本發(fā)明涉及動物模型的構(gòu)建方法領(lǐng)域，且特別涉及異常黑膽質(zhì)證動物模型及異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型的構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
：骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，op)是以骨量減少、骨的微觀結(jié)構(gòu)退化為特征的，致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病，發(fā)病率、死亡率及保健費用消耗均較大。目前據(jù)估計，全世界大約有2億骨質(zhì)疏松患者,并且每年有大約150萬人發(fā)生骨質(zhì)疏松所引起的骨折。截止到2050年全球65歲以上的老齡人口將由現(xiàn)在的3.23億增至15億，到時骨質(zhì)疏松的患病率將大大提高。因此，骨質(zhì)疏松已經(jīng)成為了世界性的難題。骨質(zhì)疏松癥多見于絕經(jīng)后婦女，據(jù)世界衛(wèi)生組織報告骨質(zhì)疏松發(fā)病率已升至危害女性健康疾病的第6位，估算約30％的絕經(jīng)后婦女存在骨質(zhì)疏松癥,而骨質(zhì)疏松性骨折是中老年婦女致殘致死的主要原因之一。目前骨質(zhì)疏松癥治療并沒有理想方法，原因是骨質(zhì)疏松癥的機理復(fù)雜。治療上多采用骨吸收抑制劑(雌激素及其受體調(diào)節(jié)劑、二磷酸鹽、降鈣素等)、骨形成促進(jìn)劑(鈣、維生素d、甲狀旁腺素、他汀類藥物等)、運動療法以及其他的輔助療法。雖然可以取得一定的療效，但是副作用較大，不宜長期使用。對骨質(zhì)疏松癥有優(yōu)勢的、特異的藥物還未見報道。維吾爾醫(yī)學(xué)(維醫(yī))在骨質(zhì)疏松癥的診治和預(yù)防方面，形成了較完整的認(rèn)識，經(jīng)歷了長期臨床實踐，積累了豐富的用方用藥標(biāo)準(zhǔn)。維醫(yī)認(rèn)為人體具有由膽液質(zhì)、血液質(zhì)、粘液質(zhì)和黑膽質(zhì)等四種體液，該四種體液正常情況下處于平衡，是機體保持正常生理功能的物質(zhì)基礎(chǔ)。其中黑膽質(zhì)體液產(chǎn)生于肝臟，具有形成沉淀、保持器官形狀與特質(zhì)的功能。對需要黑膽質(zhì)的器官，尤其是骨骼、軟骨、肌腱、毛發(fā)等器官輸送營養(yǎng)物質(zhì)，是保持骨骼健康的主要體液。由于各種內(nèi)外因素作用，體液平衡失調(diào)，形成各種各樣異常體液，再經(jīng)長期堆積與沉淀，最終產(chǎn)生異常黑膽質(zhì)證，也即體內(nèi)骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的根源。但是，目前沒有再現(xiàn)性好、復(fù)制率高、專一性好的異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型平臺，一方面，異常黑膽質(zhì)如何導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的機理研究一直是空白；另一方面，對于異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥相關(guān)藥物的篩選與干預(yù)研究的進(jìn)程來之緩慢；更重要的是因缺乏基礎(chǔ)性研究大致妨礙了維醫(yī)治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥有效防治措施的臨床推廣應(yīng)。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一目的在于提供一種異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法，該構(gòu)建方法簡單、動物模型成功率高。本發(fā)明的另一目的在于提供一種異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型的構(gòu)建方法，此構(gòu)建方法也較為簡單便捷，且復(fù)制率及說服力均較高，再現(xiàn)性及專一性均較好。本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的。本發(fā)明提出一種異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：在連續(xù)三周內(nèi)每天于溫度為4-8℃、相對濕度為30-33％的環(huán)境中對雌性試驗鼠飼喂飼料；然后對雌性試驗鼠進(jìn)行足底刺激、束縛刺激及夾尾刺激。飼料包括第一類飼料和第二類飼料。上述第一類飼料包括200-230重量份的玉米、130-145重量份的小麥、95-115重量份的麩皮、50-62重量份的豆粕、100-110重量份的油渣、65-75重量份的魚粉、12-16重量份的石粉、1-1.4重量份的食鹽、0.6-0.8重量份的維生素和1.6-1.9重量份的微量元素；第二類飼料包括大麥和芫荽籽。本發(fā)明還提出一種異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：去除雌性試驗鼠的卵巢，對雌性試驗鼠重復(fù)進(jìn)行上述異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法中的步驟，建模持續(xù)至少9周，然后測定雌性試驗鼠的骨密度、microct三維結(jié)構(gòu)和血清參數(shù)指標(biāo)。本發(fā)明較佳實施例的技術(shù)方案的有益效果是：本發(fā)明實施例提供的異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法簡單，其構(gòu)建而得的異常黑膽質(zhì)證動物模型成功率高。此外，本發(fā)明實施例提供的異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型的構(gòu)建方法簡單便捷，且復(fù)制率及說服力均較高，建模動物的背景資料及生命周期均滿足建模要求，再現(xiàn)性及專一性均較好。由其構(gòu)建而得的異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型不僅能夠再現(xiàn)與人類相似的絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松癥特征，而且還能夠表現(xiàn)出異常黑膽質(zhì)證的癥候特征。該模型為上述病癥提供了客觀依據(jù)，便于模型的重復(fù)和穩(wěn)定。具體實施方式為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。下面對本發(fā)明實施例的異常黑膽質(zhì)證動物模型及異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型的構(gòu)建方法進(jìn)行具體說明。本發(fā)明實施例提供的異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法中所采用的動物模型例如可以為大鼠模型，優(yōu)選為雌性wistar大鼠。wistar大鼠來源較廣，用其建模，不僅可以節(jié)省建模成本，而且其建模效果較佳。此外，上述動物模型還可以為雌性小鼠、雌性狗模型和雌性兔子模型等中的任意一種，也可以為其它任何可以構(gòu)建異常黑膽質(zhì)證動物模型的動物模型。具體地，異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法可以包括以下步驟：每天于干寒屬性的喂養(yǎng)環(huán)境中對雌性wistar大鼠飼喂干寒屬性的飼料，干寒屬性的喂養(yǎng)環(huán)境例如可以是溫度為4-8℃、相對濕度為30-33％的環(huán)境，并對所有雌性wistar大鼠均進(jìn)行足底刺激、束縛刺激及夾尾刺激，重復(fù)上述步驟并持續(xù)至少3周。上述溫度為4-8℃、相對濕度為30-33％的環(huán)境可采用人工氣候箱維持，每天的飼養(yǎng)時間例如可以為11點至21點。值得說明的是，在實際飼養(yǎng)過程中，上述溫度、濕度和時間可根據(jù)不同的建模動物進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。作為可選地，上述干寒屬性的飼料包括第一類飼料和第二類飼料，第一類飼料和第二類飼料的重量比為6-8：2-4，優(yōu)選為7：3。此優(yōu)選重量比下，能使第一類飼料和第二類飼料分別所起的作用最佳。為了便于大鼠進(jìn)食，可將飼料制成顆粒狀的干飼料對大鼠進(jìn)行飼養(yǎng)。第一類飼料即為普通大鼠飼料。作為可選地，例如可包括200-230重量份的玉米、130-145重量份的小麥、95-115重量份的麩皮、50-62重量份的豆粕、100-110重量份的油渣、65-75重量份的魚粉、12-16重量份的石粉、1-1.4重量份的食鹽、0.6-0.8重量份的維生素和1.6-1.9重量份的微量元素。進(jìn)一步地，上述成分可分別為210重量份、138.6重量份、105重量份、56重量份、105重量份、70重量份、14重量份、1.19重量份、0.7重量份和1.75重量份。鑒于wistar大鼠大鼠體質(zhì)需求，上述維生素優(yōu)選含有0.042重量份的維生素a和0.56重量份的維生素e。第二類飼料包括大麥和芫荽籽。第二類飼料中的大麥和芫荽籽的比例可以為1：1。本實施例的飼料中含有第二類飼料，可提高異常黑膽質(zhì)證動物模型的成功率。建模期間，以不可預(yù)見的慢性足底電擊作為應(yīng)激源，對wistar大鼠進(jìn)行足底電刺激，以使wistar大鼠產(chǎn)生慢性應(yīng)激。具體地，足底刺激可按以下方式進(jìn)行：建模第1周，每天均以33-37v的電壓對wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，每次持續(xù)18-22min；建模第2周，每天均以38-42v的電壓對wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，每次持續(xù)23-27min；建模第3周，每天均以43-47v的電壓對wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，每次持續(xù)28-32min。本實施例中上述電刺激例如可以選擇在每天的12點至17點期間進(jìn)行，該時間段也即為wistar大鼠每天活動的最佳時間。較佳地，還可以是建模第1周，每天均以35v的電壓對wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，每次持續(xù)20min；建模第2周，每天均以40v的電壓對wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，每次持續(xù)25min；建模第3周，每天均以45v的電壓對wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，每次持續(xù)30min。夾尾刺激例如可以按以下方式進(jìn)行：建模期間，每天對wistar大鼠進(jìn)行夾尾處理，每次夾尾時間為3-5min。束縛例如可以按以下方式進(jìn)行：將wistar大鼠置于束縛容器內(nèi)，如鐵管中，根據(jù)大鼠的體格，上述鐵管的尺寸例如可以為長寬高分別為18-22cm、3-7cm和3-7cm的鐵管，優(yōu)選20cm×5cm×5cm的鐵管，以確保束縛過程中所有的wistar大鼠均不能轉(zhuǎn)身。建模第1周至第3周，每天均對wistar大鼠進(jìn)行1次束縛。其中，第1周每次束縛時間為28-32min，第2周每次束縛時間為43-47min，第3周每次束縛時間為58-62min。進(jìn)一步地，也可以是第1周每次束縛30min，第2周每次束縛45min，第3周每次束縛60min。本實施例中上述束縛例如可以選擇在每天的17點至21點期間進(jìn)行。通過利用鐵管對wistar大鼠進(jìn)行束縛，不僅限制了wistar大鼠的運動，而且該束縛容器還具有光線昏暗的特點，而光線昏暗恰好是導(dǎo)致異常黑膽質(zhì)的重要心理因素。加之夾尾刺激，使wistar大鼠產(chǎn)生大幅度的疼痛，成為心理應(yīng)激源。從而使建模動物產(chǎn)生異常黑膽質(zhì)證。本發(fā)明實施例提供的異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型的構(gòu)建方法中，也優(yōu)選采用雌性wistar大鼠作為建模動物，其具體構(gòu)建方法可以包括以下步驟：在建模前，對雌性wistar大鼠進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)。具體地，將上述雌性wistar大鼠在室溫環(huán)境下，給予常規(guī)飼料喂養(yǎng)2-4天，適應(yīng)性喂養(yǎng)期間雌性wistar大鼠不受任何外界刺激。其中，室溫環(huán)境的溫度例如可以為22-28℃，相對濕度例如可以為60-80％。適應(yīng)性喂養(yǎng)后，對上述雌性wistar大鼠進(jìn)行麻醉。作為可選地，例如可以對適應(yīng)性喂養(yǎng)后的雌性wistar大鼠按每100g體重注射0.08-0.12ml的麻醉劑進(jìn)行麻醉，麻醉劑可選用體積濃度為2％的戊巴比妥鈉。具體地，例如可以是：按上述麻醉量，取麻醉劑對雌性wistar大鼠的腹腔進(jìn)行麻醉，待雌性wistar大鼠完全麻醉，靜臥不動后，剪去其腹部的毛，用體積濃度為75％的酒精對其腹部消毒，并在無菌條件下，剪開其腹部皮膚，鈍性分離其腹部肌肉，切開腹膜，進(jìn)入腹腔，去除卵巢，也即去卵巢組結(jié)扎并完整摘除其雙側(cè)卵巢。去除卵巢組結(jié)扎當(dāng)天起，每天對雌性wistar大鼠注射青霉素注射液。待其腹部愈合后，對雌性wistar大鼠進(jìn)行上述異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法中的步驟，也即包括將雌性wistar大鼠于溫度為4-8℃、相對濕度為30-33％的環(huán)境中飼喂飼料，然后對所有雌性wistar大鼠均進(jìn)行足底刺激、束縛刺激及夾尾刺激。建模周期例如可設(shè)置為3周，建模過程維持3個建模周期，也即整個建模時間為9周。建模9周后觀察雌性wistar大鼠的形態(tài)和神態(tài)變化。并在建模剛滿9周后的第一天測定雌性wistar大鼠在全麻狀態(tài)下的骨密度，在建模滿9周后的第二天處死雌性wistar大鼠，分別測定各雌性wistar大鼠的microct三維結(jié)構(gòu)和血清參數(shù)指標(biāo)。其中，血清參數(shù)指標(biāo)包括血清alp、血清ca、血清p、血清睪丸酮、血清雌二醇、血骨鈣素和25-羥維生素d3。為了建模方便及保證建模數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，并使所得模型具有可比性。本實施例中例如可選取60只體重在180±20g的上述雌性wistar大鼠，隨機分成4組，每組均15只。該4組分別為正常組、去勢組、異常黑膽質(zhì)型試驗組和異常黑膽質(zhì)型骨質(zhì)疏松癥試驗組。其中，去勢組和異常黑膽質(zhì)型骨質(zhì)疏松癥試驗組中的雌性wistar大鼠均切除了雙側(cè)卵巢，且異常黑膽質(zhì)型試驗組和異常黑膽質(zhì)型骨質(zhì)疏松癥試驗組中的雌性wistar大鼠均進(jìn)行了的異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法中的步驟。以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。實施例1將雌性wistar大鼠于4℃、相對濕度為30％的人工氣候箱中飼喂飼料，飼喂時間為每天的11點到21點。上述飼料包括重量比為6：2的第一類飼料和第二類飼料。第一類飼料包括200kg玉米、130kg小麥、95kg麩皮、50kg豆粕、100kg油渣、65kg魚粉、12kg石粉、1kg食鹽、0.6kg維生素和1.6kg微量元素。第二類飼料包括重量比為1：1的大麥和芫荽籽。建模第1周，每天均以33v的電壓對雌性wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，并持續(xù)22min。建模第2周，每天均以38v的電壓對雌性wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，并持續(xù)27min。建模第3周，每天均以43v的電壓對雌性wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，并持續(xù)32min。上述電刺激均選擇在每天的12點至17點期間進(jìn)行。建模第1周至第3周，每天的17點至21點期間對雌性wistar大鼠束縛刺激1次。束縛期間將雌性wistar大鼠放入18cm×7cm×7cm的鐵管中，第1周每次束縛持續(xù)28min，第2周每次束縛持續(xù)43min，第3周每次束縛持續(xù)58min，每次束縛后進(jìn)行3min的夾尾處理。從而得到異常黑單質(zhì)證動物模型。實施例2將雌性wistar大鼠于8℃、相對濕度為33％的人工氣候箱中飼喂飼料，飼喂時間為每天的11點到21點。上述飼料包括重量比為8：4的第一類飼料和第二類飼料。第一類飼料包括230kg玉米、145kg小麥、115kg麩皮、62kg豆粕、110kg油渣、75kg魚粉、16kg石粉、1.4kg食鹽、0.8kg維生素和1.9kg微量元素。維生素中含有0.042kg維生素a和0.56kg維生素e。第二類飼料包括重量比為1：1的大麥和芫荽籽。建模第1周，每天均以37v的電壓對雌性wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，并持續(xù)18min。建模第2周，每天均以42v的電壓對雌性wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，并持續(xù)23min。建模第3周，每天均以47v的電壓對雌性wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，并持續(xù)28min。上述電刺激均選擇在每天的12點至17點期間進(jìn)行。建模第1周至第3周，每天的17點至21點期間對建模動物束縛刺激1次。束縛期間將雌性wistar大鼠放入22cm×3cm×3cm的鐵管中，第1周每次束縛持續(xù)32min，第2周每次束縛持續(xù)47min，第3周每次束縛持續(xù)62min。每次束縛后進(jìn)行5min的夾尾處理。從而得到異常黑單質(zhì)證動物模型。實施例3將雌性wistar大鼠于6℃、相對濕度為31.5％的人工氣候箱中飼喂飼料，飼喂時間為每天的11點到21點。上述飼料包括重量比為7：3的第一類飼料和第二類飼料。第一類飼料包括210kg玉米、138.6kg小麥、105kg麩皮、56kg豆粕、105kg油渣、70kg魚粉、14kg石粉、1.19kg食鹽、0.7kg維生素和1.75kg微量元素。維生素中含有0.042kg維生素a和0.56kg維生素e。第二類飼料包括重量比為1：1的大麥和芫荽籽。建模第1周，每天均以35v的電壓對雌性wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，并持續(xù)20min。建模第2周，每天均以40v的電壓對雌性wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，并持續(xù)25min。建模第3周，每天均以45v的電壓對雌性wistar大鼠的足底進(jìn)行電刺激1次，并持續(xù)30min。上述電刺激均選擇在每天的12點至17點期間進(jìn)行。建模第1周至第3周，每天的17點至21點期間對建模動物束縛刺激1次。束縛期間將雌性wistar大鼠放入20cm×5cm×5cm的鐵管中，第1周每次束縛持續(xù)30min，第2周每次束縛持續(xù)45min，第3周每次束縛持續(xù)60min。每次束縛后進(jìn)行4min的夾尾處理。從而得到異常黑單質(zhì)證動物模型。實施例4選取體重為160g的雌性wistar大鼠，建模前，將上述雌性wistar大鼠在22℃、相對濕度為60％的條件下，給予常規(guī)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)4天，適應(yīng)性喂養(yǎng)期間雌性wistar大鼠不受任何外界刺激。適應(yīng)性喂養(yǎng)后，對雌性wistar大鼠按每100g體重注射0.08ml體積濃度為2％的戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉。然后對上述雌性wistar大鼠進(jìn)行去卵巢組結(jié)扎并完成摘除其雙側(cè)卵巢。待傷口愈合后，按實施例1中的異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法進(jìn)行構(gòu)建，建模時間為9周，每3周為一個建模周期，得到異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型。建模9周后觀察雌性wistar大鼠的形態(tài)和神態(tài)變化。并在建模剛滿9周后的第一天測定雌性wistar大鼠在全麻狀態(tài)下的骨密度，在建模滿9周后的第二天處死雌性wistar大鼠，分別測定各雌性wistar大鼠的microct三維結(jié)構(gòu)、血清alp、血清ca、血清p、血清睪丸酮、血清雌二醇、血骨鈣素和25-羥維生素d3。實施例5選取體重為200g的雌性wistar大鼠，建模前，將上述雌性wistar大鼠在28℃、相對濕度為80％的條件下，給予常規(guī)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2天，適應(yīng)性喂養(yǎng)期間雌性wistar大鼠不受任何外界刺激。適應(yīng)性喂養(yǎng)后，對雌性wistar大鼠按每100g體重注射0.12ml體積濃度為2％的戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉。然后對上述雌性wistar大鼠進(jìn)行去卵巢組結(jié)扎并完成摘除其雙側(cè)卵巢。待傷口愈合后，按實施例2中的異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法進(jìn)行構(gòu)建，建模時間為9周，每3周為一個建模周期，得到異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型。建模9周后觀察雌性wistar大鼠的形態(tài)和神態(tài)變化。并在建模剛滿9周后的第一天測定雌性wistar大鼠在全麻狀態(tài)下的骨密度，在建模滿9周后的第二天處死雌性wistar大鼠，分別測定各雌性wistar大鼠的microct三維結(jié)構(gòu)、血清alp、血清ca、血清p、血清睪丸酮、血清雌二醇、血骨鈣素和25-羥維生素d3。實施例6選取體重為180g的雌性wistar大鼠，建模前，將上述雌性wistar大鼠在25℃、相對濕度為70％的條件下，給予常規(guī)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，適應(yīng)性喂養(yǎng)期間雌性wistar大鼠不受任何外界刺激。適應(yīng)性喂養(yǎng)后，對雌性wistar大鼠按每100g體重注射0.1ml體積濃度為2％的戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉。然后對上述雌性wistar大鼠進(jìn)行去卵巢組結(jié)扎并完成摘除其雙側(cè)卵巢。待傷口愈合后，按實施例3中的異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法進(jìn)行構(gòu)建，建模時間為9周，每3周為一個建模周期，得到異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型。建模9周后觀察雌性wistar大鼠的形態(tài)和神態(tài)變化。并在建模剛滿9周后的第一天測定雌性wistar大鼠在全麻狀態(tài)下的骨密度，在建模滿9周后的第二天處死雌性wistar大鼠，分別測定各雌性wistar大鼠的microct三維結(jié)構(gòu)、血清alp、血清ca、血清p、血清睪丸酮、血清雌二醇、血骨鈣素和25-羥維生素d3。試驗例重復(fù)構(gòu)建上述實施例以構(gòu)建足夠多的異常黑膽質(zhì)證動物模型和異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型。以實施例3構(gòu)建而得的異常黑膽質(zhì)證動物模型作為異常黑膽質(zhì)型試驗組(以下簡稱異黑組)，以實施例6構(gòu)建而得的異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型作為異常黑膽質(zhì)型骨質(zhì)疏松癥試驗組(以下簡稱異黑去勢組)，并另設(shè)正常組和去勢組。其中，正常組的建模動物無額外處理，去勢組的建模動物均切除其雙側(cè)卵巢。上述各組的建模動物的種類一致，起始體重以健康狀態(tài)均無顯著性差異，建模過程中的飼喂環(huán)境均一致。建模9周后，觀察異常黑膽質(zhì)型骨質(zhì)疏松癥試驗組的建模動物較其余組建模動物在形態(tài)和神態(tài)方面的變化。并在建模剛滿9周后的第一天測定各組建模動物在全麻狀態(tài)下的骨密度，在建模滿9周后的第二天處死建模動物，分別測定各建模動物的microct三維結(jié)構(gòu)、血清alp、血清ca、血清p、血清睪丸酮、血清雌二醇、血骨鈣素和25-羥維生素d3。建模結(jié)果如下。(一)形態(tài)和神態(tài)通過觀察，異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型中的建模動物較其余組的建模動物均出現(xiàn)了形體消瘦、煩躁不寧、易怒、攻擊性強、倦怠嗜睡、易醒、孤僻、毛發(fā)亂無光澤、易掉、皮膚較涼，舌暗紫有瘀斑、大便于燥、體重增長速度慢，以及飲食量、飲水量、尿和大便量增多等改變。(二)骨密度變化表1各試驗組動物腰椎和脛骨上端骨密度比較(g/cm3)組別腰椎脛骨上端正常組0.241±0.0190.290±0.032去勢組0.171±0.036**0.203±0.029**異黑組0.165±0.026**0.208±0.024**異黑去勢組0.126±0.024**0.167±0.028**注：與正常組比較，**代表p＜0.01。由表1可知，去勢組、異黑組及異黑去勢組中建模動物的腰椎和脛骨上端的骨密度較正常組中建模動物的腰椎和脛骨上端的骨密度均明顯降低，其中異黑去勢組的腰椎和脛骨上端的骨密度降低最為明顯，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。(三)microct三維結(jié)構(gòu)表2各試驗組動物脛骨上端microct微觀空間結(jié)構(gòu)參數(shù)比較注：與正常組比較，*代表p＜0.05，**代表p＜0.01。由表2可知，與正常組相比，去勢組、異黑組及異黑去勢組中建模動物的骨組織體積比(bv/tv)、單位體積骨小梁數(shù)目(tb.n)均較減少，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。其次，去勢組、異黑組及異黑去勢組中建模動物的骨表面積和體積比(bs/bv)、骨小梁分離度(tb.sp)均較正常組中建模動物的bs/bv和tb.sp升高，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。另外，去勢組和異黑組中建模動物的骨小梁厚度(tb.th)較正常組有所增加，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，且異黑去勢組較正常組的建模動物的tb.th明顯增加，有差異，并具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。(四)血清alp、ca和p表3各試驗組動物血清alp、ca和p的比較組別alp(u/l)ca(mmol/l)p(mmol/l)正常組65.100±10.0562.473±0.0751.856±0.226去勢組85.433±24.549*2.348±0.044*2.197±0.301*異黑組86.071±21.91582.356±0.1112.051±0.249異黑去勢組101.300±15.843**2.258±0.137*2.278±0.441*注：與正常組比較，*代表p＜0.05，**代表p＜0.01。由表3可知，與正常組相比，異黑去勢組中建模動物的血清ca明顯降低、血清p明顯升高均有所升高，血清alp明顯升高，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義。去勢組中建模動物的血清ca明顯降低、血清p明顯升高、血清alp較正常組建模動物的該三個血清指標(biāo)均有所升高，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。(五)血清睪酮、雌二醇表4各試驗組動物血清睪酮和雌二醇的比較組別雌二醇(pmol/ml)睪酮(nmol/ml)正常組34.140±8.7072.266±0.188去勢組23.000±6.325**1.742±0.172*異黑組26.570±6.399*1.797±0.446*異黑去勢組20.778±6.553**1.531±0.124**注：與正常組比較，*代表p＜0.05，**代表p＜0.01。由表4可知，與正常組相比，與正常組比較，去勢組和異黑去勢組建模動物的血清雌二醇含量明顯降低，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)；異黑組與正常對照組相比雌二醇含量有所降低，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。異黑去勢組中建模動物的睪酮與正常組相比下降明顯，有差異，并有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)；去勢組和異黑組中建模動物的睪酮與正常組相比也有所下降，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。(六)血骨鈣素、維生素d表5各試驗組動物血骨鈣素、維生素d的比較注：與正常組比較，*代表p＜0.05，**代表p＜0.01。由表5可知，去勢組、異黑組和異黑去勢組中建模動物的骨鈣素與正常組相比均有所升高，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。去勢組中建模動物的25羥維生素d3與正常組的相比有所下降，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)；異黑組和異黑去勢組中建模動物的25羥維生素d3與正常組的相比明顯下降，有差異，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。承上所述，去勢組、異黑組和異黑去勢組的建模動物的骨質(zhì)疏松癥的主要診斷指標(biāo)均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，但異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型動物骨代謝相關(guān)指標(biāo)較單純的骨質(zhì)疏松癥模型動物與正常組差別更為明顯。綜上所述，本發(fā)明實施例提供的異常黑膽質(zhì)證動物模型的構(gòu)建方法簡單，其構(gòu)建而得的異常黑膽質(zhì)證動物模型成功率高。此外，本發(fā)明實施例提供的異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型的構(gòu)建方法也較為簡單便捷，且復(fù)制率及說服力均較高，再現(xiàn)性及專一性均較好。由其構(gòu)建而得的異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型不僅能夠再現(xiàn)與人類相似的絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松癥特征，而且還能夠表現(xiàn)出異常黑膽質(zhì)證的癥候特征。以上所描述的實施例是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。本發(fā)明的實施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁12