專利名稱：應(yīng)用乳酸細(xì)菌治療腹膜炎的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及應(yīng)用能夠與腸道粘膜粘附并主要在其上定植的乳酸細(xì)菌治療與腹膜炎相關(guān)的疾病。特別是，本發(fā)明涉及應(yīng)用這樣的乳酸細(xì)菌治療由于肝硬化導(dǎo)致的腹膜炎。
腹膜炎是腹膜的炎癥，通常由于嚴(yán)重的局部感染導(dǎo)致，所述局部感染通常由胃腸道炎癥和感染、胃腸道穿孔和創(chuàng)傷引起，包括手術(shù)和腹膜透析。在這種情況下，致病性和潛在致病性微生物，偶爾有細(xì)胞殘留進入腹膜，引起宿主免疫應(yīng)答，而這種免疫應(yīng)答通常無法對付病原體的侵襲。
上述情況在肝硬化患者中更是如此。肝硬化患者通常有腸道細(xì)菌的過度生長和免疫應(yīng)答的減弱，這似乎至少部分是由于腹水中調(diào)理素活性的減低。因此晚期肝硬化通常伴有自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎(SBP)，這種腹膜炎通常涉及正常情況下存在于腸道的革蘭氏陰性腸道病原體。因此在腹水中發(fā)生SBP被認(rèn)為是由于腸道細(xì)菌從腸道轉(zhuǎn)位到腹膜導(dǎo)致的。
腹膜炎的主要危害是細(xì)菌播散，即病原體通過血液和淋巴系統(tǒng)的擴散，引起多數(shù)組織感染，導(dǎo)致受累個體發(fā)生威脅生命的狀況。一旦細(xì)菌進入腹腔，播散就相當(dāng)迅速。在狗腹腔內(nèi)孵育細(xì)菌6分鐘，胸部淋巴培養(yǎng)即呈陽性，而孵育12分鐘則可導(dǎo)致血液細(xì)菌水平的上升。
盡管在腹膜炎的診斷和治療方面已經(jīng)有了一些進步，但是仍有大約三分之一合并這種感染的住院患者最終死于消化道出血、肝功能衰竭或肝腎綜合征。
目前，預(yù)防和/或治療腹膜炎典型的醫(yī)學(xué)手段包括抗生素治療，特別是在手術(shù)前。但是這種方法的缺點是可能引起導(dǎo)致腹膜炎的耐藥細(xì)菌的產(chǎn)生。而且，由于腹膜炎可能由革蘭氏陽性和革蘭氏陰性兩種細(xì)菌導(dǎo)致，應(yīng)用抗生素可能不會在所有病例中發(fā)揮足夠的功效。
此外，抗生素治療是非特異性的，還可導(dǎo)致多種非致病性微生物的損傷，而這些非致病性微生物通?？梢酝ㄟ^細(xì)菌拮抗作用預(yù)防細(xì)菌性疾病，特別是胃腸道疾病。因此，應(yīng)用廣譜抗生素一段較長時間，可以抑制絕大多數(shù)腸道內(nèi)生存細(xì)菌的生長，而致病性微生物中的抗生素耐藥菌株則可自由繁殖。導(dǎo)致的結(jié)果是，抗生素有時可能會使腹膜炎惡化，而非預(yù)防其發(fā)生。
WO 97/00081披露了另一種腹膜炎的治療方法。該文件提示可以應(yīng)用CD14拮抗劑，CD14是已知能夠與細(xì)菌脂多糖發(fā)生相互作用的表面抗原。已知細(xì)菌脂多糖能夠通過與免疫系統(tǒng)細(xì)胞的表面受體結(jié)合，刺激免疫系統(tǒng)，開始產(chǎn)生并分泌細(xì)胞因子和其他介質(zhì)，來刺激免疫系統(tǒng)。而業(yè)已發(fā)現(xiàn)，這些細(xì)胞因子和介質(zhì)可以支持細(xì)菌的生長和侵襲。因此提議的治療主旨在于干擾產(chǎn)生細(xì)胞因子/介質(zhì)的早期免疫應(yīng)答。據(jù)信通過阻斷CD14的激活，基本上防止細(xì)胞因子的產(chǎn)生，還可以抑制細(xì)菌的生長。但這種方法的缺點在于宿主的免疫應(yīng)答功能也受到大大損傷，宿主自身的防御機制進一步惡化。
因此，有需要尋求一種有效的方法，預(yù)防和/或治療局部感染，如與腹膜炎相關(guān)的疾病。因此本發(fā)明的一個目標(biāo)就是提供這樣一種方法。
在導(dǎo)向本發(fā)明的大量實驗中，研究人員探討了這樣一個理論，即個體腸道中的乳酸細(xì)菌對腹膜中的免疫系統(tǒng)細(xì)胞特別是臨近腸道的免疫系統(tǒng)細(xì)胞是否具有正面影響。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用特定的乳酸細(xì)菌可以分別明顯降低腹膜炎動物腹水和腹膜中的細(xì)菌數(shù)量，提示乳酸細(xì)菌，特別是益生性乳酸細(xì)菌，能夠有效減少腸道細(xì)菌的過度生長和病原體的轉(zhuǎn)位。
因此，可以通過應(yīng)用乳酸細(xì)菌解決上述問題，所述乳酸細(xì)菌能夠粘附于腸道粘膜，并主要在其上定植，制備成可吸收載體，用于預(yù)防和/或治療與腹膜炎相關(guān)的疾病。
腹膜炎可以是自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎(SBP)，如在腹膜中突然出現(xiàn)潛在病原體導(dǎo)致的腹膜炎，這種情況通常在肝功能損傷的情況下發(fā)生，如在肝硬化期間。而且，腹膜炎還可能是由病毒誘導(dǎo)的，或者在透析或手術(shù)后發(fā)生。
根據(jù)一個優(yōu)選實施方案，乳酸細(xì)菌是益生菌，優(yōu)選乳桿菌和雙岐桿菌屬，更優(yōu)選約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)CNCM I-1225、類干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)CNCM I-2116或雙岐桿菌(Bifidobacterium)CNCM I-2168。
根據(jù)本發(fā)明，所用乳酸細(xì)菌被整合到載體中，所述載體可以是食品或藥品，如乳類，酸奶，凝乳，奶酪，發(fā)酵乳，乳基發(fā)酵制品，冰淇淋，發(fā)酵谷物基產(chǎn)品，奶粉，嬰兒配方以及片劑，細(xì)菌懸液，干的口服添加劑，濕的口服添加劑，干的管飼物和濕的管飼物等。
載體中還可以包括已知對損傷的腸道狀況有益的其他化合物，如抗氧化劑，如維生素C，維生素E，硒或鋅。根據(jù)各自的治療和/或預(yù)防性治療的需要，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以選擇適宜的醫(yī)學(xué)形式和/或添加劑，幫助改善個體的健康狀況。
不受任何理論的限制，據(jù)信微生物的活性主要取決于兩個因素已知益生菌對宿主的免疫系統(tǒng)具有有益作用。在目前情況下，乳酸細(xì)菌似乎能夠刺激腹膜免疫系統(tǒng)，特別是位于個體腸道周圍的非特異性免疫防御系統(tǒng)，抵御微生物通過腸壁對腹膜的侵襲。該免疫屏障在罹患肝硬化的患者中通常減弱。
另一方面，據(jù)信定植于腸道壁的乳酸細(xì)菌可以物理性防止或者至少降低潛在病原體通過腸道對腹膜的侵襲。通過與腸道的粘附，細(xì)菌可以與腸道表面的病原體腸道粘膜遮蔽受體建立緊密的聯(lián)系。
應(yīng)該指出，微生物活性呈劑量依賴性，即整合到可吸收食品或藥物組合物中的微生物越多，保護性和/或治愈活性越高。因此，本發(fā)明所用食品或藥物組合物可以包含的乳酸細(xì)菌數(shù)量大約為105cfu/g載體-1012cfu/g載體。本發(fā)明所用的縮略語“cfu”是指“集落形成單位”，其定義為通過瓊脂平板上微生物計數(shù)獲得的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)量。
由于應(yīng)用的微生物對于人類和動物來說是無害的，而且最終是從自然環(huán)境中分離的，即從嬰兒糞便中分離，因此可以整合大量微生物，使微生物可以定植于個體腸道的絕大部分。
現(xiàn)在將以實施例的形式闡述本發(fā)明，但實施例不應(yīng)被認(rèn)為是對實施方案的限制。
實施例1治療動物研究共包括31只雄性Sprague-Dawley大鼠，其中19只通過每周強制性灌胃誘發(fā)肝硬化，灌胃物為四氯化碳和含苯巴比妥的水(1.5mmol/l)隨意。飼料為標(biāo)準(zhǔn)B&K(Barcelona，Spain)，大鼠可以隨意取食。在整個研究期間，對照組的12只大鼠接受標(biāo)準(zhǔn)飼料(上述)和含苯巴比妥的水，而實驗組其他大鼠(19)接受的標(biāo)準(zhǔn)飼料中含有大約1010cfu/天的乳酸細(xì)菌CNCM I-1225(約氏乳桿菌，La1)或水。
所有對照組大鼠在開始飲用含苯巴比妥的水18周后處死。12只對照大鼠中，有6只接受A處理(水)，6只接受B處理(水加乳桿菌)。處理通過強制手段實施。在分別接受處理或無處理后10天，麻醉進行剖腹手術(shù)，收集盲腸糞便、回腸糞便、回腸壁、腸系膜淋巴結(jié)、腹水和胸水樣本進行微生物學(xué)研究。從腔靜脈收集血液，確定是否存在內(nèi)毒素血癥。此外，還收集回腸壁、盲腸壁、脾臟和肝臟樣本進行組織學(xué)研究，門脈壓通過門靜脈壓力和脾臟/大鼠重量比率進行評價。
對于實驗組，當(dāng)大鼠產(chǎn)生腹水后(大約在開始誘導(dǎo)肝硬化后20周)，麻醉進行腹腔穿刺，核實腹水的存在，然后將這些大鼠隨機分為兩組一組(n＝8)接受A處理(水)，另一組(n＝11)接受B處理(加乳酸細(xì)菌)。處理通過強制手段實施。研究結(jié)束時(處理后10天)，病程在對照組大鼠中相同。
在所有對照和肝硬化大鼠中，在開始處理前24小時和處理結(jié)束時，通過測定尿中乳果糖和甘露醇，進行了腸道滲透性研究。而且，在肝硬化誘導(dǎo)期或?qū)φ掌冢瑢λ袑φ战M和肝硬化大鼠每4周進行一次腸道滲透性研究。
實施例2腹水、細(xì)菌轉(zhuǎn)位和細(xì)菌性腹膜炎的出現(xiàn)在剖腹手術(shù)中，7/8應(yīng)用水處理(處理A)的肝硬化大鼠和7/11處理B的肝硬化大鼠具有可檢測的腹水。腸系膜淋巴結(jié)培養(yǎng)在所有22只對照大鼠中均為陰性。在所有接受B處理的肝硬化大鼠中，腸系膜淋巴結(jié)、腹水和胸水培養(yǎng)也均呈陰性。而接受水處理的肝硬化大鼠，5/8大鼠顯示有細(xì)菌轉(zhuǎn)位(培養(yǎng)呈陽性)，轉(zhuǎn)移到腸系膜淋巴結(jié)或腹水或胸水(在接受A和B處理的組間，p＜0.01)2只轉(zhuǎn)位到胸水，2只轉(zhuǎn)位到腸系膜淋巴結(jié)，1只轉(zhuǎn)位到腹水和腸系膜淋巴結(jié)。分離出的細(xì)菌為2例大腸桿菌，2例大腸桿菌+腸球菌，1例大腸桿菌+鏈球菌。
結(jié)果見下表I表I
從上面的結(jié)果可以明顯看出，接受約氏乳桿菌CNCM 1225的肝硬化大鼠相較于接受水的肝硬化大鼠，細(xì)菌轉(zhuǎn)位明顯受到抑制。
實施例3腸道微生物學(xué)研究在該研究中，測試了多種微生物，用于上述實施例1和2，處理對照和肝硬化大鼠。
與水處理的肝硬化大鼠相比，*P＜0.01，**p＜0.001和***p＜0.03(Mann-Whitney檢驗)。
與水處理的肝硬化大鼠相比，#p＜0.05和##p＜0.01。
nd＝未測上述數(shù)據(jù)還證實腸道微生物平衡確實存在損傷，即與對照大鼠相比，肝硬化大鼠中潛在致病性細(xì)菌存在過度生長。與水處理組大鼠相比，處理B降低了腸細(xì)菌和腸球菌的數(shù)量，增加了乳桿菌的數(shù)量。因此，處理B可能糾正肝硬化大鼠中潛在致病性細(xì)菌的過度生長。
134表
關(guān)于微生物保藏的說明(細(xì)則13之二)
PCT/RO/134表(1992年7月)
關(guān)于微生物保藏的說明(細(xì)則13之二)
PCT/RO/134表(1992年7月)
關(guān)于微生物保藏的說明(細(xì)則13之二)
PCT/RO/134表(1992年7月)
權(quán)利要求
1.應(yīng)能夠與腸道粘膜粘附并主要在其上定植的乳酸細(xì)菌在制備可吸收載體中的用途，所述載體用來預(yù)防和/或治療與腹膜炎相關(guān)的疾病。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述乳酸細(xì)菌是益生菌。
3.任何前述權(quán)利要求的用途，其中所述細(xì)菌選自乳桿菌或雙岐桿菌。
4.權(quán)利要求3的用途，其中所述細(xì)菌是約氏乳桿菌CNCM I-1225，類干酪乳桿菌CNCM I-2116或雙岐桿菌CNCM I-2168。
5.任何前述權(quán)利要求的用途，其中所述腹膜炎是自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎(SBP)，病毒誘導(dǎo)的腹膜炎或透析誘導(dǎo)的腹膜炎(DIP)。
6.任何前述權(quán)利要求的用途，其中所述腹膜炎與肝硬化相關(guān)。
7.任何前述權(quán)利要求的用途，其中載體中所含的乳酸細(xì)菌量大約為105cfu/g載體-1012cfu/g載體。
8.權(quán)利要求7的乳酸細(xì)菌的用途，其中含有乳酸細(xì)菌的載體是食品或藥物組合物。
9.權(quán)利要求7的用途，其中載體是食品組合物，選自乳類，酸奶，凝乳，奶酪，發(fā)酵乳，乳基發(fā)酵制品，冰淇淋，發(fā)酵谷物基產(chǎn)品，奶粉，嬰兒配方，片劑，細(xì)菌懸液，干的口服添加劑，濕的口服添加劑，干的管飼物和濕的管飼物等。
全文摘要
本發(fā)明涉及應(yīng)用能夠與腸道粘膜粘附并主要在其上定植的乳酸細(xì)菌治療與腹膜炎相關(guān)的疾病。特別是，本發(fā)明涉及應(yīng)用這樣的乳酸細(xì)菌治療由于肝硬化導(dǎo)致的腹膜炎。
文檔編號A23G9/52GK1419454SQ01807119
公開日2003年5月21日 申請日期2001年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月24日
發(fā)明者E·施夫林, C·古爾納, G·索里爾諾 申請人:雀巢制品公司