDNO:15組成的多肽相當?shù)纳飳W(xué)活性；(b)檢測(a)的脂肪酸的脂肪酸延長水平；并(c)通過將步驟(b)的脂肪酸延長水平與脂肪酸延長活性聯(lián)系起來來測量脂肪酸延長活性。全文摘要本申請?zhí)峁┝诵碌娜祟惢駿LOVL7，其表達在前列腺癌中顯著升高。該基因及由該基因編碼的多肽可用于例如前列腺癌的診斷、作為研發(fā)針對該病的藥物的靶分子、及用于削弱前列腺癌的細胞生長。文檔編號C12Q1/48GK101273271SQ20068003565公開日2008年9月24日申請日期2006年7月19日優(yōu)先權(quán)日2005年7月27日發(fā)明者中川英刀,中村佑輔,中鶴修一申請人:腫瘤療法科學(xué)股份有限公司